Summary
הליך הבידוד של EOB-DTPA ואת complexation הבא עם Ga הטבעי (III) ו -68 Ga מוצגת במסמך זה, כמו גם ניתוח מעמיק של כל התרכובות והחקירות יעילות תיוג, היציבות במבחנה ומי octanol / n- מקדם חלוקה של מתחם רדיואקטיבי.
Abstract
אנו להדגים שיטה לבידוד של EOB-DTPA (3,6,9-triaza-3,6,9-טריס (carboxymethyl) -4- (ethoxybenzyl) חומצה -undecanedioic) מ שלה אלוקים (III) מורכבים ופרוטוקולים הכנת שאינם רדיואקטיביים, כלומר, טבעי Ga (III) כמו גם רדיואקטיבי 68 Ga מורכב הרומן שלה. ליגנד כמו גם Ga (III) מורכבים התאפיינו תהודה מגנטית גרעינית (NMR) ספקטרוסקופיה, ספקטרומטריית מסה ניתוח יסודי. 68 Ga הושג על ידי שיטה elution תקן מגנרטור Ga 68 Ge / 68. ניסויים להעריך את היעילות 68 Ga-תיוג של EOB-DTPA ב- pH 3.8-4.0 בוצעו. טכניקות ניתוח הוקמה רדיו TLC (כרומטוגרפיה בשכבה דקה) ו HPLC רדיו (כרומטוגרפיה נוזלית ביצועים גבוהים) שימשו כדי לקבוע את טוהר radiochemical של נותב. כתוצאה החקירה הראשונה של 68 Ga קליעים נותבים 'lipophilicity הפצת octanol / מים n-מקדם n של 68 Ga מינים נוכחים פתרון pH 7.4 נקבע על פי שיטת חילוץ. מדידות יציבות במבחנה של נותב באמצעי תקשורת השונה ב- pH הפיזיולוגי בוצעו, חושף תעריפים שונים של ריקבון.
Introduction
חומצת Gadoxetic, שם נפוצה למתחם ה (III) של ליגנד EOB-DTPA 1, היא חומר ניגוד תדיר הדמיה בתהודה מגנטית כיס (MRI). 2,3 בשל הספיגה הספציפית שלה על ידי hepatocytes הכבד אחוז הגבוה של הפרשת כיס הוא מאפשר הלוקליזציה של נגעי מוקדים וגידולים בכבדים. 2-5 עם זאת, הגבלות מסוימות של טכניקת MRI (למשל, רעילות של חומר הניגוד, תחולה מוגבלת בחולים עם שתלים קלסטרופוביה או מתכת) קוראים לשים כלי אבחון אלטרנטיביים .
טומוגרפיה פוזיטרונים (PET) היא שיטת הדמיה מולקולרית, שבה כמות קטנה של חומר רדיואקטיבי (נותב) מנוהלת, שעליו ההפצה שלה בגוף נרשמה על ידי סורק PET. PET 6 הוא שיטה דינמית המאפשרת גבוה במרחב ובזמן הרזולוציה של תמונות כמו גם כימות של תוצאות, מבלילהתמודד עם תופעות הלוואי של חומר ניגוד MRI. ערך אינפורמטיבי של מידע מטבולית המתקבל ניתן להגדיל עוד יותר על ידי שילוב עם נתונים אנטומיים המתקבלים בשיטות הדמיה נוספות, כמו רוב מושגת בדרך כלל על ידי הדמיה היברידית עם טומוגרפיה ממוחשבת (CT) ב סורקי PET / CT.
המבנה הכימי של נותב מתאים PET חייב לכלול איזוטופ רדיואקטיבי המשמש פולט פוזיטרון. יש פוזיטרונים תוחלת חיים קצרה מאז הם כמעט מייד להשמיד עם אלקטרונים של הפגזים האטומים של רקמה הסובבת. על ידי השמדת שני פוטונים גמא 511 keV עם בכיוון ההפוך של התנועה נפלטים, הנרשמות על ידי סורק PET. 7,8 כדי לגבש נותב, nuclides PET עשוי להיות מחויב קוולנטית מולקולה, כפי שנהוג ב 2-deoxy- 2- [18 F] fluoroglucose (FDG), נותב PET בצורה המקיפה ביותר בשימוש. 7 עם זאת, נוקליד עלול גם ליצור קשרים קואורדינטיבית כדי הליגנדים אחד או כמה (למשל, [68 Ga] 9,10 -DOTATOC) או להיות מיושם גם מלחים אורגניים מומסים (למשל, [18 F] נתרן פלואוריד 11). בסך הכל, את המבנה של נותב קריטי, מאחר שהוא קובע את ההתנהגות biodistribution, מטבוליזם והפרשה שלה.
נוקליד PET מתאים צריך לשלב מאפיינים נוחים כמו אנרגית פוזיטרונים נוחה וזמין כמו גם זמן מחצית חיים נאותים לחקירה המיועדת. נוקליד 68 Ga נעשה כוח חיוני בתחום PET בשני העשורים האחרונים. 12,13 זאת בעיקר בשל זמינותו באמצעות מערכת גנרטור, אשר מאפשרת תיוג באתר באופן עצמאי מהסביבות של הציקלוטרון. בשנת גנרטור, האמא נוקליד 68 Ge נספג על עמודה שממנה נוקליד הבת 68 Ga הוא eluted ובהמשך שכותרתו אל chelator מתאים. 6,14 מאז 68 נוקליד Ga קיים בתור trivalקטיון ent בדיוק כמו אלוקים (III) 10,13, chelating EOB-DTPA עם 68 Ga במקום תניב קומפלקס עם אותו מטען שלילי הכולל כחומצה gadoxetic. בהתאם לכך, 68 כי נותבה Ga יכולה להשתלב סגוליות כבדות מאפיין דומות עם התאמותיו הדמית PET. למרות חומצת gadoxetic נרכשה ו מנוהלת כמו מלח disodium, בהקשר הבא נתייחס אליו כאל אלוקים [EOB-DTPA] וכדי במתחם שאינו רדיואקטיבי Ga (III) כמו Ga [EOB-DTPA], או 68 Ga [ EOB-DTPA] במקרה של רכיב רדיואקטיבי למען הנוחות.
כדי להעריך את התאמתם כמו קליעים נותבים עבור PET, מתחמי מתכת רדיואקטיבית צריכים להיבדק בהרחבה במבחנה, in vivo או ניסויי vivo לשעבר ראשון. כדי לקבוע את התאמתו של בעיה רפואית בהתאמה, מאפיינים נותבו שונים כמו התנהגות biodistribution ופרופיל סיקול, יציבות, סגולי איברי תא או tissuדואר ספיגת צריך להיחקר. בשל האופי שלהם לא פולשנית, קביעות במבחנה מבוצעות לרוב לפני ניסויי in vivo. זה להניח שגילויי DTPA ונגזרותיו הם ההתאמה מוגבלת chelators עבור 68 Ga בשל קומפלקסים אלה חסר אדישות קינטית, וכתוצאה מכך ריקבון מהיר וזהובה כאשר מנוהל in vivo. 14-20 זו נגרמת בעיקר על ידי apo- transferrin מתנהג כמו מתחרה עבור 68 Ga בפלסמה. אף על פי כן, חקרנו נותב חדש זו בדבר היישום האפשרי שלה בתחום הדמית כיס, שבו מידע אבחון עשוי להינתן בתוך דקות לאחר הזרקה 3,4,21-23, ובכך לא בהכרח הדורשים יציבות נותב לטווח ארוך. לשם כך אנחנו מבודדים EOB-DTPA מחומצה gadoxetic ובתחילה ביצע את complexation עם Ga טבעי (III), אשר קיים כפי תערובת של שני איזוטופים יציבים, 69 Ga ו -71 68 Ga. השתמשנו הוקם שיטות ובמקביל הערכנו התאמתו לקביעת יעילות 68 Galabeling של EOB-DTPA ולחקור את lipophilicity של נותב החדש 68 Ga ויציבותה מדיה שונה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. הכנת EOB-DTPA ואת Ga [EOB-DTPA]
זהירות: יש להתייעץ כל גיליונות נתוני בטיחות חומרים רלוונטיים (MSDS) של ממיסים אורגניים בשימוש, חומצות alkalines לפני השימוש. ביצוע כל הצעדים במנדף ולהשתמש בציוד מגן אישי (משקפי מגן, כפפות, חלוק מעבדה).
- בידוד של EOB-DTPA מחומצה gadoxetic
- שים 3 מ"ל של 0.25 M פתרון בזריקות חומצה gadoxetic לתוך בקבוק. הוספת 500 מ"ג (5.6 מילימול) של חומצה אוקסלית לפתרון הזז.
- לאחר ערבוב במשך שעה 1, לסנן את ההשעיה דרך frit באמצעות לחץ מופחת. שטפו את שלוש פעמים שאריות עם 3 מ"ל מים, בהתאמה.
- מערבב את filtrates המימי ולצייד את הפתרון עם אלקטרודת pH. להוסיף 12 M חומצה הידרוכלורית אל התסנין עד pH הוא כ -0.1.
- הסר את הממס vacuo להניב שאריות צבע. אחסן תחת גז אינרטי.
- שטפו את השאריות ביסודיות (לפחות שלושהפעמים) עם אתיל אצטט להסיר את עודף חומצה אוקסלית. יבש את שאריות האור בריק.
- Redissolve שאריות 2 מ"ל מים בטמפרטורת החדר ולאחר מכן לקרר את פתרון באמבט קרח. מבלי להסיר את באמבט הקרח, להוסיף 0.5 dropwise פתרון סודיום הידרוקסיד מימייה M עד להיווצרות הוא ציין מוצק ודביק חסר צבע.
- הסר את המים על ידי decantation. שטפו את פי שני מוצק עם 1 מ"ל של מים קרים. ייבש את מוצק vacuo להניב שבר המוצר הראשון.
- לבודד חלק המוצר השני מן שברים בשילוב של מים יצק באמצעות כרומטוגרפיה בעמודה (סיליקה, מתנול / מים 4/1). 24 הסר את הממס האור בריק.
- אם כן השיג את מוצק אינו לבן טהור, redissolve זה ב 1 מ"ל של מים, מוסיפים 10 מ"ל של אתנול ולאחר מכן 10 מ"ל של אתר diethyl כדי לזרז את המוצר. סינון דרך frit באמצעות לחץ מופחת ויבש vacuo.
- לְשַׁלֵבהן שברים מוצקים של EOB-DTPA ולבצע ספקטרוסקופיות תמ"ג, 25 ספקטרומטריה 26 ובסיסי 27 ניתוחים.
- סינתזה של Ga [EOB-DTPA]
זהירות: חנות מוצק Ga (III) כלוריד תחת אווירה יבש אינרטי, מאז במגע עם אוויר, לחות או ריקבון גריז מתרחש, וכתוצאה מכך אדי מאכל היווצרות של זיהומים צהוב, חום או שחור.- כן פתרון 0.11 M מניות על ידי המסת 1.94 גרם (11.0 mmol) של Ga (III) הכלוריד 100 מ"ל מים. לדלל 1 מ"ל של 25% פתרון אמוניה מימית עם 4 מ"ל מים.
- ממיסים 80 מ"ג (0.15 מילימול) של EOB-DTPA בבקבוק 10 מ"ל מים. ואם צריך מחממים הממס להשיג פירוק מוחלט.
- להוסיף 1.4 מ"ל (0.15 מילימול) של הפתרון כלוריד המניות Ga (III). לצייד את הבקבוק עם בוחש ו-אלקטרודה pH. הוסף dropwise פתרון אמוניה מימית מדוללת עד ה- pH של התמיסה הוא כ 4.1. מערבבים ב roטמפרטורת om למשך 30 דקות.
- הסר את הממס האור בריק. מניח את השאריות בבקבוק, מצויד stillhead עם צוואר בצד מרכזי ומקביל. לצייד את הצוואר המרכזי באצבע קירור ואת הצוואר בצד עם לשקע משאבת ואקום
- מחמם את השאריות בלחץ מופחת (125 ° C, 0.6 mbar). מעת לעת להסיר אמוניום כלוריד מעודנת (נראה כמו ציפוי לבן של משטח הזכוכית) מאצבע הקירור ועדיין הראש, כמו גם מן החלקים העליונים של הבקבוק עם מטלית רטובה מעט. משך התהליך עד אין היווצרות גלויה של סובלימציה חדש.
- כדי להסיר עקבות סופיות של אמוניום כלוריד לשטוף את השאריות שלוש פעמים עם 0.5 מיליליטר של מתנול חם, בהתאמה. יבש את שאריות צבע האור בריק. בצע ספקטרוסקופיות תמ"ג, 25 26 ספקטרומטריה ובסיסית 27 ניתוחים.
2. נוהל סימון כללי
זהירות: כל לשעברperiments כולל קשר ישיר או עקיף עם חומרים רדיואקטיביים חייבת להתבצע על ידי אדם מיומן בלבד. אנא להשתמש בציוד מיגון מתאים. איסוף כל פסולת רדיואקטיבית בנפרד ולאחסן ולהיפטר בהתאם לתקנות תקפות.
- Elution של הגנרטור
הערה: 40 MCI 68 Ge / 68 Ga גנרטור עם נוקליד אמא כפותות תחמוצת על סיליקה dodecyl-3,4,5-trihydroxybenzoate היה בשימוש. Elution וטיהור יכול להתבצע באופן ידני או, כפי שהיה במקרה בהליך זה, כתהליך אוטומטי משולב באמצעות משאבת peristaltic ויחידת מנפק.- הכינו פתרונות של 5.5 M, 1.0 M ו- 0.05 חומצה הידרוכלורית M. כן פתרון של 5.0 M נתרן כלורי המכיל 25 μl של 5.5 חומצה הידרוכלורית M לכל מיליליטר. הכן פתרון חיץ של pH 4.6 ידי שילוב 4.1 נתרן אצטט גרם, 1 מ"ל HCl (30%) ו -2.5 חומצה אצטית קרחונית מ"ל דילול תערובת עם מים 50 מ"ל.
- preCondition PS-H + מחסנית ידי שטיפתו לאט עם 1 מ"ל של 1.0 M חומצה הידרוכלורית ובהמשך 5 מ"ל מים.
- Elute בעמודה סיליקה של הגנרטור עם 4 מ"ל 0.05 M HCl. 12 טען את 68 Ga eluate על מחסנית PS-H +.
- רוקן את המחסנית עם 5 מ"ל של מים ולאחר מכן לייבש אותו עם 5 מ"ל של אוויר. Elute 68 Ga ממחסנית עם 1 מ"ל 5.0 M פתרון נתרן כלורי acidified. 28
- תיוג של EOB-DTPA עם 68 Ga
- ממיסים 1 מ"ג (1.9 μmol) של EOB-DTPA ב 1 מ"ל מים. מפתרון זה לקחת 100 μl (0.19 μmol) לדלל אותם עם 9.9 מ"ל מים כדי להכין 19 מיקרומטר (10 מיקרוגרם / מ"ל) פתרון המניות של EOB-DTPA.
- הסר 50 μl (שווה 22-29 MBq) של תמיסה המכילה 68 Ga ולשים לתוך בקבוקון. הוסף 50 μl (0.5 מיקרוגרם) של פתרון המניות 19 מ"מ של EOB-DTPA ו -300 μl of חיץ להעלות את ה- pH ל 4.0. Shake בקצרה דגירה הפתרון בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות. הסרת aliquot של 1-5 μl ולשים HPLC או ניתוח TLC.
- ביצוע ניתוח HPLC רדיו על היפוך פאזות (RP) טור C18 29 השתמש בשלב הנייד הבא:. א '- מים / חומצת trifluoroacetic (99.9% / 0.1%), ב' - אצטוניטריל / חומצת trifluoroacetic (99.9% / 0.1%), שיפוע : 06 דק '80% A → A 0% (0.5 מ"ל / דקה), 610 0% דק (0.5 mL / min).
- קבע את עוצמות השיא של אותות הרדיו HPLC כאזור תחת עקומה. חישוב התשואה תיוג כמו טוהר radiochemical (RCP) של נותב כדלקמן:
RCP = A Ga-EOB-DTPA / (א Ga Ga + A-EOB-DTPA) ∙ 100%
Ga-EOB-DTPA: שטח מתחת עקומה של 68 Ga [EOB-DTPA]
Ga: שטח מתחת עקומה של חינם 68 Ga
יעילות תיוג 3.
- בצע את הליכי תיוג כמו לתארד בסעיף 2. השתמש מגוון עקבי של התחלת פעילות של 68 Ga eluate, למשל, 22-29 MBq (40-140 μl, תלוי את הרעננות של eluate).
- להוסיף את הכמות הנדרשת של פתרון חיץ כדי להתאים את ה- pH ל 3.8-4.0 (40-190 μl, תלוי בנפח של 68 Ga eluate). להוסיף את הכמות הנדרשת של פתרון המניות ליגנד (10-70 μl של פתרון 19 מ"מ).
- מוסיפים את הסכומים הדרושים של מים כדי להתאים את ההיקף הכולל של כל בדיקה תיוג ל -1.75 מ"ל. מערבבים היטב ולתת המדגם לעמוד במשך 5 דקות בטמפרטורת החדר. ביצוע ניתוח HPLC כמתואר בסעיף 2 לקבוע את תשואת התיוג.
- בצע את הליכי תיוג עם כמויות של ליגנד בין 0.1 מיקרוגרם ו -0.7 מיקרוגרם בצעדים של 0.1 מיקרוגרם. בצע ניסויים triplicates עבור כל ריכוז ליגנד. חישוב התשואה הממוצעת וסטיית תקן.
4. במבחנה יציבות
- p הכלליrocedure והכנות
- ממיסים טבלית בופר פוספט (PBS) ב 200 מ"ל של מים ללא יונים להכין פתרון מניות PBS עם ריכוז פוספט של 10 מ"מ.
- בצע תיוג של 22-29 MBq 68 Ga עם 0.5 μl של פתרון המניות EOB-DTPA, כמפורט בסעיף 2. בהתאם לנפח של 68 eluate Ga, להתאים את כמות חיץ, כמתואר בסעיף 3. משוך דגימות של פתרון תיוג המכיל 6-12 MBq של נותב לבצע מדידות יציבות.
- ביצוע ניתוח רדיו TLC על צלחות אלומיניום מצופות ג'ל סיליקה 80 מ"מ באמצעות 0.1 נתרן ציטרט מימית M כמו eluent ולנתח את הצלחות עם סורק רדיואקטיביות TLC. 30 קביעת העוצמות של אותות TLC כאזור תחת עקומה. חשב את RCP של נותב כדלקמן:
RCP = A Ga-EOB-DTPA / (א Ga-חינם + A Ga-EOB-DTPA + A Ga-קולואידים) ∙ 100%
Ga-EOB-DTהרש"פ: שטח מתחת עקומה של 68 Ga [EOB-DTPA]
Ga-חינם: שטח מתחת עקומה של חינם 68 Ga
Ga-colloidal: שטח מתחת עקומה של קולואידים 68 Ga - חישוב RCP t / RCP 0 עבור כל נקודת זמן. מגרש את RCP הסטנדרטי ובכך לעומת פרש שעות מאז דק 'נקודת מצא t = 0.
T RCP = RCP של 68 Ga [EOB-DTPA] בזמן t נקודת זמן.
RCP 0 = RCP של 68 Ga [EOB-DTPA] בזמן t = 0 דקות.
- יציבות בופר פוספט (א)
- עד 65 μl של פתרון תיוג להוסיף 150 μl של פתרון המניות PBS ו 60 μl של פתרון נתרן הידרוקסידי (0.1 M) להעלות את ה- pH ל 7.4. מערבבים היטב.
- הסרת aliquot של 1-5 μl לבצע ניתוח TLC ( "נקודת מוצא"). מיד לאחסן הפתרון באינקובטור ב 37 מעלות צלזיוס ולהסיר aliquots לבצע ניתוח TLC ב לייצגative מועדים לפי שעון מעל 3 שעות.
- יציבות כלפי עודף של apo -transferrin PBS (B)
- 120 μl של פתרון תיוג להוסיף 50 μl של פתרון המניות PBS ו 430 μl של פתרון נתרן הידרוקסידי (0.1 M) להעלות את ה- pH ל 7.4. הוסף 40 μl של פתרון של apo -transferrin (25 מ"ג / מ"ל). מערבבים היטב.
- הסרת aliquot של 1-5 μl לבצע ניתוח TLC ( "נקודת מוצא"). מיד לאחסן הפתרון באינקובטור ב 37 מעלות צלזיוס ולהסיר aliquots לבצע ניתוח TLC בנקודות נציג זמן מעל 3 שעות.
- יציבות בסרום אדם (C)
- 500 μl של נסיוב אדם להוסיף 25 μl של פתרון תיוג ו -45 μl של פתרון נתרן הידרוקסידי (0.1 M) להעלות את ה- pH ל 7.4. מערבבים היטב.
- הסרת aliquot של 1-5 μl לבצע ניתוח TLC ( "נקודת מוצא"). מיד לאחסן הפתרון בתוך incuבטור ב 37 מעלות צלזיוס ולהסיר aliquots לבצע ניתוח TLC בנקודות נציג זמן מעל 3 שעות.
קביעת 5. מקדם הפצת LogD
- בצע את הליכי תיוג כמפורט בסעיף 2. 50 μl של פתרון תיוג להוסיף 20 μl של פתרון המניות PBS ו -170 μl של פתרון נתרן הידרוקסידי (0.1 M) כדי להעלות את ה- pH ל 7.4.
- למשוך עד 200 μl מאותו פתרון והכניס אותו לתוך פלסטיק V-בקבוקון. הוסף 200 μl של octanol n-. סגור את בקבוקון מערבולת למשך 2 דקות. ואז צנטריפוגות מדגם ב 1,600 XG במשך 5 דקות.
- הסר triplicates של 40 μl משלב n -octanol ואת השלב מהימי כל ולשים אותם בתוך בקבוקוני V נפרדים. היזהר שלא לערבב את השכבות.
- למדוד את הפעילות של כל דגימה בתוך דלפק היטב גמא למשך 30 שניות. עבור כל דגימה מייד לחזור על המדידה פעמים ממנו לחשב את t Ᾱ הפעילות הממוצע t כך זכו Ᾱ, W1, Ᾱ t, t W2 ו Ᾱ, W3 (פעילויות בדגימות מימית) ו Ᾱ t, O1, Ᾱ t, O2, Ᾱ t, O3 (פעילויות octanol n-) יחד עם בהתאמה זמן נקודת t נחישותם.
- הגדר את נקודת הזמן של המדידה של המדגם האחרון כמו t 0. לקבוע ולפרט Δt בדקות ידי חישוב Δt = tt 0. בצע תיקון ריקבון של t Ᾱ, לפי הנוסחה הבאה:
Ᾱ 0 = t Ᾱ · 2 (Δt / 68 דק '). - חישוב Ᾱ 0, W כממוצע של Ᾱ 0, W1, 0 Ᾱ, W2 ו Ᾱ 0, W3 וכן Ᾱ 0, O כממוצע של Ᾱ 0, O1, 0 Ᾱ, O2 ו Ᾱ 0, O3. חישוב logD לפי הנוסחה הבאה:
logD = יומן [(Ᾱ - בצעו את הניסוי כולו ב triplicates ולחשב את ממוצע logD יחד עם סטיית התקן שלה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
ליגנד EOB-DTPA ואת Ga שאינו רדיואקטיבי (III) מורכבים נותחו באמצעות 1 H ו- 13 C {1} H ספקטרוסקופיה NMR, ספקטרומטריית מסה ניתוח יסודי. התוצאות המפורטות בטבלה 1 ו מתואר איורים 1-6 לאמת את הטוהר של חומרים.
Elution של הגנרטור 68 Ge / 68 Ga הניבו פתרונות של 400-600 MBq 68 Ga. תוצאות הליך תיוג המתוארות ההיווצרות של Ga 68 נותב הרצוי [EOB-DTPA], הצביעו כפי שיא הרדיו HPLC מפגין זמן שמירה של 2.8 דק '(איור 7). השוואה עם זמן השמירה של התקן Ga [EOB-DTPA] ב גלאי UV-VIS ב 220 ננומטר (2.7 דק ', איור 8) מאשרת תיוג מוצלח. 68 Ga מתואמים הוא זוהה כמו שיא רדיו ב 2.1 דקות (איור7). 68 יעילות Ga-התיוג של איו-BDTPA נחקרו על ידי קביעת תשואת התיוג כפונקציה של הריכוז ליגנד באמצעות HPLC (איור 9). התשואות נקבעו בשלושה עותקים וסטיות תקן חושבו.
בהתאם pH ואת הריכוז של אניונים נוכח פתרון, ללא תיאום או אי שכותרתו 68 Ga עשויה להתקיים מינים שונים, למשל, gallates או הידרוקסיד מסיס. 31 המונח הכוללני "חינם 68 Ga" 32 משמש לכל אי שכותרתו מינים בתמיסה למעט הידרוקסיד, אשר בדרך כלל, המכונה "קולואידים 68 Ga". בתנאי הניתוח תארו, חינם 68 Ga נע עם חזית הממס (ו R = 1.0) על צלחת TLC. קולואיד 68 Ga לא ניתן לאתר באמצעות HPLC, בעוד על צלחת TLC נראה כפעילותבראשית הצירים (R f = 0). הכרומתוגרמה נציג צלחת TLC נתחה עם סורק רדיואקטיביות TLC מוצגת באיור 10. נותבו מפגין התנהגות שמירה שונה, תלוי אם מדגם של פתרון תיוג (pH 3.8-4.0, f R = 0.3) או מדגם של פיסיולוגי (ו R = 0.5) pH נותח.
כדי לחקור את היציבות של נותב, שכותרתו טרי 68 Ga [EOB-DTPA] התווסף דגימות של pH פיזיולוגי, המכיל מדולל PBS (ריכוז פוספט 5.5 מ"מ, א), עודף של apo- transferrin (1.6 מ"ג / מ"ל ב מדולל PBS עם ריכוז פוספט של 0.8 מ"מ, ב ') בסרום (C האדם), בהתאמה. במשך הזמן, את הטוהר radiochemical (t RCP) של נותב בדגימות נקבע באמצעות TLC. אחוז נותב שמורים היה מחושב כיחס בין RCP t בנקודות הזמן בהתאמה RCP 0 בנקודת ההתחלה (טבלה 2). זה היה הכרחי בשל פתרונות התיוג המכילים נותב ברמות שונות ומגוונות של 0 RCP (93-96%). ובכך אחוז מתוקנן של נותב שלם מתואר כפונקציה של זמן באיור 11.
לקביעת דגימות מימית logD של נותב בתמיסה מדוללת PBS היו מוכנים. הדגימות היו מעורבים עם octanol n-, centrifuged ובהמשך aliquots הוסרו כדי לקבוע את ריכוז הפעילות בשני שלבים. ערכי פעילות והחישוב הבא של logD מהם מתוארים בטבלה 3. שווי logD הממוצע הוא 3.54 ± 0.08.
איור 1. 1 ספקטרום H-NMR של EOB-DTPA. < / strong> הספקטרום נרשם D 2 O ב- 400.1 MHz. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
איור 2. 13 C {1} H ספקטרום -NMR של EOB-DTPA. הספקטרום נרשם D 2 O ב- 100.6 MHz. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
איור 3. MS של EOB-DTPA (יינון electrospray (ESI), מתנול, מצב שלילי).54334fig3large.jpg "target =" _ blank "> לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
איור 4. 1 ספקטרום H-NMR של Ga [EOB-DTPA]. הספקטרום נרשם D 2 O ב- 400.1 MHz. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
איור 5. 13 C {1} H ספקטרום -NMR של Ga [EOB-DTPA]. הספקטרום נרשם D 2 O ב- 100.6 MHz. אנא לחץ אותה דואר כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
איור 6. MS של Ga [EOB-DTPA] (ESI, מתנול, מצב שלילי), יחד עם תיאור מפורט של דפוס איזוטופ של השיא המולקולרי. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
איור 7. הכרומתוגרמה הנציג HPLC של מדגם של 68 Ga [EOB-DTPA] המכיל בחלקים מתואם 68 Ga, כפי שנרשם על ידי גלאי הרדיואקטיביות. המתואם 68 Ga מפגין זמן שמירה של 2.1 דקות, בעוד נותב מזוהה ב -2.8 דקות .Target = "_ blank"> לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
איור 8. הכרומתוגרמה הנציג HPLC של החומר הסטנדרטי Ga [EOB-DTPA], כפי שזוהה על באפיק מול UV ב 220 ננומטר. שעת השמירה של ההתקן הקר היא 2.7 דקות. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של זה דמות.
תיאור איור 9. של 68 יעילות Ga-תיוג של EOB-DTPA. תשואת התיוג כפי שנקבע באמצעות HPLC זמם כפונקציה של הריכוז של EOB-DTPA (22-29 פעילות החל MBq, pH 3.8-4.0, 5 דקות, RT). סטיית התקן מתואר על ידי מוטות שגיאה. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
נציג איור 10. הכרומתוגרמה TLC חושף מינים 68 Ga שונים. מדגם של 68 Ga [EOB-DTPA] ב PBS בדילול (ריכוז פוספט 5.5 מ"מ, pH = 7.4) נותח לאחר 110 דקות של דגירה. הפצה למופת של קולואידים 68 Ga (R f = 0), 68 Ga [EOB-DTPA] (ו R = 0.5) וחופשי 68 Ga (R f = 1.0) על צלחת 70 מ"מ TLC כפי שזוהו על ידי סורק רדיואקטיביות TLC הוא מוצג. ספירה היא ריקבון תיקן. אנא לחץ כאן כדי להציג גדולגרסה של נתון זה.
איור 11. קביעות יציבות של 68 Ga [EOB-DTPA] מדיה שונה. תיקן מתנוונים, אחוז מתוקנן של נותב שלם כפי שנקבעו באמצעות TLC, מתוארות כפונקציה של זמן. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו .
תוצאות טבלת 1. ספקטרוסקופיות NMR, MS וניתוחי יסודות בצעו עבור EOB-DTPA ואת Ga [EOB-DTPA]. עוצמות שיא יחסית MS ניתנים%, הקצאה לשיאים ניתנות בסוגריים מרובעים. ערכי CHN יסודות היו Calcu lated עבור C 23 H 33 N 3 O 11 · H 2 O (EOB-DTPA) ו- (NH 4) 0.75 H 1.25 [C 23 H 28 גן 3 O 11] · 2H 2 O (Ga [EOB-DTPA]).
נחישות יציבות טבלת 2. 68 Ga [EOB-DTPA] מדיה שונה. המפלגה הקומוניסטית הרומנית של 68 Ga [EOB-DTPA] במדיה A, B ו- C נקבעה באמצעות TLC בנקודות זמן נתון. רכב הדגימות ניתן אחוזי% של נותב / חינם 68 Ga / קולואידים 68 Ga. אחוז נותב שלמים הוא טופל כמו יחס של RCP t / RCP 0. RCP 0 הוא RCP בהתאמה של נותב ב t = 0 דקות.
ss = "jove_content" FO: keep-together.within-page = "1"> 
. קביעת לוח 3. של logD Decay תיקן ערכים אלפא 0, X של שלושה aliquots (x = 1, 2, 3) יוסר כל שלב (W: מימית, O: n -octanol) של מדגם. כל הפעילויות ניתנות לדקה. LogD מחושבת כמפורט בסעיף 5 לפרוטוקול. הניסוי חזר על עצמו פעמים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
EOB-DTPA נגיש באמצעות סינתזה רבה שלב 33 אבל יכול באותה מידה להיות מבודד חומר ניגוד זמין המכיל חומצת gadoxetic. לשם כך, יון המרכזי אלוקים (III) ניתן זירז עם עודף של חומצה אוקסלית. לאחר הסרת ה (III) אוקסלט וחומצה אוקסלית ליגנד יכול להיות מבודד על ידי משקעים במים קרים ב- pH 1.5. עם זאת, על מנת לשפר את התשואות עמודה כרומטוגרפיה של תסנין יכול להתבצע במקום או כהליך מעקב. אחת מהשיטות מניב ליגנד טהור אנליטית ב סך התשואות של 70% (איורים 1-3, טבלה 1).
מצאנו כי על מנת לבודד Ga [EOB-DTPA] התאמת pH עם פתרון האמוניה יתרון לעומת השימוש נתרן הידרוקסידי, מאז אמוניום כלוריד תוצר לוואי ניתן להסיר שאריות מאוד הידרופילי באמצעות סובלימציה. תחת התנאים הנ"ל תהליך זה מתרחש איטיly. מאז כמויות זניחות של כלוריד היו עדיין לזיהוי לאחר חמישה ימים, מלח הנותרים נשטף החוצה עם מתנול. למרות התוצאות נוהל עבודה-אפ זה אובדן חלקי של Ga [EOB-DTPA], המוצר הושג בטהרה אנליטי עם תשואה כוללת של 46% (איורים 4-6, טבלה 1). עבור הבידוד של שניהם EOB-DTPA ואת Ga שלה (III) המורכב, שימוש כרומטוגרפיה שלב התהפך צריך להיחשב שיטה חלופית של טיהור, במיוחד מאז הפירוק של ג'ל סיליקה צפוי בעת שימוש בממסים קוטביים מאוד.
תהליך התיוג של EOB-DTPA נדרש שימוש מאוד טהור ממיסים, כימיקלים וציוד ללא מתכת כדי למנוע את נוכחותו של יונים של מתכות מתחרה, בשל 68 Ga להיות נוכח כמויות nanomolar (2 MBq של 68 Ga במדגם 1.75 מ"ל שווה ריכוז נוקליד של 0.14 ננומטר). תיוג של EOB-DTPA 68 Ga מתרחש ב- pH 3.8-4.0 תוך חמש דקותאוטי בטמפרטורת החדר. חקירות על 68 יעילויות Ga-התיוג דורשות קביעת תשואת התיוג תוך שמירה על pH תנאי תגובה, הטמפרטורה וזמן תגובה וכן התחלת פעילות של 68 Ga קבוע או במגוון מוצדק. עבור כל נקודת נתונים (כלומר, ריכוז ליגנד) הניסוי צריכה להתבצע לפחות שלוש פעמים כדי לספק ברמת ביטחון סבירה, שכן ריכוזי הן של ליגנד ו -68 Ga נמצאות ברמות נמוכות מאוד והתשואה תיוג ולכן רגישים סטיות קלות אפילו של תנאי תגובה. לדוגמה, כפי הגילאים eluate 68 Ga, aliquots של הגדלת נפח צריך להיות מסוגר לספק פעילות פתיחה קבועה, ובכך הדורשים כרכים גדל והולך של חיץ. יתר על כן, הזדקנות תוצאות eluate בהגדלת ריכוזים של Zn 68 מוצר הדעיכה, שבעצמו עלול לפעול כמתחרה 68 Ga, ובכך להשפיע באופן שלילי labelinיעילות גרם. 13,34,35 כמעט תיוג כמותי של 22-29 MBq 68 Ga מושגת בתנאים הנ"ל עם כמויות של EOB-DTPA ≥ 0.7 מיקרוגרם (איור 9), עם תוכן חינם 68 Ga ≤ 2% וכ -5 % של ההווה קולואידים 68 Ga בדגימות.
בעוד HPLC בתנאי הפרדה הבסיס מעולה של חינם 68 Ga Ga ו -68 [EOB-DTPA], שהוא אינו מתאים לאיתור קולואידים 68 Ga. לפיכך בחרנו TLC לקבוע את RCP במהלך מדידות יציבות, שבו הכימות של transferrin או חלבון נכנס 68 Ga נדרש. מצאנו הפרדת בסיס מקובלת למטרה זו (איור 10); עם זאת, השימוש בשיטות סינון כרומטוגרפיה או הדרת גודל 15,36 להסיר שברי קולואידים, ואחריו ניתוח HPLC, עלולים להיחשב חלופות. מתחם Ga 68 מפגין במיל חזקention על צלחות TLC (ו R = 0.3) אם המדגם הוא למשוך ממנה ישירות מפתרון תיוג בניגוד דגימות ב- pH פיזיולוגי (ו R = 0.5). אנו מציעים התבוננות זו עשויה להיות מוסברת על ידי מדינות protonation אחרות של המתחם.
בשנת קביעות ויציבות חוץ גופייה של 68 קליעים נותבים Ga מבוצעות בדרך כלל ב PBS 15,17 או מערכות חיץ אלטרנטיבה מחקו את pH הפיזיולוגי 37, וכן פתרונות המכילים apo- transferrin 37, המהווה את המתחרה העיקרית 68 Ga בדם, או 15,17 נסיוב אדם. בניסויים שלנו תוספת של פתרון הידרוקסיד 0.1 M נתרן כדי PBS נדרשה להתאים את ה- pH של דגימות ל -7.4. לא יכולנו לטעון כי ריכוז פוספט משפיע על קצב הפירוק, מאז ניסויים יציבים בפתרונות של משתנה ריכוז פוספט (0.8 מ"מ ו 5.5 מ"מ (א)) ניב הלא reproduתוצאות cible. עם זאת, מצאנו כי B פתרון, המכיל apo -transferrin (1.6 מ"ג / מ"ל, אשר נמצא בטווח של תוכן פלזמה נורמלית 38) ו -0.8 פוספט מ"מ (דם אדם בדרך כלל מפגין רמה פוספט של 0.8-1.5 מ"מ 39,40 מקביל), גרם פירוק בשיעור לזה הנצפה בסרום אדם (C). בפתרונות AC, לאחר 185 דקות התוכן של קולואידים 68 Ga עלה בכ 24%, בעוד שהתוכן של חינם 68 Ga עלה ב 11% בתמיסה, 17% B פתרון ו -27% ב- C פתרון (לוח 2 ). העובדה כי 68 Ga נוצר על ידי פירוק נותב קיימת בעיקר כמו 68 Ga חינם בניגוד קולואיד או הנכנס חלבון 68 Ga ב B ו- C יכול להיות בגלל רווית transferrin או וזהוב איטיים שיעורי מחייב transferrin.
לניבוי חלוקת רקמות קליעים נותבים n- octanol / מי מחיצה מקדמי להתחברמקדמי P או הפצה logD ניתן לקבוע יחס של ריכוזי פעילות בשני השלבים. על פי הגדרה, פרמטר logD אינו מבחינה בין מספר מינים הנמצאים בתווך, מה שהופך אותו מתאים הניסויים שלנו בשל האפשרות של מדינות protonation שונות של נותב וכן הפירוק שלה בשלב המימי. כדי לקבוע logD ידי מיצוי המדיום המימי בדרך כלל נאגר עם PBS לחקות את תנאי דם. 17,43-45 מסיבות הנ"ל השתמשנו מדולל PBS, מפגין ריכוז פוספט של 0.8 מ"מ ו- pH הפיזיולוגי. לאחר מיצוי עם n -octanol צנטריפוגה, הסרת מספר aliquots מאותו שלב מאפשר לאי דיוקים שנגרמו על ידי pipetting להצטמצם. בשל ריכוזי פעילות נמוכים מאוד octanol n- אחד צריך להיות זהיר, כדי למנוע זיהום צולב עם השלב המימי ולהבטיח העברה כמוני לתוך בקבוקון נפרד. distribמקדמי ution נקבע על ידי הליך זה היו לשחזור, ובעוד הם מאפשרים הערכה גסה של lipophilicity, השוואה ישירה logP של הקב"ה [EOB-DTPA] אינו אפשרי. בשל הספציפיות של הקב"ה [EOB-DTPA] וכתוצאה מכך לא בעיקר lipophilicity אלא ניסויים נוספים ספיגת כיס שלה במקצועות או תאים חיים יהיה צורך לספק מידע נרחב יותר על biodistribution כמו גם יציבות in vivo של 68 Ga [EOB -DTPA]. בסך הכל, יישום כסוכן הדמיה עבור זלוף שלב כיס מוקדם שאפשר להעלות על הדעת.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| primovist | Bayer | - | 0.25 M |
| gallium(III) chloride | Sigma-Aldrich Co. | 450898 | |
| water (deionized) | - | - | tap water deionizing equipment by Auma-Tec GmbH |
| hydrochloric acid 12 M | VWR | 20252.29 | |
| sodium hydroxide | Polskie Odczynniki Chemiczne S.A. | 810925429 | |
| oxalic acid | Sigma-Aldrich Co. | 75688 | |
| ethyl acetate | Brenntag GmbH | 10010447 | |
| silica gel | Merck KGaA | 1.10832.9025 | Geduran Si 60 0.063-0.2 mm |
| TLC silica gel 60 F254 | Merck KGaA | 1.16834.0001 | |
| methanol | VWR | 20903.55 | |
| ethanol | Brenntag GmbH | 10018366 | |
| eiethylether | VWR | 23807.468 | stored over KOH plates |
| ammonia solution (25%) | VWR | 1133.1 | |
| pH electrode | VWR | 662-1657 | |
| stirring and heating unit | Heidolph | 505-20000-00 | |
| pump | Ilmvac GmbH | 322002 | |
| frit | - | custom design | |
| NMR spectrometer | Bruker Coorporation | - | Ultra Shield 400 |
| mass spectrometer | Thermo Fisher Scientific Inc. | - | |
| elemental analyser | Hekatech GmbH Analysentechnik | - | EuroVector EA 3000 CHNS |
| deuterated water D2O | euriso-top | D214 | 99.90% D |
| Material/Equipment required for labeling procedures | |||
| 68Ge/68Ga generator | ITG Isotope Technologies Garching GmbH | A150 | |
| pump and dispenser system | Scintomics GmbH | - | Variosystem |
| hydrochloric acid 30% (suprapur) | Merck KGaA | 1.00318.1000 | |
| water (ultrapur) | Merck KGaA | 1.01262.1000 | |
| sodium chloride (suprapur) | Merck KGaA | 1.06406.0500 | |
| sodium acetate (suprapur) | Merck KGaA | 1.06264.0050 | |
| glacial acetic acid (suprapur) | Merck KGaA | 1.00066.0250 | |
| sodium citrate dihydrate | VEB Laborchemie Apolda | 10782 | >98.5% |
| PS-H+ Cartridge (S) | Macherey-Nagel | 731867 | Chromafix |
| apo-Transferrin | Sigma-Aldrich Co. | T2036 | |
| PBS buffer (tablets) | Sigma-Aldrich Co. | 79382 | |
| human serum | Sigma-Aldrich Co. | H4522 | from human male AB plasma |
| flasks, columns, etc. | custom design | ||
| pH electrode | Knick Elektronische Messgeräte GmbH & Co. KG | 765-Set | |
| binary pump (HPLC) | Hewlett-Packard | G1312A (HP 1100) | |
| UV Vis detector (HPLC) | Hewlett-Packard | G1315A (HP 1100) | |
| radioactive detector (HPLC) | EGRC Berthold | ||
| HPLC C-18-PFP column | Advanced Chromatography Technologies Ltd. | ACE-1110-1503/A100528 | |
| HPLC glass vials | GTG Glastechnik Graefenroda GmbH | 8004-HP-H/i3µ | |
| pipette | Eppendorf | - | |
| plastic vials | Sarstedt AG & Co. | 6542.007 | |
| plastic vials | Greiner Bio-One International GmbH | 717201 | |
| activimeter | MED Nuklear-Medizintechnik Dresden GmbH | - | Isomed 2010 |
| tweezers | custom design | ||
| incubator | Heraeus Instruments GmbH | 51008815 | |
| vortex mixer | Fisons | - | Whirlimixer |
| centrifuge | Heraeus Instruments GmbH | 75003360 | |
| gamma well counter | MED Nuklear-Medizintechnik Dresden GmbH | - | Isomed 2100 |
| water for chromatography | Merck KGaA | 1.15333.2500 | |
| acetonitrile for chromatography | Merck KGaA | 1.00030.2500 | |
| trifluoroacetic acid | Sigma-Aldrich | 91707 | |
| TLC radioactivity scanner | raytest Isotopenmessgeräte GmbH | B00003875 | equipped with beta plastic detector |
References
- Weinmann, H. J., et al. A new lipophilic gadolinium chelate as a tissue-specific contrast medium for MRI. Magn. Reson. Med. 22, 233-237 (1991).
- Stroszczynski, C., et al. Aktueller Stand der MRT-Diagnostik mit leberspezifischen Kontrastmitteln. Radiologe. 44, 1185 (2004).
- Van Beers, B. E., Pastor, C. M., Hussain, H. K. Primovist, Eovist - what to expect. J. Hepatol. 57, 421-429 (2012).
- Zech, C. J., Herrmann, K. A., Reiser, M. F., Schoenberg, S. O. MR Imaging in Patients with Suspected Liver Metastases: Value of Liver-specific Contrast Agent Gd-EOB-DTPA. Magn. Reson. Med. Sci. 6, 43-52 (2007).
- Leonhardt, M., et al. Hepatic Uptake of the Magnetic Resonance Imaging Contrast Agent Gd-EOB-DTPA: Role of Human Organic Anion Transporters. Drug Metab. Dispos. 38, 1024-1028 (2010).
- Wadas, T. J., Wong, E. H., Weisman, G. R., Anderson, C. Coordinating Radiometals of Copper, Gallium, Indium, Yttrium, and Zirconium for PET and SPECT Imaging of Disease. J. Chem. Rev. 110, 2858-2902 (2010).
- Ametamey, S. M., Honer, M., Schubiger, P. A. Molecular Imaging with PET. Chem. Rev. 108, 1501-1516 (2008).
- Cutler, C. S., Hennkens, H. M., Sisay, N., Huclier-Markai, S., Jurisson, S. S. Radiometals for Combined Imaging and Therapy. Chem. Rev. 113, 858-883 (2013).
- Henze, M., et al. PET Imaging of Somatostatin Receptors Using [68GA]DOTA-D-Phe1-Tyr3-Octreotide: First Results in Patients with Meningiomas. J. Nucl. Med. 42, 1053-1056 (2001).
- Hofmann, M., et al. Biokinetics and imaging with the somatostatin receptor PET radioligand 68Ga-DOTATOC: preliminary data. Eur. J. Nucl. Med. 28, 1751-1757 (2001).
- Blau, M., Nagler, W., Bender, M. A. Fluorine-18: a new isotope for bone scanning. J. Nucl. Med. 3, 332-334 (1962).
- Green, M. A., Welch, M. J. Gallium Radiopharmaceutical Chemistry. Int. J. Radiat. Appl. Instrum. B. 16, 435-448 (1989).
- Rösch, F. Past, present and future of 68Ge/68Ga generators. Appl. Radiat. Isot. 76, 24-30 (2013).
- Liu, S. The role of coordination chemistry in the development of target-specific radiopharmaceuticals. Chem. Soc. Rev. 33, 445-461 (2004).
- Haubner, R., et al. Development of (68)Ga-labelled DTPA galactosyl human serum albumin for liver function imaging. Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging. 40 (68), 1245-1255 (2013).
- Yang, W., Zhang, X., Liu, Y. Asialoglycoprotein Receptor-Targeted Radiopharmaceuticals for Measurement of Liver Function. Curr. Med. Chem. 21, 4-23 (2014).
- Chauhan, K., et al. 68Ga based probe for Alzheimer's disease: synthesis and preclinical evaluation of homodimeric chalcone in β-amyloid imaging. Org. Biomol. Chem. 12, 7328-7337 (2014).
- Chakravarty, R., Chakraborty, S., Dash, A., Pillai, M. R. A. Detailed evaluation on the effect of metal ion impurities on complexation of generator eluted 68Ga with different bifunctional chelators. Nucl. Med. Biol. 40, 197-205 (2013).
- Clevette, D. J., Orvig, C. Comparison of ligands of differing denticity and basicity for the in vivo chelation of aluminum and gallium. Polyhedron. 9, 151-161 (1990).
- Prinsen, K., et al. Development and evaluation of a 68Ga labeled pamoic acid derivative for in vivo visualization of necrosis using positron emission tomography. Bioorg. Med. Chem. 18, 5274-5281 (2010).
- Vogl, T. J., et al. Liver tumors: comparison of MR imaging with Gd-EOB-DTPA and Gd-DTPA. Radiology. 200, 59-67 (1996).
- Reimer, P., et al. Phase II clinical evaluation of Gd-EOB-DTPA: dose, safety aspects, and pulse sequence. Radiology. , 177-183 (1996).
- Ba-Ssalamah, A., et al. MRT der Leber. Radiologe. 44, 1170-1184 (2004).
- Scott, R. P. W. Journal of Chromatography Library. 22A, Elsevier Scientific Publishing Co. A137-A160 (1983).
- Reichenbaecher, M., Popp, J. Strukturanalytik organischer und anorganischer Verbindungen. , 1st, B. G. Teubner Verlag. Wiesbaden. (2007).
- Gross, J. H. Mass Spectrometry: A Textbook. , Springer. (2004).
- Ma, T. S., Rittner, R. C. Modern Organic Elemental Analysis. , Marcel Dekker, Inc. (1979).
- Mueller, D., et al. Simplified NaCl Based 68Ga Concentration and Labeling Procedure for Rapid Synthesis of 68Ga Radiopharmaceuticals in High Radiochemical Purity. Bioconjugate Chem. 23, 1712-1717 (2012).
- Roberts, T. R. Radio-column chromatography. Journal of Chromatography Library. 14, 103-132 (1978).
- Roberts, T. R. Radio-thin-layer chromatography. Journal of Chromatography Library. 14, 45-83 (1978).
- Green, M. A., Welch, M. J. Gallium radiopharmaceutical chemistry. Nucl. Med. Biol. 16, 435-448 (1989).
- Notni, J., Plutnar, J., Wester, H. J. Bone-seeking TRAP conjugates: surprising observations and their implications on the development of gallium-68-labeled bisphosphonates. EJNMMI Res. 2, 13 (2012).
- Schmitt-Willich, H., et al. Synthesis and Physicochemical Characterization of a New Gadolinium Chelate: The Liver-Specific Magnetic Resonance Imaging Contrast Agent Gd-EOB-DTPA. Inorg. Chem. 38, 1134-1144 (1999).
- 68Ga generator for positron emission tomography. Zhernosekov, K., Nikula, T. , DE102010037964B3 (2012).
- Simecek, J., Hermann, P., Wester, H. J., Notni, J. How is 68Ga Labeling of Macrocyclic Chelators Influenced by Metal Ion Contaminants in 68Ge/68Ga Generator Eluates? ChemMedChem. 8, 95-103 (2013).
- Baur, B., et al. Synthesis, Radiolabelling and In Vitro Characterization of the Gallium-68-, Yttrium-90- and Lutetium-177-Labelled PSMA Ligand, CHX-A''-DTPA-DUPA-Pep. Pharmaceuticals (Basel). 7, 517-529 (2014).
- Boros, E., et al. RGD conjugates of the H2dedpa scaffold: synthesis, labeling and imaging with 68Ga. Nucl. Med. Biol. 39, 785-794 (2012).
- Beck, W. S. Hematology. , 5th, MIT press. Cambridge, Massachusetts. (1998).
- Patel, V., Morrissey, J. Practical and Professional Clinical Skills. , 1, Oxford University Press Inc. New York. (2001).
- Bartke, A., Constanti, A. Basic Endocrinology. , 1, CRC Press. (1998).
- Bernstein, L. R. Mechanisms of Therapeutic Activity for Gallium. Pharmacol. Rev. 50, 665-682 (1998).
- Clausen, J., Edeling, C. J., Fogh, J. 67Ga Binding to Human Serum Proteins and Tumor Components. Cancer Res. 34, 1931-1937 (1974).
- Dumont, R. A., et al. Novel 64Cu- and 68Ga-Labeled RGD conjugates show improved PET imaging of αvβ3 integrin expression and facile radiosynthesis [Erratum to document cited in CA156:116856. J. Nucl. Med. 52, 1498 (2011).
- Pohle, K., et al. 68Ga-NODAGA-RGD is a suitable substitute for 18F-Galacto-RGD and can be produced with high specific activity in a cGMP/GRP compliant automated process. Nucl. Med. Biol. 39, 777-784 (2012).
- Notni, J., Pohle, K., Wester, H. J. Be spoilt for choice with radiolabelled RGD peptides: Preclinical evaluation of 68 Ga-TRAP(RGD)3. Nucl. Med. Biol. 40, 33-41 (2013).
