Summary
أدوات لتشخيص سوء حامض الصفراء وقياس نقل حامض الصفراء في الجسم الحي تقتصر. يوصف نهجا مبتكرا في الحيوانات الحية التي تستخدم بروتون المشترك (1 H)، بالإضافة إلى الفلور (19 F) التصوير بالرنين المغناطيسي. هذه المنهجية الجديدة لديها امكانات متعدية للكشف عن سوء امتصاص حامض الصفراء في الممارسة السريرية.
Abstract
جنبا إلى جنب مع دورها التقليدي كما المنظفات التي تسهل امتصاص الدهون والأدب الناشئة يشير إلى أن الأحماض الصفراوية هي عبارة عن جزيئات الإشارة القوية التي تؤثر على الأجهزة متعددة؛ أنها تعدل حركية الأمعاء وإنتاج الهرمون، وتغيير لهجة الأوعية الدموية، واستقلاب الجلوكوز، ايض الدهون، واستخدام الطاقة. التغيرات في الأحماض الصفراوية البراز قد يغير microbiome الأمعاء وتعزيز أمراض القولون بما فيها الإسهال cholerrheic وسرطان القولون. المنظمين الرئيسيين من البراز تكوين الأحماض الصفراوية هي صغيرة في الأمعاء قمي تعتمد على الصوديوم حامض الصفراء الناقل (ASBT) ونمو الخلايا الليفية عامل 19 (FGF19). انخفاض التعبير وظيفة ASBT يقلل المعوية حمض الصفراء يصل تتخذ. وعلاوة على ذلك، تشير في المختبر البيانات أن بعض الأدوية وافقت عليها الهيئة تمنع وظيفة ASBT. نقص الإفراج FGF19 يزيد تركيب الحامض المراري الكبدي وإطلاقها في الأمعاء إلى المستويات التي تطغى ASBT. إما ASBT خلل أو نقص FGF19 يزيد وقد يسبب الأحماض الصفراوية ECAL والإسهال المزمن وتعزيز الأورام القولون. للأسف، وأدوات لقياس الصفراء سوء حامض والإجراءات المخدرات على نقل حامض الصفراء في الجسم الحي محدودة. لفهم إجراءات معقدة من الأحماض الصفراوية، يطلب من التقنيات التي تتيح رصد في وقت واحد من الأحماض الصفراوية في الأمعاء والأنسجة التمثيل الغذائي. وأدى ذلك لنا أن نتصور طريقة مبتكرة لقياس نقل حامض الصفراء في الحيوانات الحية باستخدام مزيج من بروتون (1 H) والفلور (19 F) التصوير بالرنين المغناطيسي (MRI). القائم على استشفاف جديدة لالفلور (19 F) تم إنشاء التصوير بالرنين المغناطيسي الحيوانات الحية واختبار، سواء في التجارب المختبرية والحية. وتشمل نقاط القوة في هذا النهج وعدم التعرض للإشعاعات وإمكانية متعدية المؤينة للبحوث والممارسة السريرية.
Introduction
جنبا إلى جنب مع الدور الكلاسيكي على النحو المنظفات التي تسهل امتصاص الدهون من الأمعاء، وقد ظهرت الأحماض الصفراوية كما الجزيئات يشير قوية تؤثر على أجهزة متعددة بالإضافة إلى تلك التي ترتبط مع 1،2 الدوران المعوي الكبدي بهم. بالإضافة إلى السيطرة على عملية التمثيل الغذائي الخاصة بهم، والأحماض الصفراوية تعدل عدة جوانب من علم وظائف الأعضاء الهضمية (على سبيل المثال، حركية الأمعاء وإنتاج هرمون إنكرتين، علم وظائف الأعضاء القولون، والوقاية من الاصابة بالسرطان) ولها تأثيرات جهازية على لهجة الأوعية الدموية، والجلوكوز واستقلاب الشحوم، واستخدام الطاقة. وفي حين أن بعض هذه الآثار بوساطة في القناة الهضمية، ومن المقرر أن التغييرات بعد الأكل في مستويات حمض الصفراء النظامية الآخرين، كما لوحظ في المرضى الذين يعانون من السمنة المفرطة أو بعد عملية جراحية في المعدة الالتفافية. لإلقاء الضوء على الفعاليات الاستقلابية معقدة من الأحماض الصفراوية مطلوب تكنولوجيا جديدة تسمح للرصد في وقت واحد من مستويات حمض الصفراء في مقصورات تشريحية مختلفة، في الجهاز الهضمي، والفوقيةالأنسجة الأيضية (الكبد والبنكرياس والعضلات والهيكل العظمي والدهنية). الحصول على هذه المعلومات الزمانية والمكانية يتطلب التكنولوجيا المبتكرة - في مجال التصوير فيفو باستخدام استشفاف الحامض المراري جديدة كما هو موضح هنا مثل هذا النهج الجديد.
وينظم تكوين الأحماض الصفراوية والتوزيع في مقصورات التشريحية بعوامل التي تعدل تأليفهم الكبد وامتصاص فائفي، بما في ذلك النظام الغذائي، والجراحة، واستخدام المضادات الحيوية والتغيرات في النباتات الأمعاء. والمنظم الرئيسي من الأمعاء امتصاص حامض الصفراء للتداولها المعوي الكبدي 3 (الشكل 1) هو فائفي قمي تعتمد على الصوديوم حامض الصفراء الناقل (ASBT، SLC10A2). على الرغم من أن يحدث امتصاص السلبي في جميع أنحاء الأمعاء، ASBT تتوسط امتصاص 95٪ من الأحماض الصفراوية في الأمعاء بحيث عادة ما يكون هناك تسرب محدود من الأحماض الصفراوية في البراز. زادت الفئران الأحماض الصفراوية البرازية والمجلس الدولي للمطارات الصفراء تقلص Asbt-ناقص (Slc10a2 - - /)د تجمع 4.
الشكل 1: الدوران المعوي الكبدي من الأحماض الصفراوية.
مثال على الدوران المعوي الكبدي حيث يتم توليفها الأحماض الصفراوية في الكبد ويطرح في القنوات الصفراوية، المخزنة في المرارة، تم إصداره في القريب الأمعاء الصغيرة مع وجبات الطعام، واتخاذ بنشاط تصل عبر ASBT في القاصي الدقاق. في حين يتم امتصاص كميات صغيرة من الأحماض الصفراوية بشكل سلبي في جميع أنحاء الأمعاء، ويتم نقل ما يقرب من 95٪ من الأحماض الصفراوية في الأمعاء بنشاط ASBT مما أدى إلى الحد الأدنى من فقدان (حوالي 5٪) في البراز التي يتم تعويض بمقدار مماثل من تركيب الحامض المراري الجديد في الكبد، وبالتالي الحفاظ على بركة حامض الصفراء ثابتة للدولة. الأسهم على الحق في تحديد العوامل التي قد تؤثر على الاستقرار حامض الصفراء الأصلي وصفت الفلور، بما في ذلك حمض المعدة والبنكرياس والانزيمات المخاطية المعوية، ومعظم importantlذ، الانزيمات حلمهي الصادرة عن الأنواع المطثية التي تستعمر الأمعاء الدقيقة البعيدة والقولون. (تم التعديل بإذن 16) الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
سوء حامض الصفراء يمكن تصنيفها إلى ثلاثة أنواع، كل منها يزيد من الأحماض الصفراوية dihydroxy البراز، مما يسبب الإسهال متقطعة أو مزمنة. اكتب 1 نتائج من أمراض فائفي الإجمالي (على سبيل المثال، استئصال، مرض كرون) 5. اكتب 3 النتائج من المرارة، قطع المبهم، وأمراض الجهاز الهضمي، زيادة نمو البكتريا، وقصور البنكرياس. في المقابل، الأشخاص الذين يعانون من (نوع 2) سوء امتصاص حامض الصفراء "الأساسي" تحديا هائلا التشخيص لأنها تفتقر إلى مثل هذه الظروف سابقة وليس لديهم دليل على علم الأمراض في الدقاق. وبالتالي، وتشخص خطأ حامض الصفراء الأساسي سوء الامتصاص عادة مثل الإسهال ف redominant متلازمة القولون العصبي (IBS-D)، وربما كان السبب الأكثر شيوعا للزيارات المتعلقة الجهاز الهضمي العيادات الخارجية. وتشير التقديرات إلى أن ثلث المرضى الذين يعانون من IBS-D يكون سوء حامض الصفراء الابتدائي؛ في الولايات المتحدة، وهذا قد يمثل عدة ملايين من الأشخاص 5. وتشير رؤى حديثة أن BAM الأساسي مستمد من ضعف تثبيط ردود الفعل من تركيب الحامض المراري الكبدي عن طريق الأمعاء نمو الخلايا الليفية عامل 19 (FGF19)، وليس من انخفاض التعبير أو وظيفة ASBT.
في سوء امتصاص حامض الصفراء الابتدائي، وانخفاض مستويات البلازما من FGF19 تفشل في اغلاق الكبدي تركيب الحامض المراري - الزيادة الناتجة في الأحماض الصفراوية في الأمعاء التشبع الناقلين حامض الصفراء، بما في ذلك ASBT، وانسكاب زيادتها من الأحماض الصفراوية في البراز يسبب الإسهال 6 (الشكل 2). الفئران تعاني من نقص في Fgf15 (FGF19 الفئران) وموسعة تجمع الحامض المراري وزيادة الأحماض الصفراوية البرازية 7.
= "jove_content"> 
الشكل 2: آليات المعوية الصفراء حمض سوء الامتصاص.
عادة، كما هو مبين في لوحة A، ويتم امتصاص حوالي 95٪ من الأحماض الصفراوية في الأمعاء عن طريق النقل النشط في الدقاق البعيدة عبر ASBT. عندما التعبير ASBT أو النشاط يخف (لوحة B)، وضعف الأمعاء النتائج الحامض المراري امتصاص في تسرب الأحماض الصفراوية في القولون. مع ضعف الإشارات FGF19 (لوحة C)، ونقص التغذية المرتدة تثبيط الصفراوية الكبدية النتائج تركيب الحامض في زيادة تركيز الأحماض الصفراوية في الأمعاء التي تطغى قدرة النقل ASBT مع انسكاب الأحماض الصفراوية في القولون. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
طويلة الأجل، والارتفاع المزمن في المجلس الدولي للمطارات الصفراء البرازس قد تشجع الأورام القولون. ينشأ القولون الأورام من النمو الشاذ المخاطية التقدمي مشاركة مع طفرات الجينات الجسدية، ولكن العوامل البيئية التي تزيد من الأحماض الصفراوية البراز قد تسرع وتزيد هذه العملية. في القوارض، وزيادة الأحماض الصفراوية البراز إما نتيجة للإدارة الخارجية أو نقص Asbt تعزيز النمو الشاذ القولون وتشكيل الورم 8-10.
والجدير بالذكر أن النتائج مثيرة تشير إلى أن العقاقير شائعة الاستخدام التي وافقت عليها ادارة الاغذية والعقاقير (FDA) تمنع بشكل فعال نقل حامض الصفراء التي ASBT في المختبر 11. إذا كانت هذه الأدوية تقلل نقل حامض الصفراء في الأمعاء الصغيرة في الجسم الحي، وزيادة مستويات حمض الصفراء البراز، فإن التأثير المحتمل على أمراض القولون يكون المتعلقة. وعزت حتى زيادة صغيرة في أمراض القولون لاستخدام هذا الدواء يمكن أن يكون لها تأثير كبيرا على الصحة العامة. مجموعة أدوات التي يمكن تقييم معقولية هذه في نتائج المختبر والمكشوف الوبائيةسوف أرصاد يحفز بحوث إضافية، بما في ذلك دراسات السلامة ما بعد التسويق.
على الرغم من الحاجة، المقايسات العملية لتحديد الأشخاص الذين يعانون من سوء حامض الصفراء تفتقر. ورفض القياس المباشر للأحماض الصفراوية البرازية منذ سنوات مرهقة، غير عملي، ولا يمكن الاعتماد عليها 5. وتشمل النهج البديلة قياس الاحتفاظ مشتق المشعة المسمى السيلينيوم حمض الكوليك (75 SeHCAT) ومستويات البلازما من-7α هيدروكسي-4-cholesten-3-واحد (C4)، أو محاكمة العلاجية الأضابير حامض الصفراء 75 اختبار SeHCAT له محدودية في أوروبا وليس وافقت عليها الهيئة أو متاحة للاستخدام في الولايات المتحدة وعلاوة على ذلك، حتى التعرض للإشعاع متواضع (0.26 ملي سيفرت / 75 اختبار SeHCAT) من الاختبارات التشخيصية يثير المخاوف، وزيادة نمو البكتريا وأمراض الكبد المتقدم قد تربك 75 نتيجة SeHCAT. اختبار C4 جذابة محتملة منذ فقط مطلوب البلازما، ولكن لديها منخفضة فال إيجابية تنبؤيرق والاختبار غير متاح على نطاق واسع. قياس مستويات المصل FGF19 لديها قيود مشابهة. في كثير من الأحيان الأطباء اللجوء إلى محاكمة العلاجية للمنحيات حامض الصفراء، ولكن هذا النهج لا يمكن أن توفر التشخيص النهائي من سوء حامض الصفراء 5.
لهذه الأسباب، كان ينظر إلى نهج التصوير بالرنين المغناطيسي لقياس رواية النقل الحامض المراري والتوزيع في الجسم الحي باستخدام الأحماض الصفراوية متعددة المفلورة مبتكرة (MFBA-MRI). MFBA تحتوي على ثلاث ذرات الفلور (19 F)، وهو نظير مستقر وفرة طبيعية 100٪، يتم نقلها على نحو مماثل للأحماض الصفراوية الأم 12، ويمكن استخدامها لتصور نقل حامض الصفراء مع مزيج من بروتون (1 H) والفلور ( 19 F) التصوير بالرنين المغناطيسي، لذلك، طريقة حساسة آمن دون التعرض للإشعاعات المؤينة 13،14.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
تلتزم بروتوكول التالية للمبادئ التوجيهية التي وافقت عليها اللجنة المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام (IACUC) في جامعة ميريلاند في كلية الطب (IACUC بروتوكول # 0415011، وافق 18 يونيو 2015).
1. الفئران Gavaging مع إعتبر F-19 الأحماض الصفراوية
- الفئران أنبوب تغذية مع كجم من وزن الجسم 19 الأحماض الصفراوية 150 ملغ / وصفت F. ملء حقنة 1 مل لحجم اللازم مع 19 حل الصفراء الأسهم حمض المسمى F-[الكوليك حمض trifluoro أسيتيل يسين (CA-اليس-TFA، في 1: 1 البولي ايثيلين جلايكول 400: الفوسفات Dulbecco ومخزنة المالحة) أو cholylsarcosine- trifluoro-N-ميثيل اسيتاميد (CA-ريال-TFMA، وفي 60٪ البولي ايثيلين جلايكول 400 و 40٪ Dulbecco والفوسفات مخزنة المالحة] وإرفاق 20 عيار 1.5 بوصة منحنية ذات الرؤوس لمبة المعدة إبرة أنبوب تغذية تأكد من الإبرة تسمين. غير طويلة بما فيه الكفاية للوصول إلى مستوى الغضروف سيفي الشكل الماوس، عند إدراجها في المريء أعلى المحور الإبرة
- بحزم زعرموش الحيوان عن طريق الجلد فضفاضة في الجزء الخلفي من الرقبة بين الإبهام والسبابة، واستخدام الأصابع المتبقية لفهم الجلد على أسفل الظهر والذيل.
- عقد الماوس في وضع مستقيم وتمرير إبرة أنبوب تغذية على طول الجانب وسقف الفم إلى المريء وصولا الى المعدة. إذا واجه مقاومة عند البلعوم وإعادة الإبرة حتى الحيوان "يبتلع" ذلك - لا تدفع ضد المقاومة.
- إذا كنت بحاجة التخدير لأنبوب تغذية، ضع الماوس في جرة الجرس تحتوي على 5 مل الأيزوفلورين وعلى مقربة. عندما يسقط الماوس على جانبها، وانتظر 7 ثانية، وإزالة الماوس وأداء تسمين. لحماية الأفراد من أبخرة مخدر، استخدم جرة الجرس فقط في غطاء الدخان.
- مراقبة الحيوانات على التعافي من الأيزوفلورين في دقائق قليلة.
ملاحظة: بما يتم استقلاب الأيزوفلورين عن طريق الكبد، إشارة الفلور المنبثقة عن المخدرات سليمة أو عناصره تفرز في القنوات الصفراوية والمرارة يمكن أن يربك فلووrine إشارات من 19 الأحماض الصفراوية وصفت F-15. والبديل هو استخدام الكيتامين بالإضافة إلى زيلازين (انظر القسم 3.1 لجرعات).
2. حصاد والمرارة، الكبد والدم لقياس حمض الصفراء عن طريق اللوني السائل / قياس الطيف الكتلي
- لتحقيق أقصى ملء المرارة، الفئران سريع لا يقل عن 6 ساعة قبل حصاد الأجهزة. إعداد الكيتامين وزيلازين في المياه المالحة الفوسفات مخزنة (100 الكيتامين ميكرولتر، 62.5 زيلازين ميكرولتر 840 ميكرولتر PBS).
- باستخدام محقنة معقمة 1 مل، حقن ساعة الماوس تحت الجلد 1 قبل الحصاد الجهاز مع 15 ميكرولتر / غرام من وزن الجسم من حل الكيتامين / زيلازين (الكيتامين 150 ملغ و 18 زيلازين ملغ لكل كيلوغرام من وزن الجسم).
- واحد ساعة بعد إدارة الكيتامين / زيلازين تؤكد التخدير الكافي من قرصة أخمص قدميها، وتضع مستلق الماوس تخدير.
- استخدام 5 أو 6 مقص بوصة لجعل خط الوسط في البطن شق الجلد من العانة إلى سيفي الشكل وفايمقص شمال شرق (4 بوصة) لقطع بطانة البريتوني وتعرض أعضاء البطن - لا يخترق الحجاب الحاجز.
- فهم عملية سيفي الشكل مع المشبك 5 بوصة ورفع مرة أخرى عبر الصدر للكشف عن تجويف البطن العلوي. استخدام ملقط وأداة حادة لتشريح ونقل الكبد جانبا، وتعريض المرارة.
ملاحظة: لا ممزق الكبد أو لمس المرارة على النحو السابق سوف يسبب نزيف حاد وهذا الأخير قد يحفز تقلص المرارة وتفريغ. - وضع المشبك 4 بوصة عبر القناة الصفراوية المشتركة (الشكل 3، متقطع السهام). قطع في الرباط ربط القطب العلوي من المرارة إلى الحجاب الحاجز وتحرك بلطف المرارة إلى الجانب الأيمن من البطن.
الشكل (3): تشريحية وبروتون التصوير بالرنين المغناطيسي آراء المرارة ماوس.
تظهر لوحة ترك مذكرات التفاهم يتعرضالبريد المرارة إلى اليسار من خط الوسط بعد شق البطن. المشبك القبضات عملية سيفي الشكل. يشار إلى المرارة الصيام مليئة الصفراوية بواسطة السهم كبير وفرضت القناة الصفراوية المشتركة من السهام متقطع. [أقحم: يستأصل المرارة سليمة مع القناة الصفراوية المشتركة فرضت. يتم وضع علامة الحاكم في ملليمتر (مم).] وتبين اللوحة اليمنى صورة بالرنين المغناطيسي المرجح كثافة عالية الدقة بروتون من المرارة الفئران الصيام (السهم). الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
- قبل استئصال المرارة أداء ثقب في القلب، والدم الحصاد، ويستنزف الحيوان للتحقق من القتل الرحيم.
ملاحظة: حصاد المرارة أولا قد ممزق الكبد مما تسبب في انهيار القلب والأوعية الدموية والفشل في الحصول على عينة من الدم كافية (≥ 200 ميكرولتر). - كشف الجانب السفلي من الحجاب الحاجز الأيسر والتعرف على سطح ضربات القلب. عند نقطة نبض القلب القصوى ثقب غشاء القلب وبإبرة 23 عيار تعلق على حقنة 1-مل.
- سحب ببطء الحقنة بينما الشفط. عندما يبدأ الدم لملء حقنة، ووقف سحب وصيانة الشفط لجمع 0،2-0،6 ملليتر دم. بلطف الدورية للإبرة أو سحبه قليلا قد إعادة تأسيس تدفق إذا توقفت.
- نقل الدم إلى أنبوب heparinized 1.5 مل وأجهزة الطرد المركزي في 2000 x ج لمدة 15 دقيقة. ترسيب البلازما مع أربعة أجزاء الأسيتونتريل وأجهزة الطرد المركزي في 12000 x ج لمدة 10 دقيقة. تحليل طاف بواسطة السائل اللوني الطيفي الشامل / (LC / MS / MS) 11-1312-1412-1412-1412-14. إذا لزم الأمر، وتخزين البلازما في -80 درجة مئوية قبل التحليل.
- عن طريق تشريح حادة، حرر المرارة من الكبد. القطع القناة الصفراوية المشتركة تحت المشبك، وإزالة وتزن المرارة، ووضعه في microcen 1.5 ملأنبوب trifuge. حصاد الكبد.
- التجانس حوالي 100 ملغ من الكبد والمرارة كلها على الجليد في حجم-21 الخالط الأنسجة الزجاجية. استخراج 75٪ الأسيتونتريل والمياه 25٪ (800 ميكرولتر للكبد، و 300 ميكرولتر لالمرارة) وأجهزة الطرد المركزي في 12000 x ج لمدة 10 دقيقة. تمييع مقتطفات حسب الضرورة، وتحديد محتويات حمض الصفراء باستخدام LC / MS / MS 11-13.
3. الحيوانات الحية بروتون (1 H) والفلور (19 F) التصوير بالرنين المغناطيسي
- لتحقيق أقصى ملء المرارة، الفئران سريع لا يقل عن 6 ساعة قبل التصوير. استخدام الكيتامين وزيلازين، تخدير الفئران لمنع الحركة في الماسح الضوئي التصوير بالرنين المغناطيسي. إعداد محلول المخزون من الكيتامين بالإضافة إلى زيلازين في الفوسفات مخزنة المالحة (130 الكيتامين ميكرولتر، زيلازين 42.5 ميكرولتر، 827 ميكرولتر PBS). واحد ساعة قبل التصوير بالرنين المغناطيسي، واستخدام محقنة معقمة 1 مل لحقن تحت الجلد الفأر مع 5 ميكرولتر / غرام من وزن الجسم من هذا الحل (الكيتامين 65 ملغ و xylaz 4.25 ملغالمعهد الوطني للإحصاء في كجم من وزن الجسم). لمنع جفاف تحت التخدير تنطبق مرهم البيطرية لعيون الحيوان.
- بعد الاستقراء مع الكيتامين / زيلازين على النحو الوارد أعلاه، مقطع منطقة 1.5 سم 2 على اليسار النصف السفلي من البطن الماوس باستخدام # 40 أو أدق شفرات المقص الكهربائي. بعد إزالة الفراء، والإعدادية في المنطقة مع 8 - 12٪ المخفف اليود حل فرك الجراحية وشطف مع 70٪ كحول - كرر الخطوتين. إدراج عيار 24 بنسبة 0.75 بوصة إبرة / تحت الجلد القسطرة ونفق في تجويف البطن. تأكد القسطرة ليست في الأعور أو غيرها من جهاز البطن عن طريق سحب مرة أخرى على الغواص - يجب أن يكون هناك دم أو المواد البرازية في القسطرة.
- إزالة الإبرة وترك القسطرة داخل الصفاق. ضع الماوس على وسادة الحرارية التي تسيطر عليها درجة الحرارة في غرفة الماسح الضوئي الحيوان التصوير بالرنين المغناطيسي.
- تحضير حقنة 1 مل العقيمة التي تحتوي على الكيتامين وزيلازين في الفوسفات مخزنة المالحة (1000 الكيتامين ميكرولتر، 300 زيلازين ميكرولتر، 6700 ميكرولتر PBS) وملء الطول المطلوب من 72 بوصة أنابيب معقمة. ربط القسطرة داخل الصفاق إلى أنابيب معقمة مملوءة مسبقا وتمديد بعيدا عن الماسح الضوئي التصوير بالرنين المغناطيسي. للحفاظ على التخدير حقن 50 ميكرولتر من هذا الحل كل 20 دقيقة إذا العلامات الحيوية الماوس، مستقرة.
ملاحظة: قبل التصوير، وجعل بعض لا المعادن هي بالقرب من الماسح الضوئي التصوير بالرنين المغناطيسي. - استخدام 19 F / 1 H ثنائي ضبطها حجم الخطية التصوير بالرنين المغناطيسي لفائف لإرسال واستقبال إشارات التردد اللاسلكي في 300.283 ميغاهرتز لمدة 1 ساعة و282.524 ميغاهيرتز لمدة 19 نواة F.
- أداء نظام المعايرة 11 و 13 و توطين الحيوانات مع ثلاثة شريحة (محوري، في منتصف سهمي، والاكليلية) الصور الكشفية باستخدام تسلسل النار بسرعة زاوية منخفضة (FLASH). لبدء التجربة، انقر فوق الزر "إشارة المرور" في إطار التحكم المسح على وحدة البرمجيات.
- الحصول ملتسلس 1 صور H MR باستخدام سرعة اقتناء الاسترخاء مع تعزيزمنة (نادر) التسلسل في عرض العرضي للعينة أو جسم الحيوان مع الوقت التكرار 2200 ميللي ثانية، والوقت الصدى 8.9 ميللي ثانية، عامل نادر 8، مجال الرؤية 4 × 4 سم 2، شريحة سمك 1.0 مم، حجم المصفوفة 266 س 266، في الطائرة القرار 150 × 150 ميكرون 2، وعدد من المتوسطات 6. لبدء التجربة، انقر فوق الزر "إشارة المرور" في إطار التحكم المسح على وحدة البرمجيات.
- الحصول على 19 صورة F باستخدام تسلسل FLASH في نفس المنطقة من 1 H التصوير بالرنين المغناطيسي مع مرور الوقت تكرار 220 مللي ثانية، وزاوية الوجه = 30 درجة، وقت صدى 3،078 مللي، حجم مصفوفة 32 × 32، في طائرة قرار 1.25 × 1.25 مم 2، شريحة سمك 4.0 مم، وعدد من المتوسطات 768. لبدء التجربة، انقر فوق "الحزب الجمهوري" (G س- يا ن- ف ipeline) زر في نافذة أداة تحكم مطياف على وحدة البرمجيات.
- بعد التصوير بالرنين المغناطيسي، الموت ببطء الفأر مع injecti داخل الصفاقفي 15 ميكرولتر / غرام من وزن الجسم الكيتامين / حل زيلازين (150 ملغ الكيتامين / 18 ملغ زيلازين لكل كيلوغرام من وزن الجسم) تليها ثقب في القلب لاستنزاف.
- لاستعادة الماوس من التخدير، وإزالة القسطرة داخل الصفاق ولكن لا تترك الحيوان غير المراقب حتى يستعيد وعيه كافية للحفاظ على الاستلقاء القصية.
- لقياس 19 المسمى F-تركيز الأحماض الصفراوية 11-13 من الحصاد الجهاز، والحفاظ على التخدير مع الكيتامين بالإضافة إلى زيلازين كما هو موضح أعلاه.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
استخدام MFBA في الجسم الحي التصوير بالرنين المغناطيسي ل'رؤية نقل حامض الصفراء في الوقت الحقيقي لديها امكانات كبيرة لكلا البحث والاستخدام السريري. وعلاوة على ذلك، الأساليب المذكورة هنا لاستئصال المرارة وتحليل الكيمياء الحيوية من محتوياته باستخدام الكروماتوغرافيا السائلة ومطياف الكتلة توفر وسيلة لتأكيد نتائج التصوير. ومع ذلك، فإن صحة هذه الأساليب تتطلب جرعات دقيقة، وتوقيت المقايسات، وتوطين المرارة للتصوير أو الاستئصال الجراحي. لهذا الأخير، من المهم جدا أن يستسلم أعضاء البطن الماوس، بأقل قدر ممكن. حتى التلاعب طيف من المرارة يمكن أن تحفز انكماش وتفريغ. وبالتالي، للقبض على محتوياته بالكامل، فمن الأهمية بمكان لوضع المشبك عبر القناة الصفراوية المشتركة في أقرب وقت ممكن.
باستخدام اقترح النهج الجراحية هنا، المرارةوينبغي أن تحدد بسهولة وراء الفص الأمامي الأيمن من الكبد في الربع العلوي الأيمن من البطن (الشكل 3). نقل الكبد جانبا، دون لمس المرارة يعرض في القناة الصفراوية المشتركة للقط. مرة واحدة هذا المشبك في مكان، يجب أن تكون هناك صعوبة المضي قدما في الخطوات الأخرى المذكورة في بروتوكول لإزالة المرارة سليمة.
البيانات الواردة في الجدول 1 تكشف عن تركيز انتقائية للغاية من MFBA في المرارة 13،14. حسبت الجهاز (الكبد والمرارة) تركيزات MFBA بافتراض كثافة من 1 غرام / مل 13،14. في غضون 7 ساعة من الجرعة الفموية، كان متوسط تراكم MFBA في المرارة عدة أوامر من حجم (1000 أضعاف) أعلى من تلك التي لوحظت في أي من الكبد أو الدم 13،14. وقد لوحظت مستويات millimolar في المرارة مقابل مستويات مكرومولي في الكبد والدم (الجدول 1 </ قوي>). ويتراوح متوسط التركيزات MFBA 0،4-1،4 ميكرومتر في الدم، 14،5-78،8 مم في الكبد، و18،4-27،0 مم في المرارة. وبما يتفق مع MFBA يجري التعامل مع هذه النتائج نفس الأحماض الصفراوية الفسيولوجية. بعد جرعات عن طريق الفم، ويتم نقل MFBA بنشاط ASBT إلى الدورة الدموية المعوي الكبدي حيث يتم القيام بها إلى الكبد لنقل نشط في خلايا الكبد من قبل ببتيد الصوديوم / توروكولات شارك في نقل (NTCP)، وتفرز في الشجرة الصفراوية للتركيز في المرارة (الشكل 1).
ويبين الشكل 4 تراكم تعتمد على الوقت من إشارة 19 F في المرارة بعد أنبوب تغذية مع MFBA. وأكثر تفصيلا الوقت طبعا باستخدام الأساليب التحليلية (LC / MS / MS) أشارت إلى أن تركيزات المرارة الذروة من MFBA لوحظت في مجموعة من 4-7 ساعة بعد الجرعة الفموية 12، وبما يتفق مع ايجاد وحركية الفسيولوجيةمن الدوران المعوي الكبدي من الأحماض الصفراوية. اللوحة اليسرى في الشكل (4)، صورة بالرنين المغناطيسي حصلت اثنين ونصف 1-4 ساعة بعد أنبوب تغذية عن طريق الفم مع MFBA، تكشف 19 F إشارة الصادرة من ما يبدو أن القناة المشتركة الصفراء (السهم متقطع) وإشارة أقوى المنبثقة عن المرارة (السهم). من 7-8،5 ساعة، لم يعد الكشف عن إشارة القناة الصفراوية المشتركة وزادت المرارة 19 F إشارة إلى نفس كثافة كما أن المنبثقة عن شبح MFBA المجاورة (الشكل 4، اللوحة اليمنى، السهم).
كنا الفئران مع التعبير ناقصة من Asbt لاختبار قدرة MFBA-التصوير بالرنين المغناطيسي للكشف عن انخفاض امتصاص الأمعاء للأحماض الصفراوية. كما هو موضح في الشكل 5A، تخفيض حوالي 22 أضعاف في تركيز MFBA في المرارة من الفئران التي تعاني من نقص Asbt كان يقاس LC / MS 13،14. وبناء على هذه النتائج كان من المتوقع عشرفي MFBA 19 إشارة F التصوير بالرنين المغناطيسي في هذه الحيوانات ستكون أقل من حدود الكشف. في الواقع، كما هو مبين في الشكل 5B، في حين تم الكشف عن قوة 19 F إشارة الصادرة من المرارة في البرية من نوع الماوس، لم يكن هناك الموافق 19 F إشارة في 13،14 الماوس Asbt التي تعاني من نقص. وتؤكد هذه النتائج أن MFBA يتم التعامل بالمثل للأحماض الصفراوية الفسيولوجية والتي MFBA-التصوير بالرنين المغناطيسي يمكن أن تستخدم لكشف ضعف امتصاص الأمعاء للأحماض الصفراوية.
الشكل 4: التمثيلية صور MFBA-التصوير بالرنين المغناطيسي.
نتائج التجارب على الفئران حية تظهر تراكب إعادة بناء 19 F و1 صور H يدل على أن 19 إشارات F تنبع من المرارة الفئران (الأسهم الكبيرة). كانت أشباح المرجعية التي تحتوي على تركيزات معروفة من 19 الأحماض الصفراوية وصفت F-وضعت في الماسح الضوئي التصوير بالرنين المغناطيسي إلى جانب الماوس (يسار السهم). في اللوحة اليسرى، السهم متقطع يشير المسمى F-19 إشارة حامض الصفراء الصادرة من القناة الصفراوية المشتركة. سجلت فوق كل لوحة هي المرة بعد أنبوب تغذية مع حامض الصفراء المسماة F-19 التي كانت قد بدأت التصوير بالرنين المغناطيسي لوقت الانتهاء من هذا الاستحواذ صورة (1.5 ساعة). كما كان متوقعا، المرارة تملأ مع زيادة حمض الصفراء المسماة F-19 مع مرور الوقت. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 5: الموهن MFBA-MRI الإشارة من المرارة من الفئران التي تعاني من نقص Asbt.
(أ) يوضح شريط الرسم البياني أن تركيز MFBA تقاس LC / MS / MS ما يقرب من 22 أضعاف أقل في Asbt-ناقص مقارنة الفئراند للسيطرة على الفئران. (ب) غائب MFBA-MRI إشارة من المرارة من الماوس Asbt التي تعاني من نقص. وتشير النصال 19 الخيالات المسمى F حامض الصفراء (لوحات اليسار) و 19 إشارة F التصوير بالرنين المغناطيسي من الأشباح (لوحات اليمين). السهم في اللوحة اليمنى العليا يدل على المسمى F-19 إشارة حامض الصفراء المنبثقة من المرارة. لا يوجد المقابلة المسمى F-19 إشارة حامض الصفراء في الماوس Asbt التي تعاني من نقص (اللوحة السفلى اليمنى). الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
| المرارة الوزن (ملغ) | MFBA تركيز | |||
| المرارة (ملم) | الكبد (ميكرومتر) | البلازما (ميكرومتر) | ||
| CA-ليز-TFA | 25.2 ± 3.2 | 27.0 ± 2.4 | 78.8 ± 35.1 | 0.4 ± 0.2 |
| CA-ريال-TFMA | 29.2 ± 2.4 | 18.4 ± 1.6 | 14.5 ± 0.6 | 1.4 ± 0.1 |
الجدول 1: القيم التمثيلية للالمرارة، الكبد والبلازما تركيزات 19 الأحماض الصفراوية وصفت F.
وترد يعني ± الخطأ المعياري (SE) قيم الوزن المرارة وتركيزات MFBA مبين في المرارة والكبد والبلازما 12،13. تم قياس القيم المبينة 5-7 ساعة بعد gavaging الفئران مع 150 ملغم / كغم من وزن الجسم للMFBA المشار إليها. لاحظ تركيزات millimolar من MFBA في المرارة بالمقارنة مع تركيزات مكرومولي في الكبد والبلازما. N = 3 ميلم في قيمة CA-اليس-TFA و 5 الفئران في قيمة CA-ريال-TFMA.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
تركيب CA-اليس-TFA وCA-ريال-TFMA وفي المختبر تحليل النقل الخاصة بهم باستخدام ستابلي مدين، داربي خلايا الكلى الكلاب معربا عن ASBT وخلايا الكلى الجنينية البشرية معربا عن ببتيد الصوديوم / توروكولات شارك في نقل (NTCP) وترد تفاصيل مكان آخر 13،14. هنا، يتم التركيز على تناوله عن طريق الفم من MFBA بواسطة أنبوب تغذية للعيش الحيوانات، تليها حصاد المرارة والكبد والدم لتحليل محتوى MFBA، و، ولا سيما، التصوير MFBA في المرارة بواسطة التصوير بالرنين المغناطيسي الحيوانات الحية. وتشمل الخطوات الحاسمة تجنب التخدير على أساس الفلور التي قد تخلق منافسة 19 إشارات F، وتجنب التلاعب المرارة قبل لقط القناة الصفراوية المشتركة التي قد تؤدي إلى انكماش المرارة وتفريغ قبل رفعه الجهاز، وتجنب وضع المعادن بالقرب من الماسح الضوئي التصوير بالرنين المغناطيسي.
كما هو مفصل هنا وفي أماكن أخرى 13،14، MFBA-MRI لديها ر امكانات كبيرةس تحليل بنجاح نقل حامض الصفراء في الجسم الحي تحت كل الظروف الفسيولوجية العادية وغير العادية. القوة الرئيسية لMFBA-التصوير بالرنين المغناطيسي هي أنه لا ينطوي على أي إشعاعات المؤينة (لا MFBA المسمى مع طبيعيا، الفلور غير المشعة ولا التصوير بالرنين المغناطيسي تنبعث منها الإشعاعات المؤينة) وتدار وMFBA شفويا دون الحاجة بزل الوريد (على عكس الفئران، فإن معظم البشر لا تتطلب الإعطاء بالحقن من التخدير أو المهدئات لمنع القطع الأثرية الحركة في الماسح الضوئي التصوير بالرنين المغناطيسي). استبدال حمض الصفراء hydrolyzable مع حمض الصفراء الاصطناعية مقاومة التحلل بواسطة ميكروبات الأمعاء 13،14، ويمكن التغلب على القضايا المتعلقة الاستقرار في الجسم الحي من MFBA في القناة الهضمية. النموذج الأولي لMFBA تشارك مضيفا ثلاث ذرات الفلور في جزيء من الحمض الكوليك، والتي تحدث بشكل طبيعي حامض الصفراء البشري الذي هو تحلل في القناة الهضمية بواسطة المطثية هيدروليز 13،14. رواية حامض الصفراء ثلاثي المفلورة، CA-ريال-TFMA، استنادا إلى ساركوزينالعمود الفقري التي هي مقاومة التحلل من الانزيمات البكتيرية التحايل على هذا التحديد، وتمديد حياة نصف من MFBA 13،14.
وأخيرا، منهجية يحتمل أن تكون متنافسة، واستخدام N-ميثيل [11 C] cholylsarcosine لPET / CT، محدودة بسبب التعرض للإشعاع من كل من حمض رديولبلد الصفراء وCT، والحاجة إلى إعداد والسفن وتخزين المواد المشعة حمض الصفراء 17.
وفيما يتعلق بالتعديلات وحل لمشاكل منهجية الرواية هذه، يمكن للمرء أن نعتبر أن عدم الكشف عن إشارة التصوير بالرنين المغناطيسي المنبثقة عن المرارة قد يكون بسبب وجود مشكلة مع الحامض المسمى F-19 الصفراوية أو التوافر البيولوجي، توقيت الحصول على الصور، أو عدم كفاية تعبئة من المرارة. وكما ذكر أعلاه، ونحن اختبار السلامة الهيكلية من هذه العوامل من خلال قدرتها على أن تنقل في المختبر عن طريق خطوط الخلايا معربا عن نقل الأحماض الصفراوية المناسبة. نسمح لا يقل عن 1.5 ساعةص لاقتناء الصورة ولكن في بعض الحالات هذه المدة قد تتطلب تمديد. نجد أن صيام الفئران قبل التصوير بالرنين المغناطيسي لضمان أقصى قدر من المرارة ملء مهم.
تتطلب أن حدود الكشف عن إشارات 19 F-MRI التصوير الحيوانية ل90-120 دقيقة لاكتساب إشارة الكافي؛ وهذا هو الأرجح وقتا طويلا لاختبار السريري العملي - أن المرضى الذين لديهم لا تزال ماثلة في الماسح الضوئي التصوير بالرنين المغناطيسي لطوال تلك الفترة. أيضا، الحالي، التصوير بالرنين المغناطيسي السريري يعتمد في المقام الأول على بروتون (1 H) التصوير. تطبيق الفلور و(19 F) التصوير يتطلب الاستثمار في الأجهزة (19 F فائف) والبرمجيات، على الأقل استثمار 250،000 $ في التصوير بالرنين المغناطيسي الماسح الضوئي. حتى يتم تطوير التطبيقات الأخرى التصوير بالرنين المغناطيسي على أساس الفلور باستخدام MFBA-التصوير بالرنين المغناطيسي لتقييم المرضى لسوء حامض الصفراء ليس من المرجح أن تكون فعالة من حيث التكلفة.
يوفر MFBA-MRI بديلا واعدا لقياس 75 الاحتفاظ SeHCAT، البلازما 7α-هيدروكسي-4 -cholesten-3-واحد (C4)، وFGF19 البلازما، أو إجراء محاكمة العلاجية باستخدام المجلدات حامض الصفراء. في اختبار SeHCAT الولايات المتحدة (75 عاما) الذي ينطوي على التعرض للإشعاع، لا يتم ادارة الاغذية والعقاقير المعتمدة. C4 وFGF19 اختبار ديه انخفاض قيمة إيجابية، التنبؤية والاختبار متاح حاليا فقط من خلال المعامل المتخصصة. وعلاوة على ذلك، كلا C4 ومستويات FGF19 تعكس تركيب الكبد من الأحماض الصفراوية. وبالتالي، على عكس MFBA-التصوير بالرنين المغناطيسي، وهذه الاختبارات لا يمكن الكشف عن التعبير تغير أو تحور الناقلين حامض الصفراء اللفائفية أو آليات أخرى من سوء حامض الصفراء التي هي مستقلة عن زيادة تركيب الحامض المراري. قد تكون التجارب العلاجية الأضابير حامض الصفراء مفيدة ولكن لها قيمة تنبؤية مؤكدة ولا يمكن أن توفر التشخيص النهائي من سوء حامض الصفراء 5. وأخيرا، على الرغم من أن القياس المباشر للأحماض الصفراوية البرازية على ما يبدو من المعقول رفض هذا منذ سنوات مرهقة للغاية، غير عملي، ولا يمكن الاعتماد عليها للاستخدام السريري الروتيني 5.
والأنف والحنجرة "> تحديات إضافية يجب التغلب بحيث يمكن أن يترجم هذا نهجا مبتكرا لقياس في نقل حامض الصفراء المجراة في عيادة (على سبيل المثال، لتشخيص سوء حامض الصفراء كسبب من الإسهال المزمن). ويتمثل التحدي الرئيسي هو تحقيق أقصى قدر شدة الإشارة عن طريق زيادة عدد 19 ذرات F في الحامض المراري جزيء دون تعطيل قدرة MFBA تتصرف مثل الأحماض الصفراوية الطبيعية، وهذا هو، وهو جزيء حمض الصفراء التي هي ضخمة جدا بسبب أضاف 19 ذرات F لن يتم نقلها من قبل أي ASBT أو حامض الصفراء النقل في الكبد. إن قدرة الرواية MFBA ليتم نقلها في المختبر يمكن اختبار في خطوط الخلايا معربا الرئيسية الناقلين حامض الصفراء الإنسان 13،14 وينبغي أن تكون التنبؤية لفي الجسم الحي والنقل. ومع ازدياد حساسية، MFBA-MRI لديها امكانات لتحسين التصوير الشجرة بأكملها الصفراوية (على سبيل المثال، القناة الصفراوية المشتركة وفروعها)؛ وفي هذا الصدد، فإن ر القدرةس صورة القناة الصفراوية المشتركة في بعض الفئران تبدو واعدة (الشكل 4، اللوحة اليسرى).على الرغم من أن الحدود الحالية لكشف الحامض المراري من قبل MFBA-MRI تسمح التصور بهم فقط في المرارة، على افتراض أن حساسية هذه التقنية يمكن تحسينها نتوقع MFBA-التصوير بالرنين المغناطيسي يمكن أن تستخدم لقياس نقل الحامض المراري والتوزيع في الجسم الحي وبالتالي توفير المكانية شامل تشريحيا المعلومات في الوقت الحقيقي؛ تكنولوجيا التمكينية التي من شأنها دفع التصوير الجزيئي. سوف MFBA-MRI أيضا تقديم تكنولوجيا جديدة لتقييم الآثار المترتبة على تعدد الأشكال الجيني والأدوية التي تضعف وظيفة حمض الصفراء نقل. MFBA-MRI لديها امكانات متعدية لمساعدة الأطباء على الشاشة لسوء حامض الصفراء، وبالتالي تحديد وإدارة الأمراض الناتجة عن زيادة الأحماض الصفراوية برازي (على سبيل المثال، الإسهال الذي يحاكي متلازمة القولون العصبي). وأخيرا، يجب أن تصبح هذه التقنية المتاحة سريريا أنها موالية كبيرتنبيههم إياي لتسريع التقدم في الطب الدقة من خلال توفير القدرة على تحديد تغير الأمعاء امتصاص حامض الصفراء في الأشخاص الذين يعانون من الأورام القولون أو غيرها من الشروط التي قد تتأثر بالتغيرات في الأحماض الصفراوية البراز.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب ليس لديهم ما يكشف.
Acknowledgments
وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة، والمعهد الوطني للسكري وأمراض الجهاز الهضمي والكلى (أرقام منحة R21 DK093406 وT32 DK067872 إلى JP.R.) وجائزة الاستحقاق VA (منحة رقم 1BX002129 إلى JP.R.).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Duall size-21 all glass tissue grinder | Kimble Chase Life Science, Vineland, NJ | 885351-0022 | |
| Bruker BioSpec 70/30USR Avance III 7T horizontal bore MR Scanner | Bruker Biospin MRI GmbH, Germany | Use companion Paravision Version 5.1 software (see step 3.5) | |
| Bruker 40 mm 19F/1H dual-tuned linerar volume coil | Bruker Biospin MRI GmbH, Germany | Use companion Paravision Version 5.1 software (see step 3.5) | |
| Waters Acquity UPLC System with Quadrupole Detector | Waters Corporation, Milford, MA | ||
| Waters Acquity UPLC ethylene bridged hybrid C8 1.7 μm 2.1 x 50 mm column | Waters Corporation, Milford, MA | ||
| Gavage Needle | Braintree Scientific, INC. | N-010 | 20 G-1.5" curved 2.25 mm ball |
| 2 Stainless Steel Hemostats | VWR | 10755-018 | 4 and 5 inch, straight |
| Ketamine | MWI Veterinary Supply | 501090 | Ketamin zetamine 100 mg/ml |
| Xylazine | Akorn, Inc. | 20 mg/ml | |
| Intraperitoneal Catheter | Abbott | AbbocathTM-T.I.V. G720-A01 4535-42 | 24-G x 0.75" |
References
- Thomas, C., Pellicciari, R., Pruzanski, M., Auwerx, J., Schoonjans, K. Targeting bile-acid signalling for metabolic diseases. Nat Rev Drug Discov. 7, 678-693 (2008).
- Vallim, T. Q., Edwards, P. A. Bile acids have the gall to function as hormones. Cell Metab. 10, 162-164 (2009).
- Dawson, P. A., Karpen, S. J. Thematic Review Series: Intestinal Lipid Metabolism: New Developments and Current Insights Intestinal transport and metabolism of bile acids. Journal of Lipid Research. 56, 1085-1099 (2015).
- Dawson, P. A., et al. Targeted deletion of the ileal bile acid transporter eliminates enterohepatic cycling of bile acids in mice. J Biol Chem. 278, 33920-33927 (2003).
- Pattni, S., Walters, J. R. Recent advances in the understanding of bile acid malabsorption. Br Med Bull. 92, 79-93 (2009).
- Walters, J. R., et al. A new mechanism for bile acid diarrhea: defective feedback inhibition of bile acid biosynthesis. Clin Gastroenterol Hepatol. 7, 1189-1194 (2009).
- Hofmann, A. F., Mangelsdorf, D. J., Kliewer, S. A. Chronic diarrhea due to excessive bile acid synthesis and not defective ileal transport: a new syndrome of defective fibroblast growth factor 19 release. Clin Gastroenterol Hepatol. 7, 1151-1154 (2009).
- Flynn, C., et al. Deoxycholic acid promotes the growth of colonic aberrant crypt foci. Mol Carcinog. 46, 60-70 (2007).
- Glinghammar, B., Rafter, J. Carcinogenesis in the colon: interaction between luminal factors and genetic factors. Eur J Cancer Prev. 8, S87-S94 (1999).
- Bernstein, C., et al. Carcinogenicity of deoxycholate, a secondary bile acid. Arch Toxicol. 85, 863-871 (2011).
- Zheng, X., Ekins, S., Raufman, J. P., Polli, J. E. Computational models for drug inhibition of the human apical sodium-dependent bile acid transporter. Mol Pharm. 6, 1591-1603 (2009).
- Vivian, D., et al. Design and characterization of a novel fluorinated magnetic resonance imaging agent for functional analysis of bile Acid transporter activity. Pharm Res. 30, 1240-1251 (2013).
- Vivian, D., et al. Design and evaluation of a novel trifluorinated imaging agent for assessment of bile acid transport using fluorine magnetic resonance imaging. J Pharm Sci. 103, 3782-3792 (2014).
- Vivian, D., et al. In vivo performance of a novel fluorinated magnetic resonance imaging agent for functional analysis of bile acid transport. Mol Pharm. 11, 1575-1582 (2014).
- Raufman, J. P., et al. In Vivo Magnetic Resonance Imaging to Detect Biliary Excretion of 19F-Labeled Drug in Mice. Drug Metab Dispos. 39, 736-739 (2011).
- Ridlon, J. M., Kang, D. J., Hylemon, P. B. Bile salt biotransformations by human intestinal bacteria. J Lipid Res. 47, 241-259 (2006).
- Frisch, K., et al. N-methyl-11C]cholylsarcosine, a novel bile acid tracer for PET/CT of hepatic excretory function: radiosynthesis and proof-of-concept studies in pigs. J Nucl Med. 53, 772-778 (2012).
