Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

במודל רשתית חריפה להערכת תרופות הפרת מכשול רשתית דם פוטנציאל הטיפול

Published: September 13, 2016 doi: 10.3791/54619
Automatic Translation
1, 2, 2, 1,2
1Graduate School of Biomedical Sciences, Rowan University, 2Department of Cell Biology, Rowan University School of Osteopathic Medicine

Summary

מערכת בעלות נמוכה, קלה לשימוש וחזק הוא הוקם כדי להעריך טיפולים פוטנציאל שיכול לשפר הפרת מחסום דם ברשתית המושרית על ידי היסטמין. דליפת כלי דם, הפעלת תא מולר ואת ההמשכיות של תהליכים עצביים מנוצלות כדי להעריך את תגובת הניזק והיפוכו עם תרופה פוטנציאלית, A4 lipoxin.

Introduction

גוף גדל והולך של ראיות תומכת בקיומו של מחסום דם ברשתית (BRB) 1-5 ואת הדמיון שלה אל מחסום דם מוח (BBB) ​​6,7. הפשרה של BBB נקשר בחוזקה סיבתי או כסמן אבחון מחלות ניווניות כרוניות כמו מחלת אלצהיימר (AD) 8,9 ו מצבים חריפים כגון הזיות 10. תובנות מכניסטית לתוך פתולוגיות ותגליות אלה עבור מטרות תרופה פוטנציאל הם הקשו בדרך כלל על ידי מורכבות נגישות מוגבלת לרשת של המוח. חלופות כגון in vivo הדמיה 11, המוח organotypic תרבות 12, בתרביות תאים ראשוניים 13,14 ומערכות שיתוף התרבות 15 נוצרו. עם זאת, רוב המודלים האלה דורשים מכשירים מיוחדים, תקופות ניסוי ארוכות או סמנים מרובים כדי לזהות תאים. דמיון פונקציונלי מבני בין BBB ו BRB וכן מתאם בין dysfunctions של שני היה לטעון 16-19. בנוסף, גישה קלה יותר, סוגי תאים מוגדרים היטב שכבתי מבנה אפשרו הרשתית היטב מאופיינת כחלון למוח. הזהויות המבניות ותפקודיות של BBB ו BRB להישאר להיות לעומת בפירוט. עם זאת, פתולוגיות רשתית, במיוחד הפרת BRB, גם נקשרו בחוזקה עם ההתקדמות של מחלות שונות, כולל סוכרת 18-19 לספירה 21,22. לכן, זה עניין להקים מערכת תפקוד BRB לא רק להתוות את המנגנון אלא גם להקרין תרופות פוטנציאליות. בדו"ח זה, תפקוד לקוי פרוטוקול המאפשר BRB באמצעות תרבות ברשתית חריפה פשוט מפותח והציג.

חדירות BBB מוגברות שינויים פתולוגיים דמוית לספירה הוקמו תרבות המוח organotypic מודגרות עם היסטמין, מתווך פרו-דלקתי 12. לכן, במערכת הציגה, היסטמין היה Applמטען לתרבות רשתית vivo לשעבר כדי לגרום בעיות בתפקוד BRB. רשתיות מכמה מינים, כגון musculus Mus ו Bos Taurus, נבדקו. בשל זמינויות הדמיון המסחריות שלהם רקמה אנושית, נוצלו עיני חזירים טריות לספק את הנתונים המדווחים כאן. לאחר דוגרים עם היסטמין ו / או תרופות אחרות, את הרשתיות עובדו להערכה על ידי immunostaining במשך כמה חלבונים 12, כגון אימונוגלובולין G (IgG), אחד המרכיבים העיקריים של דם; גליה fibrillary חלבון חומצי (GFAP), סמן ידוע עבור הפעלת גליה; ו-הקשורים microtubule חלבון 2 (MAP2), חלבון cytoskeletal ספציפי נוירון חיוני להרכבה microtubule. יתר על כן, במודל השכבות של הרשתית מאפשר ניתוח מפורט של התהליכים של תאי מולר ותאי גנגליון, כגון שינויי הרוחב וההמשכיות שלהם. כך מספר פרמטרים נוספים זמינים להעריך את ההשלכות שלBRB הפרה בשלב מוקדם כדי להעריך את השפעות ההיפוך של טיפולים פוטנציאליים וכן.

בפרוטוקול זה, תופעות היפוך הפוטנציאל של תרופות הוקרן מוערכים משלושה היבטים: דליפה של כלי הדם (BVS), הפעלת תאי גלייה והתגובה-נזק של תאים עצביים. כמה שיטות כימותים מנוצלות, למשל, את רמת הביטוי שמוצגת על ידי עוצמת immunostaining, מדידת רוחב של תהליך ורציפות תהליכים עצביים שמוצגים על ידי מסנן שיפור. כדי להמחיש את השיטה טובה יותר וכדי לסייע לפרש את התוצאות, lipoxin A4 (LXA4), תרכובת המסונתזת באופן אנדוגני בתגובה לפציעה דלקתית הפחתה בתפקוד האנדותל 23, נבחר למטרות הדגמה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

כל הפרוטוקולים בוצעו בהתאם למדיניות של ועדת הטיפול בבעלי החיים המוסדית השתמשתי ישימה.

1. הכנה

  1. כן תקשורת הייצוב עם 75% בינוניים הנשר השונה של Dulbecco (DMEM), 25% תמיסת המלח המאוזן "הנקס (HBSS). מערבבים היטב, aliquot ולאחסן ב -20 ° C עד השימוש.
  2. הכן את בופר פוספט (PBS) לעקר ידי מעוקר. אחסן את הפתרון בטמפרטורת החדר. מומלץ לחמם את PBS על 37 ° C לפני הניסוי (5 מ"ל לכל טוב).
  3. כן 10%, 20% ו -30% סוכרוז PBS. לסנן את כל הפתרונים בנפרד מעל 0.22 מיקרומטר מסננים נפרדים עבור עיקור. שמור פתרונות על 4 מעלות צלזיוס.
  4. כן פתרון מניות היסטמין ב PBS לריכוז של 90 מ"מ. לעקר את הפתרון על ידי סינון על מסנן 0.22 מיקרומטר. Aliquot ולשמור הפתרון ב -80 מעלות צלזיוס. הימנע מחזורים להקפיא-ו-הפשרה מרובות.
  5. הפוך paraformaldehyde 4% טרי (PFA) ב- PBS לפני הניסוי. מניחים אותו על קרח.
    זהירות: שמור PFA במנדף וללבוש ציוד מגן מתאים.
  6. הפשרה בינוני הייצוב (20 מיליליטר לכל רשתית). להוסיף פניצילין, סטרפטומיצין לריכוז סופי של 100 U / ml. חלק חם של המדיום (15 מ"ל לכל רשתית) ל -37 מעלות צלזיוס חממה לפני הניסוי. השאירו את שאר המדיום על הקרח.
  7. מניחים את HBSS (10 מ"ל לכל הרשתית) על קרח.

2. רשתית תרבות Organotypic

  1. העברת דגימות במנדף בתרבית רקמה. פתח את עיינית בחתך סביב העדשה. בעזרת מברשת, להסיר את ההומור זגוגי בעדינות מבלי משיכת הרשתית. בעדינות לנתק את הרשתית מהקצה לחתוך עם מברשת לחשוף את בדיסק האופטי. חמור עצב הראייה בתער ולשחרר את הרשתית.
  2. מעבירים את הרשתית לתוך צלחת פטרי ובזהירות לשטוף הרשתית פעם באמצעות HBSS קר. הנח את הדוגמה HBSS על iלִספִירַת הַנוֹצרִים. לנתח כמה הרשתיות החוצה לפי הצורך על ידי חזרה על שלב 2.1 ו על שלב זה.
  3. חותכים את הרשתית לשניים באופן סימטרי עם תער. בעדינות להעביר דגימות לצלחת 6-היטב עם 3 מ"ל של התקשורת ייצוב לכל טוב. אפשר איזון למשך 30 דקות ב 37 מעלות צלזיוס באינקובטור עם האווירה המכילה 5% CO 2.
  4. הכן את ריאגנטים הבאים במהלך הדגירה על שלב 2.3: לדלל את הפתרון המניות היסטמין לריכוז הרצוי (450 מיקרומטר) במדיום חמים. ממיסים LXA4 (מאוחסן תחת ארגון) לתוך המדיום לריכוז סופי של 250 ng / ml.
    הערה: כאשר מודדים את השפעת LXA4, מחצית מן הרשתית יחיד משמש היסטמין לבד, בעוד החצי השני משמש היסטמין עם LXA4.
  5. לשאוב את המדיום ייצוב בזהירות ולהוסיף המדיום מוכן היטב כל (3 מ"ל לכל טוב). דגירת הדגימות ב 37 מעלות צלזיוס במשך שעה 1. באינקובטור עם האווירה המכילה 2 5% CO.
  6. שוטפים אתדגימות פעם חם, PBS סטרילית.

3. להכין את דגימות Immunostaining

  1. לשאוב PBS מהצלחות. להוסיף 4% PFA (3 מ"ל לכל טוב) ו דגירה של 15 דקות בטמפרטורת החדר.
  2. במהירות לשאוב PFA. שוטפים את דגימות פעם באמצעות PBS. העברת דגימות 10% סוכרוז (5 מ"ל לכל טוב) ו דגירה של 2 עד 4 שעות ב 4 ° C.
  3. העברת דגימות סוכרוז 30% (5 מ"ל לכל טוב) ו דגירה לילה ב 4 מעלות צלזיוס. מערבב חלק אחד של מדיום ההקפאה המסחרי עם שני חלקים של סוכרוז 20% על מנת להפוך את מדיום ההקפאה עובד. תשאיר את זה על 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה או יותר עד באוויר בועות להיעלם.
  4. העברת דגימות המדיום מקפיא עובד ולאפשר איזון במשך 5 דקות בטמפרטורת החדר. חתוך כל רשתית למלבנים (בערך 3 מ"מ על 5 מ"מ).
  5. להעביר בזהירות את דגימות לתוך התקשורת מקפיא עובד הכלול מיכל גלילי (כ -1 ס"מ רדיוס x 2 ס"מ גובה) devised מרדיד אלומיניום. ודא פרוסות רשתית הם אנכיים (אוריינטציה לספק חתך של הרשתית על חתך) ולהקפיא אותם בחנקן נוזלי. שמור את אבני ב -80 ° C עד השימוש.
  6. סעיף כל בלוק על cryostat ל -14 מיקרומטר פרוסות עבות ו הר בסעיפים בשקופיות זכוכית. אחסן את השקופיות ב -80 ° C עד השימוש.

4. Immunostaining

  1. שטפו את החלקים עם חיץ פוספט סוכרוז 5% (SPB, סוכרוז 5% ב PBS, pH 7.4) פעם. חסום את אתרי הקישור הלא ספציפית על ידי דוגרים סעיפים בחסימת המאגר (5% SPB עם 10% נסיוב עז נורמלי 0.5% Triton X-100) במשך שעה 1 בטמפרטורת החדר.
  2. דגירת הסעיפים (בשקופיות) עם הנוגדן הראשוני המתאים (GFAP או MAP2, מדולל ב 1: 500 בחסימת מאגר) במשך שעה 1. לשאוב את הפתרון. לשטוף שלוש פעמים ב 5% SPB. עבור מכתים את IgG אנדוגני, לדלג על שלב זה.
  3. דגירה החלקה עם SECON המקבילנוגדנים dary (Cyanine3 / FITC IgG אנטי עכבר חמור מצומדות / נגד ארנב, מדולל ב 1: 800 במאגר חסימה) במשך שעה 1.
  4. שטפו את החלקים ביסודיות עם 5% SPB שלוש פעמים. להכין את דגימות במיקרוסקופ על ידי מקבע אותם ב הרכבה בינונית המכיל DAPI והתכסות coverslips.
  5. באמצעות מיקרוסקופ לייזר confocal, ללכוד תמונות באמצעות עדשה 20X תחת פרמטרים זהים כגון עוצמת הלייזר, ערך רווח, להתעכב זמן, וכו 'בין הקבוצות. הגדר את אורכי גל עירור / פליטה עבור הערוץ הכחול (כדי לזהות DAPI) כמו 408/447 ננומטר, עבור במסלול האדום (כדי לזהות Cyanine3) כמו 561/785 ננומטר עבור המסלול הירוק (כדי לזהות FITC) כמו 488/525 ננומטר .

ניתוח תמונה 5.

  1. לכמת אחוז כלי דם דולפים על פי הקריטריונים הבאים 12: כלול רק כלי דם עם גרעיני תא האנדותל בתוך מטוס סעיף במניין; לשקול דולפי כלי דם אם הוא מראה AGradient של immunostaining סביב הספינה.
  2. כדי לקבוע את רמת הביטוי, לבחור אזורים של עניין ולמדוד את הערך האפור הממוצע באמצעות תוכנת ניתוח תמונה.
  3. כדי למדוד את הרוחב של התהליך, לבחור שטח של המקטע שבו התהליכים מובחנים (השכבה החיצונית גרעינית, ONL, למשל). לאחר מכן בחר שדה אופטי שבו תהליכים אלו גלויים ורציפים. הגדר את סרגל קנה המידה בהתאם להגדרה המיקרוסקופית, למתוח קו על פני התהליך ולבצע את המדידה.
  4. כדי לנתח את ההמשכיות של תהליך, באזורים נבחרים של עניין, להחיל את המסנן נקרא השונות אשר משפר את הקצוות של התמונה על ידי החלפת כל פיקסל עם השונות בשכונה שלה, באופן אוטומטי את הניגודיות והבהירות, לספור את השורות לנרמל את הספירה על ידי אֵזוֹר.
  5. חישוב משמעויות סטטיסטיות באמצעות -test t של סטודנט שני זנב. *, P <0.05; **, P <0.01; ***, P <0.001. Pהרבה תוצאה כמו ממוצע ± SEM.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

אנו מציגים מערכת בעלות נמוכה, זמן יעיל וקל לשימוש להעריך טיפולים פוטנציאל שיכול להגן מפני הפרת BRB המושרה על ידי היסטמין. IgG הוא מוגבל בתוך הכלי ברשתית ביקורת (איור 1 א), אך הדלפות מתוך כלי הדם בחשיפת היסטמין (איור 1B), המאשר כי המודל הוקם בהצלחה.

LXA4 נבחר כדי להדגים את ההקרנה לתרופות נגד הפרת BRB במערכת הציגה. תפקוד לקוי של BRB מוחלש על טיפול עם LXA4 (איור 1D), אשר אין כל השפעה משמעותית על ידי עצמו (איור 1 ג). ההיפוך הוא ונרשם כאחוז של כלי הדם דלפו והתוצאה היא משמעותי (1E איור). שני סוגי תאים ברשתית, ותאי גלייה מולר (איור 2) ותאי גנגליון ( (איור 2E) המוצג באמצעות מכתים GFAP (איור 2, AD) אבל אין השפעה משמעותית על המשכיות של תהליכים דנדריטיים בתאי גנגליון (איור 3G), שמוצג על ידי מכתים MAP2 (איור 3, ע"א). יצוין גם כי לא חל שינוי משמעותי ברמת הביטוי של כל אחד החלבונים מזוהה.

איור 1
איור 1:. גדר רשתית הדם נפגעת על חשיפת היסטמין והצילה ידי LXA4 טיפול immunostaining IgG (אדום) מוצג מנקודת הרשתית אשר הייתה מטופל (א), ניזק נגרם עם היסטמין בלבד (B), שטופל LXA4 בלבד (C ), או חשוף הוא histamine ו LXA4 (D). בשליטה (א) והתייחסו LXA4 (C) קבוצות, IgG מוגבלת בתוך כלי הדם (BVS) ואילו בקבוצת היסטמין (B), IgG מזוהה מתוך BVS בו צורות עננים דליפה שמציינים מעגלים מנוקדים. רובד נוסף של LXA4 מציל את תפקוד כלי (D). סרגל קנה מידה, 20 מיקרומטר. (E) מדידת כמותית של BVS דולף על פני הקבוצות הנבדקות. מובהקות סטטיסטיות נקבעות על ידי -test t של סטודנט שני זנב. *, P <0.05; **, P <0.01; ***, P <0.001. ממוצע ± SEM (n = 18) הוא להתוות בתרשים. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 2
איור 2: רונג> תהליכים בתא מולר נפגמו על ידי היסטמין והציל ידי טיפול LXA4. Immunostaining עבור GFAP מוצגת מנקודת הרשתית אשר היה מטופל (א), הנזק הנגרמת עם היסטמין בלבד (B) שטופלו רק LXA4 (C) או חשופים הן היסטמין ו LXA4 (D). מכתים חיובי מתקבל בתהליכי תאי מולר פני הרשתית וברחבי BVS. סרגל קנה מידה, 20 מיקרומטר. (E) רוחבו של תהליכים בתא מולר מכל הקבוצות מוצגות. כ -30 תהליכים בודדים נמדדו לכל קבוצה. מובהקות סטטיסטיות נקבעות על ידי -test t של סטודנט שני זנב. *, P <0.05; **, P <0.01; ***, P <0.001. ממוצע ± SEM (n = 30) הוא להתוות בתרשים. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

t "FO: keep-together.within-page =" 1 "> איור 3
איור 3: את רצף תהליכי תא גנגליון אינו מושפע LXA4. (א) Immunostaining נגד MAP2 מוצג מנקודת הרשתית אשר הייתה מטופל (א), ניזק נגרם עם היסטמין בלבד (B) שטופל LXA4 בלבד (C) או חשוף הוא היסטמין LXA4 (D). מכתים חיובי מתקבל התהליכים גופי התא של תאי גנגליון. תמונה לדוגמא של מכתים MAP2 (E) יחד עם תמונת מסנן משופרת המתאימה לו (F) מוצגת. התהליכים המתמשכים מסומן על ידי ראשי חץ. סרגל קנה מידה, 20 מיקרומטר. (G) הצפיפות של תהליכים בתא הרציפים, גנגליון MAP2 החיוביים מכל הקבוצות מוצגות. מובהקות סטטיסטיות נקבעות על ידי -test t של סטודנט שני זנב. *, P <0.05; **, P <0.01; ***, P <0.001. ממוצע ± SEM (n = 18) הוא להתוות בתרשים. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
DMEM Life Technologies  11965-092
HBSS Life Technologies  14170-112
Sucrose J.T.Baker 4072-05
Histamine  Sigma H7125-1G
Penicillin-Streptomycin  Invitrogen
PFA Electron Microscopy Sciences 15710
Freezing Media  Triangle Biomedical Sciences TFM-5
Normal Goat Serum  Rockland D104-00-0050
Triton X-100 Sigma T8787
GFAP Antibody Millipore AB5804
MAP2 Antibody EMD Millipore MAB3418
FITC conjugated Donkey anti-rabbit IgG Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc. 711-095-152
Cy3 conjugated Donkey anti-mouse IgG Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc. 715-165-150
mounting medium containing DAPI Vector Laboratories, Inc. H-1200
Laser Confocal Microscope Nikon Eclipse Ti microscope
ImageJ National Institutes of Health 1.45s

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Cunha-Vaz, J., Bernardes, R., Lobo, C. Blood-retinal barrier. J Ophthalmol. 21, 3 (2011).
  2. Kim, J. H., et al. Blood-neural barrier: intercellular communication at glio-vascular interface. J Biochem Molec Biol. 39, 339-345 (2006).
  3. Kumagai, A. K. Glucose transport in brain and retina: implications in the management and complications of diabetes. Diabetes Metab Res Rev. 15, 261-273 (1999).
  4. Runkle, E. A., Antonetti, D. A. The blood-retinal barrier: structure and functional significance. Methods Molec Biol. 686, Clifton, N.J. 133-148 (2011).
  5. Takata, K., Hirano, H., Kasahara, M. Transport of glucose across the blood-tissue barriers. Int Rev Cytol. 172, 1-53 (1997).
  6. Goncalves, A., Ambrosio, A. F., Fernandes, R. Regulation of claudins in blood-tissue barriers under physiological and pathological states. Tissue Barriers. 1, 24782 (2013).
  7. Patton, N., et al. Retinal image analysis: concepts, applications and potential. Prog Ret Eye Res. 25, 99-127 (2006).
  8. Di Marco, L. Y., et al. Vascular dysfunction in the pathogenesis of Alzheimer's disease--A review of endothelium-mediated mechanisms and ensuing vicious circles. Neurobiol Dis. 82, 593-606 (2015).
  9. Nagele, R. G., et al. Brain-reactive autoantibodies prevalent in human sera increase intraneuronal amyloid-beta(1-42) deposition. J Alzheimer's Dis: JAD. 25, 605-622 (2011).
  10. Goldwaser, E., Acharya, N., Nagele, R. Cerebrovascular and blood-brain barrier compromise: A mechanistic link between vascular disease and Alzheimer's disease subtypes of neurocognitive disorders. J Parkinsons Dis Alzheimer's Dis. 2, 10 (2015).
  11. Horton, N. G., et al. In vivo three-photon microscopy of subcortical structures within an intact mouse brain. Nat Photonics. 7, (2013).
  12. Sedeyn, J. C., et al. Histamine Induces Alzheimer's Disease-Like Blood Brain Barrier Breach and Local Cellular Responses in Mouse Brain Organotypic Cultures. Biomed Res Int. 2015, 937148 (2015).
  13. Avdeef, A., Deli, M. A., Neuhaus, W. Blood-Brain Barrier in Drug Discovery: Optimizing Brain Exposure of CNS Drugs and Minimizing Brain Side Effects for Peripheral Drugs. Di, L., Kerns, E. H. , John Wiley & Sons, Inc. Ch. 10 188 (2014).
  14. Eigenmann, D. E., et al. Comparative study of four immortalized human brain capillary endothelial cell lines, hCMEC/D3, hBMEC, TY10, and BB19, and optimization of culture conditions, for an in vitro blood-brain barrier model for drug permeability studies. Fluids Barriers CNS. 10, 33 (2013).
  15. Takeshita, Y., et al. An in vitro blood-brain barrier model combining shear stress and endothelial cell/astrocyte co-culture. J Neurosci Methods. 232, 165-172 (2014).
  16. Alberghina, M., Lupo, G., Anfuso, C. D., Moro, F. Palmitate transport through the blood-retina and blood-brain barrier of rat visual system during aging. Neurosci Lett. 150, 17-20 (1993).
  17. Hosoya, K., Yamamoto, A., Akanuma, S., Tachikawa, M. Lipophilicity and transporter influence on blood-retinal barrier permeability: a comparison with blood-brain barrier permeability. Pharm Res. 27, 2715-2724 (2010).
  18. Minamizono, A., Tomi, M., Hosoya, K. Inhibition of dehydroascorbic acid transport across the rat blood-retinal and -brain barriers in experimental diabetes. Biol Pharm Bull. 29, 2148-2150 (2006).
  19. Serlin, Y., Levy, J., Shalev, H. Vascular pathology and blood-brain barrier disruption in cognitive and psychiatric complications of type 2 diabetes mellitus. Cardiovasc Psychiatry Neurol. 2011, 609202 (2011).
  20. Kolb, H. How the retina works - Much of the construction of an image takes place in the retina itself through the use of specialized neural circuits. Am Sci. 91, 28-35 (2003).
  21. Ikram, M. K., Cheung, C. Y., Wong, T. Y., Chen, C. P. Retinal pathology as biomarker for cognitive impairment and Alzheimer's disease. J Neurol Neurosurgery Psychiatry. 83, 917-922 (2012).
  22. Tan, Z., Ge, J. Amyloid-beta, the retina, and mouse models of Alzheimer disease. Am J Pathol. 176, 2055 (2010).
  23. Serhan, C. N. Pro-resolving lipid mediators are leads for resolution physiology. Nature. 510, 92-101 (2014).
  24. Bucolo, C., et al. Effects of topical indomethacin, bromfenac and nepafenac on lipopolysaccharide-induced ocular inflammation. J Pharm Pharmacol. 66, 954-960 (2014).
  25. Edelman, J. L., Lutz, D., Castro, M. R. Corticosteroids inhibit VEGF-induced vascular leakage in a rabbit model of blood-retinal and blood-aqueous barrier breakdown. Exp Eye Res. 80, 249-258 (2005).

Tags

רפואה גיליון 115 מחסום דם ברשתית רשתית חוסר תפקוד כלי דם היסטמין lipoxin A4 תאי מולר תאי גנגליון
במודל רשתית חריפה להערכת תרופות הפרת מכשול רשתית דם פוטנציאל הטיפול
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Wu, H., Rodriguez, A. R., Spur, B.… More

Wu, H., Rodriguez, A. R., Spur, B. W., Venkataraman, V. An Acute Retinal Model for Evaluating Blood Retinal Barrier Breach and Potential Drugs for Treatment. J. Vis. Exp. (115), e54619, doi:10.3791/54619 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter