Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Neuroscience

Боковой Хронический Черепно Окно Подготовка Включает Published: December 29, 2016 doi: 10.3791/54701

Summary

Хирургическая окклюзия дистальной ветви средней мозговой артерии (МСАО), часто используется модель в экспериментальных исследованиях инсульта. Эта рукопись описывает основную технику постоянного MCAO, в сочетании с введением боковой черепной окно, которое дает возможность для продольной прижизненной микроскопии у мышей.

Abstract

Очаговая мозговая ишемия (то есть, ишемический инсульт) , может привести к значительному травмы головного мозга, что приводит к серьезной потере функции нейронов и , следовательно , к хосту двигательных и когнитивных нарушений. Его высокая распространенность представляет серьезную опасность для здоровья, поскольку инсульт является одной из основных причин длительной нетрудоспособности и смерти во всем мире 1. Восстановление функции нейронов, в большинстве случаев, лишь частично. До сих пор, варианты лечения весьма ограничены, в частности , из - за узкого временного окна для тромболизиса 2,3. Определение методов для ускорения восстановления после инсульта остается главным медицинской целью; Тем не менее, это было затруднено из-за недостаточного механистической проникновением в процесс восстановления. Экспериментальные исследователи инсульта часто используют грызуна модели фокальной ишемии головного мозга. Помимо острой фазы, исследования инсульта все больше ориентируется на подострой и хронической фазы при ишемии головного мозга. Большинство исследователей инсульта применяют постоянный или транокклюзия масштабного коэффициента ЗВК у мышей или крыс. У пациентов, окклюзий MCA являются одними из наиболее частых причин ишемического инсульта 4. Кроме проксимального окклюзии MCA с использованием модели нити, хирургическая окклюзия дистальной MCA, вероятно, наиболее часто используемая модель в исследовании экспериментальной инсульта 5. Окклюзия дистальной (к ветвлением lenticulo-стриарных артерий) MCA ветви, как правило, запасные части стриатуме и в первую очередь влияет на неокортекс. Судно прикуса может быть постоянным или временным. Высокая воспроизводимость объема поражения и очень низким уровнем смертности по отношению к долгосрочному результату являются основными преимуществами этой модели. Здесь мы покажем, как выполнить хронический черепных окно (CW) подготовка латерального сагиттальной пазухи, а потом, как хирургическим путем вызвать дистальную инсульта под окном, используя краниотомии подход. Этот подход может быть применен для последовательной визуализации острых и хронических изменений, возникающих после ишемии черезэпи-освещения, конфокальной лазерной сканирующей и двухфотонную прижизненной микроскопии.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

ЭТИКА ЗАЯВЛЕНИЕ: Эксперименты по предметам животных были проведены в соответствии с руководящими принципами и правилами, установленными Landesamt FUER Gesundheit унд Soziales, Берлин, Германия (G0298 / 13) и ARRIVE критериев, в зависимости от обстоятельств. Для этого исследования, от 10 до 12-недельных самцов мышей C57BL / 6J были использованы.

1. Боковой Хронический Черепно Окно Подготовка

  1. Выполнение анестезии с подкожной инъекцией кетамина (90 мг / кг) и ксилазина (10 мг / кг). Тест для адекватного седации с болью раздражитель.
  2. Стерилизовать хирургических инструментов и операционного поля с 70% -ным этанолом.
  3. Удалите волосы головы от шеи до глаз, используя грызуна бритву.
  4. Зафиксируйте голову в стереотаксической раме.
  5. Используйте декспантенол глазную мазь на оба глаза, чтобы избежать обезвоживания.
  6. Очистите хирургическую область, чтобы удалить все волосы и стерилизовать его с 3-мя слоями 74,1% этанола и 10% 2-пропранолол.
  7. Выполнение средней линиинадрез от шеи до глаз скальпелем.
  8. Span лоскут кожи с 4 места для палаток швами.
  9. Удалите надкостницы тщательно на левом полушарии, очищая его с скальпелем до точки, где начинается височной мышцы.
    Примечание: Этот препарат также служит для создания хорошей адгезии к площади зубной клей, который фиксирует крышку стекла.
  10. Выполните лобно-теменной трепанацию черепа с диаметром 4 мм, за счет уменьшения толщины черепа на краю костного лоскута с использованием microdrill. Применение солевого раствора в процессе бурения, чтобы избежать травм тепла.
  11. Приподнимите костный лоскут с канюлей и удалить его с помощью microforceps.
  12. тщательно и интенсивно Промывать с физиологическим раствором.
  13. Смешайте зубной клей , пока он не имеет надлежащей последовательности и не является жидкостью (то есть, клей не должен производить темы больше). Поместите его на кости вокруг краниотомии.
  14. Поместите крышку стекла диаметром 6 мм на подготовленном клеем и закрепите его с помощью йе остальная часть зубной клей. Убедитесь, что она водонепроницаема. Подождите, пока клей не сушат и трудно проверив ее при помощи щипцов.
    Примечание: дополнительное орошение ускоряет процесс отверждения.
  15. Снять швы и места для палаток закрыть рану швами кожи.
  16. Подтяните кожу фланг мыши. Вставьте иглу подкожно и осторожно заменить 0,5 мл стерильного физиологического раствора подкожно для баланса жидкости.
  17. После операции, держать животных в клетке восстановления нагревают в течение 90 мин. Подождите, пока животные не полностью пробуждены, прежде чем покинуть их без присмотра. Подождите, пока животные не будут полностью восстановлены перед их возвращением в клетку с другими животными.
  18. Повторите подкожную подстановку объем физиологического раствора после того, как приблизительно 12 ч, как описано в пункте 1.16.
  19. Всегда применять обезболивание через желудочный зонд или непосредственно в полости рта после операции (например, парацетамол (10 мг / мл) или другие нестероидные противовоспалительные препараты).
  20. Проверить состояние животных каждый день после операции, и всегда обеспечивают пюре животную пищу на полу в чашку Петри, чтобы сделать пищу простым и избежать критической потери веса после операции.
    Примечание: Прижизненные микроскопия может быть выполнена в первый день после черепной подготовки окна.
  21. Применение изофлуран анестезии и зафиксировать животное в держателе головки. Откройте шовный материал кожи и очистить окно с ватными палочками и стерильным физиологическим раствором. Через 24 часа черепной окно должно быть заполнено спинномозговой жидкостью к тому времени точки, что позволяет визуализацию. Выполните визуализацию с использованием существующих протоколов микроскопии 18.

2. Дистальный MCAO

ПРИМЕЧАНИЕ: Процедура MCAO должна проводиться около 5 дней, после получения CW. Это сводит к минимуму помехи от иммунной реакции, вызванной препаратом CW с иммунной реакции, вызванной инсультом.

"SRC =" / файлы / ftp_upload / 54701 / 54701fig1.jpg "/>
Рисунок 1. Обзор дистального МСАО. A. Это хороший обзор о судах до оп. B. Сосуды после первого биполярного контакта. С. Сосуды после второго биполярного контакта. D. Обзор о судах, которые полностью закрыты в настоящее время. E. Окончательный обзор с меньшим увеличением. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

  1. Анестезировать мышей с использованием маски анестезии и соответствующего обезболивающий режима в консультации с ветеринарным персоналом (например, индукция с 1,5 - 2% изофлуран и технического обслуживания с 1,0 - 1,5% изофлуран в 2/3 N 2 O и 1/3 O 2 через испарителем).
  2. Бритье и удалить волосы и дезинфицировать кожу и окружающие мех с соответствующим агентом (например, 70% этиловый спирт), и высушить его после этого.
  3. Поддерживать температуру тела мышей при 36,5 ° C ± 0,5 ° C во время операции. Обратной связи контролируется грелку, нагревают в соответствии с ректальной температуры мыши, настоятельно рекомендуется.
  4. Место животное в боковом положении. Закрепите нос в маске анестезии и регулировать изофлуран концентрации до 1,0 - 1,5%.
  5. Применяют влажную мазь (декспантенол) для обоих глаз.
  6. Используйте разрез кожи, сделанный для подготовки CW.
  7. Аккуратно отделить кожу и определить височной мышцы под ним.
  8. Отрегулируйте энергию высокочастотного генератора (5 - 7 Вт) и использовать биполярный режим.
  9. С помощью электрокоагуляции щипцами и осторожно удалите височную мышцу от черепа, создавая мышечный лоскут, не полностью удаления мышц.
  10. Определить MCA ниже прозрачного черепа в ростральной части височной области, спинные к ретро-Орбитал пазухи. Если раздвоение MCA не могут быть идентифицированы, пытаются идентифицировать судно наиболее ростральной.
  11. Тонкий череп выше ветви MCA с microdrill при непрерывном оросительной во избежание повреждения тепла.
  12. Поднимите кость с канюлей и удалить его с microforceps.
  13. Уменьшение энергии высокочастотного генератора до 3 - 5 Вт
  14. Подойдите к артерии сверху и нежно прикоснуться к ней с биполярных щипцов с обеих сторон без подъема судна.
  15. Коагулируйте артерию проксимально и дистально к развилке сосуда.
  16. Подождите 30 секунд, а затем нажмите артерию осторожно, чтобы гарантировать, что поток крови постоянно прерывается. Повторите электрокоагуляцию, если наблюдается реканализации.
  17. Закрепить височной мышцы с 1 или 2 стежков при вставке мышцы, чтобы покрыть дефект кости, если это возможно.
  18. Шовный рану и поместить животное в коробку восстановления с подогревом. В целом, восстановление животных быстро после летучего ANESThesia.
  19. Для замещения объема, наносят 0,5 мл стерильного физиологического раствора, подкожно, как описано в пункте 1.16.
  20. После операции, позволяет животным оставаться в клетке восстановления нагревают в течение 90 мин. Подождите, пока животные не сознают, прежде чем покинуть их без присмотра. Только вернуть их в клетку с другими животными, когда они полностью выздоровели.
  21. Повторите замену громкости, как описано в пункте 1.16, после 12 ч.
  22. Применяют послеоперационное обезболивание через питьевую воду (например, парацетамол (10 мг / мл) или другие нестероидные противовоспалительные препараты).
  23. Проверьте состояние здоровья животных каждый день после операции. Обеспечить растертый животной пищи в чашку Петри на полу, чтобы упростить питание и свести к минимуму потери веса в послеоперационном периоде.

3. Лечение Sham

  1. Выполните все процедуры идентично шаги 1 и 2, описанных выше, в том числе CW препарат, за исключением того, не слипаются обнаженную средней мозговой арTery.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Сроки и репрезентативные результаты показаны на рисунках 2 и 3. Черепных препарат окно, с небольшим черепной окна сбоку от верхнего сагиттального синуса приводит к очень низкой смертности и заболеваемости скорости , когда выполняется опытным хирургом (рис 2 B, C, D). Все 10 животных выжили, и все хронические ХО может быть использован для получения изображения высокого качества, даже через 28 дней после операции. Там не было никаких проблем с раневых инфекций или других осложнений.

Из-за короткого воздействия летучего анестезии и только незначительные повреждения мозга, примерно 10 - 15 мин после дистальной MCAO и переноса в клетку восстановления с подогревом, все животные спали, свободно перемещаться в клетке восстановления, и взаимодействуя с однопометные. В целом, смертность от дистального модели MCAO составляет менее 5% и в основном происходит в результате сосудистого Injury и последующего кровотечения во время операции МСАО. Смертность в течение периода наблюдения 28-дневного периода после дистальной MCAO происходит очень редко. Морфологически поражения можно оценить с помощью гистологию или МРТ (рисунок 3 A, B). Кроме того, измерения МРТ предлагают возможность оценить объем поражения и прогрессирования в продольном образом. МРТ проводили через 24 часа после того, как ишемия четко изображен ишемического повреждения , расположенный под хроническим CW, в то время как следующие фиктивные операции, не пораженном ткань коры головного мозга обнаружено не было (рис 3А). Результаты МРТ ясно показывают , строгое ограничение очага поражения в коре головного мозга, тем самым избавляя стриатума, в отличие от мицелиальных модели MCAO (фиг.3В). Боковой хронический CW подготовка позволяет долгосрочную визуализацию корковой сосудистую и микроциркуляции с помощью эпи-флуоресцентной микроскопии (рис 3C, верхняя часть) и подкорковых областей с помощью двухфотонной микроскопии (FIGUповторно 3C, нижняя часть). Кроме того, можно получать изображения молекулярных путей и от клетки к клетке взаимодействий с флуоресцентно-меченного клеток или измерений автофлюоресценции, таких как время жизни флюоресценции визуализации. Как показано на фиг.3D, дистальный модель MCAO вызывает высокой воспроизводимостью ишемических поражений. Что касается объема инфаркта, мы ожидаем, что стандартное отклонение ниже 15% в одном наборе операций. Как уже упоминалось выше, в отличие от моделей проксимального MCAO, уровень смертности довольно низкие для дистального модели 5. Использование последовательного МРТ, повреждение, объем, и прогрессирование отека следующий очаговой ишемии головного мозга может быть оценена. МРТ через 24 ч и 96 ч после постоянного дистального MCAO не показали существенного прогрессирования Т2 hyperintensities.

фигура 2
Рисунок 2: Хронический Черепно Подготовка окна. (A) Представительный график. <сильный> (B) Маркировка области , где краниотомия имеет место, боковой к височной мышцы, медиальнее верхнего сагиттального синуса, и спинные к темени. (С) Мозг поверхность после краниотомии, с интактной твёрдой слоем и покровным стеклом на месте; окружность показывает расположение ишемизированной области после дистальной МСАО. (D) Закончено хронический черепных окно с фиксированным покровным стеклом, готовы к повторяющимся визуализации в течение нескольких недель (б = темени, тм = височной мышцы, SSS = верхний сагиттальный синус, аи = площадь ишемии). Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

Рисунок 3
Рисунок 3: Комбинация боковой Chronic CW и дистального MCAO или Sham хирургии. (A) МРТ проводили через 24 часа после того, как шутра операция не показывает пораженное корковой ткани. (Б) МРТ проводили через 24 часа после того, как ишемия ясно показывает ишемическое поражение (*) , расположенному под хроническим CW. (С) прижизненные эпи-флуоресцентных изображений (верхняя часть) и двухфотонного томография (нижняя часть) коркового сосудистую сеть . Объем (D) Инфаркт оценивали с помощью МРТ через 24 ч и 96 ч после ишемии показывает средний объем поражения 13.16 2,3 мм 3 при 24 ч и 12,2 1,9 мм 3 на 96 часов. Каждая точка представляет отдельное животное (n = 10 животных на группу, среднее ± SEM). Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Инсульт является одной из основных причин длительной нетрудоспособности и смерти во всем мире 1. Помимо острого лечения, исследования новых подходов и механизмов для ускорения и повышения восстановления после инсульта остается главным медицинская цель 7. Экспериментальные исследователи инсульта часто используют грызуна модели фокальной ишемии головного мозга. На самом деле, модели , индуцирующие переходные или постоянные MCAO имитируют один из наиболее распространенных видов очаговой ишемии головного мозга у больных 4. Кроме проксимального окклюзии MCA, модель нити для хирургической окклюзии дистальной MCAO, вероятно, наиболее часто используемая модель в экспериментальных исследованиях инсульта 5,19. Здесь мы опишем основной метод постоянного дистального MCAO в сочетании с боковой CW, предлагая возможность для продольной прижизненной микроскопии у мышей. Высокая воспроизводимость объема поражения, а также очень низкие показатели смертности, в частности, в отношении изучения долгосрочных результатов, аре основные преимущества этой мышиной модели. В этой корковой модели инсульта, кровеносные сосуды в области инсульта и пери-инфарктной области могут быть визуализированы с помощью хронического CW. Использование мульти-флуоресцентной системы эпифлуоресцентной videomicroscopic, динамику кровотока и динамического набора циркулирующих клеток могут быть визуализированы. Кровеносные сосуды визуализируются посредством использования флуоресцентно меченных макромолекул, как декстраны или альбумин. Клетки могут быть помечены либо флуоресцентных красителей или с помощью генетических моделей, таких как химеры костного мозга с GFP-положительных животных. Кроме того, для изучения клетки к клетке взаимодействия и динамики экстраваскулярных клеток, двухфотонного лазерного сканирования конфокальной микроскопии может быть применен. Обработки изображений до 250 мкм ниже поверхности коры может быть выполнена. Опять же , кровеносные сосуды окрашивали с использованием флуоресцентно меченных макромолекулы, а клетки помечены генетически (например, с использованием трансгенной GFP-Nestin мышь).

Черепных окноОперация проводится с помощью трепанации без открытия твердой мозговой оболочки. Одним из основных недостатком является то, чтобы случайно повредить дурального слой и коры головного мозга под ним при открытии черепа с microdrill. Таким образом, этот метод требует некоторых технических навыков для того, чтобы избежать повреждения твердой мозговой оболочки и коры головного мозга, которая вызывает иммунный результаты реакции и влияния микроскопии. В качестве альтернативы, потенциальная модель разреженных черепа ограничена менее надежным качеством микроскопии из-за оставшегося черепа, особенно в долгосрочной перспективе. Часто повторяющиеся черепа прореживания необходимо, в то время как в модели CW, качество окна длится в течение нескольких месяцев, пока череп подроста или дуральным загущающих влияний формирования изображения качество 14,20. Модуляция этой модели с препаратом разреженных черепа было бы возможно. Дуральный слой должен быть оставлен на мозг, чтобы избежать каких-либо травм или возбуждение коры. Только если непосредственное применение к ишемическому области желательно в экспериментальной модели может быть повторно Duraдвигались, осторожно и не повреждая никаких мостиковых вен.

В отличие от моделей , сочетающих CW и индуцирующих целенаправленную окклюзии сосудов с помощью облучения , циркулирующих фотосенсибилизаторов, что приводит к только очень малых ишемических поражений, дистальные МСАО модель имитирует большинство человеческих штрихами, которые расположены в корковом MCA территории 13. Чтобы избежать помех при транзиторной воспалительной реакции из-за подготовки CW, окно должно быть подготовлено несколько дней до дистального операции МСАО.

Ряд тестов для оценки функциональных, а также поведенческие аспекты у грызунов доступны (например, анализ походки, тест rotarod, шест тест, тест удаления клея, тест лестница, испытания в открытом грунте, и Моррис водном лабиринте) 21. Во всех этих тестах, мышей, подвергнутых воздействию MCAO выполнять менее успешно, чем у контрольных животных в отношении краткосрочных и среднесрочных результатов. Однако, что касается оценкидолгосрочные результаты, следует признать , что чувствительность функционального тестирования весьма ограничены с точки зрения дистального MCAO, а также мягкий проксимальная MCAO 19,21-23.

Дистальный MCAO, выполненных хорошо подготовленных хирургов, могут быть вызваны в течение менее чем 20 мин и может производить с высокой воспроизводимостью ишемических поражений. Тем не менее, воспроизводимости требует тщательного контроля над вмешивающихся. Различия в хирургической техники может привести к различиям в размере 24 инфарктом. Различные штаммы мыши может показать другой исход инсульта из-за разницы в анатомии сосудов головного мозга между штаммами. Кроме того, как температура тела влияет на неврологическое повреждение и восприимчивость к ишемии, при гипотермии , приводящей к более мелких поражений и гипертермии до более серьезных дефицитов 25,26, контроль температуры и технического обслуживания являются весьма актуальными в этой модели, а также в других моделях с ишемией 27. В общем случае, физиологических параметров, таких как pressu кровиповторно и кровь газов, являются важными усложняющих результата и должны контролироваться в течение 28 лет . Кроме того, выбор анестезирующего средства имеет большое значение, так как некоторые вещества могут оказывать прямое нейропротекторное действие или действовать опосредованно через вазоактивные свойства 29. Таким образом, воздействие анестезии должны быть стандартизированы и настолько короткими, насколько это возможно. И, наконец, жилищные условия, как использование обогащения, может повлиять на исход инсульта , а также, и , таким образом , должны быть стандартизированы и описаны в научных докладов 30. Для получения соответствующих доклинических результатов для разработки новых терапевтических подходов, стандартизации, контроля качества и отчетности имеют первостепенное значение 31.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Binocular surgical microscope Zeiss Stemi 2000 C
Light source for microscope Zeiss CL 6000 LED
Heating pad with rectal probe FST 21061-10
Stereotactic frame Kopf Model 930
Anaethesia system for isoflurane Draeger
Isoflurane Abott
Dumont forceps #5 FST 11251-10
Dumont forceps #7 FST 11271-30
Bipolar Forceps Erbe 20195-501
Bipolar Forceps  Erbe                              20195-022
Microdrill FST                              18000-17         
Needle holder FST 12010-14
5-0 silk suture Feuerstein, Suprama
7-0 silk suture Feuerstein,Suprama
8-0 silk suture Feuerstein, Suprama
Veterinary Recovery Chamber Peco Services V1200

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Mukherjee, D., Patil, C. G. Epidemiology and the global burden of stroke. World Neurosurg. 76, (6), Suppl 85-90 (2011).
  2. Ebinger, M., Prüss, H., et al. Effect of the use of ambulance-based thrombolysis on time to thrombolysis in acute ischemic stroke: a randomized clinical trial. JAMA. 311, (16), 1622-1631 (2014).
  3. Ebinger, M., Lindenlaub, S., et al. Prehospital thrombolysis: a manual from Berlin. J vis Exp. (81), e50534 (2013).
  4. Bogousslavsky, J., Van Melle, G., Regli, F. The Lausanne Stroke Registry: analysis of 1,000 consecutive patients with first stroke. Stroke. 19, (9), 1083-1092 (1988).
  5. Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. Modeling stroke in mice - middle cerebral artery occlusion with the filament model. J Vis Exp. (47), (2011).
  6. Donnan, G. A., Fisher, M., Macleod, M., Davis, S. M. Stroke. Lancet. 371, (9624), 1612-1623 (2008).
  7. Meairs, S., Wahlgren, N., et al. Stroke research priorities for the next decade--A representative view of the European scientific community. Cerebrovasc Dis. 22, (2-3), 75-82 (2006).
  8. Rosamond, W., Flegal, K., et al. Heart disease and stroke statistics--2007 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee. Circulation. 115, (5), 69-171 (2007).
  9. Moskowitz, M. A., Lo, E. H., Iadecola, C. The science of stroke: mechanisms in search of treatments. Neuron. 67, (2), 181-198 (2010).
  10. Dirnagl, U., Iadecola, C., Moskowitz, M. A. Pathobiology of ischaemic stroke: an integrated view. Trends Neurosci. 22, (9), 391-397 (1999).
  11. Dirnagl, U., Endres, M. Found in Translation: Preclinical Stroke Research Predicts Human Pathophysiology, Clinical Phenotypes, and Therapeutic Outcomes. Stroke. (2014).
  12. Prinz, V., Hetzer, A. -M., et al. MRI heralds secondary nigral lesion after brain ischemia in mice: a secondary time window for neuroprotection. J Cereb Blood Flow Metab. (2015).
  13. Shih, A. Y., Mateo, C., Drew, P. J., Tsai, P. S., Kleinfeld, D. A polished and reinforced thinned-skull window for long-term imaging of the mouse brain. J Vis Exp. (61), (2012).
  14. Holtmaat, A., Bonhoeffer, T., et al. Long-term, high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window. Nat Protoc. 4, (8), 1128-1144 (2009).
  15. Iadecola, C., Dirnagl, U. The microcircualtion--fantastic voyage: introduction. Stroke. 44, (6), Suppl 1 83 (2013).
  16. Blinder, P., Tsai, P. S., Kaufhold, J. P., Knutsen, P. M., Suhl, H., Kleinfeld, D. The cortical angiome: an interconnected vascular network with noncolumnar patterns of blood flow. Nat Neurosc. 16, (7), 889-897 (2013).
  17. Shih, A. Y., Driscoll, J. D., Drew, P. J., Nishimura, N., Schaffer, C. B., Kleinfeld, D. Two-photon microscopy as a tool to study blood flow and neurovascular coupling in the rodent brain. J Cereb Blood Flow Metab. 32, (7), 1277-1309 (2012).
  18. Cabrales, P., Carvalho, L. J. M. Intravital microscopy of the mouse brain microcirculation using a closed cranial window. J Vis Exp. (45), (2010).
  19. Rosell, A., Agin, V., et al. Distal occlusion of the middle cerebral artery in mice: are we ready to assess long-term functional outcome. Transl Stroke Res. 4, (3), 297-307 (2013).
  20. Dorand, R. D., Barkauskas, D. S., Evans, T. A., Petrosiute, A., Huang, A. Y. Comparison of intravital thinned skull and cranial window approaches to study CNS immunobiology in the mouse cortex. Intravital. 3, (2), (2014).
  21. Balkaya, M., et al. Assessing post-stroke behavior in mouse models of focal ischemia. J Cereb Blood Flow Metab. 33, (3), 330-338 (2013).
  22. Balkaya, M., Kröber, J., Gertz, K., Peruzzaro, S., Endres, M. Characterization of long-term functional outcome in a murine model of mild brain ischemia. J Neurosci Methods. 213, (2), 179-187 (2013).
  23. Freret, T., Bouet, V., et al. Behavioral deficits after distal focal cerebral ischemia in mice: Usefulness of adhesive removal test. Beh Neurosci. 123, (1), 224-230 (2009).
  24. Liu, S., Zhen, G., Meloni, B. P., Campbell, K., Winn, H. R. RODENT STROKE MODEL GUIDELINES FOR PRECLINICAL STROKE TRIALS (1ST EDITION). J Exp Stroke Trans Med. 2, (2), 2-27 (2009).
  25. Florian, B., Vintilescu, R., et al. Long-term hypothermia reduces infarct volume in aged rats after focal ischemia. Neurosci Lett. 438, (2), 180-185 (2008).
  26. Noor, R., Wang, C. X., Shuaib, A. Effects of hyperthermia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats. Neurosci Lett. 349, (2), 130-132 (2003).
  27. Barber, P. A., Hoyte, L., Colbourne, F., Buchan, A. M. Temperature-regulated model of focal ischemia in the mouse: a study with histopathological and behavioral outcomes. Stroke. 35, (7), 1720-1725 (2004).
  28. Shin, H. K., Nishimura, M., et al. Mild induced hypertension improves blood flow and oxygen metabolism in transient focal cerebral ischemia. Stroke. 39, (5), 1548-1555 (2008).
  29. Kapinya, K. J., Prass, K., Dirnagl, U. Isoflurane induced prolonged protection against cerebral ischemia in mice: a redox sensitive mechanism. Neuroreport. 13, (11), 1431-1435 (2002).
  30. Gertz, K., Priller, J., et al. Physical activity improves long-term stroke outcome via endothelial nitric oxide synthase-dependent augmentation of neovascularization and cerebral blood flow. Circ Res. 99, (10), 1132-1140 (2006).
  31. Dirnagl, U. Bench to bedside: the quest for quality in experimental stroke research. J Cereb Blood Flow Metab. 26, (12), 1465-1478 (2006).
Боковой Хронический Черепно Окно Подготовка Включает<em&gt; В Vivo</em&gt; Наблюдение После Дистальный средней мозговой артерии у мышей Occlusion
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Bayerl, S. H., Nieminen-Kelhä, M., Broggini, T., Vajkoczy, P., Prinz, V. Lateral Chronic Cranial Window Preparation Enables In Vivo Observation Following Distal Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice. J. Vis. Exp. (118), e54701, doi:10.3791/54701 (2016).More

Bayerl, S. H., Nieminen-Kelhä, M., Broggini, T., Vajkoczy, P., Prinz, V. Lateral Chronic Cranial Window Preparation Enables In Vivo Observation Following Distal Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice. J. Vis. Exp. (118), e54701, doi:10.3791/54701 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter