Summary
Chirurgische occlusie van een distale middelste cerebrale slagader tak (MCAo) is een veel gebruikte model in de experimentele beroerte onderzoek. Dit manuscript beschrijft de basistechniek vaste MCAo, gecombineerd met het inbrengen van een laterale craniale venster, dat de mogelijkheid voor longitudinaal intravitale microscopie bij muizen heeft.
Abstract
Focale cerebrale ischemie (dat wil zeggen, ischemische beroerte) kan grote hersenletsel veroorzaken, wat leidt tot een ernstig verlies van neuronale functie en bijgevolg tot een gastheer van motorische en cognitieve beperkingen. De hoge prevalentie vormt een ernstig gezondheidsprobleem last, een beroerte is een van de voornaamste oorzaken van langdurige arbeidsongeschiktheid en overlijden wereldwijd 1. Herstel van neuronale functie is in de meeste gevallen slechts gedeeltelijk. Tot nu toe zijn behandeling opties zeer beperkt, met name vanwege de smalle tijdvenster voor trombolyse 2,3. Het bepalen van methoden om herstel na een beroerte te versnellen blijft een uitstekende medische doel; Echter, dit is belemmerd door onvoldoende mechanistische inzichten in het herstelproces. Experimentele beroerte onderzoekers vaak in dienst knaagdiermodellen van focale cerebrale ischemie. Voorbij de acute fase wordt een beroerte onderzoek steeds meer gericht op de sub-acute en chronische fase na cerebrale ischemie. permanente of tran meest beroerte onderzoekers toe te passensient occlusie van de MCA bij muizen of ratten. Bij patiënten, occlusies van MCA behoren tot de meest voorkomende oorzaken van ischemische beroerte 4. Naast proximale occlusie van de MCA met het filament model, chirurgische occlusie van de MCA distaal is waarschijnlijk het meest gebruikte model experimentele beroerte onderzoek 5. Occlusie van een distale (om de vertakking van de lenticulo-gestreept slagaders) MCA tak spaart typisch het striatum en in de eerste plaats van invloed op de neocortex. Vaartuig occlusie kan permanent of van voorbijgaande aard zijn. Hoge reproduceerbaarheid van laesievolume en zeer lage sterfte ten opzichte van de lange-termijn resultaten zijn de belangrijkste voordelen van dit model. Hier laten we zien hoe je een chronische craniale venster (CW) de voorbereiding lateraal uit te voeren om de sagittale sinus, en daarna hoe ze operatief leiden tot een distale slag onder het venster met behulp van een craniotomie aanpak. Deze aanpak kan worden toegepast voor sequentiële beeldvorming van acute en chronische veranderingen na ischemie viaepi-lichtdoorlatende, confocale laser scanning, en twee-foton intravitale microscopie.
Protocol
ETHIEK STATEMENT: experimenten met proefdieren werden uitgevoerd in overeenstemming met de uiteengezet door Landesamt fuer Gesundheit und Soziales, Berlijn, Duitsland (G0298 / 13) en de BEREIKT criteria richtlijnen en voorschriften, voor zover van toepassing. Voor dit onderzoek, 10- tot 12-weken oude mannelijke C57BL / 6J muizen werden gebruikt.
1. Laterale Chronische Cranial Window Voorbereiding
- Voer anesthesie met een subcutane injectie van ketamine (90 mg / kg) en xylazine (10 mg / kg). Test voor adequate sedatie met een pijnprikkel.
- Steriliseer de chirurgische instrumenten en chirurgisch veld met 70% ethanol.
- Verwijder het hoofdhaar van de hals om de ogen met behulp van een knaagdier scheerapparaat.
- Bevestig het hoofd in een stereotactische frame.
- Gebruik dexpanthenol oogzalf op beide ogen om uitdroging te voorkomen.
- Maak de chirurgische gebied om alle haren te verwijderen en steriliseer het met 3 lagen van 74,1% ethanol en 10% 2-propranolol.
- Voer een middellijninsnijding van de nek naar de ogen met behulp van een scalpel.
- Overspannen de huid flap met 4 tenting hechtingen.
- Verwijder het periosteum voorzichtig op de linker hersenhelft door te schrapen met een scalpel om het punt waar de temporale spier begint.
Opmerking: Dit preparaat dient ook om een goede hechting gebied voor de tandheelkundige lijm, die dekglas lost maken. - Voer een fronto-pariëtale craniotomie met een diameter van 4 mm door verdunnen van de schedel op de rand van het bot flap met een microboor. Solliciteer zoutoplossing tijdens het boren om warmte letsel te voorkomen.
- Verhoog het bot flap met canules en verwijder hem met behulp van microforceps.
- Irrigeren zorgvuldig en uitgebreid met een zoutoplossing.
- Meng de tandheelkundige lijm tot het de juiste consistentie en is geen vloeistof (dat wil zeggen, de lijm mag niet produceren discussies meer). Plaats het op het bot rond de craniotomie.
- Leg een deksel glas met een 6-mm diameter op het voorbereide lijm en zet deze vast met the rest van de tandheelkundige lijm. Wees er zeker van dat het waterdicht is. Wacht tot de lijm wordt gedroogd en hard door deze te testen met een pincet.
LET OP: Een extra irrigatie versnelt het uitharden. - Verwijder de tenting hechtingen en sluit de wond met de huid hechtingen.
- Trek de huid van de flank van de muis. Plaats een naald onderhuids en voorzichtig te vervangen door 0,5 ml steriele zoutoplossing subcutaan voor de vochtbalans.
- Na de operatie, houdt de dieren in de verwarmde herstelkooi voor 90 min. Wacht tot de dieren zijn helemaal wakker voor het verlaten van hen onbeheerd achter. Wacht tot de dieren volledig worden teruggewonnen voordat ze een kooi met andere dieren terugkeren.
- Herhaal subcutaan zoutoplossing volumesubstitutie na ongeveer 12 uur, zoals beschreven in stap 1.16.
- Gelden altijd analgesie via sondevoeding of direct in de mondholte na de operatie (bijvoorbeeld paracetamol (10 mg / ml) of andere niet-steroïdale anti-inflammatoire geneesmiddelen).
- Controleer de van de dieren elke dag na de operatie, en altijd fijngestampt dierlijk voedsel op de vloer in een petrischaal te eten eenvoudig maken en kritische gewichtsverlies na chirurgie te voorkomen.
OPMERKING: Intravitale microscopie kan worden uitgevoerd op de eerste dag na craniale venster bereiding. - Solliciteer isofluraananesthesie en zet het dier in een kop houder. Open de huid hechtdraad en reinig het raam met wattenstaafjes en steriele zoutoplossing. Na 24 uur moet de schedelholte weer worden gevuld met cerebrospinale vloeistof door dat tijdstip, waarop beeldvorming mogelijk maakt. Voer beeldvorming met behulp van gevestigde microscopie protocollen 18.
2. Distale MCAo
LET OP: De MCAo procedure moet worden uitgevoerd ongeveer 5 d na CW voorbereiding. Dit minimaliseert interferentie van de immune reactie veroorzaakt door het preparaat CW de slag geïnduceerde immuunreactie.
"Src =" / files / ftp_upload / 54701 / 54701fig1.jpg "/>
Figuur 1. Overzicht van de distale MCAo. A. Dit is een mooi overzicht van de schepen voor de op. B. De schepen na de eerste bipolaire contact. C. De schepen na de tweede bipolaire contact. D. Het overzicht van de schepen, die nu volledig gesloten zijn. E. Final overzicht met lagere vergroting. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
- Verdoven de muizen met behulp van een verdoving masker en een passende verdoving regime, in overleg met het diergeneeskundig personeel (bijvoorbeeld inductie met 1,5-2% isofluraan en onderhoud met 1,0-1,5% isofluraan in 2/3 N 2 O en O 2 1/3 via een verdamper).
- Scheer en verwijder het haar en desinfecteren van de huid en de omliggende bont met een geschikt middel (bijvoorbeeld, 70% ethyl alcohol), en droog hem daarna.
- Handhaaf de lichaamstemperatuur van de muizen bij 36,5 ° C ± 0,5 ° C tijdens de operatie. Een feedback geregelde verwarming pad, op basis van de rectale temperatuur van de muis verhit, wordt sterk aanbevolen.
- Plaats het dier in de laterale positie. Bevestig de neus in de anesthesie masker en stel de isofluraan concentratie 1,0-1,5%.
- Solliciteer natte zalf (dexpanthenol) aan beide ogen.
- Gebruik de huid incisie gemaakt voor de bereiding CW.
- Voorzichtig scheiden van de huid en het identificeren van de temporale spier eronder.
- Stel de energie van de hoogfrequente generator (5-7 W) en gebruik de bipolaire modus.
- Gebruik de electrocoagulatie tang en voorzichtig de temporale spier te verwijderen uit de schedel, het creëren van een spier flap, zonder volledig verwijderen van de spier.
- Identificeer de MCA onder de transparante schedel in de rostrale deel van de temporale gebied, dorsale de retro-orbital sinus. Als de MCA splitsing niet kunnen worden geïdentificeerd, proberen vast te stellen van het schip meest rostrale.
- Dun de schedel boven de MCA tak met een microboor onder voortdurend irrigatie hitte schade te voorkomen.
- Til het bot met canules en verwijderen met microforceps.
- Verminderen de energie van de hoogfrequente generator 3-5 W.
- Benader de slagader van boven en zachtjes aanraken met de bipolaire tang aan beide zijden zonder de opheffing van het schip.
- Coaguleren de slagader proximaal en distaal aan het vat vertakking.
- Wacht 30 sec, en raak dan de slagader voorzichtig om ervoor te zorgen dat de bloedstroom permanent wordt onderbroken. Herhaal de electrocoagulatie als een rekanalisatie waargenomen.
- Bevestig de temporale spier met 1 of 2 steken aan de spier insertie dekking het botdefect, indien mogelijk.
- Hechtdraad de wond en plaats het dier in de verwarmde herstel doos. In het algemeen dieren herstel snel na het vluchtige anesthesia.
- Voor volumesubstitutie Breng 0,5 ml steriele zoutoplossing subcutaan zoals beschreven in stap 1.16.
- Na de operatie, zodat de dieren om te verblijven in de verwarmde herstel kooi voor 90 min. Wacht tot de dieren zijn bewust voor het verlaten van hen onbeheerd achter. Alleen hen terug te keren naar een kooi met andere dieren wanneer ze volledig zijn hersteld.
- Herhaal de volumesubstitutie Zoals in stap 1,16, na 12 uur.
- Toepassen postoperatieve analgesie via het drinkwater (bijvoorbeeld paracetamol (10 mg / ml) of andere niet-steroïdale anti-inflammatoire geneesmiddelen).
- Controleer de gezondheidstoestand van de dieren elke dag na de operatie. Bieden gepureerd dierlijk voedsel in een petrischaal op de vloer te eten vereenvoudigen en postoperatieve gewichtsverlies minimaliseren.
3. Sham Treatment
- Voer alle procedures identiek aan stappen 1 en 2, zoals hierboven CW-preparaat behalve niet coaguleren blootgestelde cerebralis ar beschreventerij.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
De tijdlijn en representatieve resultaten worden getoond in Figuren 2 en 3. De craniale venster preparaat, met een kleine craniaal venster lateraal van de superieure sagittale sinus (figuur 2 B, C, D) resulteert in een zeer lage mortaliteit en morbiditeit wanneer uitgevoerd door ervaren chirurgen. Alle 10 dieren overleefden en alle chronische CW kunnen worden voor hoogwaardige beelden, zelfs 28 dagen na de operatie. Er was geen probleem met wondinfecties of andere complicaties.
Door de korte blootstelling aan volatiele anesthesie en slechts geringe schade aan de hersenen, ongeveer 10 - 15 min na distale MCAo en transfer naar het verwarmde herstel kooi, alle dieren waren wakker, vrij bewegen in het herstel kooi, en de interactie met nestgenoten. In het algemeen mortaliteit van het distale MCAo model minder dan 5% en vooral optreedt als gevolg van vasculaire injury en daaropvolgende bloeding tijdens operatie MCAo. Sterfte tijdens de 28 dagen durende observatieperiode volgende distale MCAo komt slechts zeer zelden. Morfologisch kan de laesie worden beoordeeld met behulp histologie of MRI (figuur 3 A, B). Bovendien MRI-metingen bieden de mogelijkheid om laesievolume en progressie beoordelen longitudinale wijze. Een MRI uitgevoerd 24 uur na ischemie duidelijk toont de ischemische laesie zich onder de chronische CW, terwijl na sham operatie werd geen laesie corticale weefsel gevonden (figuur 3A). De MRI resultaten tonen duidelijk de strikte beperking van de laesie naar de cortex, waardoor het striatum sparen, in tegenstelling tot de filamenteuze MCAo model (Figuur 3B). De laterale chronische CW voorbereiding in staat stelt op lange termijn visualisatie van de corticale vaatstelsel en microcirculatie door epi-fluorescentie microscopie (figuur 3C, bovenste deel) en subcorticale gebieden door twee-foton microscopie (Figure 3C, onderste deel). Verder is het mogelijk om het moleculaire pathways en cel-cel interacties met fluorescentie gemerkte cellen of autofluorescentie metingen, zoals fluorescentie levensduur imaging. Zoals getoond in figuur 3D, het distale MCAo model veroorzaakt zeer reproduceerbare ischemische letsels. Ten aanzien van het infarct volume, verwachten we een standaarddeviatie van minder dan 15% in een enkele set van operaties. Zoals hierboven vermeld, in tegenstelling tot de modellen van proximale MCAo, sterftecijfers zijn vrij laag voor de distale model 5. Met behulp van sequentiële MRI, laesie, volume, en oedeem progressie na focale cerebrale ischemie kan worden beoordeeld. De MRI bij 24 uur en 96 uur na permanent distale MCAo toonde geen significante progressie van T2 hyperintensiteiten.
Figuur 2: Chronische Cranial Window Voorbereiding. (A) Vertegenwoordiger tijdlijn. <strong> (B) markeren het gebied waar de craniotomie plaatsvindt, lateraal van de temporale spier, mediaal van de superieure sagittale sinus en dorsaal bregma. (C) Brain oppervlakte na een craniotomie, met een intacte dura laag en de dekking van glas op zijn plaats; de cirkel toont de locatie van het ischemische gebied na distale MCAo. (D) Finished chronische craniale venster met vaste deksel glas, klaar voor herhaalde beeldvorming gedurende enkele weken (b = bregma, tm = temporalis, SSS = superieure sagittal sinus, ai = oppervlakte van ischemie). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 3: Combinatie van de Lateral Chronische CW en distale MCAo of Sham Surgery. (A) De MRI uitgevoerd 24 uur na sham operatie geen laesie corticale weefsel tonen. (B) De MRI uitgevoerd 24 uur na ischemie duidelijk toont de ischemische laesie (*) zich onder de chronische CW. (C) intravitale epi-fluorescentie beeldvorming (bovenste deel) en twee-foton imaging (onderste deel) van de corticale vaatstelsel. (D) infarctvolume geëvalueerd via MRI bij 24 uur en 96 uur na ischemie vertoonde een gemiddeld laesievolume van 13,16 2,3 mm bij 3 uur en 24 12,2 1,9 3 mm in 96 uur. Elke stip vertegenwoordigt een individueel dier (n = 10 dieren per groep, gemiddeld ± SEM). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Beroerte is een van de voornaamste oorzaken van langdurige arbeidsongeschiktheid en overlijden wereldwijd 1. Beyond acute behandeling, onderzoek naar nieuwe benaderingen en mechanismen te versnellen en verbeteren van het herstel na een beroerte blijft een uitstekende medische doel 7. Experimentele beroerte onderzoekers vaak in dienst knaagdiermodellen van focale cerebrale ischemie. In feite, modellen induceren van voorbijgaande of permanente MCAo na te bootsen een van de meest voorkomende vormen van focale cerebrale ischemie bij patiënten 4. Naast proximale occlusie van de MCA, het filament model voor chirurgische occlusie van het distale MCAo is waarschijnlijk het meest gebruikte model experimentele beroerte onderzoek 5,19. Hier beschrijven we de basistechniek vaste distale MCAo combinatie met een laterale CW, biedt de mogelijkheid voor longitudinaal intravitale microscopie bij muizen. Hoge reproduceerbaarheid van laesie volume, evenals zeer lage sterftecijfers, in het bijzonder met betrekking tot het bestuderen van de lange-termijn resultaten, are de belangrijkste voordelen van dit muismodel. In deze corticale beroerte model, kan bloedvaten in de slag gebied en peri-infarct gebied worden gevisualiseerd via de chronische CW. Een multi-fluorescentie epifluorescentie videomicroscopic systeem bloedstroom dynamiek en de dynamische rekrutering van circulerende cellen kunnen worden gevisualiseerd. Bloedvaten worden gevisualiseerd door het gebruik van fluorescent gelabelde macromoleculen, zoals dextranen of albumine. Cellen kunnen worden gelabeld ofwel door fluorescerende kleurstoffen of door genetische modellen zoals beenmerg chimeren met GFP-positieve dieren. Verder naar cel-cel interacties en de dynamiek van extravasculaire cellen te bestuderen, kan een twee-foton laser scanning confocale microscoop worden toegepast. Imaging tot 250 urn onder het corticale oppervlak worden uitgevoerd. Opnieuw worden bloedvaten gekleurd met fluorescent gelabelde macromoleculen en cellen genetisch gemerkt (bijvoorbeeld door het gebruik van de transgene GFP-Nestin muis).
De craniale vensteroperatie wordt uitgevoerd via een craniotomie zonder de dura. Een belangrijke valkuil is om per ongeluk verwonden de durale laag en cortex onder bij het openen van de schedel met de microboor. Daarom is deze techniek vereist enige kennis om schade aan de dura en de cortex, die een immuunreactie en invloeden microscopie resultaten induceert voorkomen. Als alternatief wordt een mogelijke uitgedunde schedelmodel beperkt door minder betrouwbaar microscopie product ten gevolge van de resterende schedel, vooral op lange termijn. Vaak repetitieve schedel dunner is noodzakelijk, terwijl in de CW-model, het venster kwaliteit duurt enkele maanden, tot de schedel hergroei of durale verdikking invloeden beeldkwaliteit 14,20. Een modulatie van dit model met een uitgedunde schedel preparaat mogelijk zou zijn. De durale laag moet worden overgelaten aan de hersenen om enig letsel of excitatie van de cortex te vermijden. Indien rechtstreekse toepassing op het ischemische gebied is gewenst in een experimenteel model kan de dura weerbewogen, zorgvuldig en zonder ook maar een overbrugging aderen.
In tegenstelling tot modellen waarbij een CW en induceren gericht vatafsluiting via bestraling van circulerende fotosensitizers, waardoor slechts zeer geringe ischemische letsels, het distale MCAo model bootst de meeste menselijke lijnen die zich in het corticale gebied 13 MCA. Om interferentie met een voorbijgaande ontstekingsreactie te voorkomen als gevolg van CW voorbereiding, moet het venster worden voorbereid enkele dagen voor distale MCAo operatie.
Een aantal tests om te beoordelen functionele en gedragsaspecten bij knaagdieren beschikbaar zijn (bv, ganganalyse, rotarod test, pole test, lijm verwijderen test, trap test, open veld test, en Morris water maze) 21. In al deze tests, muizen blootgesteld aan MCAo presteren minder succesvol dan de controle dieren met betrekking tot korte- en middellange termijn resultaten. Echter, met betrekking tot de beoordeling vanop lange termijn resultaten, moet worden erkend dat de gevoeligheid van de functionele testen is zeer beperkt in termen van distale MCAo, evenals mild proximale MCAo 19,21-23.
Distale MCAo, uitgevoerd door goed opgeleide chirurgen, kan worden geïnduceerd in minder dan 20 minuten en kan zeer reproduceerbare ischemische letsels produceren. Echter, reproduceerbaarheid vereist een grondige controle van de verstorende variabelen. Verschillen in chirurgische techniek kan leiden tot verschillen in infarctgrootte 24. Verschillende muizenstammen kan een ander slag resultaat te laten zien als gevolg van verschillen in cerebrale vasculaire anatomie tussen stammen. Zoals lichaamstemperatuur neuronale beschadiging en gevoeligheid voor ischemie, met hypothermie leidt tot kleinere laesies en hyperthermie tot meer ernstige gebreken 25,26 beïnvloedt, temperatuurcontrole en onderhoud zeer relevant in dit model, maar ook in andere ischemiemodellen 27. In het algemeen fysiologische parameters, zoals bloed pressuRe en bloedgassen, zijn belangrijke confounders van resultaat en moet worden gecontroleerd 28. Bovendien, de keuze van de verdoving van groot belang, aangezien sommige middelen direct neuroprotectieve effecten kan uitoefenen of indirect werken via vasoactieve eigenschappen 29. Daarom moet blootstelling aan anesthesie worden gestandaardiseerd en bleef zo kort mogelijk. Tot slot, woonomstandigheden, zoals het gebruik van verrijking, kan een beroerte uitkomst beïnvloeden zo goed, en dus moeten worden gestandaardiseerd en in het onderzoek beschreven rapporten 30. Relevante preklinische resultaten voor de ontwikkeling van nieuwe therapeutische benaderingen, standaardisatie, kwaliteitscontrole en rapportage te produceren zijn van het grootste belang 31.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Binocular surgical microscope | Zeiss | Stemi 2000 C | |
| Light source for microscope | Zeiss | CL 6000 LED | |
| Heating pad with rectal probe | FST | 21061-10 | |
| Stereotactic frame | Kopf | Model 930 | |
| Anaethesia system for isoflurane | Draeger | ||
| Isoflurane | Abott | ||
| Dumont forceps #5 | FST | 11251-10 | |
| Dumont forceps #7 | FST | 11271-30 | |
| Bipolar Forceps | Erbe | 20195-501 | |
| Bipolar Forceps | Erbe 20195-022 | ||
| Microdrill | FST 18000-17 | ||
| Needle holder | FST | 12010-14 | |
| 5-0 silk suture | Feuerstein, Suprama | ||
| 7-0 silk suture | Feuerstein,Suprama | ||
| 8-0 silk suture | Feuerstein, Suprama | ||
| Veterinary Recovery Chamber | Peco Services | V1200 |
References
- Mukherjee, D., Patil, C. G. Epidemiology and the global burden of stroke. World Neurosurg. 76 (6), Suppl 85-90 (2011).
- Ebinger, M., Prüss, H., et al. Effect of the use of ambulance-based thrombolysis on time to thrombolysis in acute ischemic stroke: a randomized clinical trial. JAMA. 311 (16), 1622-1631 (2014).
- Ebinger, M., Lindenlaub, S., et al. Prehospital thrombolysis: a manual from Berlin. J vis Exp. (81), e50534 (2013).
- Bogousslavsky, J., Van Melle, G., Regli, F. The Lausanne Stroke Registry: analysis of 1,000 consecutive patients with first stroke. Stroke. 19 (9), 1083-1092 (1988).
- Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. Modeling stroke in mice - middle cerebral artery occlusion with the filament model. J Vis Exp. (47), (2011).
- Donnan, G. A., Fisher, M., Macleod, M., Davis, S. M. Stroke. Lancet. 371 (9624), 1612-1623 (2008).
- Meairs, S., Wahlgren, N., et al. Stroke research priorities for the next decade--A representative view of the European scientific community. Cerebrovasc Dis. 22 (2-3), 75-82 (2006).
- Rosamond, W., Flegal, K., et al. Heart disease and stroke statistics--2007 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee. Circulation. 115 (5), 69-171 (2007).
- Moskowitz, M. A., Lo, E. H., Iadecola, C. The science of stroke: mechanisms in search of treatments. Neuron. 67 (2), 181-198 (2010).
- Dirnagl, U., Iadecola, C., Moskowitz, M. A. Pathobiology of ischaemic stroke: an integrated view. Trends Neurosci. 22 (9), 391-397 (1999).
- Dirnagl, U., Endres, M. Found in Translation: Preclinical Stroke Research Predicts Human Pathophysiology, Clinical Phenotypes, and Therapeutic Outcomes. Stroke. , (2014).
- Prinz, V., Hetzer, A. -M., et al. MRI heralds secondary nigral lesion after brain ischemia in mice: a secondary time window for neuroprotection. J Cereb Blood Flow Metab. , (2015).
- Shih, A. Y., Mateo, C., Drew, P. J., Tsai, P. S., Kleinfeld, D. A polished and reinforced thinned-skull window for long-term imaging of the mouse brain. J Vis Exp. (61), (2012).
- Holtmaat, A., Bonhoeffer, T., et al. Long-term, high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window. Nat Protoc. 4 (8), 1128-1144 (2009).
- Iadecola, C., Dirnagl, U. The microcircualtion--fantastic voyage: introduction. Stroke. 44 (6), Suppl 1 83 (2013).
- Blinder, P., Tsai, P. S., Kaufhold, J. P., Knutsen, P. M., Suhl, H., Kleinfeld, D. The cortical angiome: an interconnected vascular network with noncolumnar patterns of blood flow. Nat Neurosc. 16 (7), 889-897 (2013).
- Shih, A. Y., Driscoll, J. D., Drew, P. J., Nishimura, N., Schaffer, C. B., Kleinfeld, D. Two-photon microscopy as a tool to study blood flow and neurovascular coupling in the rodent brain. J Cereb Blood Flow Metab. 32 (7), 1277-1309 (2012).
- Cabrales, P., Carvalho, L. J. M. Intravital microscopy of the mouse brain microcirculation using a closed cranial window. J Vis Exp. (45), (2010).
- Rosell, A., Agin, V., et al. Distal occlusion of the middle cerebral artery in mice: are we ready to assess long-term functional outcome. Transl Stroke Res. 4 (3), 297-307 (2013).
- Dorand, R. D., Barkauskas, D. S., Evans, T. A., Petrosiute, A., Huang, A. Y. Comparison of intravital thinned skull and cranial window approaches to study CNS immunobiology in the mouse cortex. Intravital. 3 (2), (2014).
- Balkaya, M., et al. Assessing post-stroke behavior in mouse models of focal ischemia. J Cereb Blood Flow Metab. 33 (3), 330-338 (2013).
- Balkaya, M., Kröber, J., Gertz, K., Peruzzaro, S., Endres, M. Characterization of long-term functional outcome in a murine model of mild brain ischemia. J Neurosci Methods. 213 (2), 179-187 (2013).
- Freret, T., Bouet, V., et al. Behavioral deficits after distal focal cerebral ischemia in mice: Usefulness of adhesive removal test. Beh Neurosci. 123 (1), 224-230 (2009).
- Liu, S., Zhen, G., Meloni, B. P., Campbell, K., Winn, H. R. RODENT STROKE MODEL GUIDELINES FOR PRECLINICAL STROKE TRIALS (1ST EDITION). J Exp Stroke Trans Med. 2 (2), 2-27 (2009).
- Florian, B., Vintilescu, R., et al. Long-term hypothermia reduces infarct volume in aged rats after focal ischemia. Neurosci Lett. 438 (2), 180-185 (2008).
- Noor, R., Wang, C. X., Shuaib, A. Effects of hyperthermia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats. Neurosci Lett. 349 (2), 130-132 (2003).
- Barber, P. A., Hoyte, L., Colbourne, F., Buchan, A. M. Temperature-regulated model of focal ischemia in the mouse: a study with histopathological and behavioral outcomes. Stroke. 35 (7), 1720-1725 (2004).
- Shin, H. K., Nishimura, M., et al. Mild induced hypertension improves blood flow and oxygen metabolism in transient focal cerebral ischemia. Stroke. 39 (5), 1548-1555 (2008).
- Kapinya, K. J., Prass, K., Dirnagl, U. Isoflurane induced prolonged protection against cerebral ischemia in mice: a redox sensitive mechanism. Neuroreport. 13 (11), 1431-1435 (2002).
- Gertz, K., Priller, J., et al. Physical activity improves long-term stroke outcome via endothelial nitric oxide synthase-dependent augmentation of neovascularization and cerebral blood flow. Circ Res. 99 (10), 1132-1140 (2006).
- Dirnagl, U. Bench to bedside: the quest for quality in experimental stroke research. J Cereb Blood Flow Metab. 26 (12), 1465-1478 (2006).
