Summary
Preklinische modellen die adjuvante therapie beoordelen die gericht zijn op metastase van borstkanker, ontbreken. Om dit aan te pakken, ontwikkelden we een muizenmodel van de novo pulmonale mammary adenocarcinoma metastase, waarbij therapieën toegediend in de adjuvante omgeving (post-chirurgische resectie van primaire tumoren) kunnen worden geëvalueerd voor werkzaamheid bij het beïnvloeden van eerder gecoede pulmonale metastasen.
Introduction
Vrouwen in Noord-Amerika hebben een levensduur van 12% voor het ontwikkelen van borstkanker 2 ; Een meerderheid van deze personen zullen primaire tumoren hebben verwijderd via de operatie, en afhankelijk van het subtype van kanker, krijgen dan gerichte, endocriene, chemo- en / of stralingstherapie in de adjuvante instelling 3 . Voorbeelden zijn onder meer vrouwen met hormoonreceptor-positieve kanker die anti-oestrogeen therapieën ontvangen en vrouwen met HER2-positieve tumoren die HER2-gerichte therapieën ontvangen met straling / chemotherapie, terwijl er nog geen gerichte therapieën beschikbaar zijn voor drievoudige negatieve tumoren 3 . Ondanks de vooruitgang in straling, chemotherapie, gepersonaliseerde en hormoon gebaseerde therapieën die chirurgische resectie aanvullen, komt de ziekte terug bij 30-70% van de vrouwen die gediagnosticeerd zijn met fase II of III-ziekte 4 , aangezien therapieën grotendeels ondoeltreffend zijn bij het uitroeien van metastatische ziekte in verre organen, waaronder Long, bot, bRegen en / of lever 5 . Dit is vooral belangrijk gezien het feit dat wanneer metastatische ziekte optreedt bij afwezigheid van primaire tumor hergroei, dit impliceert dat verspreide kwaadaardige cellen waarschijnlijk al in secundaire organen aanwezig waren op het moment van definitieve operatie. Dientengevolge zijn therapieën die de groei van metastatische tumoren kunnen uitroeien of vertragen, dringend nodig.
Terwijl de novo- muismodellen van mammary carcinogenese opvallend informatief zijn bij het onthullen van mechanismen die neoplastische progressie 1 regelen, hebben bestaande modellen ook verschillende beperkingen. Een hiervan is het feit dat transgenische modellen van de novo doorgaans primaire tumoren ontwikkelen in meervoudige borstklippen, waarbij de primaire tumorbelasting de duur van de studies beperkt. Terwijl primaire tumorcel ontsnappen en metastatische zaaien zich waarschijnlijk vroeg in neoplastische progressie in deze modellen voordoen, komt de franke ontwikkeling van metastatische tumoren te vroeg voor en hangt er af van oN het muismodel en de achtergrond van de stam, is vaak gedeeltelijk penetrant 1 . Dit beperkt verder het nut van de novo modellen voor het ontdekken van moleculen die de metastase reguleren in secundaire organen en voor het evalueren van de preclinische werkzaamheid van de therapeutica in de adjuvante omgeving.
Om deze beperkingen te omzeilen, ontwikkelden we een de novo autochthonisch model van mammary carcinoom metastase naar longen. Oudertransgene vrouwen ( dwz MMTV-PyMT op de FVB / n-stamachtergrond voor studies die hierin beschreven zijn) met een latere stadium de novo- mammatumoren zijn ouder tot ~ 100 dagen 6 , op welk punt hun primaire tumoren chirurgisch worden gerececteerd en enzymatisch gedisocieerd in Enkelcel suspensies. Suspensies (1 x 10 6 cellen) worden op hun beurt orthotopisch geëxplanteerd in 6-7 weken oude ontvanger syngeneuze vrouwelijke muizen, waar enkele primaire mammertumoren zich ontwikkelen over een periode van 38 tot 60 dagen ( 3 ) worden ontvanger muizen verdoofd en worden primaire tumoren chirurgisch geresecteerd, zodat tumorhergroei op de chirurgische plaats minimaal is, consistent met de operatie bij vrouwen ( aanvullend figuur 1 ). Op de FVB / n stamachtergrond ontwikkelen muizen histologisch detecteerbare metastatische foci in de longen met 45% penetratie door ~ 115 dagen na de operatie ( Figuur 1B ). Met deze uitgebreide latentie van metastatische tumorgroei is het model uniek gepositioneerd voor adjuvante therapieafgifte en voor het ophelderen en evalueren van onderliggende biologie die de metastatische progressie beïnvloeden na chirurgische verwijdering van primaire tumoren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Dieren die in het volgende protocol worden gebruikt, worden gedekt door de Institutional Animal Care and Use Committee van de Oregon Health & Science University (IACUC), die is ontworpen om te voldoen aan de wetgeving inzake dierenwelzijnsregels en het PHS-beleid.
Onderhoud van steriele omstandigheden: Steriliseerde instrumenten moeten gebruikt worden en tussen muizen schoon worden met steriel gaas, gespoeld in PBS, gevolgd door sterilisatie met 70% ethanol desinfectiemiddel gedurende tenminste 15 minuten. Een chirurgische pet, een facemask, een toga en een handschoen moet gedragen worden voor overlevingsoperaties. Pre-operatieve voorbereiding van het dier voor overlevingsoperaties is opgenomen in het volgende protocol. Raadpleeg tabel 1 voor een lijst met reagentia en apparatuur.
1. Isolatie en bereiding van enkelcelsuspensies uit primaire mammamomentoren
- Verdoof donorvrouw 100 dagen oude transgene MMTV-PyMT (FVB / n) muizen en onderhouden onder cOntwijkende sedatie door toediening van 2% isofluraan via een verdovingsmasker. Bevestig dat de muis goed verdoofd is met een afwezig voetreflexreflex.
- In een steriele omgeving reserveert u primaire mammatumoren uit 100-dagen oude transgene vrouwelijke MMTV-PyMT (FVB / n) muizen door het uitdelen van de borsttumor van de overliggende huid en het omliggende vetweefsel en / of lymfeklieren door middel van steriele scharen. Euthanize de verdoofde muizen door cervicale dislocatie.
- Met steriele schaar of een scalpel, maalgewassen primaire tumoren handmatig in kleine stukken (~ 1,0 mm 3 ). Plaats tumor stukken in 3,0 mg / ml collagenase A en 4,0 U / ml DNase I opgelost in DMEM. Gebruik ~ 10 ml van het bovenstaande verteermedium per 1,0 cm diameter tumor.
- Voer de spijsvertering uit in een steriele 25 ml fles met een steriele roerbalk bij ~ 125 rpm en 37 ° C gedurende 40 minuten.
- Stop de spijsvertering door foetaal runder serum (FBS) toe te voegen tot een uiteindelijke verdunning van 10% en plaats het gehele mengsel op wEt ijs waar het wordt gehandhaafd.
- Filter de verteerde tumor suspensie door een 0,7 μm nylon zeef in een 50 ml conische buis en wis eventuele resterende tumor in de zeef. Centrifugeer het supernatant bij 300 xg bij 4 ° C.
- Resuspendeer de pellet in 10 ml DMEM per 1,0 cm tumor en herfilter door een 0,7 μm nylon filter. Tel celconcentratie, centrifugeer vervolgens bij 300 xg bij 4 ° C.
- Resulteer pellet in 10% dimethylsulfoxide met 90% FBS bij een concentratie van 2 x 107 levende cellen / ml. Bewaar single-cel suspensies van hele primaire tumor bij -80 ° C.
2. Orthotopic Injection of Mammary Tumor
- Gedeeltelijk ontdooide bevroren primaire tumor suspensies bij 37 ° C totdat de bevroren pellet uit de cryogene buis in 20 ml DMEM kan worden vrijgelaten en de cellen tellen. Centrifugeer bij 300 xg bij 4 ° C en resuspendeer cellen in een 1: 1 DMEM: groeifactor gereduceerde gesolubileerde keldermembraanpreparatie extracted van de Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) muizen sarcoma bij een concentratie van 1 x 10 7 cellen / ml (zie tabel of Materials).
- Plaats de verdovende ontvanger van de vrouwelijke syngeneuze muis ventrale zijde omhoog en onderhoud onder continue sedatie door 2% isofluraan via een verdovingsmasker toe te dienen.
- Steriliseer de juiste 4e borstklier injectieplaats met behulp van aerosolized 70% ethanol en aanbrengen van Poly (vinylpyrrolidon) -Iodine met een steriele katoenwabber.
- Spuit 100 μL (1 x 10 6 levende cellen uit bevroren primaire tumorsuspensies) in de rechterkant van de 4e dikke klier van de 6 tot 10 week oude vrouwelijke FVB / n muis met een 29 G 0,3 ml insulinspuit.
3. Chirurgische Resectie van Orthotopische Mammary Tumor
- 38-60 dagen na de injectie van de tumorcel, euthaniseren muizen die geen orthotopische tumorvolumes vertonen, variërend tussen 172 en 450 mm 3 in volume [lengte x (breedte 2
- Plaats verdoofde muizen die de juiste tumorgrootte ventrale zijde laten zien onder continue sedatie door 2% isofluraan via een verdovingsmasker toe te dienen en bevestig dat de muis goed verdoofd is met een afwezig voetreflexreflex. Breng de vetsalf aan de ogen aan om droogte te voorkomen tijdens de sedatie.
- Spuit 70% ethanol om het chirurgische gebied rond de primaire tumor te steriliseren, en voeg dan Poly (vinylpyrrolidon) -Iodine toe met een steriele katoenwabber.
OPMERKING: Haarverwijdering op de chirurgische plaats leidde tot huiduitkalkingen en / of infecties bij ~ 5% muizen en werd derhalve uitgesloten van deze stap (gegevens niet getoond). - Zoals getoond in Figuur 1C , maak een eerste huidinsnijding met behulp van stompe schaar mediale-caudale aan de tumor.
- Vervolgens maak je een superieure excisie van de huid ( Figuur 1C ) mediaal aan de tumor. Let op de noodzaak om vasculature feHet opbrengen van de tumor die op de huid ligt voordat u de incisie uitstrekt.
- Ga de huidinsnijding lateraal (achter de tumor) door, en maak dan een superieure huiduitsnijding (lateraal naar tumor) en mediale excisie (superieur aan tumor) ( Figuur 1C ).
- Nadat de huid omtrekt rond de tumor is gesneden ( Figuur 1C ), lig de overliggende huid aan de tumor vast aan de hand van de tang, terwijl de tumor onduidelijk wordt verwijderd van de buikwandmuskulatuur en de membraan intact blijft.
- Identificeren (door stompe dissectie) en dichtschroeien grote vaten die door de 4de en 5de borstklieren.
- Accijns ongeveer de helft van de 4de en 5de borstklieren aan de cauterisatie site om de tumor te bevrijden bovenliggende huid, en segmenten van de melkklieren (figuur 1C).
- In geval van bloedingen, identificeer actief bloedenSchepen en onmiddellijk cauterize ze. Als meer dan 250 μL bloed verloren gaat, sluit de muis de studie uit en verwijder hem.
- Sluit excisiesites met wondklemmen met behulp van een wondclip applicator ( Figuur 1C ).
OPMERKING: Verwijder de wondklemmen 10 dagen na de operatie met een wondklemverwijderaar. - Geef warm steriele zoutoplossing subcutaan (4% van het lichaamsgewicht van het dier) en houd het dier warm met een warmtelamp. Controleer de dieren elke 5-10 minuten tijdens herstel van verdoving.
OPMERKING: Toediening van bupivacaïne of lidocaïne verhoogde postoperatieve sterfte (data niet getoond). Muizen die tekenen van pijn toonden (hunching, onwillig om te verhuizen, niet-bruidegom) 1 uur na de operatie werden geëuthaniseerd.- Zodra de muis volledig is hersteld, geef het terug naar het bedrijf van andere muizen.
4. Isolatie en verwerking van bloed en long voor flowcytometrie en histologie
<ol>OPMERKING: Bevroren voorraden opgeloste bromodeoxyuridine worden binnen 1 maand na de bereiding gebruikt.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Meer dan 75% van de ontvangende muizen die 1 x 10 6 cellen van primaire borsttumoren van MMTV-afgeleid PymT muizen ontwikkelen interne mammaire adenocarcinoom variërend in grootte 172-450 mm3 binnen 38-60 dagen (gegevens niet getoond). Muizen die in aanmerking komen voor randomisatie worden dan ingevoerd in studiegroepen na chirurgische resectie van primaire tumoren zoals getoond ( Figuur 1C ). Primaire tumor hergroei werd geïdentificeerd in minder dan 2% muizen die chirurgische resectie van primaire tumor ondergaan ( aanvullend figuur 1 ). 45% van de ontvanger muizen geëvalueerd door dit protocol ontwikkelde histologisch detecteerbare metastatische foci tegen dag 115 na tumorresectie ( Figuur 1B ). Om histologie van metastasen te bevestigen in gebieden geïdentificeerd die metastatische cellen bevatten door H & E-kleuring, werden aangrenzende weefselsecties geëvalueerd door PyMT PCR (data nietgetoond).
Figuur 1 : Post-chirurgische resectie van primaire tumoren en ontwikkeling van de novo pulmonale metastase. ( A ) Experimentele schema van muizen-adenocarcinoom metastase model. † wijst erop dat alle muizen werden geperfreerd en geïnjecteerd met BrdU op de dag van euthanasie. ( B ) Representatieve H & E waar de detectie van metastatische foci werd beoordeeld door seriële sectie van FFPE longweefsel met losse lobben. Metastatische foci (> 5 cellen) werden bepaald door H & E kleuring elke 100 μm weerspiegelende 1.300 μm weefsel. Longen van 11 muizen werden geanalyseerd. ( C ) Schema van chirurgische resectie van primaire mammary tumor. Rode cijfers en pijlen geven de volgorde en de richting van de huidinsnijdingen aanGrenzend aan de primaire tumor (links). Rechts 4e en 5e borstklieren bij grote schepen getoond aan de primaire tumor (midden) gevolgd door wondsluiting met wondklemmen (rechts). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 2 : Isolatie, perfusie en fixatie van long. Afbeelding (links) en bijbehorende cartoon (rechts) worden getoond van longisolatie, perfusie en fixatie. (A) een middellijn incisie wordt getoond met het bijvoegsel weergeven teruggetrokken huid bloot rechts 4e en 5e borstklieren (pijl). ( B ) De buikwand wordt geopend voor het diafragma. ( C ) Na terugtrekking oF darm, de abdominale aorta (pijlkop) wordt geïdentificeerd en afgesneden. ( D ) Het diafragma en de zijwanden van de ribbekap zijn gesneden om de thoracale holte bloot te stellen. ( E ) De long wordt door de rechter ventrikel van het hart geperfueerd tot de longen volledig wit worden ( F ). ( G ) De blootgestelde luchtpijp wordt geïdentificeerd, gevolgd door formalin ( H ) in de luchtpijp te injecteren tot de longen zijn uitgebreid ( I ). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Aanvullend Figuur 1 : Primaire tumor hergroei op chirurgische plaats. Representatieve H & E (boven) en grove (onder) beelden van de overblijvende juiste 4e en 5e melkklier na de operatie laten zien zonder tuMor hergroei met inguinale lymfeklier ( AB ) en borstklier met primaire tumor hergroei ( CE ). Klik hier om deze afbeelding te downloaden.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Wijzigingen en probleemoplossing:
Wanneer de tumor uit de buikwand los komt, kan de tumor aan de buikwand vasthouden. Dit werd waargenomen bij <5% muizen geïnjecteerd met tumor (gegevens niet getoond). Voor muizen met tumoren die aan de buikwand hechten, moet de muis worden geëuthaniseerd, omdat resectie moeilijk is zonder primaire tumor hergroei.
Beperkingen van model / techniek:
Terwijl andere onderzoekers de aanwezigheid hebben van fluorescent gemerkte enkelvoudige metastatische cellen die naar lever, nier, milt en hersenen worden verspreid, naast lung, na reimplantatie van mammale terminale eindknoppen afgeleid van MMTV-PyMT muizen 7 , afgezien van long, hebben we meerdere waargenomen Muizen met metastatische foci in lever, waarvan de penetratie nog niet bepaald moet worden. Andere plaatsen van mogelijke metastatische lasten, zoals lymfeklierenS, milt, bot en hersenen, werden niet geëvalueerd. Een beperking van deze techniek omvatte ook postoperatieve excoraties en infectie van de huid bij het scheren van de chirurgische plaats. Hierdoor werd de steriliteit van de chirurgische plaats beperkt tot toepassing van 70% ethanol gevolgd door poly (vinylpyrrolidon) -iodine.
Kritieke stappen binnen het protocol:
Stompe dissectie van de tumor weg van de buikwand is een kritische stap (stap 3.7) waar vermijding van de vaten binnen de membraan moet worden uitgevoerd. Stappen 3.8 en 3.9 zijn ook kritische stappen waar het grootste risico voor onbeheerde bloeding bestaat. De niet-geautoriseerde proximale en distale delen van het vaartuig dienen na de cauterisatie geïdentificeerd te worden om de bloedingen te kunnen visualiseren.
Betekenis met betrekking tot bestaande methoden:
Muismodellen van menselijke kanker die stadiums van de ziekte nabootsenProgressie, kinetiek en histopathologie bieden onschatbare hulpmiddelen om nieuwe doelstellingen voor therapie te identificeren en te evalueren, evenals potentiële werkzaamheid van nieuwe therapeutische middelen die die moleculen / pathways richten. Terwijl staart- en / of hartinjectie van gevestigde kankercellijnen vaak worden gebruikt als experimentele modellen van metastase, slaan deze in om kritieke stappen in het metastatische proces te herhalen, en in plaats daarvan weerspiegelen ectopische orgelkolonisatiebepalingen waar aspecten van overleving van de tumorcel kunnen worden geëvalueerd 8 . Bovendien, terwijl sommige bestaande transgene muizenmodellen van de novo mammary carcinogeneseontwikkeling modellenystemen verschaffen die studie mogelijk maken van stappen die betrokken zijn bij de metastase, beperkt de significante primaire tumorbelasting doorgaans de duur van de studie. Zo hebben groepen geïncultiveerde neoplastische cellen geïnjecteerd die afgeleid zijn van MMTV-PyMT primaire tumoren om chirurgische resectie 9 mogelijk te maken . Onze methode breidt uit van deze technieken zoals het dOes niet selecteren voor neoplastische cellijnen die in vitro worden gegroeid uit tumoren en direct de volledige, heterogene primaire tumor aan ontvangermuizen introduceren. Bovendien zorgt de lange latentie van longmetastase vorming in ons model voor een beter therapeutisch raamwerk voor diverse behandelingsstudies.
Toekomstige toepassingen:
Met betrekking tot het evalueren van de werkzaamheid van de therapeutica in deze modellen, omdat primaire tumoren typisch ontwikkeld zijn in alle borstklippen, is chirurgische resectie van alle primaire tumoren en adjuvante evaluatie van therapieën die gericht zijn op het minimaliseren van de groei van metastatische kolonies niet mogelijk. Door deze problemen ontwikkelden we een autochtone model van metastatische verspreiding waarbij de metastatische verspreiding van tumorcellen de novo plaatsvindt en na chirurgische resectie van de primaire tumor wordt een verlengde latentieperiode vastgesteld die het mogelijk maakt om metastase in de long te identificeren. Zo, dit modelWeerspiegelt menselijke borstkankermetastase en biedt een uniek systeem om de werkzaamheid van adjuvante afgeleide therapieën te beoordelen voor het effect op het reguleren van ziektevrije overleving en / of algehele overleving met gedefinieerde eindpunten per IACUC richtlijnen.
Aangezien een groot deel van vrouwen met borstkanker worden behandeld door chirurgische resectie van primaire tumoren 10 , en degenen die zich verder ontwikkelen, distale metastase ontwikkelen, impliceert dat verspreiding en zaaien voorafgaand aan chirurgische resectie hebben plaatsgevonden. Distale orgaanmicroenvironments bieden unieke niches voor overlevende en / of proliferatieve metastatische cellen 11 . Zo is het van essentieel belang dat modellenystemen deze facetten nabootsen, zodat moleculen en pathways die werkzaam zijn op secundaire plaatsen, die waarschijnlijk verschillen van primaire tumoren, geïdentificeerd, gestudeerd en therapieën nauwkeurig kunnen worden geëvalueerd voor werkzaamheid. Het hierin ontwikkelde model levert deze aspecten op voor studie.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs hebben geen bekendmaking van conflicten met de hierin gepresenteerde gegevens.
Acknowledgments
De auteurs bedanken Jo Hill voor histopathologische bijstand, dr. John Gleysteen voor instructie in chirurgische techniek, Tessa Diebel voor videografische bijstand, alle leden van de laboratoria Wong and Coussens voor kritisch inzicht en discussies, en het OHSU Knight Cancer Institute voor financiële steun. De auteurs erkennen steun van T32GM071388-10 en T32CA106195-11 aan CEG, de NCI / NIH, het Ministerie van Defensie Borstkanker Onderzoeksprogramma, de Susan G Komen Foundation, de Stichting Stichting Borstkanker en een Staan op Kanker - Stichting Lustgarten Pancreatic Cancer Convergence Dream Team Translational Research Grant (SU2C-AACR-DT14-14) aan LMC, een Women's Health Circle of Foundation Foundation Award voor MHW, en het Brenden-Colson Center voor Pancreatic Health aan MHW en LMC.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Isofluorane | Piramal Healthcare | N/A | Prescription order |
| Collagenase A | Roche | 11088793001 | |
| DNase I | Roche | 10104159001 | |
| DMEM | ThermoFisher | 12634010 | |
| 25 mL Pyrex bottle | Sigma-Aldrich | CLS139525 | |
| Fetal Bovine Serum | Atlanta Bio | S11150 | |
| 0.7 µm nylon strainer | Corning | 352350 | |
| 50 mL conical tube | VWR | 89039-658 | |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma-Aldrich | D2650 | |
| Growth factor-reduced Matrigel | BD | 354230 | Growth factor-reduced solubilized basement membrane preparation extracted from the Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) mouse sarcoma |
| Poly(vinylpyrrolidone)–Iodine complex | Sigma-Aldrich | PVP1 | |
| 29 gauge 0.3 mL insulin syringe | BD | 324702 | |
| Small Vessel Cauterizer Kit | FST | 18000-00 | |
| Wound clips | Texas Scientific | 205016 | |
| AutoClip wound clip applier | BD | 427630 | |
| AutoClip wound clip remover | BD | 427637 | |
| Bromodeoxyuridine | Roche | 10280879 | |
| Heparinized capillary tubes | Fisher | 22362566 | |
| Microtainer tubes with dipotassium EDTA | BD | 365974 | |
| 20 mL syringe | BD | 309661 | |
| DPBS | Thermo-Fisher | 14190-250 | |
| OCT-freezing medium | VWR | 25608930 | |
| Formalin, Buffered, 10% (Phosphate Buffer) | Fisher | SF100-4 | |
| 23g needle | Fisher | 14-826-6B | |
| FVB/n mouse | Jackson Laboratories | 001800 |
References
- Fantozzi, A., Christofori, G. Mouse models of breast cancer metastasis. Breast Cancer Res. 8, 212 (2006).
- SEER Cancer Statistics Review 1975-2008. Howlader, N. N. A., Krapcho, M. , National Cancer Institute. Bethesda, MD. based on November 2010 SEER data submission, posted to the SEER web site. http://seer.cancer.gov/csr/1975_2008/ (2011).
- National Comprehensive Cancer Network. Breast Cancer (Version 3.2014). , Accessed November 25. http://www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/breast.pdf (2016).
- Kataja, V., Castiglione, M., Group, E. G. W. Locally recurrent or metastatic breast cancer: ESMO clinical recommendations for diagnosis, treatment and follow-up. Ann Oncol. 19 Suppl 2, 11-13 (2008).
- Margolese, R. G., Hortobagyi, G. N., Buchholz, T. A., et al. Management of Metastatic Breast Cancer. Holland-Frei Cancer Medicine. Kufe, D. W., Pollock, R. E., Weichselbaum, R. R., et al. , 6th, BC Decker. Hamilton (ON). (2003).
- Guy, C. T., Cardiff, R. D., Muller, W. J. Induction of mammary tumors by expression of polyomavirus middle T oncogene: a transgenic mouse model for metastatic disease. Mol Cell Biol. 12, 954-961 (1992).
- Kouros-Mehr, H., et al. GATA-3 links tumor differentiation and dissemination in a luminal breast cancer model. Cancer Cell. 13, 141-152 (2008).
- Minn, A. J., et al. Genes that mediate breast cancer metastasis to the lung. Nature. 436, 518-524 (2005).
- Qian, B. Z., et al. FLT1 signalling in metastasis-associated macrophages activates an inflammatory signature that promotes breast cancer metastasis. J Exp Med. 212 (9), 1433-1448 (2015).
- Verkooijen, H. M., et al. Patients' refusal of surgery strongly impairs cancer survival. Ann Surg. 242 (2), 276-280 (2005).
- Peinado, H., et al. Pre-metastatic niches: organ-specific homes for metastasis. Nat Rev Cancer. 17 (5), 302-317 (2017).
