A macrofoam based sampling methodology was developed and evaluated for the detection and quantification of norovirus on environmental hard surfaces.
Menneske noroviruses er en ledende årsak til epidemien og sporadisk gastroenteritt på verdensbasis. Fordi de fleste infeksjoner er enten spres direkte via person-til-person rute eller indirekte gjennom miljø overflater eller mat, forurenset fomites og livløse overflater er viktige kjøretøy for spredning av viruset i løpet av norovirus-utbrudd.
Vi utviklet og evaluert en protokoll ved hjelp macrofoam vattpinner for påvisning og typing av menneskelige noroviruses fra harde overflater. Sammenlignet med fiber-tipped vattpinner eller antistatiske våtservietter, macrofoam vattpinner tillate virus recovery (range 1,2 til 33,6%) fra toalettsete flater på opp til 700 cm 2. Protokollen omfatter trinn for utvinning av viruset fra vattpinner og ytterligere konsentrasjon av det virale RNA ved å bruke spinnkolonner. Totalt 127 (58,5%) av 217 penselprøver som hadde blitt samlet inn fra overflater i cruiseskip og langsiktig omsorg anlegg hvor norovirus gastroenteritt hadde værtrapportert testet positivt for GII norovirus ved RT-qPCR. Av disse var 29 (22,8%) kunne med hell genotypede. I konklusjonen, påvisning av norovirus om miljø overflater ved hjelp av protokollen vi utviklet kan bistå i å bestemme nivået av miljøforurensning ved utbrudd samt påvisning av virus når kliniske prøver er ikke tilgjengelig; det kan også legge til rette for overvåking av effektiviteten av utbedring strategier.
Menneske noroviruses er en ledende årsak til epidemien og sporadisk akutt gastroenteritt på verdensbasis en, to, tre. Viruset er svært smittsom og overføring skjer ved direkte person til person interaksjon eller indirekte gjennom kontakt med forurenset mat, vann eller miljømessige overflater. Noroviruses kan kaste i lengre perioder og forlenget overlevelse av virus på miljø overflater er dokumentert en, to, tre. Under topp shedding, er milliarder av viruspartikler frigjort pr gram avføring, og oppkast også inneholder et tilstrekkelig antall viruspartikler for å forårsake infeksjon 4, 5, 6, 7, 8,ef "> 9, 10. I tillegg kan overføring av viruset mellom døde overflater og human hud lett oppstå i 2, 11, 12. Det kan således overvåkning av miljøforurensning bistå i utbrudds undersøkelser og i å vurdere effektiviteten av rensing og desinfeksjonsrutiner.
Flere miljøprøvetakings protokoller er blitt beskrevet for deteksjon av rotavirus, coliphage MS2, feline calicivirus (FCV), og bakteriofag P22 13, 14, 15, 16. Imidlertid validerings betingelser som er beskrevet i disse studier, inkludert rask uttørking (<1 time) og små overflateområder (25 x 100 cm 2), kan det ikke tilstrekkelig representere feltinnstillinger. I tillegg forventes lave forurensningsnivåer av Environmental overflater krever protokoller som er i stand til å oppdage svært få viruspartikler.
Vi utviklet en macrofoam basert overflate prøvetaking metode for påvisning og typing av norovirus. Denne metoden er validert i flere norovirus-utbrudd. Protokollen inkluderer 1) hvordan å samle penselprøver fra miljø overflater (2) hvordan du best kan opprettholde integriteten av prøvene under innsamling og forsendelse til laboratoriet, og 3) laboratorietesting og typing av norovirus.
Noroviruses har en 50% menneskelig smittende dose mellom 18 og 10 tre viruspartikler 20. Derfor kan til og med lavt nivå forurensning av overflater utgjør et offentlig helserisikoen. Flere aspekter av prøvetakingspinne protokollen ble evaluert inkludert: 1) ulike pensel materialer, 2) oppbevaring tilstand spinner under transport, 3) viral RNA konsentrasjon, og 4) coliphage MS2 som intern utvinning kontroll.
Inntil nylig hadde bare resultatene for kompres…
The authors have nothing to disclose.
The authors have no acknowledgements.
Generic name for kits | ||||
Macrofoam swab | Premoistened EnviroMax Swab kit | Puritan | 2588060PFUW | |
RNA Lysis buffer | CDC UNEX buffer | Microbiologics | Cat No MR0501 | |
RNA extraction spin column | Midi column | Omega Biotek | Cat No R6664-02 | |
RNA purification spin column | Zymol RNA Clean and Concentrator kit | Zymo Research | Cat No R1016 | |
Real time RT-PCR kit | AgPath kit One-Step RT-PCR Kit | Life Technologies | Cat No 4387391 | |
Conventional RT-PCR kit | Qiagen one step RT-PCR kit | Qiagen kit | Cat No 210212 | |
Gel extraction kit | Qiagen QIAquick gel extraction kit | Qiagen kit | Cat No 28704 or 28706 | |
Coliphage MS2 | ATCC | Cat No 15597-B1 | ||
RNA run-off transcripts | Bacteriophage MS2 (ATCC No. 15597-B1) can be cultivated using Escherichia coli (E.coli) Famp (ATCC No. 700891). | |||
Realtime PCR platform | Applied Biosystems | Model ABI 7500 | GI and GII RNA run off transcripts were quantified spectrophotometrically at A260, diluted in diethyl pyrocarbonate-treated water to 1 × 106 copies/ μl, and stored at −80°C with 1.0 U /μl RNasin (Promega, Madison, WI). | |
Optical 96-well reaction plate | Thermo Scientific | Cat No 4316813 | ||
MicroAmp Clear Adhesive Film | Thermo Scientific | Cat No 4306311 |