Modelos animales de aterosclerosis son esenciales para comprender el mecanismo e investigar nuevos enfoques para prevenir el desarrollo de la placa o ruptura, una causa principal de muerte en el mundo industrializado. Este protocolo utiliza una combinación de lesión de globo y dieta rica en colesterol para inducir a las placas ateroscleróticas en arteria ilíaca de conejo.
Síndrome coronario agudo resultante de la obstrucción coronaria después de la ruptura y desarrollo de la placa aterosclerótica es la causa principal de muerte en el mundo industrializado. Conejos Nueva Zelanda blanco (NZB) son ampliamente utilizados como modelo animal para el estudio de la aterosclerosis. Desarrollan lesiones espontáneas cuando alimentados con la dieta aterogénico; sin embargo, esto requiere mucho tiempo de 4 a 8 meses. Para mejorar y acelerar la aterogénesis, se emplea a menudo una combinación de dieta aterogénico y lesión endotelial mecánica. El procedimiento presentado en la inducción de las placas ateroscleróticas en conejos utiliza un catéter con balón para alterar el endotelio en la arteria ilíaca izquierda de NZB conejos alimentados con la dieta aterogénico. Daño mecánico causado por el catéter con balón induce una cadena de reacciones inflamatorias iniciar neointimal acumulación del lípido en una manera dependiente del tiempo. Placa aterosclerótica después de espesamiento de neointimal de mostrar globo lesiones con infiltración extensa de lípidos, contenido de la celda alta del músculo liso y presencia de macrófagos derivados de células de la espuma. Esta técnica es simple, reproducible y produce la placa de longitud controlada dentro de la arteria ilíaca. Todo el procedimiento se completa dentro de 20-30 minutos. El procedimiento es seguro con baja mortalidad y ofrece también gran éxito en la obtención de importantes lesiones intimales. El procedimiento del catéter de balón indujo resultados de lesión arterial en la aterosclerosis dentro de dos semanas. Este modelo puede utilizarse para investigar la patología de la enfermedad, diagnóstico por imágenes y evaluar nuevas estrategias terapéuticas.
La ruptura de las placas ateroscleróticas vulnerables es una de las principales causas de muerte en los países industrializados1. Aunque la investigación en las últimas décadas ha desarrollado varios mecanismos moleculares y celulares implicados en la progresión de la placa, continuó todavía se necesitan esfuerzos no sólo para desentrañar el complejo mecanismo de progresión de la enfermedad sino también para probar nuevas terapéuticas se acerca. Se han propuesto varios modelos animales para el estudio de la aterosclerosis. Manipulación genética, lesión de endotelio de alimentación o mecánico de colesterol son las estrategias estándar compartidas por modelos más animales de la aterosclerosis, incluyendo ratones, conejos o minipigs. Entre éstos, NZB los conejos son sensibles a la dieta de colesterol mientras que los ratones y las ratas normales no absorben mucho colesterol de la dieta2,3,4. Conejos desarrollan espontáneamente las lesiones aórticas ricas en macrófagos con algún componente fibroso cuando alimentados con colesterol dieta rica5,6. Sin embargo, el tiempo largo preparatorio de 4 a 8 meses para inducir la aterosclerótica plaquesby alimentación colesterol dieta solo6,7 es un gran inconveniente para la mayoría de los ajustes experimentales. En búsqueda para inducir lesiones en relativamente poco tiempo, una combinación de colesterol alto dieta y balón la lesión ha sido desarrollada por Baumgarter y Studer8. El objetivo general de esta técnica es inducir a las placas ateroscleróticas compuestas de células espumosas (similares a la estría grasa en los seres humanos) en conejos hipercolesterolémicos dentro de 2 semanas. La presente técnica describe el procedimiento de lesión de la pared arterial basado en método de Baumgarter utilizando un catéter con balón en la arteria ilíaca de conejos hipercolesterolémicos NZB.
Junto con una dieta rica en colesterol, lesiones resultantes de globo inducido la endotelialización conducirá a la aterosclerosis. Lesión de globo acelera la formación de lesiones ateroscleróticas y produce placa de tamaño uniforme y distribución. Engrosamiento intimal aumenta durante un período de tiempo y célula intimal infiltración comienza en pocos días después de lesión. Grasos con macrófagos importantes comienzan a aparecer después de 7-10 días de lesión de globo y están representados como lesión tipo II según la clasificación de la Asociación Americana del corazón. Lesión de globo en conejo se realiza con frecuencia en la aorta para estudiar la composición de la placa. El endotelio neointimal expresa altos niveles de la molécula de adhesión intercelular. Las placas se asocian a disección medial y cambios adventicial. Las lesiones ateroscleróticas están compuestos por lípidos, proliferación las células musculares lisas (SMCs), fibras de colágeno y células inflamatorias que se acumulan en el endotelio regenerado y son principalmente de tipo II en la naturaleza. La distribución topológica de las placas de conejo fue similar al reportado en aortas humanas 9,10 , en principio, la aorta es más grande en tamaño en comparación con las arterias ilíacas y produciría la placa de mayor longitud. Sin embargo, la gran ventaja de la utilización de la arteria ilíaca como el sitio de la aterosclerosis en conejos es su accesibilidad, su similitud en el contenido muscular de la arteria coronaria humana11, lesión uniforme desarrollo12, factor tisular alta actividad13 y recipiente consistente dimensión comparable a la coronaria humana permitiendo la evaluación de dispositivos comercialmente manufacturados morfométricas y criterios de valoración angiográficas. Se han investigado métodos invasivos y no invasivos para analizar las placas en las arterias ilíacas de conejo en el animal vivo. Informes anteriores describen el uso de resonancia magnética (MRI) con la ayuda de un Señor de 2,35-tesla sistema 14 además, el ultrasonido intravascular (IVUS) o catéteres de tomografía de coherencia óptica pueden ser adecuadamente aplicada a la imagen placas ateroscleróticas en las arterias ilíacas conejo. La arteria ilíaca es accesible para la proyección de imagen de ultrasonido cuando se usa una ecografía de alta resolución y la aorta puede estudiarse también con esta técnica.
En la última década, este modelo de conejo de lesión de globo ha ayudado a comprender aún más los mecanismos de progresión de placa15y regresión de placa16. Además, el modelo se ha utilizado para estudiar la influencia de nuevos agentes terapéuticos tales como las estatinas, antiagregantes estándar, antioxidante agentes17,18 y stents liberadores de fármacos como everolimus o liberador de zotarolimus stent19,20 en engrosamiento neointimal. Este modelo también se ha utilizado para investigar la proyección de imagen intravascular del catéter21la proyección de imagen de la fluorescencia del infrarrojo cercano.
El modelo de aterosclerosis de la arteria ilíaca de conejo es ampliamente utilizado en la investigación de la aterosclerosis. Con este protocolo los conejos desarrollaron rápidamente las placas más severas y avanzadas en comparación con las lesiones espontáneas convertidas sólo dieta de colesterol. Lo importante, animales recuperan rápidamente de la cirugía.
El principal estímulo de la aterogénesis es el daño mecánico causado por el catéter de balón que lesiona el endotelio y el…
The authors have nothing to disclose.
Este trabajo fue apoyado por el suizo nacional ciencia Fundación beca 150271.
New Zealand White rabbits | Charles River laboratories,France | Cre:KBL(NZW) | |
Cholesterol rich diet | Ssniff spezialdiäten | Ssniff EF K High Fat and Cholesterol | |
Glass bead sterilizer-Germinator 500 | VWR, Leicestershire, UK | 101326-488 | |
Fogarty balloon embolectomy catheters, 2 French | Edwards Lifesciences, Switzerland | 120602F | For single use only |
Luer Lock Syringe | Becton, Dickinson and Company, USA | 309628 | |
Thermopad Type 226 | Solis, Switzerland AG | 397387 | |
Buprenorphine- Temgesic | Reckitt Benckiser AG, Switzerland | 7.68042E+12 | |
Isoflurane | Piramal Critical Care, Inc, Bethlehem, PA 18017 | 2667-46-7 | |
Anaesthesia machine-combi-vet Base Anesthesia System | Rothacher Medical GmbH, Switzerland | CV 30-301-A | |
Cardell touch veterinary vital signs monitor | Midmark, Ohio, USA | 8013-001 | |
Ophthalmic ointment-Humigel | Virbac, France | ||
Animal hair clippers | Aesculap AG, Germany | GT420 | |
Disinfectant-Betadine solution | MundipharmaMedicalCompany, Switzerland | 14671-1203 | |
Dumont #7 Forceps | FST Germany | 11274-20 | |
Medium and small microscissors | Medline International Switzerland Sàrl | UC4337 | |
Microvascular clamps | FST, Germany | 18051-28 | |
Papaverine | ESCA chemicals, Switzerland | RE 356 803 | |
Vein Pick | Harvard Apparatus, Cambridge, UK | 72-4169 | For single use only |
Saline | Laboratorium Dr. G. Bichsel AG, , Switzerland | 1330055 | |
Polysorb 5-0 suture | Covidien AG, Switzerland | UL 202 | Monofilament |
Sulfadoxine and Trimethoprim-Trimethazol | Werner Stricker AG, Switzerland | Swissmedic Nr. 50'361 | |
Antiseptic- Octenisept | Schülke & Mayr AG, Switzerland | GTIN: 4032651214068 | |
Phosphate Buffered Saline | Roth | 1058.1 | |
Isobutanol-2-Methylbutane | Sigma-Aldrich, Switzerland | M32631-1L | |
Optimum Cutting Temperature compound-Tissue-Tek | VWR Chemicals, Belgium | 25608-930 | |
Cryostat | Leica, Glattbrugg, Switzerland | Leica CM1860 UV | |
Glass slide- Superfrost Plus | Thermo Scientific | 4951PLUS4 | |
Mayer's Haematoxylin | Sigma-Aldrich, Switzerland | MHS32-1L | |
Eosin 0.5% aq. | Sigma-Aldrich, Switzerland | HT110232-1L | |
Oil Red O | Sigma-Aldrich, Switzerland | O0625-25G | |
α-smooth muscle actin antibody | Abcam, UK. | ab7817 | |
Macrophage Clone RAM11 antibody | DAKO, Switzerland | M063301 | |
Hoechst | Abcam, UK. | ab145596 | |
Goat polyclonal Secondary Antibody (Chromeo 546) | Abcam, UK. | ab60316 | |
Alexa Fluor 488/547 | Abcam, UK. | ||
Glycergel Mounting Medium, Aqueous | DAKO, Switzerland | C056330 | |
Hematoxylin for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | H3136-25G | |
Ferric chloride for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 157740-100G | |
Iodine for Movat staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 207772-100G | |
Potassium iodide for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 60400-100G-F | |
Alcian blue for Movat staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | A5268-10G | |
Strong Ammonia for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 320145-500ML | |
Brilliant crocein MOO for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 210757-50G | |
Acid Fuchsin for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | F8129-50G | |
Sodium Thiosulfate for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 72049-250G, | |
Phosphotungstic acid for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 79690-100G | |
Crocin for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 17304-5G | |
EUKITT for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 03989-100ML |