This protocol describes a centrally catheterized mouse model of prolonged critical illness. We combine the cecal ligation and puncture method to induce sepsis with the use of a central venous line for fluids, drugs and nutrient administration to mimic the human clinical setting.
Этот протокол описывает централизованно катетеры модели мыши длительного критического заболевания. Мы объединяем слепую кишку перевязки и метод прокола, чтобы вызвать сепсис с использованием центральной венозной линии для жидкостей, лекарственных препаратов и введения питательных веществ, чтобы имитировать клинические параметры человека. Тяжелобольные пациенты требуют интенсивной медицинской помощи для того, чтобы выжить. В то время как большинство пациентов будет восстанавливаться в течение нескольких дней, около четверти пациентов необходима длительная интенсивной терапии и имеет высокий риск смерти от не-решения полиорганной недостаточности. Кроме того, длительный этап критического заболевания является пронизанной глубокой мышечной слабости и эндокринных и метаболических изменений, из которых патогенез в настоящее время не полностью изучены. Наиболее широко используемых животных модель в критическом исследовании ухода является слепой кишки перевязки и пункции модель, чтобы вызвать сепсис. Это очень воспроизводимая модель, с острыми воспалительными и гемодинамическими изменениями, подобными человеческим сенсестренка, которая предназначена для изучения острой фазы критического заболевания. Тем не менее, эта модель пронизанный высокой летальности, которая отличается от клинической ситуации человека, и не развитом для изучения длительной фазы критического заболевания. Таким образом, мы адаптировали технику, помещая центральный венозный катетер в яремной вене позволяет нам управлять клинический значимой поддерживающей терапией, чтобы лучше имитировать человеческую клиническую ситуацию критической болезни. Эта модель мыши требует обширной хирургической процедуры и ежедневный интенсивный уход за животными, но это приводит к соответствующей модели острой и длительной фазы критического заболевания.
Критические болезни является болезненное состояние, в котором функция одного или нескольких органов и систем затруднено в той степени, что пациент умрет, если интенсивная медицинская помощь не назначается. В то время как первопричины для поступления в отделение интенсивной терапии (ОИТ) может варьироваться, начиная от травмы, осложненной операции, ожогов, заболевание обострений до сепсиса, все тяжелобольные пациенты страдают от клеточного повреждения, вызванных гипоперфузиями, гипоксией и чрезмерного воспалением среди других , что приводит к полиорганной недостаточности. Большинство пациентов выживают их острый инсульт, но важная часть пациентов не сразу восстановиться и нуждаются в длительной интенсивной терапии. Они имеют высокий риск смерти из-за отказа разрешения полиорганной недостаточности. Кроме того, длительный этап критического заболевания является пронизанным глубокой мышечной слабостью и эндокринным и метаболическими изменениями, из которых патогенез в настоящее время не полностью изучен.
Несколько гОден модели используются в условиях интенсивной исследовательской помощи. Два основном используемые модели являются экзогенное введение липополисахарида (LPS) и слепой кишки перевязки и пункции (CLP). Обе модели разработаны для имитации острой фазы сепсиса, определяемый как угрожающей жизни дисфункции органов , вызванной дизрегуляции ответ хозяина на инфекцию, и одна из основных причин для поступления в отделении интенсивной терапии во всем мире 1, 2. Модель LPS имеет несколько недостатков , как это только скоротечно влияет на высвобождение цитокинов и состояние гемодинамики животного 3. В отличие от людей, грызуны также являются особенно устойчивыми к эндотоксина и использование «» высоких доз эндотоксина необходимо производить гипотензии и смертности, тем самым дальнейшее повышение озабоченности обоснованности этого метода 4, 5. Другая модель, слепой кишки перевязки и пункции модель (CLP)имеет лигирование части слепой кишки с последующим проколом сквозными и сквозным. Эта процедура вызывает полимикробную брюшную инфекцию с повреждением тканей, с последующей транслокацией бактерий в отделение крови. Это вызовет системную воспалительную реакцию и развитие сепсиса. Модель CLP была широко признана в качестве животной модели острой критической болезни , которая воспроизводит основные черты сепсиса: гипервоспаления, вазодилатацию, гипотонии и повышение сердечного выброса 6, 7. Однако эта модель не позволяет изучать не-решения полиорганной недостаточности, гипотрофии мышц и эндокринных и метаболических изменений, характерных для длительной фазы критического заболевания. Кроме того, в последнее время валидность мышиных моделей для критических заболеваний были поставлены под сомнение, поскольку выводы из мышиных моделей не всегда могут быть переведены к установке 8 человек, 9, 10. Возможное объяснение может быть то, что поддерживающая терапия, которая предоставляется тяжелобольными пациентами человека существенно отличается от ухода, который предоставляется тяжелобольной мышей.
Поэтому, чтобы более близко напоминает человеческую установку и позволить исследование длительной фазы критической болезни, мы разработали модель мыши, которая имитирует острую интенсивную терапию, как указано для человека, например, обширное внутривенного введения жидкости и лечения антибиотиков, и которая позволяет администрировать поддерживающую терапию для того, чтобы пережить длительную фазу критических заболеваний, таких как нутритивной поддержки. Для этой цели мы адаптировали модель мыши CLP-индуцированной сепсисом, являющийся золотым стандартом для сепсиса, и помещают центральную венозную линию, которая позволяет введение жидкостей, питательных веществ и лекарственных средств.
Мы разработали более клинический значимыми мышиную модель критических заболеваний, путем объединения слепой кишки перевязки и пункционный метода, чтобы вызвать сепсис с использованием центральной венозной линии для жидкостей, лекарственных препаратов и введения питательных вещест…
The authors have nothing to disclose.
GVdB, via the University of Leuven (KU Leuven), receives long-term structural research support from the Methusalem Program funded by the Flemish Government (METH08/07) and holds a European Research Council Advanced Grant AdvG-2012-321670 from the Ideas Program of the European Union seventh framework program. SET received a Research Foundation-Flanders (FWO) Research Assistant Fellowship.
Buprenorphine | Ecuphar | Vetergesic 0,3mg/ml | |
C57BL/6 | Janvier labs | C57BL/6JRj | |
colloids | Fresenius Kabi | Volulyte 6% | |
crystalloids | Baxter | Plasmalyte a viaflo | |
Ethilon 3.0 | Ethicon | F3211 | |
Imipenem | MSD | Tienam 500mg powder for injection fluid | |
Isoflurane | Eurovet | Iso-vet | |
Ketamine | Eurovet | Nimatek 100mg/ml | |
LocTite Super glue3 all plastics | Rectavit | 119818 | |
Mersilk 3.0 | Ethicon | L192 | |
Mersilk 5.0 | Ethicon | F682 | |
Microrenathane .025 O.D." x .012 I.D." | Bioseb | MRE-025 | |
olimel N7E | Baxter | ||
PE10 – Polyethylene .011" x .024" | Instech Solomon | BTPE-10 | |
PE-50 tubing .023"x.038" | Instech Solomon | BTPE-50 | |
Rodent Swivel 20 G | Bioseb | RS-20G | |
Ropivacaïne | Astrazenica | Naropin 2mg/ml | |
Xylazine | VMD | Xylazine hydrochloride 2% |