Summary
يمكن نمذجة نزيف غير المنضبط، وهو سبب مهم للوفيات بين مرضى الصدمة، وذلك باستخدام تهتك الكبد القياسية في نموذج الفئران. هذا النموذج يؤدي إلى فقدان الدم متسقة، والبقاء على قيد الحياة، ويسمح لاختبار عوامل مرقئ. توفر هذه المقالة عملية خطوة بخطوة لتنفيذ هذا النموذج القيم.
Abstract
النزف غير المنضبط هو سبب مهم للوفيات التي يمكن الوقاية منها بين مرضى الصدمة. قمنا بتطوير نموذج الفئران من نزيف غير المنضبط عن طريق تهتك الكبد الذي يؤدي إلى فقدان الدم متسقة، وتعديلات الدورة الدموية، والبقاء على قيد الحياة.
الفئران الخضوع لاستئصال موحدة من الفص الأوسط الأوسط من الكبد. ويسمح لهم بالنزيف دون تدخل ميكانيكي. يمكن أن تدار العوامل مرقئ كما قبل العلاج أو العلاج الانقاذ اعتمادا على مصلحة المحقق. خلال وقت النزف، يتم تنفيذ رصد الدورة الدموية في الوقت الحقيقي عبر خط الشريان الفخذ الأيسر. ثم يتم التضحية الفئران، ويتم قياس فقدان الدم، ويتم جمع الدم لمزيد من التحليل، ويتم حصاد الأجهزة لتحليل الإصابة. ويصف التصميم التجريبي للسماح للاختبار المتزامن للحيوانات متعددة.
نزيف الكبد كنموذج من نزيف غير المنضبط موجود طن الأدب، في المقام الأول في نماذج الفئران والخنازير. بعض هذه النماذج تستخدم مراقبة الدورة الدموية أو قياس فقدان الدم ولكن تفتقر الاتساق. النموذج الحالي يتضمن القياس الكمي لفقدان الدم، رصد الدورة الدموية في الوقت الحقيقي في نموذج الفئران التي توفر ميزة استخدام خطوط المعدلة وراثيا وآلية الإنتاجية العالية لمواصلة التحقيق في الآليات الفيزيولوجية المرضية في نزيف غير المنضبط.
Introduction
الصدمة هي السبب الرئيسي للوفاة والعجز بين الشباب في جميع أنحاء العالم. 1 لا يزال النزف غير المنضبط السبب الرئيسي للوفيات بين المصابين بصدمات شديدة. 2 إدارة المريض النزيف الصدمة هو شقين: السيطرة على النزيف الجراحي، والإنعاش واستبدال الدم المفقود.
وكانت النماذج الحيوانية للصدمة النزفية حجر الزاوية في أبحاث الصدمة، ويمكن استخدامها في تقييم الفيزيولوجيا المرضية وعلاج الصدمة / النزفية. 3 ، 4 الصدمة في النماذج الحيوانية يمكن أن يتحقق على نطاق واسع بطريقتين: تسيطر على النزف والنزيف غير المنضبط. 5 ، 6 يتم التحكم في النزف عن طريق إزالة حجم ثابت من الدم أو إزالة الدم لتحقيق ضغط الدم معين (الضغط الثابت). بينما النماذج سي مفيدة في التقييم في آليات والتغيرات المناعية في صدمة النزفية، فهي لا تنطبق على اختبار عوامل مرقئ ولا تحاكي السيناريو السريري للنزف بعد الصدمة. إلى هذه الدرجة، سعينا لتطوير نموذج من النزيف غير المنضبط التي من شأنها أن تسمح لنا لاختبار التغيرات مرقئ والعناصر المؤيدة للتخثر في نموذج الفئران. الكبد هو خيار جذاب لنزيف غير المنضبط في جزء منه بسبب إمدادات الدم المزدوج للكبد وأنها واحدة من الأجهزة داخل البطن الأكثر إصابة في كل من صدمة حادة واختراق. ونظرا للأهمية السريرية العالية، تم استخدام الكبد كنموذج للنزيف غير المنضبط، والأكثر شيوعا في نماذج الفئران والخنازير ولكن في الآونة الأخيرة في الرئيسيات أيضا. 7 ، 8 ، 9 ، 10 ، 11 ، 12 13 ، 14
نماذج الفئران والخنازير من نزيف الكبد غير المنضبط، في حين قيمة في النظر في ممارسات الإنعاش ورصد الدورة الدموية، هي أقل فائدة من نموذج الفئران لأسباب مختلفة مثل التكلفة، وعدد من الحيوانات المستخدمة، والأهم من ذلك نقص النسبي خطوط المعدلة وراثيا المتاحة للتحليل من الإشارات الخلوية والجزيئية محددة. ويشارك نموذج الفئران الحالي أوجه تشابه هامة لنماذج نزيف الكبد الموجودة بما في ذلك تهتك الكبد موحدة، وفقدان الدم الكمي، ورصد الدورة الدموية، والقدرة على إجراء تحليل البقاء على قيد الحياة. العديد من النماذج الموجودة فقط تتضمن بعض هذه الجوانب في حين تم تطوير نموذجنا لقياس العديد من فاريا الفسيولوجيةفي وقت واحد وفي الفئران متعددة. كذلك، فإن تطوير نموذج الفئران يفتح الباب أمام التحقيقات وراء الإنعاش وإلى آليات الفيزيولوجيا المرضية أكبر في نزيف غير المنضبط مع إمكانات من حيث التكلفة، وارتفاع الإنتاجية نموذج باستخدام التقنيات الجزيئية المتقدمة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
تم وضع الفئران وفقا لجامعة بيتسبرغ (بيتسبرغ، با، الولايات المتحدة الأمريكية) والمعاهد الوطنية للصحة (المعاهد الوطنية للصحة، بيثيسدا، مد، الولايات المتحدة الأمريكية) المبادئ التوجيهية رعاية الحيوان في ظروف محددة خالية من مسببات الأمراض مع 12 ساعة دورات الضوء الداكن وحرية الوصول إلى التغذية القياسية والمياه. تمت الموافقة على جميع التجارب على الحيوانات وأجريت وفقا للمبادئ التوجيهية التي وضعتها لجنة بحوث الحيوان والرعاية في جامعة بيتسبرغ.
1. الجراحية الميدانية وإعداد الصك
- تعقيم جميع الأدوات الجراحية، خياطة، الشاش، القطن تلميح قضيب، أنابيب، وموصلات الأنابيب قبل الإجراء.
- تعقيم الأدوات الجراحية، خياطة، الشاش، وتطبيقات طرف القطن في الأوتوكلاف. تعقيم أنابيب وموصلات الأنابيب مع أكسيد الإثيلين.
- الحقل الجراحي
- بدوره على المياه-- تعميم وسادة التدفئة وتعيين إلى 37 و ديغ؛ c. وضع سورجىوسادة زرقاء كال على أعلى من ذلك ثم ثنى العقيمة على رأس لوحة الأزرق الجراحية.
- فتح جميع الأدوات المعقمة على ثنى العقيمة. استخدام قفازات معقمة لتجنب كسر العقم خلال هذه الخطوة.
- ملء وعاء من الفولاذ المقاوم للصدأ مع الايثانول 70٪ وتجنب جانبا. وسوف تستخدم هذه لتنظيف الأدوات بين الحيوانات.
- بدوره على التعقيم ميكروبيد والسماح للحرارة إلى 150 درجة مئوية. وسوف تستخدم هذه أيضا لتنظيف الأدوات بين الحيوانات. إذا أجريت عملية جراحية على أكثر من 5 الفئران، تأكد من تغيير الأدوات إلى مجموعة معقمة جديدة.
- محول مجموعة المتابعة
- ربط محول العقيمة، بي-50 أنابيب، واثنين من إبر 23G، والذكور من الذكور لور، ومحبس ثلاثي الاتجاه. 6
- معايرة وصفر محول لكل تعليمات الشركة المصنعة.
2. الكبد الجراحة عملية الجراحية
- التخدير الحث وتحديد المواقع
- حقن البنتوباربيتال الصوديوم داخل الصفاق بجرعة 70 ملغ / كغ. التخدير يجب أن تصبح نافذة المفعول بين 5-10 دقيقة. تقييم عمق التخدير مع قرصة أخمص قدميه. إذا كان الماوس لديه استجابة لقرصة أخمص القدمين، وهناك حاجة إلى وقت إضافي أو التخدير. إذا كان هناك حاجة إلى التخدير إضافية أثناء الإجراء، تكملة بنتوباربيتال الصوديوم. لا تعطي المكملات بكميات أكبر من 0.05 مل لمنع جرعة زائدة.
- بعد الماوس هو تماما تحت التخدير، موقف مستلق الماوس على لوحة الجراحية. تأمين جميع الأطراف الأربعة من الماوس إلى المجلس مع الشريط.
- حلق البطن والثيران الثنائية مع الحلاقة.
- نقع الشاش المعقم مع بيتادين وتنطبق على البطن والفخذ الثنائية لعملية جراحية. لتجارب البقاء على قيد الحياة، الإعدادية البطن و غروينز مع بيتادين تليها الإيثانول لما مجموعه ثلاث دورات الإعدادية.
- إدراج مسبار درجة الحرارة المستقيم لمراقبة درجة الحرارة الأساسية في جميع أنحاء الإجراء. إبقاء cدرجة حرارة خام بين 35-37 درجة مئوية.
- لاقامة القسطرة الوريدية: ملء أنابيب بي-10، إبرة 30 G، ومحبس ثلاثي الاتجاه مع حل لاكتاتد رينغر من كيس إيف.
- لتشكيل قسطرة الشرايين: ملء أنابيب بي-10 و 30 G إبرة مع المالحة هيبارينيزد (1:10 التخفيف من 1000 ه الهيبارين). مطلوب الهيبارين المالحة لمنع تخثر الدم.
- ضع الماوس تحت المجهر تشريح.
- جعل شق 4-5 ملم طولية على العضلات الفخذ باستخدام مقص الجراحية ايريس. باستخدام ملقط دومونت الاستيلاء على الأنسجة الدهنية متصلة العضلات المقربة وسحب أفقيا لتعرض نظيفة من حزمة الفخذ. لا تشريح من خلال الأنسجة الدهنية وهذا سوف يؤدي إلى إصابة الأوعية الدموية.
- تشريح بعناية العصب بعيدا عن الشريان والوريد مع ملقط دومون. هناك لوحة الدهون المجاورة للعصب. الاستيلاء على هذا مع واحد دومونت فورسبd سحب أفقيا. وهذا يسحب العصب بعيدا عن الشريان خلق طائرة للتشريح. مع دومونت فورسب أخرى تشريح بصراحة النسيج الضام بين العصب والشريان.
- لا انتزاع العصب خلال هذا الجزء من تشريح.
- حلقة ثلاثة خيوط الحرير 6-0 حول الشريان والوريد القريبة إلى فيموريس بروفوندا تقلع.
- وضع خياطة 1 الأكثر القريبة وترك فضفاضة.
- وضع خياطة 2 معظم عن قرب وربطة عنق على الفور.
- وضع خياطة 3 بين خياطة 1 و 2 وترك فضفاضة.
- جعل بضع الشريان على السطح البطني للسفينة. ويوصى باستخدام مقص الأوعية الدموية الدقيقة لجعل بضع الشريان لتجنب ترانزكتيون من السفينة.
- إدراج القسطرة الثلاثية في الشريان. على الفور التعادل قبالة خياطة 1 و 2 لتأمين القسطرة في المكان.
- ربط القسطرة الثلاثية إلى محول وجمع البيانات خط الأساس ضغط الدم.
- كرر الخطوات 2.2.4 - 2.2.6 على الفخذ المعاكس. قنية الوريد الفخذي بطريقة مماثلة إلى الشريان. إجراء بضع البطن على السطح البطني للسفينة تليها الإدراج القسطرة. هذه القسطرة يمكن استخدامها لإدارة السوائل أو المخدرات.
- قبل وزن أنبوب يحتوي على 0.5 مل من برنامج تلفزيوني، ثلاثة مثلثات امتصاص، واحد تزن القارب في الماوس.
- جعل بطني خط الوسط شق البطن بدءا من عملية خنجري وتمتد كودالي للسماح التعرض للكبد تماما.
- إدراج مثلث امتصاص واحد في البطن ضد جدار البطن الأيمن. كرر على الجانب الأيسر.
- تأكد من أن مثلث الامتصاص هو بعيدا عن الكبد لتجنب تأثير التعبئة مرقئ بعد الكبد هو تمزق.
- انتزاع بعناية الفص الأوسط الأوسط من الكبد وتمزق 75٪ من الفص مع مقص ايريس الجراحية. وضع تمزقد في أنبوب يحتوي على برنامج تلفزيوني.
- إغلاق جدار البطن مع المواد الغذائية الأساسية عن طريق قضيب التيلة. فهم الجلد والعضلات معا واطلاق النار على التيلة. القيام بذلك في أسرع وقت ممكن بعد تهتك الكبد لتجنب فقدان الدم خارج البطن. في تجارب البقاء على قيد الحياة، يتم إغلاق البطن في طبقتين. تشغيل خياطة امتصاص للعضلات تليها طبقة تشغيل من خياطة غير امتصاص للجلد يوفر إغلاق كافية.
- بالنسبة للفئران التي هي من أجل البقاء على قيد الحياة تيمبوانتس أطول من 30 دقيقة ينبغي إزالة القسطرة الفخذ، والشريان والوريد تعادل مع خياطة 3 من الخطوة 2.2.6. ثم يتم إغلاق الأربية الثنائية في طبقتين كما هو موضح في الخطوة السابقة.
- بعد وقت محدد من الفائدة للنزف (30 دقيقة تصل إلى 72 ساعة)، وإزالة المواد الغذائية الأساسية. إزالة المثلثات امتصاص ووضعها في المقابلة وزنها وزنها القوارب. استخدام المثلثات امتصاص إضافية لامتصاص أي دم غير ممتص.
- ترك الفئران التي سيتم التضحية في 30 دقيقة على لوحة الجراحية وتحت المراقبة المستمرة وتحت التخدير الكامل حتى وقت التضحية. يتم الموت الرحيم الفئران مع مزيج من ثقب القلب وجرعة زائدة من إيسوفلوران استنشق.
- مكان الفئران التي هي لفترة أطول البقاء على قيد الحياة نقاط الوقت في قفص الانتعاش على رأس لوحة التدفئة المياه تعميم. مراقبة باستمرار الفئران خلال الانتعاش ولا تترك غير المراقب حتى يستعيد وعيه للحفاظ على الاستلقاء القصية. عودة الماوس إلى قفص الفضاء مع الفئران الأخرى مرة واحدة فقط قد تعافى من التخدير.
- إدارة تسكين بعد الجراحة مع 0.1 ملغ / كغ بوبرينكس عن طريق الحقن تحت الجلد مرة واحدة استيقظ من التخدير وكل 12 ساعة بعد حتى وقت التضحية.
- السماح الفئران حرية الوصول إلى الغذاء والماء بعد أن يتم إعادتها إلىأقفاص طبيعية بعد العملية.
- في وقت التضحية من أجل البقاء على قيد الحياة الفئران، ويتم إنجاز التخدير مع إيسوفلوران استنشاقه. مرة واحدة تحت يتم جمع الدم التخدير عن طريق الحق في القلب ثقب القلب، يتم تسجيل فقدان الدم كما هو موضح أعلاه وأخيرا المؤمن القتل الرحيم مؤمن مع جرعة زائدة من إيسوفلوران.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
الكبد نموذج تهتك النتائج في استنساخه وفقدان الدم متسقة في الفئران. الشكل 1A يوضح وزن ثابت من الكبد تمزق التي يمكن الحصول عليها مع انحراف معياري من 0.02 غرام فقط. هذا الاتساق في الوزن الكبد تمزق يسمح القدرة على إعادة إنتاج نموذج بين الفئران وفي مختلف مجموعات التجريبية مثل بروتوكولات ريسوزيتاتيف مختلفة. كذلك، فإن الوزن استنساخه من الكبد تمزق، مع وجود خطأ قياسي من 0.01 غرام فقط يوفر نموذج أكثر نموذجا للنزيف غير المنضبط الذي غالبا ما يكون من الصعب الحصول عليها في النماذج الحيوانية.
ويظهر التحقق من آثار النزيف من بروتوكولات العلاج المختلفة في نموذج في الشكل 1B . تم معالجة الفئران مسبقا مع الهيبارين (66 وحدة، كسيطرة إيجابية لفقدان الدم)، أو المضادة لل فبرينوليتيك، حمض الترانيكساميك (تكسا) (باعتبارهالسيطرة السلبية)، والتحقق من صحة الجسيمات متناهية الصغر الموالية للوقف مرقئ اختبارها سابقا في الفئران الذيل الفئران نزيف المقايسات. 15 هذه النتائج تثبت قدرة هذا النموذج لاستخدامها لتقييم آثار مرقئ أو مضاد للتخثر في وضع النزف.
وغالبا ما يرافق نزيف غير المنضبط من ديرانجيمنتس الدورة الدموية التي هي مهمة لمراقبة. في الشكل 2 يعني متوسط ضغط الدم الشرياني (ماب) من الفئران الفردية التالية تهتك الكبد أن قطرة هائلة وقابلة للتكرار في ماب بعد يتم تنفيذ تهتك مما أدى إلى حالة صدمة النزفية. هذا مهم لأنه يسمح للآثار الدورة الدموية من مختلف تدابير الانعاش أو التدخلية ويسمح لرؤية هامة في علم وظائف الأعضاء المحيطة الظروف التجريبية المختلفة. في حين أن هناك آثار الدورة الدموية كبيرة بعد تهتك الكبد وجدنا تي قبعة نموذج يمكن استخدامها لتقييم آثار البقاء على قيد الحياة كما تم تقييم النموذج إلى 72 ساعة مع البقاء على قيد الحياة من 56٪ في هذه النقطة الزمنية ( الشكل 3 ).
الشكل 1: التحقق من صحة تهوية الكبد. ( A ) أوزان ممثل الكبد الكبد. وكان متوسط وزن الكبد 0.26 غرام مع انحراف معياري قدره 0.02 غرام وخطأ معياري لمتوسط 0.01 جم. هذه النتائج تثبت الاتساق التي يمكن الحصول عليها مع تقدير البصري لدينا 75٪ تهتك. ( B ) فقدان الدم في غرام بعد المعالجة المسبقة مع الهيبارين، وحمض الترانيكساميك، والجسيمات متناهية الصغر مضادة للرقق التحقق من صحة سابقا كان فقدان الدم 1.6، 0.60، و 0.65 غرام على التوالي. هذه النتائج التحقق من صحة هذا النموذج لاختبار آثار مرقئ أو مضاد للتخثر من المخدرات.
gether.within الصفحات = "1"> 
الشكل 2: متوسط ضغط الدم الشرياني بعد ليراتيون الكبد. تعقب الجرافيك من الفئران الفردية يعني اقتفاء أثر الدم الشرياني على مدى 20 دقيقة الذين خضعوا إما عملية صورية أو تهتك الكبد. تليها تهتك الكبد من قبل انخفاض سمة ومتواضعة في متوسط ضغط الدم الشرياني (ماب) من الفئران التي هي غائبة في الفئران تعمل صورية.
الشكل 3: منحنى كابلان-مير على قيد الحياة في أعقاب إرتباط الكبد. تم العثور على البقاء على قيد الحياة 72 ساعة في الفئران التي خضعت لتهتك الكبد دون أي علاج لتكون 56٪.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
نموذج تهتك الكبد الفئران وصفها هنا يوفر نموذج موثوق بها، متسقة من نزيف غير المنضبط. هذا النموذج هو واضح لأداء ولكن هناك خطوات هامة تتطلب دراسة دقيقة. الجزء الأكثر تحديا من الناحية الفنية من النموذج هو قنية من الأوعية الفخذية لمراقبة الدورة الدموية وإدارة السوائل / المخدرات. يجب توخي الحذر أثناء تشريح العصب و بضع الشريان / بضع الرحم. من المهم عدم لمس العصب أثناء تشريح الأوعية لتجنب تلف الأعصاب الناتجة والشلل المحتمل، وخاصة لنماذج البقاء على قيد الحياة. قطع الشريان وفخذ البطن تتطلب معالجة حساسة للسفينة. نقترح استخدام مقص الأوعية الدموية الدقيقة لمنع انتقال عرضي من السفينة.
في حين أن تهتك الكبد هو أقل تحديا من الناحية الفنية فمن المهم أن تكون متسقة في جزء من نموذج لضمان نزيف استنساخه ومتسقة فيالفأر. وقد تم تطوير نموذجنا بقصد اختبار وكلاء مرقئ الموالية في الإنعاش، وبالتالي فإن الاعتبار وضع موضع مهم يتضمن ضمان يتم وضع مثلثات امتصاص بعيدا عن موقع تهتك لتجنب التعبئة أو تأثير مرقئ الميكانيكية. تجنب التلاعب غير الضروري من الأجهزة الأخرى والفصوص الأخرى من الكبد لمنع إصابة غير مقصودة أو النزيف خلال هذا الجزء من الجراحة. يجب إغلاق البطن بسرعة بعد تهتك لتجنب فقدان الدم خارج البطن.
وينبغي رصد الفئران عن كثب في جميع أنحاء الإجراء ولكن الأهم من ذلك بعد يتم تنفيذ تهتك نظرا للتغيرات الدورة الدموية كبيرة أنها تجربة كما أثبتنا في الشكل 2 . تجربتنا مع هذه التغيرات الدورة الدموية كبيرة هي أن الماوس من غير المرجح أن البقاء على قيد الحياة إذا قطراتهم ماب أقل من 10mmHg ل> 30 ق ونوصي التضحية من الماوس الذي هذه المرةاورس. إذا كان السوائل أو المخدرات هو أن يتم اختبار آثاره مرقئ نوصي الإدارة بعد فترة وجيزة من تهتك، حيث أن الفئران تميل إلى تخثر المنطقة تمزق بسرعة. استخدام إدارة الألم أمر ضروري إذا كان مهتما في أداء أطول نقاط المراقبة الوقت من وصفها هنا. كذلك، ينبغي رصد أطرافه الخلفية لعلامات نقص التروية بعد ربط الأوعية الفخذية. ونظرا للخبرة الواسعة في هذه العمليات الجراحية، فإن حدوث هذه المضاعفات في مختبرنا هو أقل من 1٪ من جميع الحيوانات التي تم اختبارها. 4 ، 6
هذا النموذج لديه عدد من القيود الهامة، بما في ذلك الجانب من النزيف غير المنضبط. في حين أننا نرى نزيف ثابت في الفئران من حيث فقدان الدم بعض الفئران تستجيب بشكل مختلف، وسوف يموت بسرعة بعد تهتك. وثمة قيد آخر في النموذج هو حجم تهتك الكبد. بينما بياناتنا يدل على إرو القياسية الضيقةص في وزن الكبد مقطوع، عندما يؤديها أفراد مختلفون إمكانية لمزيد من التباين في حجم استئصال وبالتالي النزف بالتأكيد موجود. بالإضافة إلى ذلك، منحنى التعلم لتشريح الأوعية الدموية الدقيقة والقنية يمكن أن يكون تحديا من الناحية الفنية، ونحن نقدر منحنى التعلم من 50 الحيوانات من تجربتنا، مع منحنى التعلم المقدرة من 10 الفئران لاستنساخ تهتك الكبد كما هو موضح. من تجربتنا البقاء على قيد الحياة من 56٪ في 72 ساعة يمكن توقع. عند تنفيذ نموذج لتحليل البقاء على قيد الحياة اهتمام وثيق إلى الانتعاش من التخدير وإدارة الألم المناسبة حاسمة. في نموذجنا الحالي، ونحن لم تقم بأي سائل تكميلي أو إنعاش المخدرات إلى الفئران وراء ما يتلقونه قبل تهتك الكبد. من المهم أن نلاحظ أن الحيوانات يجب رصدها عن كثب عن علامات الشدة في جزء البقاء على قيد الحياة من النموذج ومعالجتها بشكل مناسب للألم. بينتوباربيتال هو أنسث لديناتيك من خيار لنقاط الوقت كنا مهتمين ولكن خيارات أخرى من التخدير ممكنة ويمكن أن تؤثر على النتائج. السيطرة على الألم مهم لمراقبة بحيث الفئران قادرة على تناول الطعام والشراب بحرية، والتي إذا لم تسيطر يمكن أن يؤدي إلى تقلب خارج النزف والعلاج من الفائدة. هذا النموذج أيضا يفسح المجال لتكون جنبا إلى جنب مع نماذج أخرى مثل إصابة الأنسجة الرخوة، كاذبة، أو نموذج مولتيروما. كذلك، هذا النموذج يمكن بسهولة أن تتكيف لدراسة آثار عوامل مرقئ الموضعية مقارنة عن طريق الوريد. التعديلات البديلة متعددة من هذا النموذج ممكنة ولكن لا تزال لم تختبر. على الرغم من أن الحيوانات في هذا النموذج كانت مطابقة لعمر ووزن، فمن الممكن أن الحيوانات من الأوزان المختلفة يمكن استخدامها وحجم تهتك الكبد اختيارها على أساس الوزن. ويمكن توقع نتائج مماثلة من تهتك الطحال للمحققين الذين قد لا تريد إصابة الكبد اعتمادا على نقطة النهاية من المصالح. مماثلة عدم السيطرةوقد استخدمت نماذج النزف أدى في حيوانات أخرى 7 ، 8 ، 9 ، 10 ، 11 ، 12 توفير التعديلات البديلة المحتملة على النموذج الحالي. وأخيرا، يمكن زيادة حجم تهتك لتعظيم فقدان الدم، ومع ذلك، وجدنا أن هذا يزيد بشكل كبير من الوفيات، وأن الأضرار التي لحقت الأوردة الكبدية الرئيسية مع نماذج موسعة لديها درجة أعلى من التباين.
وقد استخدمت الكبد في نماذج غير المنضبط السابقة. ومع ذلك، تم تنفيذ معظم هذه النماذج في نموذج الفئران. تطورنا من نموذج تهتك الكبد غير المنضبط في الفئران يسمح للمحققين للاستفادة من ثروة من السلالات المعدلة وراثيا. وتشمل المزايا الأخرى لنماذج الفئران القدرة على إجراء اختبار الإنتاجية العالية، والفعالية من حيث التكلفة، وسهولة المناولة.نموذجنا يسمح الرصد الدورة الدموية، الكمي من فقدان الدم، وتقييم الوفيات التي الدراسات السابقة غالبا ما تشمل سوى واحدة من هذه الجوانب من التقييم. ونحن قادرون على أداء هذا النموذج على الفئران متعددة في وقت واحد مما يسمح ليس فقط عالية الإنتاجية ولكن تناقصت التقلب في النموذج.
في الختام، نقدم هنا نموذجا يمكن استنساخه من نزيف غير المنضبط باستخدام تهتك الكبد القياسية في نموذج الفئران. نموذجنا هو المثالي لتقييم المخدرات مرقئ جديدة في وضع نزف أو الصدمة، ويمكن استخدامها في تقييم على المدى القصير من فقدان الدم أو أجريت لتقييم الآثار البقاء على قيد الحياة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
ليس لدى المؤلفين أي مصالح مالية متنافسة لإعلانها.
Acknowledgments
وأيد عمل هذه المخطوطة بتمويل للدكتور نيل من قبل برنامج المشروع التجريبي معهد الطب الوعائي في الارقاء والأحياء الدموية (P3HVB) والزمالة البحوث عست. ويدعم هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية الأمريكية للصحة المنح 1 R35 GM119526-01 و UM1HL120877-01.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| SS/45 dumonts | Fine Science Tools | 11203-25 | |
| surgical scissors | Fine Science Tools | 14068-12 | |
| hemostats | Fine Science Tools | 13009-12 | |
| microscissors | Fine Science Tools | 15000-08 | |
| 0.8 mm curved forceps | Fine Science Tools | 11009-13 | |
| suture reel 6-0 | Fine Science Tools | 18020-60 | |
| suture 4-0 silk w/ needle | Owens Minor | K188H | |
| gauze 4 x 4 | can be purchased through any global vendor | ||
| cotton-tip applicator | can be purchased through any global vendor | ||
| 30 G needle | can be purchased through any global vendor | ||
| 23 G needle | can be purchased through any global vendor | ||
| 10 cc syringe | can be purchased through any global vendor | ||
| 50 cc conical tube | can be purchased through any global vendor | ||
| 1 cc syringe w/ 25G needle | Fisher Scientific | 14-826-88 | |
| Polyethylene 10 tubing 100`(PE-10) | Fisher Scientific | 14-170-12P | |
| Polyethylene 50 tubing 100`(PE-50) | Fisher Scientific | 14-170-12B | |
| 3-way stopcock | Fisher Scientific | NC9779127 | |
| surgical blue pad | Fisher Scientific | 50-7105 | |
| Sterile Field dressings | Fisher Scientific | NC9517505 | |
| tape rolls 1" | Corporate Express | MMM26001 | |
| straight side wide mouth jars | VWR | 159000-058 | |
| stainless steel tray 8" x 11" | VWR | 62687-049 | |
| male-male leur lock 3-way | VWR | 20068-909 | |
| sterilization pouch 3" x 8" | VWR | 24008 | |
| sterilization pouch 5" x 10" | VWR | 24010 | |
| absorption triangles | Fine Science Tools | 18105-03 | |
| 7 mm wound clip applier | Fisher Scientific | E0522687 | |
| 1,000 7 mm wound clips | Fisher Scientific | E0522687 | |
| betadine (4 oz) | can be purchased through any global vendor | ||
| sterile gloves | can be purchased through any global vendor | ||
| eppendorfs | can be purchased through any global vendor | ||
| 1/2 cc Lo-Dose insulin syringe | Fisher Scientific | 12-826-79 | |
| small weigh boat | can be purchased through any global vendor | ||
| lactated ringers | can be purchased through any global vendor | ||
| hepranized saline solution (.1 µL; hep + 9.9 µL; NaCl) | can be purchased through any global vendor | ||
| phosphate buffered saline | can be purchased through any global vendor | ||
| pentobarbital | can be purchased through any global vendor | ||
| Wild M650 microscope w/ boom stand | Leica | ||
| Digi-Med BPA-400 analyzer & systems integrator | Micro-Med | SYS-400 | |
| TXD-310 (Digi-Med Transducer) | Micro-Med | TXD-300 | |
| Computer | Dell | ||
| microbead instrument sterilizer | VWR | 11156-002 | |
| Oster A5 clippers w. size 40 blade | VWR | 10749-020 | |
| circulating heating pad 18 x 26 | Harvard | py872-5272 | |
| rectal thermometer | Kent Scientific | RET-3 |
References
- Chang, R., Cardenas, J. C., Wade, C. E., Holcomb, J. B. Advances in the understanding of trauma-induced coagulopathy. Blood. 128 (8), 1043-1049 (2016).
- Kutcher, M. E., et al. A paradigm shift in trauma resuscitation: evaluation of evolving massive transfusion practices. JAMA surgery. 148 (9), 834-840 (2013).
- Tsukamoto, T., Pape, H. C. Animal Models for Trauma Research. Shock. 31 (1), 3-10 (2009).
- Darwiche, S. S., et al. Pseudofracture: an acute peripheral tissue trauma model. J Vis Exp. (50), (2011).
- Lomas-Niera, J. L., Perl, M., Chung, C. -S., Ayala, A. Shock and Hemorrhage: an Overview of Animal Models. Shock. 24, Suppl 1. 33-39 (2005).
- Kohut, L. K., Darwiche, S. S., Brumfield, J. M., Frank, A. M., Billiar, T. R. Fixed volume or fixed pressure: a murine model of hemorrhagic shock. J Vis Exp. (52), (2011).
- Matsuoka, T., Hildreth, J., Wisner, D. H. Liver injury as a model of uncontrolled hemorrhagic shock: resuscitation with different hypertonic regimens. J Trauma. 39 (4), 674-680 (1995).
- Komachi, T., et al. Adhesive and Robust Multilayered Poly(lactic acid) Nanosheets for Hemostatic Dressing in Liver Injury Model. J. Biomed. Mater. Res. Part B Appl. Biomater. , (2016).
- Orfanos, N. F., et al. The effects of antioxidants on a porcine model of liver hemorrhage. J Trauma Acute Care Surg. 80 (6), 964-971 (2016).
- Morgan, C. E., Prakash, V. S., Vercammen, J. M., Pritts, T., Kibbe, M. R. Development and validation of 4 different rat models of uncontrolled hemorrhage. JAMA Surgery. 150 (4), 316-324 (2015).
- Rosselli, D. D., Brainard, B. M., Schmiedt, C. W. Efficacy of a topical bovine-derived thrombin solution as a hemostatic agent in a rodent model of hepatic injury. Can J Vet Res. 14 (14), 303-308 (2015).
- Sheppard, F. R., et al. Development of a Nonhuman Primate (Rhesus Macaque) Model of Uncontrolled Traumatic Liver Hemorrhage. Shock. 44, 114-122 (2015).
- Nemzek-Hamlin, J. A., Hwang, H., Hampel, J. A., Yu, B., Raghavendran, K. Development of a murine model of blunt hepatic trauma. Comp Med. 63 (5), 398-408 (2013).
- Vogel, S., et al. Platelet-derived HMGB1 is a critical mediator of thrombosis. J Clin Invest. 125 (12), (2015).
- Modery-Pawlowski, C. L., Tian, L. L., Ravikumar, M., Wong, T. L., Sen Gupta, A. In vitro and in vivo hemostatic capabilities of a functionally integrated platelet-mimetic liposomal nanoconstruct. Biomaterials. 34 (12), 3031-3041 (2013).
