Summary
Travma hastalarında önemli bir mortalite nedeni olan kontrolsüz kanama, bir fare modelinde standart bir karaciğer laserasyonu kullanılarak modellenebilir. Bu model tutarlı kan kaybı, sağkalım ile sonuçlanır ve hemostatik ajanların test edilmesine izin verir. Bu makale, bu değerli modeli gerçekleştirmek için adım adım süreç sağlar.
Abstract
Kontrol edilemeyen kanamalar travma hastalarında önlenebilir ölümlerin önemli bir nedenidir. Sürekli kan kaybı, hemodinamik değişiklikler ve hayatta kalma ile sonuçlanan bir karaciğer laserasyonuyla kontrolsüz kanamaya ait fare modelini geliştirdik.
Fareler, karaciğerin sol orta lobunun standartlaştırılmış rezeksiyonuna girerler. Mekanik müdahale olmaksızın kanamalarına izin verilir. Hemostatik ajanlar, araştırmacının ilgisine bağlı olarak tedavi öncesi veya kurtarma tedavisi olarak uygulanabilir. Hemoraji sırasında sol femoral arteriyel hat üzerinden gerçek zamanlı hemodinamik takip yapılır. Fareler daha sonra kurban edilir, kan kaybı nicelleştirilir, kan daha ileri analiz için toplanır ve yaralanmaların analizi için organlar hasat edilir. Deneysel tasarım, birden fazla hayvanın eşzamanlı test edilmesini sağlamak için açıklanmıştır.
Kontrolsüz kanama modelinde karaciğer kanaması var iLiteratürde, başta sıçan ve domuz modellerinde. Bu modellerden bazıları hemodinamik izleme kullanır ya da kan kaybını nicelleştirir ancak tutarlılık yoktur. Mevcut model, kontrolsüz kanamada patofizyolojik mekanizmaları daha ileri araştırmak için transgenik hatların kullanılması ve yüksek verimli bir mekanizma avantajı sunan bir fare modelinde, gerçek zamanlı hemodinamik izlemenin kan kaybının miktarının belirlenmesini içermektedir.
Introduction
Travma, dünya genelindeki gençler arasında önde gelen ölüm ve sakatlık nedenidir. 1 Kontrolsüz kanama ağır yaralı travma hastalarında önde gelen mortalite nedenidir. Hemorajing travmalı hastanın yönetimi iki aşamalıdır: cerrahi kanamanın kontrolü, ve resüsitasyon ve kayıp kanın değiştirilmesi.
Hemorajik şokun hayvan modelleri, travma araştırmalarında temel taşlardır ve travmatik / hemorajik şokun patofizyolojisinin ve tedavisinin değerlendirilmesinde kullanılabilir. 3 , 4 Hayvan modellerinde Şok, kontrollü hemoraji ve kontrolsüz kanama olmak üzere iki yöntemle geniş ölçüde başarılabilir. 5 , 6 Kontrollü kanama, belli bir kan basıncını (sabit basınç) elde etmek için sabit bir kan hacminin çıkarılması veya kan alınması ile gerçekleştirilir. SüreSe modelleri, hemorajik şokun mekanizmalarında ve immün değişikliklerde değerlendirilmesinde yararlıdır, hemostatik ajanların test edilmesine uygun değildir ve travmayı takiben kanama senaryosunu taklit etmemektedir. Bu dereceye kadar kontrolsüz bir kanama modeli geliştirdik ve böylelikle bir fare modelinde hemostatik değişiklikler ve koagülan önleyici ajanlar test ettik. Karaciğer, kısmen kontrolsüz kanama için cazip bir seçenektir çünkü kısmen kan çift karbondan sağlanmaktadır ve hem künt hem de penetran travmada en sık yaralanan karın içi organlardan biridir. Yüksek klinik önemi göz önüne alındığinde, karaciğer, çoğunlukla sıçan ve domuz modellerinde, ancak son zamanlarda primatlarda kontrolsüz kanama modeli olarak kullanılmıştır. 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 13 , 14
Kontrolsüz karaciğer kanamasının sıçan ve domuz modelleri, resüsitasyon uygulamalarına ve hemodinamik izlemeye değer olsa da, maliyet, kullanılan hayvanlar sayısı ve analiz için mevcut olan transjenik hatları gibi çeşitli nedenlerle fare modeline göre daha avantajlıdır Belirli hücresel ve moleküler sinyalizasyon. Mevcut fare modeli, standart karaciğer laserasyonu, kan kaybı kantifikasyonu, hemodinamik izleme ve sağkalım analizini yapma kabiliyeti gibi mevcut karaciğer kanamaları modellerine önemli benzerlikler paylaır. Mevcut birçok model yalnızca bu yönlerden bazılarını içerirken, modelimiz fizyolojik varia'nın çoğunu ölçmek için geliştirilmiştirAynı anda ve birden fazla farede bulaşır. Ayrıca, bir fare modelinin geliştirilmesi, resüsitasyonun ötesinde araştırmalara ve ileri moleküler teknikler kullanarak yüksek verimli bir maliyet modeli potansiyeli olan kontrolsüz kanamada daha büyük patofizyoloji mekanizmalarına kapı açmaktadır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Fareler, Pittsburgh Üniversitesi'nden (Pittsburgh, PA, ABD) ve Ulusal Sağlık Enstitülerinden (NIH; Bethesda, MD, USA) belirli patojen içermeyen koşullarda, 12 saat açık-karanlık döngülerle ve serbest erişim olanağına sahip hayvan bakım kılavuzlarına uygun olarak barındırıldı. Standart yem ve su. Tüm hayvan deneyleri, Pittsburgh Üniversitesi'ndeki Hayvan Araştırma ve Bakım Komitesi tarafından belirlenen kurallara uygun olarak onaylandı ve yürütüldü.
1. Cerrahi Alan ve Enstrüman Kurulumu
- Prosedürden önce tüm cerrahi aletleri, sütürü, gazlı bezleri, pamuklu uç aplikatörlerini, boruları ve boru bağlantılarını sterilize edin.
- Bir otoklavda cerrahi aletleri, sütürü, gazlı bezleri ve pamuk ucu aplikatörlerini sterilize edin. Boru ve tüp konektörlerini etilen oksitle sterilize edin.
- Cerrahi alanı
- Su ile dolaşan bir ısıtma yastığı açın ve 37 ° C'ye ayarlayın. Surgi koyÜzerine mavi ped koyun ve daha sonra cerrahi mavi pedin üzerine steril bir örtme örtüsü yerleştirin.
- Tüm sterilize edilmiş aletleri steril örtüye açın. Bu adım esnasında sterilliği kesmekten kaçınmak için steril eldiven kullanın.
- % 70 etanol içeren paslanmaz çelik bir kaba doldurun ve kenara koyun. Bu, hayvanlar arasındaki araçları temizlemek için kullanılacaktır.
- Microbead sterilizatörünü açın ve 150 ° C'ye kadar ısınmasına izin verin. Bu aynı zamanda hayvanlar arasındaki araçları temizlemek için de kullanılacaktır. 5ten fazla farede ameliyat yapıyorsanız, aletleri yeni bir steril sete değiştirdiğinizden emin olun.
- Dönüştürücü Kurulumu
- Steril bir dönüştürücü, PE-50 tüp, iki adet 23G iğne ve erkek erkek luer ve üç yönlü bir tıkaç bağlayın. 6
- Üreticinin talimatlarına göre çeviriciyi kalibre edin ve sıfırlayın.
2. Karaciğer laserasyonu cerrahi prosedürü
- Anestezi İndüksiyonu ve Konumlandırılması
- Sodyum pentobarbital intraperitoneal olarak 70 mg / kg dozunda enjekte edilir. Anestezi 5-10 dakika arasında sürmelidir; Anestezi derinliğini ayak parmakları ile tespit edin. Fare ayak parmağına tepki gösteriyorsa ek zaman veya anestezi gereklidir. Prosedür sırasında ilave anestezi gerekiyorsa, sodyum pentobarbital ekleyin. Doz aşımını önlemek için 0.05 mL'den daha büyük miktarlarda takviyeler vermeyin.
- Farenin tamamen anestezi altında kaldıktan sonra, fareyi bir cerrahi tahtaya yatırın. Farenin dört ucunu bantla tahtaya sabitleyin.
- Karın ve bilateral kasıklarını ustura ile tıraş edin.
- Steril gazlı bezleri betadin ile ıslatın ve karın ve bilateral kasık ameliyatı için uygulayın. Hayatta kalma deneyleri için karın ve kasıkları betadinle, ardından etanol ile toplam üç hazırlık döngüsü için hazırlayın.
- İşlem boyunca çekirdek sıcaklığını izlemek için bir rektal sıcaklık probu takın. C tutunCevher sıcaklığı 35-37 ° C arasındadır.
- Venöz kateterin kurulumu için: PE-10 tüpünü, 30 G'lik bir iğneyi ve IV torbadan Laktated Ringer solüsyonu ile üç yönlü bir tıkaç doldurun.
- Arteryel kateterin kurulumu için: PE-10 hortum ve 30G iğneyi heparinize salin (1: 10 seyreltik 1,000 U heparin) ile doldurun. Pıhtılaşmayı önlemek için heparin salin gerekir.
- Fareyi bir mikroskop altında bırakın.
- Cerrahi İris makas kullanarak kas iskeletine 4-5 mm uzunlamasına bir kesi yapın. Dumont forseps kullanarak adduktor kasına bağlı yağ dokusunu kapar ve femur demetinin temiz bir şekilde maruz kalması için yanal olarak çekilir. Yağ dokusuyla parçalanmayın; bu vasküler yaralanmaya neden olacaktır.
- Dumont forsepsiyle damarı ve damarı dikkatle ayırın. Sinire bitişik bir yağ yastığı var. Bunu bir Dumont forcep ile tutunYanal olarak çekin; Bu sinir diseksiyon için bir düzlem oluşturan arterden uzaklaşır. Diğer Dumont forcep ile sinir ve arter arasındaki bağ dokusunu keskin bir şekilde inceleyin.
- Diseksiyonun bu kısmı sırasında sinir tutmayın.
- Profunda femorise yakın arter ve damardaki üç adet 6-0 ipek dikiş yerinden çıkın.
- En yakın proksimalde sütür 1 yerleştirin ve gevşek bırakın.
- Dikiş 2'yi en uzaktan yerleştirin ve hemen bağlayın.
- Sütür 1 ve 2 arasına sütür 3 yerleştirin ve gevşek bırakın.
- Geminin ventral yüzeyi üzerinde bir arteriotomi yapın. Damarın kesilmesini önlemek için arteriotomi yapmak için mikrovasküler makas kullanılması önerilir.
- Üç yollu kateter artere yerleştirilir. Kateteri yerine sabitlemek için Sütür 1 ve 2'yi derhal sıkın.
- Üç yollu kateteri dönüştürücüye bağlayın ve temel kan basıncı verilerini toplayın.
- Karşıt kasık üzerinde 2.2.4 - 2.2.6 adımlarını tekrarlayın. Femoral veni atardamere benzer şekilde kanüle edin. Geminin ventral yüzeyinde venotomi yapın ve bunu takiben kateter yerleştirin. Bu kateter sıvı veya ilaç uygulaması için kullanılabilir.
- 0.5 mL PBS, üç emilim üçgeni ve bir fare ağırlığı tekerleği içeren bir tüpü önceden tartın.
- Karafiodan başlayıp karaciğerin tamamen maruz kalmasına izin vermek için kaudal uzanan bir ventral orta hat laparotomi insizyonu yapın.
- Karında sağ karın duvarına karşı bir emilim üçgenini yerleştirin. Sol tarafta tekrarlayın.
- Karaciğer lekelenmesinden sonra bir paketleme hemostatik etkiden kaçınmak için emilim üçgeninin karaciğerden uzakta olmasına dikkat edin.
- Karaciğerin sol orta lobunu dikkatli bir şekilde kapınız ve lob makul sterilizatör ile% 75 oranında loblastınız. Kesikliğin yeriniD segmentini PBS içeren bir tüpte yıkayın.
- Bir zımba aplikatörü vasıtasıyla karın duvarını zımba ile kapatın. Cildi ve kasları birlikte tutun ve elyaf ateşleyin. Karın dışındaki kan kaybını önlemek için bunu karaciğer laserasyonundan sonra mümkün olduğunca çabuk yapın. Hayatta kalma deneylerinde, karın iki kat kapalıdır. Kas için çalışan bir absorbe edilebilir dikiş, ardından cilt için emilebilir olmayan sütürden oluşan bir tabaka yeterli kapatmayı sağlar.
- Hayatta kalma süreleri 30 dakikadan fazla olan fareler için, femur kateteri çıkarılmalı, arter ve ven adım 2.2.6'dan dikiş 3 ile bağlanmalıdır. Bilateral kasıklar daha sonra önceki aşamada anlatıldığı gibi iki kat halinde kapatılır.
- Kanama için belirli bir zaman süresinin ardından (30 dakika ila 72 saat arası), zımbaları çıkarın. Emilim üçgenlerini çıkartın ve önceden tartılmış olan tartım teknelerine koyun. Emilmemiş kan emmek için ilave absorpsiyon üçgenleri kullanın.
- Kurban edilmek istenen fareleri 30 dakika içinde cerrahi kurul üzerinde bırakın ve sürekli gözlem altında ve tam anestezi altında kurban etme zamanı olun. Fareler, kardiyak ponksiyon ve inhale izofluran doz aşımı kombinasyonu ile ötenazi yapılır.
- Daha uzun sağkalım süresi noktaları olan fareleri su ile dolaşan bir ısıtma masasının üstündeki bir kurtarma kafesine yerleştirin. İyileşme sırasında fareyi sürekli olarak izleyin ve sternal uyumayı sağlamak için bilinç kazanana kadar gözetimsiz bırakmayın. Anesteziden kurtulduktan sonra fareyi kafes boşluğuna diğer farelerle geri getirin.
- Post-operatif analjeziyi 0.1 mg / kg bupreneks ile, anesteziden bir kez alındıktan sonra ve fedakarlık zamanı 12 saat sonra, subkutan enjeksiyon yoluyla uygulayın.
- Fareler, kendilerine geri gönderildikten sonra farelerden yiyeceklere ve suya serbestçe erişmelerine izin verin.Ameliyat sonrası normal kafesler.
- Sağkalım fareleri için feda edildiğinde anestezi, inhale izofluran ile başarılır. Bir kez anestezi altında kan sağ kalp kardiyak ponksiyonu yoluyla toplanır, kan kaybı yukarıda tarif edildiği gibi kaydedilir ve nihayetinde aşırı doz izofluran ile ötanazi sigortalanır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Karaciğer laserasyon modeli farelerde tekrarlanabilir ve tutarlı kan kaybına neden olur. Şekil 1A , sadece 0.02 g'lık bir standart sapma ile elde edilebilen, yırtılmış karaciğere ait tutarlı ağırlığı göstermektedir. Lacerated karaciğer ağırlığı bu tutarlılık, modeller fareler arasında çoğaltmak için yeteneği sağlar ve farklı resüsitatif protokolleri gibi farklı deneysel kurulumlar. Yırtıklanmış karaciğerin tekrarlanabilir ağırlığı, sadece 0.01 g'lık standart bir hata ile kontrolsüz kanama için hayvan modellerinde genellikle zordur daha standart bir model sağlamaktadır.
Modelde farklı tedavi protokollerinin kanama etkilerinin doğrulanması Şekil 1B'de gösterilmiştir. Fareler, heparin (kan kaybı için pozitif bir kontrol olarak 66 ünite) veya anti-fibrinolitik traneksamik asit (TXA) ile önceden muamele edildiNegatif kontrol) ve daha önce faregiller kuyruk damar kanaması deneylerinde test edilmiş geçerliliği onaylanmış bir hemostatik nanopartikül. 15 Bu sonuçlar, bu modelin hemoraji sırasında hemostatik veya antikoagülan etkileri değerlendirmede kullanılabilme yeteneğini göstermektedir.
Kontrolsüz kanama genellikle monitörizasyonu için önemli olan hemodinamik bozulmalara eşlik eder. Şekil 2'de , karaciğer laserasyonundan sonra tek tek farelerin ortalama arteriyel kan basıncı (MAP), laserasyon sonrası MAP'de hızlı ve kesintili düşüşün hemorajik şok hali ile sonuçlandığını göstermektedir. Bu, farklı resüsitatif veya girişimsel önlemlerin hemodinamik etkilerine izin verdiği ve çeşitli deneysel koşulları çevreleyen fizyolojiye önemli bir bakış açısı sağlaması açısından önemlidir. Karaciğer laserasyonundan sonra önemli hemodinamik etkiler olsa daŞapka modeli, bu zaman noktasında% 56 hayatta kalma oranı ile modelin 72 saat boyunca değerlendirildiğinden hayatta kalma etkilerini değerlendirmek için kullanılabilir ( Şekil 3 ).
Şekil 1: Karaciğer Yıkama Validasyonu. ( A ) Transeksüel karaciğerin temsili ağırlıkları. Ortalama karaciğer ağırlığı 0.26 g, standart sapma 0.02 g ve standart hata 0.01 g idi. Bu sonuçlar,% 75 laserasyonun görsel olarak tahmin edilmesiyle elde edilebilen tutarlılığı göstermektedir. ( B ) heparin, traneksamik asit ve önceden onaylanmış bir hemostatik nanopartikül ile ön muameleyi takiben gram kaybı Kan kaybı sırasıyla ortalama 1,6, 0,60 ve 0,65 g olmuştur. Bu sonuçlar, bir ilacın hemostatik veya antikoagülan etkilerini test etmek için bu modelin faydasını doğrulamaktadır.
Şekil 2: Karaciğer laserasyonunu takiben ortalama arteryel kan basıncı. Tek tek farelerin grafiksel izleri, ya sahte operasyona ya da karaciğer laserasyonuna maruz kalmış 20 dakika boyunca arteryal kan izleri anlamına gelmektedir. Karaciğer laserasyonunu, sahte farelerde farelerde ortalama arter kan basıncında (MAP) karakteristik ve hızlı bir düşüş izlemektedir.
Şekil 3: Karaciğer laserasyonunu takiben Kaplan-Meier Survival Eğrisi. Herhangi bir muamele görmeden karaciğer laserasyonuna uğrayan farelerde 72 saat sağkalımın% 56 olduğu bulundu.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Burada açıklanan fare karaciğer laserasyon modeli, kontrolsüz kanamaya karşı güvenilir, tutarlı bir model sağlar. Bu model gerçekleştirmek kolaydır, ancak titiz bir değerlendirme gerektiren önemli adımlar vardır. Modelin en teknik açıdan zor kısmı, femoral damarların hemodinamik izleme ve sıvı / ilaç uygulaması için kanülasyonudır. Sinirin diseksiyonu ve arteriotomi / venotomi sırasında dikkatli olunmalıdır. Özellikle hayatta kalma modelleri için sinir hasarından ve muhtemel paraliziden kaçınmak için damarların diseksiyonu sırasında sinire dokunmamak önemlidir. Arteriotomi ve venotomi, gemi hassas bir şekilde ele alınmasını gerektirir. Kazanın kesilmesini önlemek için mikrovasküler makas kullanmanızı öneririz.
Karaciğer laserasyonu teknik açıdan daha az zorken, model bölümünde tekrarlanabilir ve tutarlı kanamayı sağlamak için tutarlı olması önemlidir.fare. Modelimiz, hemostatik ajanların resüsitasyonda test edilmesi amacıyla geliştirilmiştir ve bu nedenle, önemli bir yerleştirme dikkate alınarak emilim üçgenlerinin bir kesilme veya mekanik hemostatik etki önlemek için kesilme yerinden uzakta tutulmasını sağlamayı içerir. Ameliyatın bu bölümünde kasti olmayan yaralanmaları veya kanamaları önlemek için diğer organların ve karaciğerin diğer loblarının gereksiz şekilde manipüle edilmesinden kaçının. Karın dışındaki kan kaybını önlemek için laserasyonun ardından karın hızla kapatılmalıdır.
Fareler prosedür boyunca yakından izlenmelidir, fakat en önemlisi, Şekil 2'de gösterdiğimiz gibi, önemli bir hemodinamik değişiklikler göz önüne alındığında laserasyon gerçekleştirildikten sonra gerçekleştirilir. Bu önemli hemodinamik değişikliklerle ilgili deneyimlerimiz, MAP'lerinin> 30 s boyunca 10 mmHg'nin altına düşmesi durumunda fare hayatta kalma olasılığı düşüktür ve bu durumun farenin feda edilmesini öneriyoruzurs. Bir sıvı ya da ilacın hemostatik etkileri açısından test edilecek olursa, kesilme işleminden hemen sonra, fareler pürüzlü bölgeyi hızla pıhtasa çevirme eğiliminde olduğundan, uygulama önerilir. Burada tarif edilenden daha uzun gözlem zaman-puanları ile ilgilenmek isterseniz ağrı yönetiminin kullanılması gereklidir. Ayrıca, femoral damarların bağlanmasının ardından arka bacaklarda iskemi bulguları izlenmelidir. Bu cerrahi prosedürlerle ilgili kapsamlı tecrübeler nedeniyle, bu komplikasyonun laboratuarımızda insidansı, test edilen tüm hayvanlardan% 1'den azdır. 4 , 6
Bu model, kontrolsüz kanama yönü de dahil olmak üzere bir dizi önemli sınırlamaya sahiptir. Kan kaybı açısından farelerde tutarlı kanamalar görürken, bazı fareler farklı tepki verir ve laserasyon sonrası çabucak ölecektir. Modeldeki bir diğer kısıtlama da karaciğer laserasyonunun boyutu. Verilerimiz standart bir darbeyi gösterirkenRezeke edilen karaciğer ağırlığında, farklı kişiler tarafından yapıldığında, rezeksiyon boyutunda daha fazla değişkenlik ihtimali ve dolayısıyla kanama kesinlikle varolmaktadır. Buna ek olarak, mikrovasküler diseksiyon ve kanülasyon için öğrenme eğrisi teknik açıdan zor olabilir ve tarif edildiği gibi karaciğer laserasyonunun tekrarlanabilirliği için 10 farenin tahmini öğrenme eğrisi ile deneyimlerimiz doğrultusunda 50 hayvanın öğrenme eğrisini tahmin ederiz. Deneyimlerimize göre 72 saatte% 56'lık bir hayatta kalma beklenebilir. Hayatta kalma analizi için model uygularken anesteziden kurtulmaya ve uygun ağrı yönetimine dikkat edilmelidir. Mevcut modelimizde, karaciğer laserasyonundan önce aldığı şeylerin ötesinde herhangi bir ilave sıvı veya uyuşturucu resüsitasyonu gerçekleştirmedik. Hayvanların, modelin hayatta kalma bölümünde sıkıntı işaretleri için yakından izlenmesi ve ağrı için uygun şekilde tedavi edilmesi gerektiğine dikkat etmek önemlidir. Pentobarbital bizim anestemiz.İlgilendiğimiz zaman noktaları için tercih edilen tik ama diğer anestezi seçenekleri olasıdır ve sonuçları etkileyebilir. Ağrı kontrolü, farelerin serbestçe yiyebilecekleri ve içebilecekleri izlemek için önemlidir; kontrol edilmediği takdirde, kanama ve ilgi alanı dışındaki tedavide değişkenliğe yol açabilir. Bu model aynı zamanda yumuşak doku yaralanması, psödo-kırılma veya politravma modeli gibi diğer modellerle kombine edilmesine de izin verir. Ayrıca, bu model, topikal hemostatik ajanların intravenözlere kıyasla etkilerini incelemek üzere kolaylıkla adapte edilebilir. Bu modelin çok sayıda alternatif modifikasyonu mümkündür fakat test edilmemiş olarak kalır. Bu modeldeki hayvanlar yaş ve kilo için eşleştirilmiş olsalar da, farklı ağırlığa sahip hayvanlardan yararlanma ve ağırlığa bağlı olarak seçilen karaciğer laserasyonunun büyüklüğü mümkündür. Çıkarların uç noktasına bağlı olarak karaciğerine zarar vermek istemeyebilecek araştırmacılar için splenik laserasyon sonucu benzer sonuçlar beklenebilir. Benzer kontrolsüzlükMevcut kanama modifiye alternatif alternatifler sunan 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 nolu diğer hayvanlarda kanamalı kanama modelleri kullanılmıştır. Son olarak, kanama kaybını en yükseğe çıkarmak için laserasyonun boyutu yükseltilebilir, ancak, bunun, mortaliteyi önemli ölçüde arttırdığını ve genişletilmiş modellerle ana hepatik venlere verilen hasarın daha yüksek bir değişkenlik derecesine sahip olduğunu tespit ettik.
Karaciğer, daha önce kontrol edilmemiş modellerde kullanılmıştır; Bununla birlikte, bu modellerin çoğu sıçan modelinde gerçekleştirildi. Farelerde kontrolsüz bir karaciğer laserasyon modelinin geliştirilmesi, araştırmacıların genetik olarak modifiye edilmiş ırkların zenginliğinden faydalanmalarını sağlar. Kemirgen modellerin diğer avantajları, yüksek verimli test, maliyet etkinliği ve kullanım kolaylığı özelliklerini içerir.Modelimiz, hemodinamik izlemeye, kan kaybının miktarının belirlenmesine ve önceki çalışmaların genellikle yalnızca bu değerlendirmelerden birini içerdiği mortalitenin değerlendirilmesine izin verir. Bu modeli birden çok farede aynı anda yerine getirebiliyoruz, bu sayede sadece yüksek verimlilik değil aynı zamanda modeldeki değişkenlik de azaltılmış oluyor.
Sonuç olarak, burada, bir fare modelinde standart bir karaciğer laserasyonunu kullanan tekrarlanabilir bir kontrol edilemeyen kanama modeli sunulmuştur. Modelimiz hemosta veya travma ortamında yeni hemostatik ilaçların değerlendirilmesi için idealdir ve kan kaybının kısa vadeli bir değerlendirmesinde kullanılabilir veya sağkalım etkilerini değerlendirmek için kullanılabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarların beyan etmek için mali çıkar çıkarları yoktur.
Acknowledgments
Bu yazının çalışması Hemostaz ve Vasküler Biyoloji (P3HVB) Vasküler Tıp Enstitüsü Pilot Proje Programı ve AAST Araştırma Bursu tarafından Dr. Neal'a finansman sağlanarak desteklenmiştir. Bu çalışma, ABD Sağlık Enstitüsleri tarafından sağlanan destekler 1 R35 GM119526-01 ve UM1HL120877-01 tarafından desteklenmektedir.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| SS/45 dumonts | Fine Science Tools | 11203-25 | |
| surgical scissors | Fine Science Tools | 14068-12 | |
| hemostats | Fine Science Tools | 13009-12 | |
| microscissors | Fine Science Tools | 15000-08 | |
| 0.8 mm curved forceps | Fine Science Tools | 11009-13 | |
| suture reel 6-0 | Fine Science Tools | 18020-60 | |
| suture 4-0 silk w/ needle | Owens Minor | K188H | |
| gauze 4 x 4 | can be purchased through any global vendor | ||
| cotton-tip applicator | can be purchased through any global vendor | ||
| 30 G needle | can be purchased through any global vendor | ||
| 23 G needle | can be purchased through any global vendor | ||
| 10 cc syringe | can be purchased through any global vendor | ||
| 50 cc conical tube | can be purchased through any global vendor | ||
| 1 cc syringe w/ 25G needle | Fisher Scientific | 14-826-88 | |
| Polyethylene 10 tubing 100`(PE-10) | Fisher Scientific | 14-170-12P | |
| Polyethylene 50 tubing 100`(PE-50) | Fisher Scientific | 14-170-12B | |
| 3-way stopcock | Fisher Scientific | NC9779127 | |
| surgical blue pad | Fisher Scientific | 50-7105 | |
| Sterile Field dressings | Fisher Scientific | NC9517505 | |
| tape rolls 1" | Corporate Express | MMM26001 | |
| straight side wide mouth jars | VWR | 159000-058 | |
| stainless steel tray 8" x 11" | VWR | 62687-049 | |
| male-male leur lock 3-way | VWR | 20068-909 | |
| sterilization pouch 3" x 8" | VWR | 24008 | |
| sterilization pouch 5" x 10" | VWR | 24010 | |
| absorption triangles | Fine Science Tools | 18105-03 | |
| 7 mm wound clip applier | Fisher Scientific | E0522687 | |
| 1,000 7 mm wound clips | Fisher Scientific | E0522687 | |
| betadine (4 oz) | can be purchased through any global vendor | ||
| sterile gloves | can be purchased through any global vendor | ||
| eppendorfs | can be purchased through any global vendor | ||
| 1/2 cc Lo-Dose insulin syringe | Fisher Scientific | 12-826-79 | |
| small weigh boat | can be purchased through any global vendor | ||
| lactated ringers | can be purchased through any global vendor | ||
| hepranized saline solution (.1 µL; hep + 9.9 µL; NaCl) | can be purchased through any global vendor | ||
| phosphate buffered saline | can be purchased through any global vendor | ||
| pentobarbital | can be purchased through any global vendor | ||
| Wild M650 microscope w/ boom stand | Leica | ||
| Digi-Med BPA-400 analyzer & systems integrator | Micro-Med | SYS-400 | |
| TXD-310 (Digi-Med Transducer) | Micro-Med | TXD-300 | |
| Computer | Dell | ||
| microbead instrument sterilizer | VWR | 11156-002 | |
| Oster A5 clippers w. size 40 blade | VWR | 10749-020 | |
| circulating heating pad 18 x 26 | Harvard | py872-5272 | |
| rectal thermometer | Kent Scientific | RET-3 |
References
- Chang, R., Cardenas, J. C., Wade, C. E., Holcomb, J. B. Advances in the understanding of trauma-induced coagulopathy. Blood. 128 (8), 1043-1049 (2016).
- Kutcher, M. E., et al. A paradigm shift in trauma resuscitation: evaluation of evolving massive transfusion practices. JAMA surgery. 148 (9), 834-840 (2013).
- Tsukamoto, T., Pape, H. C. Animal Models for Trauma Research. Shock. 31 (1), 3-10 (2009).
- Darwiche, S. S., et al. Pseudofracture: an acute peripheral tissue trauma model. J Vis Exp. (50), (2011).
- Lomas-Niera, J. L., Perl, M., Chung, C. -S., Ayala, A. Shock and Hemorrhage: an Overview of Animal Models. Shock. 24, Suppl 1. 33-39 (2005).
- Kohut, L. K., Darwiche, S. S., Brumfield, J. M., Frank, A. M., Billiar, T. R. Fixed volume or fixed pressure: a murine model of hemorrhagic shock. J Vis Exp. (52), (2011).
- Matsuoka, T., Hildreth, J., Wisner, D. H. Liver injury as a model of uncontrolled hemorrhagic shock: resuscitation with different hypertonic regimens. J Trauma. 39 (4), 674-680 (1995).
- Komachi, T., et al. Adhesive and Robust Multilayered Poly(lactic acid) Nanosheets for Hemostatic Dressing in Liver Injury Model. J. Biomed. Mater. Res. Part B Appl. Biomater. , (2016).
- Orfanos, N. F., et al. The effects of antioxidants on a porcine model of liver hemorrhage. J Trauma Acute Care Surg. 80 (6), 964-971 (2016).
- Morgan, C. E., Prakash, V. S., Vercammen, J. M., Pritts, T., Kibbe, M. R. Development and validation of 4 different rat models of uncontrolled hemorrhage. JAMA Surgery. 150 (4), 316-324 (2015).
- Rosselli, D. D., Brainard, B. M., Schmiedt, C. W. Efficacy of a topical bovine-derived thrombin solution as a hemostatic agent in a rodent model of hepatic injury. Can J Vet Res. 14 (14), 303-308 (2015).
- Sheppard, F. R., et al. Development of a Nonhuman Primate (Rhesus Macaque) Model of Uncontrolled Traumatic Liver Hemorrhage. Shock. 44, 114-122 (2015).
- Nemzek-Hamlin, J. A., Hwang, H., Hampel, J. A., Yu, B., Raghavendran, K. Development of a murine model of blunt hepatic trauma. Comp Med. 63 (5), 398-408 (2013).
- Vogel, S., et al. Platelet-derived HMGB1 is a critical mediator of thrombosis. J Clin Invest. 125 (12), (2015).
- Modery-Pawlowski, C. L., Tian, L. L., Ravikumar, M., Wong, T. L., Sen Gupta, A. In vitro and in vivo hemostatic capabilities of a functionally integrated platelet-mimetic liposomal nanoconstruct. Biomaterials. 34 (12), 3031-3041 (2013).
