Summary
هنا، ونحن تصف نهجا جديدا لإلحاق رئيس مغلقة إصابات الدماغ في ميلانوغاستر ذبابة الفاكهة . أسلوبنا لديه ميزة تقديم مباشرة الآثار المتكررة مع قوة قابل للتعديل إلى الرأس وحده. سوف مزيد من استكشاف نظام اللافقاريات تساعد على إلقاء الضوء على التسبب في اعتلال الدماغ الصدمة المزمن.
Abstract
اعتلال الدماغ الصدمة المزمن (كت) هو مرض العصبية التناسلية التي ترتبط ارتباطا وثيقا بالتعرض للإصابات الدماغية الصدمة الخفيفة المتكررة (متبي). ولا تزال الآليات المسؤولة عن تغيراتها المرضية المعقدة بعيد المنال إلى حد بعيد، على الرغم من توافق الآراء مؤخرا على تحديد معايير الاعتلال العصبي. هنا، نحن تصف طريقة جديدة لتطوير نموذج كت في ذبابة الفاكهة ميلانوغاستر ( ذبابة الفاكهة ) في محاولة لتحديد الجينات الرئيسية والمسارات التي تؤدي إلى تراكم هيبيرفوسفوريلاتد تاو مميزة والموت العصبية في الدماغ. يتم تسليم آثار قوة قابل للتعديل لإلحاق إصابة مغلقة خفيفة مباشرة إلى رأس الطاير، وتخضع الرأس إلى التسارع السريع والتباطؤ. طريقة لدينا يلغي المشاكل المحتملة الكامنة مع غيرها من نماذج ذبابة الفاكهة متبي (على سبيل المثال، قد يكون الناجم عن الموت الحيوان عن طريق الأضرار التي لحقتأجزاء أخرى من الجسم أو الأعضاء الداخلية). إن العناية بالحيوانات الأقل كثافة في اليد العاملة والتكلفة، والعمر القصير، والأدوات الجينية الواسعة تجعل ذبابة الفاكهة مثالية لدراسة الأمراض المسببة للأمراض، وتمكن من إجراء شاشات جينية ودوائية واسعة النطاق على نطاق الجينوم. ونحن نتوقع أن التوصيف المستمر للنموذج سيولد رؤى ميكانيكية هامة بشأن الوقاية من الأمراض والنهج العلاجية.
Introduction
اعترف مؤخرا اعتلال الدماغ الصدمة المزمن (كت) باعتباره اضطراب تنكس عصبي متميز، منفصلة عن تاوباثيز أخرى مثل مرض الزهايمر 1 . وخلافا لمرض الزهايمر وغيره من أمراض التوأم الشائعة التي تتقدم عوامل الخطر الأكثر أهمية وتاريخ عائلي من الخرف، فإن كت، كما هو مبين في اسمها، تعني ارتباطا وثيقا بتاريخ الصدمة الدماغية، على الأرجح ينظر في الرياضيين الرياضيين الاتصال، مثل الملاكمين و لاعبي كرة القدم، وكذلك في قدامى المحاربين العسكريين 2 ، 3 ، 4 ، 5 . ويعتقد أن تبدأ من قبل ضربات ارتجاجية ومزدوجة متكررة إلى الرأس. المرضى قد تظهر أعراض وعلامات مثل العجز المعرفي، والمزاج والتغيرات السلوك، واختلال الحركة، والتي تتداخل بشكل كبير مع مرض الزهايمر، أمام الصدغ الصدغيالخرف، خرف الجسم ليوي، ومرض باركنسون 6 . على النقيض من ذلك، وفحوص ما بعد الوفاة من أنسجة المخ تكشف عن نمط واضح من تراكم هيبرفوسفوريلاتد تاو المحيطة الأوعية الدموية الصغيرة في أعماق سولسي القشرية، وهي ميزة باثوغونومونيك لم يلاحظ في الظروف التنكسية الأخرى 7 . ومع ذلك، حتى الآن، لا يعرف سوى القليل جدا عن المرضية مما يؤدي إلى مظهر المرض. هذا هو في جزء كبير منه بسبب عدم وجود نموذج الحيوان المؤمنين - في الآونة الأخيرة لديها نماذج القوارض ولدت 5 ، 8 . هذه الكائنات النموذجية لها عيوب الرعاية كثيفة التكلفة وعمر طويل نسبيا، والتي ليست مناسبة تماما لدراسات الأمراض العصبية التنكسية.
بالمقارنة مع نظرائهم الثدييات، والحيوانات اللافقارية مثل ذبابة الفاكهة هي بديل ممتاز، مع الصيانة فعالة من حيث التكلفة،أدوات واسعة لتشريح المحددات الوراثية، وعمر قصير نسبيا 9 . ومن الجدير بالملاحظة أن أدمغة الذبابة والعقل البشري تشترك في مسارات الجزيئية والخلوية المحفوظة بشكل تطوري، فضلا عن التشابه التشريحي 10 ، 11 ، 12 . تم الإبلاغ عن اثنين من نماذج ذبابة الفاكهة بارعة لدراسة إصابات الدماغ الصدمة سابقا 13 ، 14 . كان أول جهاز "صدمة عالية التأثير" (هيت) صممه كاتزنبرجر وزملاؤه ذبابا متحركا بشكل حر في قارورة بلاستيكية كانت مرتبطة بالنهاية الحرة لنبع معدني 13 ، 15 . عندما يميل القارورة البلاستيكية في وضع مستقيم، وأفرج عنه، وضرب لوحة البولي يوريثان ونقلت الصدمة إلى الذباب لأنها ارتدت إلى الجدار قارورة وانتعشت. في المقابل، صمم بركات وزملاؤه طريقة تسليم مختلفة لنافي أومني حبة الممزق 24 منصة الخالط 14 . وكانت الذباب عاجزة مع كو 2 وضعت في أنبوب 2 مل سكروكاب التي تم تأمينها إلى الخالط وتخضع لظروف الهز مبرمج مسبقا. فائدة واحدة من استخدام نظام الخالط الأنسجة هو أن المجرب يمكن أن تعدل شدة الإصابة، ومدة الإصابة، وعدد نوبات الإصابة. ومع ذلك، فإن كلا النظامين يعاني من نفس العيب: الإصابات الأولية في الرأس بشكل عشوائي من حيث موقع التأثير والقوة. وبالإضافة إلى ذلك، أسفرت كلتا الطريقتين في وفيات كبيرة، والناجمة عن الأضرار الجانبية التي لا مفر منها لأجزاء أخرى من الجسم والأعضاء الداخلية. هنا، نحن تصف طريقة جديدة للحث على متبي في ذباب الفاكهة. يتكون جهازنا من المؤثرات البالستية التي تعمل بالغاز. بالمقارنة مع نماذج ذبابة الفاكهة القائمة 14 ، 15 ، وطريقة لدينا لديه ميزة فريدة من نوعها لتقديم قياسلا يتم توجيهها إلا في رأس الذبابة الحرة، مما يسمح بالتحكم الدقيق بعوامل مختلفة، مثل شدة التأثير، والفترة الزمنية بين التأثيرات، والعدد الإجمالي للآثار المستمرة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. الجمعية من الجهاز سترايك ( الشكل 1 )
- إزالة المكبس من حقنة توبركولين 1 مل. قطع برميل في علامة 1 مل.
- إزالة حاجز الهباء الجوي (ارتفاع 3 مم × 4 مم القطر) من 200 ميكرولتر ماصة طرف واستخدامه بمثابة مؤثر. وضع المؤثر داخل برميل حقنة. اضغط بلطف برميل لتحريك المؤثر إلى طرف طرف، مع الجانب المسطح الذي يغطي فتح فوهة.
- نعلق طرف طرف برميل إلى الأنابيب البلاستيكية التي ترتبط إلى ثاني أكسيد الكربون (كو 2 ) منظم تدفق محطة التخدير ذبابة الفاكهة .
- عقد برميل عموديا ومشبك إلى حامل حامل المشبك القياسية بحيث يبقى المؤثر في الجزء السفلي من برميل.
- تعديل 200 ميكرولتر ماصة طرف لجعل حامل ذبابة.
- قطع 4 ملم من طرف لجعل افتتاح 0.8 مم قطرها، مما يسمح فقط رأس الذبابة ليتعرض.
ملاحظة: ثوراكس وجميع أجزاء أخرى من الجسم يطير البقاء داخل طرف ماصة.
- قطع 4 ملم من طرف لجعل افتتاح 0.8 مم قطرها، مما يسمح فقط رأس الذبابة ليتعرض.
- تعديل 1،000 ميكرولتر ماصة طرف و 1 مل حقنة إبرة غطاء لجعل الموصل.
- قطع 44 ملم من فتح طرف. خذ طول 6 مم من 1 مل حقنة إبرة غطاء ودفعه بإحكام في الجزء المتبقي من 1،000 ميكرولتر ماصة طرف.
2. تشغيل الجهاز سترايك
- تخدير واحد البالغ من العمر يومين الإناث ذبابة الكبار باستخدام كو 2 على وسادة الطيران.
- نقل بلطف إلى حامل الطاير باستخدام فرشاة غرامة. اضغط على حامل بلطف بحيث ينظر رئيس ذبابة خارج طرف طرف. إذا يتعرض الطحال الذبابة خارج طرف، ثنية بلطف مرة أخرى داخل طرف مع إبرة محقنة 1 مل محقنة.
ملاحظة: تأكد من الحفاظ على ذبابة الذبابة داخل الحامل. خلاف ذلك، قد يطير الطاير من إصابة خرطوم مص. - تشديد ذبابة حوليدر إلى حقنة برميل مع الموصل بحيث رئيس يطير يواجه أسفل.
- تعيين ضغط الغاز في 100 كيلو باسكال. ضبط معدل التدفق وفقا لتصميم التجربة.
- تتحول بسرعة التبديل تبديل منظم تدفق وإيقاف بحيث الضربات الضربات رئيس ذبابة مرة واحدة.
- رفع حامل ذبابة ونقله على لوحة الطيران. عكس حامل ذبابة وبلطف الاستفادة من الجانب للسماح للذبابة. ترك الطاير في قارورة فارغة للتعافي.
3. بمساعدة الفيديو تتبع الحركة
- ملء طبق بتري قطرها 6 سم مع المطاط الصناعي السيليكون شفافة لجعل الساحة تتبع. ترك مساحة 3 ملم بين السيليكون وغطاء الطبق للسماح للذباب على المشي بحرية ولكن لا تطير.
- تخدير أربعة الذباب من إما الشام أو مجموعة المعالجة في كل مرة ووضعها في الساحة. ترك الذباب في 22 درجة مئوية لمدة 1 ساعة.
- وضع جهاز جهاز شحن (كسد) المسؤول فوق الساحات وتسجيل لمدة 5 دقائق.
- تحليل مسارات الحركة المسجلة باستخدام برامج كتراكس (متاحة مجانا من كالتيش) 16 . تصدير البيانات التي تم تتبعها في لغة البرمجة (على سبيل المثال، ماتلاب) - تنسيق متوافق وتحليل البيانات على أساس المسافة المقطوعة في الإطار 17 . حساب متوسط مسافة المشي لكل ذبابة والجمع بينها وبين جميع الذباب المسجلة / مجموعة أخرى للحصول على متوسط المسافة التراكمية التي يسافرها السكان من الملفات في نفس المجموعة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
لإنشاء نموذج كت باستخدام ذبابة الفاكهة الكبار، قررنا فعالية الجهاز لدينا في إلحاق إصابة الرأس مغلقة واحدة. للقضاء على الاختلافات المتعلقة التركيب الوراثي، والجنس، أو العمر، استخدمنا كانتون-S ذبابة الإناث فت 2 في هذه التجربة في التجربة. يمكننا بسهولة السيطرة على قوة من تأثير عن طريق تنظيم معدل تدفق كو 2 في ضغط الغاز المستمر من 100 كيلو باسكال. الذباب المعرضة لضربة واحدة على أعلى معدل تدفق (15 لتر / دقيقة) أظهرت العيوب الخارجية الدنيا ( الشكل 2 ). كل من العينين الخارجية وفم فم يبدو سليمة. ومع ذلك، وجدنا أن معدل تدفق 15 لتر / دقيقة كانت قاتلة للغاية، مما أدى إلى أقل من 10٪ معدل البقاء على قيد الحياة في غضون 24 ساعة ( الشكل 3A ). في المقابل، أدى التعرض لإضراب 10 أو 7.5 لتر / دقيقة إلى 61.1٪ و 96.3٪ على قيد الحياة، على التوالي، بينما في 5.0 و 2.5 لتر / دقيقة معدلات التدفق، نجا جميع الذباب الخلفإيه 24 ساعة ( الشكل 3A ). لذلك، نحن توحيد دراساتنا المستقبلية إلى 5.0 لتر / دقيقة كو 2 معدل التدفق. بعد ضربة واحدة في 5.0 لتر / دقيقة، والذباب تعافى تدريجيا حركتهم في غضون 4 دقائق ( الشكل 3B ). على مدى 2 د المقبل، وظيفة قاطرة، ويقاس من القدرة على المشي، استعادة ببطء إلى وضعها الطبيعي ( الشكل 3C ). كما تقييم أولي، هذه الظواهر تذكرنا تلك التي قدمها الناس الذين يعانون من ارتجاج أو مستويات خفيفة من الصدمة 18 . المرضى الذين يعانون من إصابات في الدماغ غالبا ما تكون موجودة مع التدهور التدريجي للحركات العضلية والوفاة المبكرة.
لتقييم الآثار طويلة الأجل للإصابات الدماغ متعددة، طبقنا بروتوكول متبي من خمس ضربات متتالية بمعدل تدفق 5.0 L / دقيقة، مع فترات الاسترداد 24 ساعة بين كل ضربة. للتحقيق ه تأثير متبي على وظيفة الحركة، استخدمنا نظام تتبع الحركة بمساعدة الفيديو لتحليل سلوك المحرك يطير. بعد شيخوخة الذباب 20 د بعد المعالجة، أظهرت المجموعة المعالجة متبي انخفاض النشاط المشي والمسافة المقطوعة مقارنة مع مجموعة الشام ( الشكل 4 A & B ؛ مجموعة الشام: 6.49 ± 0.72، ن = 28 مقابل المجموعة المعالجة: 4.3 ± 0.47، ن = 32؛ p <0.05). للتحقيق في ما إذا كان تكرار إصابات الدماغ لها أي آثار مزمنة على البقاء على قيد الحياة، قررنا عمر الذباب التي تحملت بروتوكول متبي. كما تبين الشكل 4C أن الذباب المعالجة (ن = 100) كان متوسط عمرها بشكل كبير (36.9 ± 2.7 مقابل 26.3 ± 0.9 د) وخفض العمر الافتراضي (49.3 ± 2.4) مقابل 34.7 ± 1.4 د).
1 "كلاس =" زفيجيمغ "سرك =" / فيليز / ftp_upload / 55602 / 55602fig1.jpg "/>
الشكل 1 . الرسم البياني لجهاز سترايك. يستخدم الجهاز المواد التي هي متاحة بسهولة في مختبر ذبابة الفاكهة : 1) 200 ميكرولتر ماصة طرف، 2) 1 مل حقنة السلين، 3) المؤثر، 4) ربط أنبوب مدمن مخدرات إلى محطة التخدير ذبابة الفاكهة ، و 5) موصل لتشديد غيض على المحقنة. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2 . إصابة صادمة خفيفة الرأس مغلقة. إن ضربة واحدة على أعلى تدفق الغاز لم تتسبب في أضرار خارجية واضحة للرأس أو الجسم أو الزوائد. ( A &ب ) ضربة ضرب. ( C & D ) شام يطير. ذبابة الذباب خضعت تماما لنفس الإجراءات مثل المجموعة المعالجة، بما في ذلك عمليات النقل داخل وخارج حامل الطاير، إلا أنه لم يتم وضع أي مؤثر في برميل حقنة عندما تم تطبيق تدفق كو 2 . الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3 . تأثير إضراب واحد. ( أ ) مؤشر البقاء على قيد الحياة في 24 ساعة (سي 24 )، التي تحددها نسبة الذباب التي نجت في غضون 24 ساعة بعد الإضراب، هو الرسم البياني مقابل معدل تدفق الغاز. الذباب التي تم ضربها مرة واحدة مع 5.0 لتر / دقيقة تدفق الغاز تعافى النشاط الحركي معفي 4 دقائق ( B )، واستعادة حركتهم ببطء إلى وضعها الطبيعي على مدى 2 د فترة ( C) . شريط الخطأ، خطأ قياسي في المتوسط (سيم). الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 4 . تطوير نموذج متبي في ذبابة الفاكهة . تسببت الضربات المتكررة على مدى خمسة أيام في النشاط الحركي ضعاف بشكل كبير ( A & B ) وانخفاض العمر الافتراضي ( C ). يتم عرض المسارات المشي الممثل سجلت أكثر من 5 دقائق لمدة 4 الذباب عار ومعالجة في A. أشرطة الخطأ، سيم. * p <0.05، مان ويتني U- اختبار مع تصحيح بونفيروني. مجموع الذباب: المجموعة المعاملة ن = 100، مجموعة الشامن = 129. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
إن النماذج الحيوانية التي تصمم بأمانة خصائص كت، بما في ذلك التعديلات العصبية، والعلامات العصبية المرضية، والعجز السلوكي العصبي، ضرورية للكشف عن آليات المرض وتطوير الأهداف التشخيصية والعلاجية. ومن المفهوم أنه لا يوجد نموذج حيواني لمرض بشري مثالي في محاكاة جميع النقاط النهائية ذات الصلة سريريا. ومع ذلك، فإننا نعتقد أن نموذج كت قوية يجب أن تفي بالمتطلبات الثلاثة التالية: (1) يجب أن يطبق تأثير مباشرة على الرأس الذي لديه فروة الرأس سليمة وحماية الجمجمة. (2) لا ينبغي أن يجمد الرأس أثناء التعرض للتأثير بحيث يسمح التسارع السريع التباطؤ والحركات دوران وخطي الرأس. و (3) يجب أن يتضمن التصميم التجريبي كلا من الأنظمة المفردة والمتكررة، وينبغي أن تكون عواقب التأثير خفيفة في طبيعتها، دون إلحاق ضرر واضح، مثل وذمة الأنسجة، أو كدمة، أو نزيف صريح.
أويحييr نموذج ذبابة الفاكهة يتميز عن الطرق الأخرى التي تسبب إصابات الدماغ الصدمة في الذباب 13 ، 14 ، 15 . كل من حبة تمزق نموذج وجهاز هيت إلحاق إصابة مع موقع تأثير عشوائي وقوة. في كلا الطريقتين، والأعداد المتغيرة من الذباب الواردة في قارورة بلاستيكية القياسية أو أنبوب سكروكاب 2 مل الاتصال جدار الحاوية وارتداد عدة مرات خلال كل ضربة أو إصابة نوبة. وبما أن الذباب متحررة بحرية داخل الحاوية، فإن الإصابات الأولية التي تلحق بها تختلف اختلافا كبيرا عن الذباب الفردية، حيث أن أجزاء مختلفة من أجسادهم و / أو رؤوسهم يصابون بجروح مختلفة. وهكذا، فإنه ليس من المستغرب أن، باستخدام تلك النماذج، عانت الذباب من ضعف حاجز الأمعاء. وكان هذا يرتبط ارتباطا مباشرا مع معدل الوفيات في كلا النظامين 13 ، 14 ، مشيرا بقوة إلى أن nكانت التغيرات في الخلايا العصبية مسؤولة عن الوفاة الناجمة عن الصدمة في كلا النظامين. وعلى النقيض من ذلك، فإن أسلوبنا قادر على تقديم تأثيرات مباشرة للرأس إلى نفس الموقع. الجسم محمي من أي تعرض مباشر، مما يلغي المحاذير المحتملة التي قد تكون ناجمة عن الأضرار التي لحقت أجزاء أخرى من الجسم أو إلى الأعضاء الداخلية. وبالإضافة إلى ذلك، فإن معدل تدفق الغاز كو 2 المستخدمة لدفع الوزن يمكن تنظيمها لتحقيق السيطرة، وقوة قابل للتعديل. الأهم من ذلك، لا يطير رئيس ذبابة في وقت الإضراب، والسماح لعملية تسريع التباطؤ السريع جدا الذي يحاكي الشكل الأكثر شيوعا من متبي الذي يحدث في السكان 19 .
على الرغم من أنه سيكون مثاليا لتثبيت التلقائي على / قبالة التحول للسيطرة على منظم تدفق كو 2 ، لا يبدو التبديل اليدوي الحالي للتأثير على استنساخ قوة تأثير لأن تصميم الجهاز لدينا كليدين القوة التي يجب أن تمارس بسرعة بمجرد الضرب الضربات الرأس.
وباختصار، يوفر نظامنا نظاما جديدا لتقليد أفضل متبي، وإدخال منصة جديدة لنموذج كت. مثل غيرها من النماذج ذبابة الفاكهة التي أثبتت قيمتها في فك رموز الاضطرابات العصبية الإنسان 9 ، 20 ، ومن المتوقع أن التوصيف المفصل المستمر للنموذج من حيث فقدان الخلايا العصبية، تاو فرط الفسفوريلات، تدب-43 اعتلال البروتين، والاستجابة نيوروينفلاماتوري إلى متبي وتوليد رؤى ميكانيكية هامة في عمليات مرض كت وسوف تساعد على الإجابة على بعض الأسئلة الحاسمة في هذا المجال.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
وأيد هذا العمل من قبل كلية جامعة جون هوبكنز الطب كلية بدء التشغيل لك
Acknowledgments
الكتاب ليس لديهم ما يكشف.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Aerosol Barrier | USA Scientific | 1120-8810 | Used as an impactor |
| 200 μL Pipette Tip | USA Scientific | 1111-0706 | Used as a fly head holder |
| 1000 μL Pipette Tip | USA Scientific | 1122-1830 | Used as a connector |
| 1 mL Tuberculin Syringe | Becton Dickinson | 309625 | |
| 60 mm Petri Dishes | Fisher Scientific | FB0875713A | Used as a tracking arenas |
| Flow Regulator | Genesee Scientific | 59-122WC | |
| Standard Clamp Holder/stand | EISCO Scientific | CH0688 | |
| Fine Brush | Genesee Scientific | 59-204 | |
| Flypad | Genesee Scientific | 59-114 | |
| Sylgard Silicone Elastomer | Dow Corning | 4019862 | |
| CCD Camera | Microsoft | HD-5000 | |
| Ctrax Walking Fly Tracker | Caltech | Ctrax 0.2.11 | |
| MATLAB Image Processing Toolbox | MATLAB | R2015b |
References
- McKee, A. C., et al. The first NINDS/NIBIB consensus meeting to define neuropathological criteria for the diagnosis of chronic traumatic encephalopathy. Acta Neuropathol. 131, 75-86 (2016).
- Martland, H. S. Punch drunk. JAMA. 91 (15), 1103-1107 (1928).
- Millspaugh, J. A. Dementia pugilistica. US Naval Med Bull. 35, 297-303 (1937).
- Omalu, B. I., et al. Chronic traumatic encephalopathy in a national football league player: part II. Neurosurgery. 59 (5), 1086-1092 (2006).
- Goldstein, L. E., et al. Chronic traumatic encephalopathy in blast-exposed military veterans and a blast neurotrauma mouse model. Sci Transl Med. 4 (134), (2012).
- Mez, J., Stern, R. A., McKee, A. C. Chronic traumatic encephalopathy: where are we and where are we going? Curr Neurol Neurosci Rep. 13 (12), 407 (2013).
- McKee, A. C., et al. The spectrum of disease in chronic traumatic encephalopathy. Brain. 136 (Pt 1), 43-64 (2013).
- Petraglia, A. L., et al. The spectrum of neurobehavioral sequelae after repetitive mild traumatic brain injury: a novel mouse model of chronic traumatic encephalopathy. J Neurotrauma. 31 (13), 1211-1224 (2014).
- Hirth, F. Drosophila melanogaster in the study of human neurodegeneration. CNS Neurol Disord Drug Targets. 9 (4), 504-523 (2010).
- Littleton, J. T., Ganetzky, B. Ion channels and synaptic organization: analysis of the Drosophila genome. Neuron. 26 (1), 35-43 (2000).
- Appel, L. F., et al. The Drosophila Stubble-stubbloid gene encodes an apparent transmembrane serine protease required for epithelial morphogenesis. Proc Natl Acad Sci USA. 90 (11), 4937-4941 (1993).
- Piyankarage, S. C., Featherstone, D. E., Shippy, S. A. Nanoliter hemolymph sampling and analysis of individual adult Drosophila melanogaster. Anal Chem. 84 (10), 4460-4466 (2012).
- Katzenberger, R. J., et al. A Drosophila model of closed head traumatic brain injury. Proc Natl Acad Sci USA. 110 (44), E4152-E4159 (2013).
- Barekat, A., et al. Using Drosophila as an integrated model to study mild repetitive traumatic brain injury. Sci Rep. 6, 25252 (2016).
- Katzenberger, R. J., et al. A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila. J Vis Exp. (e52905), (2015).
- Branson, K., Robie, A. A., Bender, J., Perona, P., Dickinson, M. H. High-throughput ethomics in large groups of Drosophila. Nat Methods. 6 (6), 451-457 (2009).
- Straw, A. D., Dickinson, M. H., et al. Motmot, an open-source toolkit for realtime video acquisition and analysis. Source Code Biol Med. 4 (5), 1-10 (2009).
- Talavage, T. M., et al. Functionally-detected cognitive impairment in high school football players without clinically-diagnosed concussion. J Neurotrauma. 31 (4), 327-338 (2014).
- Theadom, A., et al. Frequency and impact of recurrent traumatic brain injury in a population-based sample. J Neurotrauma. 32 (10), 674-681 (2015).
- Drobysheva, D., et al. An optimized method for histological detection of dopaminergic neurons in Drosophila melanogaster. J Histochem Cytochem. 56 (12), 1049-1063 (2008).
