Summary
يصف هذا العمل بروتوكول يستخدم نهج حل المكون لدراسة الحساسية لمسببات الحساسية لقاح العشب في مجموعة من المرضى من جنوب الصين مع حساسية الأنف و / أو الربو.
Abstract
يؤدي التحسس إلى حبوب اللقاح الحشائش إلى مخاطر عالمية لأمراض مجرى الهواء التحسسي. على الرغم من أن الوقاية تعتمد على التحقيق المحلي من المواد المسببة للحساسية حبوب اللقاح، والبيانات حول هذا الموضوع محدودة في جنوب الصين. تم الحصول على أي بيانات متوفرة عن طريق الاستبيانات تقرير الذاتي، واختبارات الجلد وخز، واختبارات إيج الكلي أو محددة باستخدام مقتطفات الخام. ولأسباب كثيرة، لا يمكن الاعتماد على هذه الأساليب. تم فحص تفاعل المصل إلى عشب برمودا، وعشب تيموثي، ومسببات الحساسية من هومولوس في مجموعة من المرضى من قوانغتشو الكبرى (أكبر مدينة في جنوب الصين وضواحيها) مع التهاب الأنف التحسسي و / أو الربو باستخدام محلل المناعية المؤتمتة بالكامل كعنصر (كرد).
وللمرة الأولى، ظهر انتشار كبير إلى حد كبير لإيجابية البرمودا العشب سيج في الجنوبيين الصينيين مع التهاب الأنف التحسسي و / أو الربو. في هؤلاء المرضى، انتشار خفية من التوعيةإلى العشب تيموثي و همولوس سكاندنز لوحظ أيضا، والتي قد تنشأ من التفاعل عبر، كما أن الأخيرين ليست مشتركة في المنطقة. وقد تم دعم ذلك أيضا من خلال الكشف عن مكونات الحساسية.
وقد يوفر محللو المقايسة المناعية التلقائية بالكامل اتساقا مرضيا بين المناطق والمختبرات والمؤسسات ومع مرور الوقت. وقد تتيح آلية الصك كشفا موحدا لم يكن من الممكن كشفه بسهولة قبل ظهور كرد.
هذه هي الدراسة التي تستخدم نهج كرد للتحقيق في التوعية للحساسية حبوب اللقاح العشب في جنوب الصين. ويضيف إلى الأدلة الحالية في الأدب. هناك حاجة إلى دراسات مستقبلية للتحقق من صحة هذه النتائج. ومع ذلك، على الرغم من كرد هو أداة مفيدة، والنتائج التي تم التوصل إليها مع محلل المناعي الآلي بالكامل لا ينبغي أن تحل محل غيرها من التحقيقات المخبرية، والتقييمات السريرية، والخبرة الطبيب.
Introduction
تمثل حبوب اللقاح العشب ما يقرب من 50٪ من الحساسية المرتبطة بالغلوبيولين المناعي (إيغ)، وبسبب طبيعتها المحمولة جوا، تفرض مخاطر عالمية لأمراض مجرى الهواء التحسسي، وخاصة الربو والتهاب الأنف التحسسي 1 ، 2 ، 3 ، 4 . الوقاية من الحساسية العشب حبوب اللقاح في منطقة تعتمد على معلومات حول التوزيع المحلي للحساسية حبوب اللقاح. لسوء الحظ، الطيف من حساسية المواد المسببة للحساسية يختلف من مكان إلى آخر، وهي الملاحظة المعروفة عموما باسم خصوصية إقليمية.
وفي الصين، وهي منطقة شاسعة من شرق آسيا، تتزايد خصوصية المناطق الإقليمية لتوعية حبوب اللقاح في الأعشاب بسبب محدودية البيانات المتاحة حاليا من الجزء الجنوبي من هذا البلد خلال العقود الماضية 5 . وقد أدى هذا الندرة في البيانات إلى صعوبة في إظهار الحسي حبوب اللقاح العامفي هذا البلد الكبير 6 . بالإضافة إلى ذلك، تم الحصول على بيانات محدودة جدا عن الجنوبيين الصينيين إلى حد كبير من الاستبيانات تقرير الذاتي، واختبارات الجلد وخز (بدلا من اختبارات المصل المختبر)، والقياسات الإجمالية إيغ (بدلا من حساسية إيغ (سيج))، وكشف سيج لمسببات الحساسية ( بدلا من الجزيئات المكونة للحساسية).
الإبلاغ الذاتي من أعراض الحساسية يمكن أن تكون غير موثوق بها عندما تكون مهتمة المواد المسببة للحساسية محددة. اختبارات الوخز الجلد، على الرغم من أن الوصول إليها على نطاق واسع، تنطوي على استخدام غير القياسية، مستخلصات الحساسية الخام، التي قد تحتوي على نفسها مكونات توعية أخرى التي تربك تفسير النتيجة. تعتمد موثوقية اختبار وخز الجلد أيضا بشكل حاد على التلاعب بمهارة من قبل أخصائيي الحساسية أو الممرضات المتخصصين، واستخدام الهستامين مؤخرا، والامتثال المريض (في بعض الأحيان من الصعب جدا للأطفال الصغار). إجمالي المفتش العام مفيد لفحص الحساسية ولكن لا تحديد معقول ثه المساس بالمواد المسببة للحساسية لدى المريض. وعلاوة على ذلك، تحتوي جميع المواد المسببة للحساسية تقريبا على عدد من الجزيئات المكونة للحساسية. قد يشير الحساسية إلى المكونات الرئيسية ( أي دير p 1 و دير p 2 من عث الغبار المنزلي) إلى حساسية "حقيقية" (الحساسية لمسبب حساسية معين، بدلا من إيجابية كاذبة بسبب التفاعلات المتبادلة مع المواد المسببة للحساسية الأخرى)، ولكن التحسس (على سبيل المثال، التفاعل التفاعلي دير p 10، تروبوميوسين) قد لا 7 .
وقبل إدخال التشخيصات التي تم حلها عن طريق المكونات، أعاقت هذه النكسات المخيبة للآمال دراسات الحساسية في الصين. كرد على وجه التحديد بالكشف عن مكونات مسببات الحساسية باستخدام المؤتلف أو تنقيته جزيئات الحساسية، مما يجعل القياس بسهولة قابلة للقياس وقابل للتخصيص 8 . في العقود الماضية، ودراسات الحساسية في كثير من الأحيان استخدام مستخلصات الخام من المواد المسببة للحساسية التي تحتوي حتما على عدد من المكونات غير ذات الصلة. العديد من هذه كووالمكونات هي خاملة، ولكن في بعض الأحيان، يمكن أن يؤدي بعضها إلى ارتباك ردود فعل إيجابية. استخدام جزيئات مسببة للحساسية المؤتلف أو المنقى في كرد يمكن الالتفاف على هذا وبالتالي توفير أفضل دقة الاختبار. عند معالجتها في ميكروأرس، نهج كرد بسرعة شاشات أو يحدد التوعية لمئات من جزيئات الحساسية في المواضيع الفردية. ولا توجد حاليا دراسة جيدة تصميما على كرد على التوعية بالحبوب اللقاحية في جنوب الصين. ومن الناحية المثالية، ينبغي أن تشمل هذه الدراسة سكانا محليين يتمتعون بتغطية جغرافية كبيرة، وأنهم يمثلون حبوب اللقاح التي يتم الإبلاغ عنها عادة في الصين، وأن يعالجوا الجوانب التقنية المذكورة أعلاه. للوصول إلى المستوى العملي من الأهمية السريرية وتسهيل تجنيد عينات المصل، والتحقيق المبكر على التوعية إلى حبوب اللقاح العشب كما المواد المسببة للحساسية استنشاق قد تركز أيضا على المرضى الذين يعانون من اضطرابات الجهاز التنفسي التحسسي، وليس على عامة السكان.
يصف هذا العمل طريقةتستخدم لاختبار تفاعل المصل سيج إلى عشب برمودا، تيموثي العشب، و سكانولس همولوس في المرضى من قوانغتشو الكبرى (أكبر مدينة في جنوب الصين وضواحيها) مع التهاب الأنف التحسسي و / أو الربو باستخدام نهج كرد 5 . هذه النتائج على توعية هذه الحشائش شبه الاستوائية والمعتدلة في جنوب الصين إضافة أدلة هامة إلى أن حاليا في الأدب.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
تم اعتماد بروتوكول الدراسة، بما في ذلك استخدام عينة المصل البشري، من قبل لجنة الأخلاقيات، مستشفى تابع الأولى من جامعة قوانغتشو الطبية. وقدم جميع المشاركين موافقة خطية مستنيرة، إما بشكل مستقل أو عن طريق والديهم (في حالة الأطفال). وقد تم تسجيل البروتوكول على الانترنت (الصينية السريرية سجل المحاكمة، رقم التسجيل: تشيكر-دسك-13004003، الرجوع إلى http://www.chictr.org/cn/).
1. تحديد مجتمع الدراسة
ملاحظة: مستودع معلومات الحساسية من مختبر مفتاح الدولة لأمراض الجهاز التنفسي (إير-سكلرد) هو المصدر الرئيسي لتجنيد المرضى، لأن إير هو قاعدة بيانات كبيرة الأكثر توثيقا جيدا من المرضى لاختبار مسببات الحساسية في جنوب الصين 9 ، 10 . وقد قامت إير بتخزين عينات من المصل للمرضى منذ ما يقرب من عقد من الزمان. باختصار، تم إعداد هذه العينات المخزنة مسبقا بواسطة الطرد المركزي 5 مل سو فليبوتوميزد الدم الوريدي لمدة 10 دقيقة في 3000 x ج والتعافي من طاف. وضعت عينات المصل في ثلاجات -80 درجة مئوية للتخزين على المدى الطويل. العينات التي استوفت معايير إدراج المريض كانت جاهزة للاستخدام لجميع الاختبارات في هذه الدراسة.
- من قاعدة بيانات إير، استرجاع البيانات حول المرضى الذين يعانون من حساسية الأنف و / أو الربو الذين خضعوا لاختبارات المصل للحساسية العشب سيج بين يناير 2013 ويونيو 2015، فترة الدراسة المصممة مسبقا.
- اختيار المرضى الذين يعانون من خفيفة إلى معتدلة التهاب الأنف التحسسي و / أو الربو وفقا لالتهاب الأنف التحسسي وتأثيره على الربو (أريا) 11 والمبادرة العالمية للربو (جينا) 12 المبادئ التوجيهية. تعيينهم باسم "مجموعة الدراسة".
- استبعاد المرضى الذين يعانون من سجلات طبية غير مكتملة، أولئك الذين فقدوا للمتابعة، أولئك الذين يرفضون إعطاء موافقة مستنيرة بشأن استخدام عينات مصلها لأغراض علمية،نقص المناعة، تلك الموجودة حاليا على العلاج المناعي أو وكلاء مناعة، أو تلك التي وجدت لديها العدوى الطفيلية.
- حدد مجموعة معاصرة من المرضى الذين يعانون من الحساسية غير التنفسية ( أي الأكزيما، والتهاب الجلد التحسسي، والحساسية الغذائية) وفقا لنفس معايير الاستبعاد وتعيينهم باسم "مجموعة السيطرة".
- تأكد من أن عينات المصل تم جمعها قبل إعطاء أي وصفات أو علاجات لتقليل الآثار المربكة على نتائج المختبر. استبعاد أي عينة مصل لا يستوفي هذا الشرط.
- تأكد من أن جميع المواد هي المقيمين الدائمة من جميع أنحاء قوانغتشو الكبرى ( أي ولد أو عاش هناك لأكثر من 10 عاما).
2. تدفق الدراسة وقياسات الفائدة
- استرداد عينات المصل من المرضى المؤهلين من البنك الحيوي. لاختبار عنصر الحساسية / حساسية، واستخدام 140 ميكرولتر من المصل (بما في ذلك 100 ميكرولتر لملءمتابعة الفضاء الميت).
ملاحظة: الحد الأقصى لحجم المصل الكلي المطلوب لكل مريض في هذه الدراسة هو: 3 المواد المسببة للحساسية محددة و 8 مكونات حساسية، سيج = 140 ميكرولتر * 11 = 1،540 ميكرولتر. - عند استخدام هذه الأداة، في المقام الأول اختبار عينات المصل ل سيجس إلى المواد المسببة للحساسية كاملة من العشب برمودا، تيموثي العشب، و همولوس سكاندنز . اتبع التعليمات الواردة في القسم 3.
ملاحظة: تم اختيار هذه اللقاحات للقياسات لأن العشب برمودا 13 ، 14 ، 15 و سكانولنس همولوس 16 تم الإبلاغ على نطاق واسع في الصين، في حين تيموثي العشب 17 ، 18 ، 19 هو نوع من النباتات النموذجية التي تعيش في بيئات تتراوح بين الاستوائية إلى المعتدلة المناطق، هو الأكثر دراستها في جميع أنحاء العالم. - ثانيا، اختبار عينات المصل المحددة في الخطوة 2.3 أن يكون(1)، تيموثي [فلب 1 (g205)، فل p 4 (g208)، فل p 5 (g215)، فل p 6 (g209) )، فل p 7 (g210)، فل p 11 (g211)، و فل p 12 (g212)]، ومحددات الكربوهيدرات المتفاعلة [كسد (o214)]. اتبع التعليمات الواردة في القسم 3.
3. إجراء الاختبار الآلي بالكامل باستخدام نظام تحليل المقايسة المناعية
ملاحظة: الإجراء برمته من اختبار سيج حساسية، وهو مؤتمتة بالكامل ووصف في مكان آخر 7 ، 8 ، 9 ، 10 ، يتبع بروتوكول الشركة المصنعة.
- بدء محلل المناعية مؤتمتة بالكامل (على سبيل المثال، immunoCAP1000) واستخدامها لأداء المناعية في جميع أنحاء الدراسة. قم بتشغيل الكمبيوتر المدمج في إدارة بيانات المعلومات (إدم).
ملاحظة: الشرج المناعيةيزر بشكل روتيني في وضع الاستعداد. - مع "السلطة الابتدائية" على، والتبديل على "نظام الطاقة" وانتظر 3 دقائق حتى يبدأ البرنامج المدمج في. انقر على "تحميل الحل شطف" و "تحميل غسل الحل."
- إضافة 140 ميكرولتر من المصل إلى قارورة لكل حساسية / حساسية اختبار المكون. تسمية كل قنينة تحتوي على 140 ميكرولتر من المصل مع رقم تعريف فريد لكل مريض.
- من واجهة إدم، قم بتنفيذ الخطوات التالية بالنقر فوق القائمة.
- تحقق من "طلب قائمة" نافذة على إدم للتأكد من أن "سيج" هو طريقة الاختبار المفضل.
- تحميل أنابيب العينة في رفوف العينة وأنابيب التحكم في الجودة في رفوف مراقبة الجودة، مع الرموز الشريطية.
ملاحظة: لكل مريض، كان يخطط في البداية ل سيج إلى 3 المواد المسببة للحساسية محددة و 8 مكونات حساسية، أو 346 * 11 (3،806) أنابيب العينة. لكل أنبوب العينة، 3 أنابيب لمراقبة الجودةالتي تحتوي على مستويات منخفضة ومتوسطة وعالية من السيطرة سيج (انظر جدول المواد لمزيد من التفاصيل). في نهاية المطاف، لم يتم فحص سوى 58 مريضا الذين اختبروا إيجابية في الاختبار الأولي (الخطوة 2.3) في الاختبار الثانوي (الخطوة 2.3). تحميل أنابيب يمكن تعيين تلقائيا على وحدة تحكم الكمبيوتر. - حدد "تحميل الكواشف" في "معالجة الفحص" الشاشة. استكمال تحميل العينة وجودة السيطرة رفوف، حل التنمية، اقتران، معايرة، الناقل، نصائح ماصة، حل وقف، وغسل الحل وفقا "لوادليست" (انظر جدول المواد لمزيد من التفاصيل).
- في "تحميل وبدء"، اضغط على "موافق".
ملاحظة: في نهاية القياس، تظهر النتائج على إدم. - من واجهة إدم، حدد البيانات المراد تصديرها. انقر على "القائمة" و "الموافقة" و "حفظ باسم" وتصدير نتائج القياس سيج كملف جدول بيانات. استيراد ملف جدول البيانات إلى برنامج إحصائي (على سبيل المثال، سبس) 10 . باستخدام وحدة نمطية محددة لمعاملات سبيرمان من القائمة سبس، وتحليل الارتباطات في التوعية بين هذه حبوب اللقاح العشب (سيج إيجابية إلى حساسية كاملة) وعناصر حبوب اللقاح (سيج إيجابية لجزيئات الحساسية).
4. تعريف سيج رياكتيفيتي
ملاحظة: لعينة مصل غير مخفف، ومجموعة من قياس إيغ محددة هي 0.35-100 كو / L.
- تمييع العينات مع قيم سيج> 100 كو / L 1: 5 وإعادة فحص. عندما تبقى القيمة أعلى من 100 كو / L، المضي قدما في مزيد من التخفيفات حتى يتم التوصل إلى مستوى نقطة نهاية تصل إلى 1000 كو / L.
- استنادا إلى قيمة العتبة 0.35 كو / L، والنظر في مستوى سيج تتجاوز 0.35 كو / L لتكون إيجابية 5 ، 7 ، 10 . قيم رياكتيف(1)، والصنف 3 (≥0.35 و <0.70 كو / L)، والصنف 2 (≥0.70 و <3.50 كو / L)، والصنف 3 (≥3.50 و <17.50 كو / L)، والصنف 4 (≥ 17.50 و <50.00 كو / L)، والصنف 5 (≥50.00 و <100.00 كو / L)، والطبقة 6 (≥100.00 كو / L).
5 - التحليل الإحصائي
- تحليل البيانات مع البرامج الإحصائية (على سبيل المثال، سبس) 10 . اذكر البيانات الكمية كمتوسط والانحراف المعياري، والبيانات النوعية كمتوسط ونطاقات متعددة (إقر)، والبيانات الفئوية كنسبة من النتائج الإيجابية.
- استخدم اختبار مربع مربع لمقارنة النسب بين المجموعات، واختبار t غير مقيد للبيانات الكمية، واختبار مجموع البيانات النوعية.
- استخدام اختبار بيرسون لتحليل الارتباط بين البيانات البارامترية، مع معاملات الارتباط المعبر عنها ب "r"، واختبار سبيرمان للقيم غير المعلمية، مع tمعاملات الارتباط المعبر عنها ب " r s ". النظر في الدلالة الإحصائية لتكون عندما P- القيم <0.05.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
محلل المناعية الآلي بالكامل المستخدمة في هذه الدراسة لديها بنية المرحلة الصلبة مغطاة المكونات التساهمية مسببات الحساسية أو مكونات الحساسية التي تتفاعل مع جزيئات الفائدة (سيج) في عينات المصل من المريض. مع برنامج تلقائي، محلل يغسل كل غير محددة إيغس مع 150 ميكرولتر من الحل شطف ويكرر هذا 5 مرات. ثم يضيف أنزيم المسمى المضادة للأجسام المضادة إيغ (50 ميكرولتر) لتوليد معقدة. إن الأجسام المضادة لمكافحة إيغ المسمى (المتقارن) إنزيم المسمى هو الأجسام المضادة الثانوية التي تربط إلى إيغ محددة. يتم القضاء على الأجسام المضادة لمكافحة إيغ غير منضم عن طريق الغسيل مع 150 ميكرولتر من محلول الغسيل (تكرار 3 مرات). يتم التعامل مع مجمع ملزمة مع وكيل النامية (50 ميكرولتر) لمدة 9 دقائق عند 37 درجة مئوية. العامل النامي هو عامل هضم إنزيم يقطع جميع الأجسام المضادة المضاد لل إيغ. ينبعث هذا الأخير مضان تحت حالة قلوية. توقف التفاعل معإضافة حل توقف القلوية. بعد هذا، الصك يضغط على بنية المرحلة الصلبة للضغط خارج شطافة وقياس مضان من الشطف الناتجة في الطول الموجي من 470 نانومتر. يرتبط مضان خطيا إلى المستوى المطلق للجزيئات الحليلة من الفائدة في شطافة. ارتفاع قيمة مضان يعني أكثر سيج في عينة المصل. لتفسير نتائج الاختبار، يقوم النظام تلقائيا بتحويل الردود للعينات إلى تركيزات باستخدام منحنى المعايرة. ويتم نقل بيانات القياس إلكترونيا إلى برنامج إدم الذي يدمج وظائف حساب النتائج التحليلية وحساب الإحصاءات وتقارير النتائج.
بعد معايير الإقصاء والاستبعاد، حققت هذه الدراسة في مصل الدم من 346 مريضا. تضمنت مجموعة الدراسة 78 شخصا يعانون من حساسية الأنف وحدها، 92 مع الربو وحده، و 88 يصاحب ذلك لي مع الربو والتهاب الأنف. وشملت مجموعة السيطرة 88 مريضا يعانون من الحساسية غير التنفسية. وكان هؤلاء المرضى الذين تتراوح أعمارهم بين 1-87 سنة، وأكد أن المقيمين الدائمين من جميع أنحاء قوانغتشو الكبرى، والمنطقة المستهدفة للدراسة. وكانت جميع مجموعات الدراسة والمجموعة الضابطة قابلة للمقارنة في الخصائص الديموغرافية والاجتماعية، بما في ذلك الجنس والعمر والتاريخ العائلي. من المرضى في مجموعة الدراسة، 22.5٪ اختبار إيجابي لعشب برمودا، 13.6٪ إلى العشب تيموثي، و 7.0٪ إلى سكانولس همدنز . في مجموعة الدراسة، كان معدل توعية أي حبوب لقاح العشب أعلى بكثير مما هو عليه في المجموعة الضابطة ( الجدول 1 ). وكان كل مرضى برمودا العشب سيج سلبية أيضا سلبية لعشب تيموثي و سكاندولس همولوس . ومن المثير للاهتمام أن نلاحظ أن المرضى الذين يعانون من حساسية الأنف و / أو الربو أظهرت نسبة أعلى بكثير من التوعية لعشبة برمودا (ن = 58، 22.5٪) من أولئك الذين يعانون من الحساسية الأخرى (ن = 4، 4.5٪).
= "jove_content" فو: كيب-together.within-بادج = "1"> لم يكن هناك مرضى لديهم تفاعل من الدرجة 6 سيج في هذه الدراسة. من بين المرضى الذين يعانون من برمودا العشب الطبقة 1 سيج التفاعل، واحتمال الاختبارات الإيجابية ل سين د 1، والمواد المسببة للحساسية تيموثي العشب، سكانولنس همولوس ، أو كسد كان أقل من 30٪. في المقابل، كان المرضى الذين يعانون من الطبقة 4 برمودا العشب سيج التفاعل فرصة 67-100٪ من الإيجابية المصاحبة ل سين د 1، تيموثي مسببات الحساسية العشب، سكاندولس العشب، أو كسد ( الشكل 1 ). أظهرت مستويات تفاعل البرمودا العشبية علاقة ارتباط معنوية، مع وجود احتمالات إيجابية لمجموعات أخرى من حبيبات حبوب اللقاح ( r s = 0.669، P <0.001).
تم تقييم توعية تيموثي العشب أيضا من قبل سيج إلى مكونات العشب تيموثي. من بين 35 تيموثي المرضى إيجابية العشب، وكان العنصر الأكثر حساسية مسببات الحساسية فل p 4 (100٪، 35/35)، تليها فل p 1(17.1٪، 6/35). وكان ثلاثة مرضى لكل منهم (3/35، 8.6٪) إيجابيا لأي واحد من فل p 5 و 6 و 7 و 11 و 12 ( الجدول 2 ). ارتبطت مستويات المصل فل p 4 سيج بقوة مع مجموع مسببات حساسية تيموثي العشب و كسد سيج ( r s = 0.941 و 0.928، على التوالي، P <0.001؛ الجدول 3 ). وكان 41.4٪ (24/58) من مرضى إيجابية بيرمودا العشب و 68.6٪ (24/35) من تيموثي مرضى توعية العشب كانت سيج إيجابية لاتفاقية مكافحة التصحر. أظهر تحليل ارتباط الرتبة سبيرمان ارتباطا كبيرا في التوعية بين كسد وغيرها من مسببات الحساسية العشب ( الجدول 3 ).
الشكل 1: شارك في توعية بين المرضى إيجابي ل بيرمودا العشب سيج.
ويظهر هذا الرقم النسبة المئوية للمرضى الذين يعانون من فئات مختلفة من التفاعل سيج إلى العشب برمودا (ن = 58) ويصاحب ذلكالنمل توعية لعشب تيموثي، سكانولنس همولوس ، كسد ، وغيرها من مكونات حساسية العشب. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
| معدل الاختبارات الإيجابية [٪ (n / المرضى)] | |||
| برمودا العشب | تيموثي، خضر | همدنوس سكاندنز | |
| المرضى الذين يعانون من أر و / أو أس | 22.5٪ (58/258) †† | 13.6٪ (25/258) † | 7.0٪ (18/258) |
| المرضى الذين يعانون من أر | 21.8٪ (17/78) †† | 10.2٪ (8/78) | 7.7٪ (6/78) |
| المرضى الذين يعانون من أس | 22.8٪ (21/92)†† | 14.1٪ (13/92) † | 5.4٪ (5/92) |
| المرضى الذين يعانون من أر و أس | 22.7٪ (20/88) †† | 15.9٪ (14/88) | 8.0٪ (7/88) |
| عمر | |||
| أقل من 14 سنة أو أقل | 18.6٪ (8/43) | 14.0٪ (6/43) | 7.0٪ (3/43) |
| > 4 سنوات | 23.3٪ (50/215) | 13.5٪ (29/215) | 7.0٪ (15/215) |
| جنس | |||
| الذكر | 25.7٪ (35/136) | 13.9٪ (19/136) | 7.4٪ (10/136) |
| إناثا | 18.8٪ (23/122) | 13.1٪ (16/122) | 6.6٪ (8/122) |
| المرضى الذين يعانون من الحساسية الأخرى | 4.5٪ (4/88) ** | 1.1٪ (1/88) ** | 0 * |
الجدول 1: المرضى الذين يعانون من اختبارات إيجابية سيج لعصير برمودا، تيموثي العشب، و سكاندولس همولس استنادا إلى كيان المرض والتفاصيل الديموغرافية. وكانت نسبة أعلى من المرضى الذين يعانون من أمراض الجهاز التنفسي التحسسي إيجابية لعشب برمودا (χ 2 = 14.35، P <0.001)، عشب تيموثي (χ 2 = 10.88، P <0.001)، و سكاندولس همولوس (χ 2 = 5.14، P = 0.02 ) مقارنة بضوابط الحساسية الأخرى ( ** P <0.01، * P <0.05). وكانت نسبة المرضى الذين يعانون من اختبار العشب برمودا إيجابي أعلى بكثير من نسبة لعشب تيموثي ( ‡. P <0.05) و همولوس سكاندنز ( †† P <0.01). وكانت نسبة المرضى الذين يعانون من اختبار العشب تيموثي إيجابي أعلى من ذلك من سكاندنز هومولوس ( † P <0.05). لم تتغير نسبة الاختبارات الإيجابية لعشب برمودا، وعشب تيموثي، و همولوس سكاندنز سيج اختلافا كبيرا بين المجموعات الصغرى والبالغة (χ 2 = 0.07، P = 0.79؛ χ 2 = 0.06، P = 0.80؛ χ 2 = 0.11، P = 0.74؛ على التوالي). لم تكن معدلات حساسية حبوب اللقاح الحشائرية مختلفة إحصائيا بين الذكور والإناث (χ 2 = 1.338، P = 0.25؛ χ 2 = 0.063، P = 0.80؛ χ 2 = 0.38، P = 0.54؛ على التوالي). وبالمثل، لم تكن هناك فروق ذات دلالة إحصائية في معدلات الحساسية بين مرضى الأنف والربو (χ 2 = 0.030، P = 0.985؛ χ 2 P = 0.558؛ χ 2 = 0.528، P = 0.768؛ على التوالي).
| المرضى (٪) | فل p 4 | فل p 1 | فل p 5 | فل p 6 | فل p 11 | فل p 7 | فل p 12 | |
| 28 (80.0٪) | + | |||||||
| 4 (11.4٪) | + | + | ||||||
| 1 (2.9٪) | + | + | + | + | + | + | ||
| 2 (5.7٪) | + | + | + د> | + | + | + | + | |
| مجموع | 35 (100٪) | 6 (17.1٪) | 3 (8.6٪) | 3 (8.6٪) | 3 (8.6٪) | 3 (8.6٪) | 3 (8.6٪) | |
| سيج a (كو / L) | 0.52، 0.06-2.02 | 0.02، 0.01-0.10 | 0.04، 0.03-0.24 | 0.12، 0.03-0.34 | 0.05، 0.02-0.27 | 0.03، 0.02-0.36 | 0.10، 0.04-0.28 |
الجدول 2: حساسية تيموثي غراس وفقا لنسبة السمية ومستويات مكونات العشب تيموثي (N = 35). +، الاختبارات الإيجابية. a ، سيج مستويات (كو / L) يتم عرضها كمتوسط و إقر. من بين 35 تيموثي العشب المرضى إيجابية إيجابية، كان 80.0٪ فقط فل p 4 إيجابية، في حين أن 11.4٪ كانت إيجابية ل فل p 4 أو فل p 1.
| حساسية | برمودا | الثيموثية عشب | همدنوس سكاندنز | CCD |
| برمودا | - | 0.709 ** | 0.682 ** | 0.565 ** |
| سين d 1 | 0.583 ** | 0.787 ** | 0.751 ** | 0.865 ** |
| الثيموثية عشب | 0.709 ** | - | 0.921 ** | 0.856 ** |
| فل p 4 | 0.645 ** | 0.941 ** | 0.886 * | 0.928 ** |
| فل p 1 | 0.616 ** | 0.681 ** | 0.712 ** | 0.507 ** |
| فل p 5 | 0.46 | 0.273 | 0.590 * | 0.624 * |
| فل p 6 | 0.445 | 0.306 | 0.583 * | 0.569 |
| فل p 7 | 0.681 * | 0.481 | 0.632 * | 0.531 |
| فل p 11 | 0.589 * | 0.372 | 0.620 * | 0.568 |
| فل p 12 | 0.671 * | 0.411 | 0.565 | 0.446 |
| همدنوس سكاندنز | 0.682 ** | 0.921 ** | - | 0.853 ** |
الجدول 3: معاملات الترابط † للإيجابية بين كسد والمواد المسببة للحساسية العشب غبار الطلع. † كما هو معامل الترابط r s ؛ تم إجراء تحليل ارتباط سبيرمان لهذه المجموعة من البيانات غير المعلمية. * P <0.05، ** P <0.01.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
وقد يوفر محللو المقايسة المناعية التلقائية بالكامل اتساقا مرضيا بين المناطق والمختبرات والمؤسسات ومع مرور الوقت. وقد وجد هذا الإجراء التلقائي لدعم كبير البحوث والبحوث السريرية مقعد، وتمكين الكشف الموحد للكثير من المواد المسببة للحساسية و / أو مكونات الحساسية، وتحديد احتمال حساسية عبر التفاعلات التي لم يكن من السهل الكشف عنها قبل ظهور كردز. وعلاوة على ذلك، يمكن أن تكتمل إجراءات الاختبار كله مع رقابة صارمة على الجودة، مما يسمح للطرق الإنتاجية العالية، على النحو المطلوب في مسح لمنطقة جغرافية كبيرة. على الرغم من أن إجراء الاختبار يتم تشغيله في الغالب بواسطة وحدة تحكم حاسوبية، فإنه يجب توجيه الانتباه إلى العديد من القضايا الهامة. ومن الضروري استخدام الصك في الامتثال الدقيق لدليل المستعمل؛ أي انحراف يمكن أن يؤدي إلى أخطاء الاختبار لا لزوم لها، الأضرار الميكانيكية، أو الخسائر الشخصية من شعاع الليزر أو الجهد الكهربائي العالي. دائما أرتأكد من أن منحنى المعايرة السليم والصحيح قد تم تخزينه في النظام، لأن هذا مرتبط بدقة الاختبار. وإلا، ينبغي قياس تركيز سيج من محدد محدد قبل الاختبارات عينة المصل. بعد ذلك، قد يقوم النظام تلقائيا بحساب وتخزين منحنى المعايرة لاستخدامها لاحقا. كما هو الحال مع التقنيات المخبرية الأخرى، فمن المهم أيضا لمراقبة سلامة التلاعب في مصل الدم البشري لحماية الفنيين من العدوى وتجنب تلويث البيئة.
ولأول مرة، وباستخدام محلل المقايسة المناعية المؤتمتة بالكامل كنهج كرد، أظهرت هذه الدراسة انتشارا كبيرا لإيجابية بيرمودا عشب سيج (22.5٪) لدى المرضى الذين يعانون من حساسية الأنف و / أو الربو في قوانغتشو، جنوب الصين. وبما أن عشب تيموثي و سكانولس همولوس ليست شائعة، حتى غير موجودة، في قوانغتشو، فإن معدلات إيجابية عشب تيموثي (13.6٪) و همولوس سكاندنز سيج (7.0٪) مأي أن يعزى إلى التفاعل عبر حبوب اللقاح العشب.
من خلال تحليل مسببات الحساسية لقاح العشب، كان من الواضح أن جميع المرضى تيموجى العشب إيغ إيجابية كانت أيضا إيجابية لمستضد العشب تيموثي فل فل 4. كان عدد قليل جدا (17.1٪) اختبار إيجابي ل فل p 1، والذي كان مختلفا بشكل مدهش من البيانات في أوروبا، حيث معدل الإيجابية إلى فل p 1 هو أعلى بكثير من ذلك من ف ص 4 18 ، 20 ، 21 . وبما أن فل p 1 هو العنصر الرئيسي لعشب تيموثي، فإن المعدل السائد للإيجابية فل p 4 على فل p 1 في هذه الدراسة قد يشير أيضا إلى احتمال حدوث تفاعل متبادل بخلاف الحساسية "الحقيقية"، لأن فل p 4 يشترك في التشابه الهيكلي مع كسد وعدد من المواد المسببة للحساسية الأخرى، بما في ذلك الأشجار والخضار والفواكه الاستوائية 19 ، 22 ، 23، 24 . الأهمية السريرية لهذه الملاحظة يمكن أن يكون أن غالبية تيموثي المرضى إيجابية العشب في هذه الدراسة لا ينبغي أبدا أن نصح لتلقي تيموثي العشب العلاج المناعي، والذي يستخدم حاليا فل p 1 25 .
يجب ذكر العديد من القيود على أساليب الدراسة والتقنيات. أولا، منذ ما يصل إلى 3 شرائط المعايرة مختلفة يمكن وضعها في ماصة / صينية كاشف في محلل المناعية، في الحد الأقصى، ويمكن تشغيل ثلاث دفعات اختبار في نفس الوقت. وعندما يتطلب الأمر عبء عمل ثقيلا، كما هو الحال في استقصاء إقليمي أكبر، فإنه لا يزال يتطلب قدرا كبيرا من الوقت للتجهيز. ثانيا، التفاعل المتقاطع مع إيغا الإنسان، إيغد، إيغم، ومفتش غير موجود في تركيزات الفسيولوجية عند استخدام محلل من هذه الدراسة، لذلك هناك حاجة إلى أساليب التحقيق الأخرى عندما عبر التفاعل مع هذه المناعي المعنية. ثالثا، على الرغم من تعقيد ديفيكه، والنتائج التي تم التوصل إليها مع محلل المناعية مؤتمتة بالكامل لا ينبغي أن تحل محل غيرها من التحقيقات المخبرية، والتقييمات السريرية، والخبرة الطبيب عندما يتم إجراء تشخيص نهائي. رابعا، بسبب التأخر في إدخال حساسية كرد في الصين، العديد من المنتجات التجارية من مكونات حبوب اللقاح العشب شبه الاستوائية غير متوفرة أو لم يتم الموافقة على البحوث حتى وقت قريب. لذلك، باستخدام هذه التقنية كنهج كرد للمواد المسببة للحساسية يعتمد إلى حد كبير على توافر التجاري من إمدادات المنتجات من الشركة المصنعة للاستخدام المحدد في المنطقة. في المناطق الاستوائية وشبه الاستوائية مع تعقيد في كل مكان من حبوب اللقاح النباتي، يمكن أن تكون دراسة كرد غير كافية وصعبة بسبب عدم وجود منتجات حساسية مسببة للاختبارات. مثل هذه المعضلة يمكن أن تضر كثيرا من كفاءة هذه التقنية.
ومع ذلك، إلى آخر من معرفتنا، وهذه هي الدراسة الرائدة التي تستخدم نهج كرد رo فحص الحساسية لمسببات حساسية غبار الطلع في جنوب الصين. ويمكن مواصلة الدراسات في هذا السياق والتحقق من صحة هذه النتائج.
حتى الآن، وقد تم قبول التقنيات باستخدام محلل المناعي التلقائي بالكامل كمعيار الذهب للاختبارات في المختبر سيج اختبار 26 ، 27 . وبالنظر إلى البيانات المحدودة جدا حول حساسية الحساسية داخل إقليم الصين الشاسع، فإن الدراسات ذات العينة الكبيرة التي تستخدم المقايسة المناعية المؤتمتة بالكامل كنهج كرد يمكن أن تسد الثغرات وتضيف إلى الأدلة المتوفرة في هذا المجال. ومن المهم أن نلاحظ أن مثل هذه الدراسات، عادة ما تكون متعددة المراكز والتعاون على الصعيد الوطني، قد تتطلب الربط الشبكي من المقايسات المناعية على أساس بروتوكول للتوحيد القياسي.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب ليس لديهم ما يكشف.
Acknowledgments
نشكر يويمينغ سو على مساعدته في إعداد هذا الرقم. وقد تم تمويل هذه الدراسة من قبل مؤسسة قوانغدونغ للعلوم والتكنولوجيا (مشروع رقم: 2014A020212352)، ومكتب التعليم قوانغتشو (1201630044؛ 1201630393) والمؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (نسفك 81572063؛ نسفك 81601394).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| ImmunoCAP 1000 Instrument | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 12-3800-01 | |
| Phadia Information Data Manager Software Package | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 12-3801-11 | |
| Software Package, ImmunoCAP 1000 | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 12-3801-12 | |
| g2 (Bermuda grass) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-4131-01 | |
| g6 (Timothy grass) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-4100-01 | |
| w22 (Japanese Hop) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-4452-01 | |
| g216 (nCyn d 1) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-4972-01 | |
| g205 (rPhl p 1) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5234-01 | |
| g208 (nPhl p 4) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5288-01 | |
| g215 (rPhl p 5b) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5338-01 | |
| g209 (rPhl p 6) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5289-01 | |
| g210 (rPhl p 7) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5290-01 | |
| g211 (rPhl p 11) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5291-01 | |
| g212 (rPhl p 12) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5292-01 | |
| o214 Cross-reacting carbohydrate determinants (CCDs) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5339-01 | |
| Specific IgE Conjugate 400 | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9310-08 | |
| Specific IgE Calibrator Strip | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9459-08 | |
| Specific IgE Curve Control Strip | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9312-08 | |
| Specific IgE Anti-IgE ImmunoCAP | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-4417-01 | |
| ImmunoCAP Specific IgE Negative Control | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9445-01 | |
| ImmunoCAP Specific IgE Control L | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9528-01 | |
| ImmunoCAP Specific IgE Control M | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9529-01 | |
| ImmunoCAP Specific IgE Control H | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9530-01 | |
| Development Solution | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9439-08 | |
| Stop Solution | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 34-2271-58 | |
| Washing Solution | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9202-08 | |
| FluoroC | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9264-01 | |
| Maintenance Solution Kit | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9476-01 |
References
- Scadding, G. K. BSACI guidelines for the management of allergic and non-allergic rhinitis. Clin Exp Allergy. 38 (1), 19-42 (2007).
- Pollart, S. M., Reid, M. J., Fling, J. A., Chapman, M. D., Platts-Mills, T. A. Epidemiology of emergency room asthma in northern California: association with IgE antibody to rye grass pollen. J Allergy Clin Immunol. 82 (2), 224-230 (1988).
- Wang, Q. Lower airway inflammation and hyperresponsiveness in non-asthmatic patients with non-allergic rhinitis. J Thorac Dis. 7 (10), 1756-1764 (2015).
- Ma, Y. The link between mold sensitivity and asthma severity in a cohort of northern Chinese patients. J Thorac Dis. 7 (4), 585-590 (2015).
- Luo, W. Major grass pollen allergens and components detected in a southern Chinese cohort of patients with allergic rhinitis and/or asthma. Mol Immunol. 78, 105-112 (2016).
- Zhang, Y., Zhang, L. Prevalence of allergic rhinitis in china. Allergy Asthma Immunol Res. 6 (2), 105-113 (2014).
- Zeng, G., Zheng, P., Luo, W., Huang, H., Wei, N., Sun, B. Longitudinal profiles of serum specific IgE and IgG4 to Dermatophagoides pteronyssinus allergen and its major components during allergen immunotherapy in a cohort of southern Chinese children. Mol Immunol. 74, 1-9 (2016).
- Kleine-Tebbe, J., Matricardi, P. M., Hamilton, R. G. Allergy work-up including component-resolved diagnosis: how to make allergen-specific immunotherapy more specific. Immunol Allergy Clin North Am. 36 (1), 191-203 (2016).
- Sun, B., Zheng, P., Wei, N., Huang, H., Zeng, G. Co-sensitization to silkworm moth (Bombyx mori) and 9 inhalant allergens among allergic patients in Guangzhou, southern China. PLoS One. 9 (5), e94776 (2014).
- Zeng, G. Component-resolved diagnostic study of Dermatophagoides pteronyssinus major allergen molecules in a southern Chinese cohort. J Investig Allergol Clin Immunol. 25 (5), 343-351 (2015).
- Allergic Rhinitis and Its Impact on Asthma (ARIA). Management of Allergic Rhinitis and Its Impact on Asthma Pocket Guide. , Available from: http://www.whiar.org/docs/ARIA_PG_08_View_WM.pdf (2015).
- Global Initiative for Asthma (GINA). Pocket Guide for Asthma Management and Prevention. , Available from: http://ginasthma.org/wp-content/uploads/2016/01/GINA_Pocket_2015.pdf (2015).
- Liu, J., Guo, A., Guo, H. Morphological variation and types of Cynodon dactylon. Acta Prataculture Sinica. 12 (6), 99-104 (2003).
- Zhang, H., Xi, J. Study on the germplasm resource and ecological characteristics of wild carpet grass (Axonopus compressus) in Guangdong. Grassland and Turf. 13 (1), 25-28 (2005).
- Kao, S. H., Su, S. N., Huang, S. W. Sub-proteome analysis of novel IgE-binding proteins from Bermuda grass pollen. Proteomics. 5 (14), 3805-3813 (2005).
- Ouyang, Y. H., Zhang, D. S., Fan, E. Z., Li, Y., Zhang, L. Correlation between symptoms of pollen allergic rhinitis and pollen grain spreading in summer and autumn. Zhonghua Er Bi Yan Hou Tou Jing Waike Zazhi. 47 (8), 623-627 (2012).
- Westritschnig, K. Analysis of the sensitization profile towards allergens in central Africa. Clin Exp Allergy. 33 (1), 22-27 (2003).
- Rossi, R. E., Monasterolo, G., Monasterolo, S. Measurement of IgE antibodies against purified grass-pollen allergens (Phl p 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 11, and 12) in sera of patients allergic to grass pollen. Allergy. 52 (12), 1180-1185 (2001).
- Zafred, D., Nandy, A., Pump, L., Kahlert, H., Keller, W. Crystal structure and immunologic characterization of the major grass pollen allergen Phl p 4. J Allergy Clin Immunol. 132 (3), 696-703 (2013).
- Chabre, H. Molecular variability of group 1 and 5grass pollen allergens between Pooideae species: implications for immunotherapy. Clin Exp Allergy. 40 (3), 505-519 (2010).
- Mari, A. Skin test with a timothy grass (Phleum pratense) pollen extract vs.IgE to a timothy extract vs. IgE to rPhl p 1 rPhl p 2, nPhl p 4, rPhl p 5, rPhl p 6, rPhl p 7, rPhl p 11, and rPhl p 12: epidemiological and diagnostic data. Clin Exp Allergy. 33 (1), 43-51 (2003).
- Grote, M., Stumvoll, S., Reichelt, R., Lidholm, J., Rudolf, V. Identification of an allergen related to Phl p 4, a major timothy grass pollen allergen, in pollens, vegetables, and fruits by immunogold electron microscopy. Biol Chem. 383 (9), 1441-1445 (2002).
- Andersson, K., Lidholm, J. Characteristics and immunobiology of grass pollen allergens. Int Arch Allergy Immunol. 130 (2), 87-107 (2003).
- Tripodi, S. Molecular profiles of IgE to Phleum pratense in children with grass pollen allergy: implications for specific immunotherapy. J Allergy Clin Immunol. 129 (3), 834-839 (2012).
- Stumvoll, S., et al. Purification, structural and immunological characterization of a timothy grass (Phleum pratense) pollen allergen Phl p 4, with cross-reactive potential. Biol Chem. 383 (9), 1383-1396 (2002).
- Wood, R. A., Segall, N., Ahlstedt, S., Williams, P. B. Accuracy of IgE antibody laboratory results. Ann Allergy Asthma Immunol. 99 (1), 34-41 (2007).
- Wang, J., Godbold, J. H., Sampson, H. A. Correlation of serum allergy (IgE) tests performed by different assay systems. J Allergy Clin Immunol. 121 (5), 1219-1224 (2008).
