Summary
Este trabajo describe un protocolo que utiliza un enfoque resuelto por componentes para estudiar la sensibilización a los alérgenos de polen de hierba en una cohorte de pacientes del sur de China con rinitis alérgica y / o asma.
Abstract
La sensibilización al polen de la hierba impone un riesgo global para las enfermedades alérgicas de las vías respiratorias. Aunque la prevención depende de la investigación local de los alérgenos del polen, los datos sobre este tema están limitados en el sur de China. Todos los datos disponibles se obtuvieron mediante cuestionarios de autoinforme, pruebas cutáneas y pruebas de IgE totales o específicas utilizando extractos crudos. Por muchas razones, estos métodos no son confiables. Se examinó la reactividad sérica sérica a los alérgenos de Bermuda, Timothy grass y Humulus scandens en una cohorte de pacientes del Gran Cantón (la ciudad más grande del sur de China y sus afueras) con rinitis alérgica y / o asma utilizando un analizador de inmunoensayo completamente automatizado como componente (CRD).
Por primera vez, se demostró una prevalencia considerablemente alta de la positividad de la hierba de Bermuda en los residentes del sur de China con rinitis alérgica y / o asma. En estos pacientes, una sutil prevalencia de sensibilizaciónA Timothy grass y Humulus scandens , que pueden surgir de la reactividad cruzada, ya que los dos últimos no son comunes en la región. Esto también fue apoyado por la detección de componentes alergénicos.
Los analizadores de inmunoanálisis totalmente automatizados pueden ofrecer una consistencia satisfactoria entre regiones, laboratorios e instituciones y con el tiempo. La automaticidad del instrumento puede permitir una detección estandarizada que no se hubiera revelado fácilmente antes del advenimiento del CRD.
Este es un estudio que utiliza un enfoque CRD para investigar la sensibilización a los alérgenos de polen de hierba en el sur de China. Se añade a la evidencia actual en la literatura. Se necesitan estudios futuros para validar estos hallazgos. Sin embargo, aunque el CRD es una herramienta útil, los hallazgos realizados con el analizador de inmunoanálisis totalmente automatizado no deben sustituir a otras investigaciones de laboratorio, evaluaciones clínicas y experiencia médica.
Introduction
El polen de pasto representa casi el 50% de las alergias relacionadas con la inmunoglobulina E (IgE) y, debido a su naturaleza aérea, impone un riesgo global de enfermedades alérgicas de las vías respiratorias, en particular asma y rinitis alérgica 1 , 2 , 3 , 4 . La prevención contra alergias al polen de hierba en una región se basa en información sobre la distribución local de los alérgenos de polen. Desafortunadamente, el espectro de los alérgenos sensibilizantes varía de un lugar a otro, una observación generalmente conocida como especificidad regional.
En China, un vasto territorio de Asia oriental, la especificidad regional de la sensibilización del polen de pasto se complica aún más por los limitados datos disponibles actualmente en la parte sur de este país durante las últimas décadas 5 . Esta escasez de datos ha conducido a una dificultad en mostrar el polen sensiTización en este gran país 6 . Además, los datos muy limitados sobre el sur de China se obtuvieron en gran medida a partir de cuestionarios de auto-reporte, pruebas de prick cutáneo (en lugar de pruebas de suero de laboratorio), IgE total (en lugar de IgE alergeno-específica) y detección de IgE a alérgenos En lugar de moléculas de componentes alergénicos).
El auto-reporte de síntomas alérgicos puede ser poco fiable cuando se trata de alérgenos específicos. Las pruebas cutáneas, aunque ampliamente accesibles, implican el uso de extractos alergénicos crudos no estandarizados, que pueden contener otros componentes sensibilizantes que confunden la interpretación de los resultados. La fiabilidad de la prueba cutánea también depende en gran medida de la manipulación hábil por los alergistas o enfermeras especializadas, el uso reciente de histamina y el cumplimiento del paciente (a veces muy difícil para los niños pequeños). La IgE total es útil para la detección de una alergia pero no determinaE ofender alérgenos en un paciente. Además, casi todos los alérgenos contienen una serie de moléculas de componente alergénico. La sensibilización a los componentes principales (Der p 1 y Der p 2 de los ácaros del polvo doméstico) puede sugerir una alergia "genuina" (alergia a un alérgeno específico, en lugar de una falsa positividad debido a reacciones cruzadas con otros alérgenos), pero la sensibilización A ciertos ( es decir, la reacción cruzada Der p 10, una tropomiosina) no puede 7 .
Antes de que se introdujeran los diagnósticos resueltos por componentes (CRD), estos decepcionantes retrocesos impedían los estudios sobre alergenos en China. CRD detecta con precisión los componentes de un alergeno mediante el uso de moléculas de alérgeno recombinante o purificado, por lo que la medición fácilmente cuantificable y caracterizable [ 8] . En décadas pasadas, los estudios de la alergia emplearon con frecuencia extractos crudos de alergenos que inevitablemente contienen una serie de componentes irrelevantes. Muchos de estos coLos componentes son inertes, pero ocasionalmente, algunos podrían conducir a confundir las reacciones positivas. El uso de moléculas alérgenas recombinantes o purificadas en CRD puede eludir esto y por lo tanto proporcionar una mejor exactitud de la prueba. Cuando se procesa en microarrays, un enfoque de CRD rastrea rápidamente o identifica la sensibilización a cientos de moléculas de alérgenos en sujetos individuales. Actualmente no existe un estudio de CRD bien diseñado sobre la sensibilización del polen de pasto en el sur de China. Idealmente, este estudio debería incluir una población local de considerable cobertura geográfica, explicar el polen de gramíneas comúnmente reportado en China y abordar los aspectos técnicos mencionados anteriormente. Para llegar a un nivel práctico de relevancia clínica y para facilitar el reclutamiento de muestras de suero, la investigación temprana sobre la sensibilización a los polen de hierba como alergenos inhalantes puede también centrarse en pacientes con trastornos alérgicos respiratorios, en lugar de en la población general.
Este trabajo describe un métodoUtilizado para probar la reactividad sígida del suero a la hierba Bermuda, Timothy grass y Humulus scandens en pacientes del Gran Cantón (la ciudad más grande del sur de China y sus afueras) con rinitis alérgica y / o asma utilizando el enfoque CRD 5 . Estos hallazgos sobre la sensibilización a estos peces de pasto subtropical y templado en el sur de China añaden evidencia importante a la que actualmente se encuentra en la literatura.
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Protocol
El protocolo del estudio, incluido el uso de muestras de suero humano, fue aprobado por el Comité de Ética, Primer Hospital Afiliado de la Universidad Médica de Guangzhou. Todos los participantes ofrecieron consentimiento informado por escrito, ya sea de forma independiente o vía sus padres (en el caso de los niños). El protocolo se ha registrado en línea (Chinese Clinical Trial Registry, Nº Reg .: ChiCTR-DCC-13004003, consulte http://www.chictr.org/cn/).
1. Identificación de la población de estudio
NOTA: El Repositorio de Información sobre Alergias del Laboratorio Principal de Enfermedades Respiratorias (AIR-SKLRD) es la principal fuente de reclutamiento de pacientes, ya que AIR es la base de datos más documentada de pacientes para pruebas alérgicas en el sur de China 9,10. AIR ha estado almacenando muestras de suero de pacientes durante casi una década. Brevemente, estas muestras almacenadas se prepararon previamente por centrifugación de 5 ml deF de sangre venosa flebotomizada durante 10 min a 3.000 xg y recuperando el sobrenadante. Las muestras de suero se colocaron en -80 ° C refrigeradores para el almacenamiento a largo plazo. Las muestras que cumplieron los criterios de inclusión de los pacientes estaban listas para usar en todas las pruebas del presente estudio.
- A partir de la base de datos de AIR, recoja datos sobre pacientes con rinitis alérgica y / o asma que se sometieron a exámenes de suero de alérgenos de hierba entre enero de 2013 y junio de 2015, el período de estudio prediseñado.
- Seleccione pacientes con rinitis alérgica leve o moderada y / o asma de acuerdo con las directrices de la Rinitis Alérgica y su Impacto en el Asma (ARIA) 11 y la Iniciativa Global para el Asma (GINA) 12 . Asignarlos como el "grupo de estudio".
- Excluir a los pacientes con registros médicos incompletos, los que se pierden en el seguimiento, los que se niegan a dar su consentimiento informado con respecto al uso de sus muestras de suero con fines científicos,Mmunodeficiencia, aquellos que actualmente están en inmunoterapia o agentes inmunomoduladores, o aquellos que tienen infecciones parasitarias.
- Seleccione una cohorte contemporánea de pacientes con alergias no respiratorias (eccema, dermatitis alérgica y alergia alimentaria) de acuerdo con los mismos criterios de exclusión y asignarlos como el "grupo control".
- Asegúrese de que las muestras de suero fueron recolectadas antes de que se hayan administrado recetas o tratamientos para minimizar los efectos de confusión en los hallazgos de laboratorio. Excluya cualquier muestra de suero que no cumpla con este requisito.
- Asegúrese de que todos los sujetos son residentes permanentes de todas las partes del Gran Cantón ( es decir, nacido o ha vivido allí por más de 10 años).
2. Flujo del Estudio y Mediciones de Interés
- Recuperar las muestras de suero de pacientes elegibles de la bio-banco. Para probar un componente alérgeno / alérgeno, use 140 μl de suero (incluyendo 100 μL para llenarHasta el espacio muerto).
NOTA: El volumen sérico total máximo necesario para cada paciente en este estudio es: 3 alérgenos específicos y 8 componentes alérgenos, sIgE = 140 μL * 11 = 1.540 μL. - Cuando utilice este instrumento, pruebe primariamente las muestras de suero para SIGE a alérgenos enteros de Bermuda, Timothy grass y Humulus scandens . Siga las instrucciones de la Sección 3.
NOTA: Estos pólenes fueron seleccionados para las mediciones porque Bermuda grass 13 , 14 , 15 y Humulus scandens 16 han sido ampliamente reportados en China, mientras que Timothy grass 17 , 18 , 19 es una especie vegetal típica que vive en ambientes que van de tropical a templado Y es el más estudiado en todo el mundo. - Secundariamente, probar las muestras de suero identificadas en el paso 2.3 para tenerSIGES a alergenos completos para la presencia de SIGES a componentes alérgenos de Bermuda [Cyn d 1 (g216)], Timothy [Phlp1 (g205), Phlp4 (g208), Phlp5 (g215), Phlp6 (g209 ), Phlp7 (g210), Phlp11 (g211) y Phlp12 (g212)], y determinantes de carbohidratos reactivos cruzados [CCD (o214)]. Siga las instrucciones de la Sección 3.
3. Procedimiento de prueba completamente automatizado utilizando el sistema de análisis inmunoensayo
NOTA: Todo el procedimiento de la prueba de alergia de la sIgE, que es totalmente automatizado y ha sido descrito en otro lugar 7 , 8 , 9 , 10 , sigue el protocolo del fabricante.
- Inicie el analizador de inmunoensayo completamente automatizado ( por ejemplo, ImmunoCAP1000) y úselo para realizar el inmunoensayo durante todo el estudio. Active el equipo de administración de datos de información (IDM).
NOTA: El inmunoensayo analYzer está rutinariamente en modo de espera. - Con la "alimentación primaria" activada, encienda la "alimentación del sistema" y espere 3 minutos hasta que se inicie el software incorporado. Haga clic en "Load Rinse Solution" y "Load Washing Solution".
- Añada 140 μl de suero a un vial para cada prueba del componente alérgeno / alérgeno. Etiquetar cada vial que contenga 140 μl de suero con un número de identificación único para cada paciente.
- Desde la interfaz IDM, ejecute los siguientes pasos haciendo clic en el menú.
- Compruebe la ventana "Solicitar lista" en el IDM para asegurarse de que "sIgE" es el método de prueba de elección.
- Cargue los tubos de muestra en los bastidores de muestra y los tubos de control de calidad en los bastidores de control de calidad con códigos de barras.
NOTA: Para cada paciente se planificó inicialmente la prueba para sIgE a 3 alérgenos específicos y 8 componentes alérgenos, o 346 * 11 (3,806) tubos de muestra. Para cada tubo de muestra, 3 tubos de control de calidadQue contienen niveles bajos, medios y altos de control sIgE (ver Tabla de Materiales para más detalles). Finalmente, sólo 58 pacientes que dieron positivo en la prueba primaria (paso 2.3) fueron examinados en la prueba secundaria (paso 2.3). La carga de los tubos se puede ajustar automáticamente en la consola del ordenador. - Seleccione "Load Reagents" en la pantalla "Assay Processing". Completar la carga de la muestra y las bandejas de control de calidad, solución de desarrollo, conjugado, calibradores, portador, puntas de pipeta, solución de parada y solución de lavado de acuerdo con la "Lista de carga" (consulte la Tabla de materiales para más detalles).
- En "Cargar e iniciar", presione "Aceptar".
NOTA: Al final de la medición, los resultados aparecen en el IDM. - Desde la interfaz IDM, seleccione los datos que se van a exportar. Haga clic en "Menú", "Aprobar" y "Guardar como" y exporte los resultados de medición de SIGE como un archivo de hoja de cálculo. Importe el archivo de hoja de cálculo a un software estadístico ( por ejemplo, SPSS) 10 . Utilizando un módulo específico para los coeficientes de Spearman del menú SPSS, analice las correlaciones en la sensibilización entre estos pollos de hierba (sIgE positivo a todo el alergeno) y los componentes del polen (sIgE positiva a las moléculas alérgenas).
4. Definición de la reactividad de SIGE
NOTA: Para una muestra de suero sin diluir, el rango de medición de IgE específica es de 0,35 a 100 kU / L.
- Diluir las muestras con valores sIgE> 100 kU / L 1: 5 y volver a ensayar. Cuando el valor se mantenga superior a 100 kU / L, proceda a nuevas diluciones hasta alcanzar un nivel final de hasta 1.000 kU / L.
- Basándose en el valor umbral de 0,35 kU / L, considere un nivel sIGe superior a 0,35 kU / L para ser positivo 5 , 7 , 10 . Calificar el reactiv(≥0.35 y <0.70 kU / L), clase 2 (≥0.70 y <3.50 kU / L), clase 3 (≥3.50 y <17.50 kU / L), clase 4 (≥ 17,50 y <50,00 kU / L), clase 5 (≥50,00 y <100,00 kU / L) y clase 6 (≥100,00 kU / L).
5. Análisis estadístico
- Analizar los datos con software estadístico ( por ejemplo, SPSS) 10 . Reportar los datos cuantitativos como la media y la desviación estándar, los datos cualitativos como la mediana y los rangos intercuartiles (IQR), y los datos categóricos como la proporción de los resultados positivos.
- Utilice una prueba de ji cuadrado para la comparación de proporciones entre grupos, una prueba t no emparejada para datos cuantitativos y una prueba de suma de rangos para datos cualitativos.
- Utilice la prueba de Pearson para los análisis de correlación entre datos paramétricos, con los coeficientes de correlación expresados como "r" y el test de Spearman para valores no paramétricos, con tCoeficientes de correlación expresados como " r s ". Considere la significación estadística para ser cuando P- valores <0,05.
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Representative Results
El analizador de inmunoensayo totalmente automatizado utilizado en este estudio tiene una estructura de fase sólida cubierta con alergenos de acoplamiento covalente o componentes alérgenos que reaccionan con las moléculas de interés (sIgE) en muestras de suero del paciente. Con un programa automático, el analizador elimina todas las IgE no específicas con 150 μl de solución de enjuague y lo repite 5 veces. A continuación, agrega anticuerpos anti-IgE marcados con enzima (50 μl) para generar un complejo. El anticuerpo anti-IgE marcado con enzima (conjugado) es un anticuerpo secundario que se une a una IgE específica. Los anticuerpos anti-IgE no unidos se eliminan lavando con 150 μl de solución de lavado (repetida 3 veces). El complejo unido se trata con un agente revelador (50 μl) durante 9 minutos a 37 ° C. El agente revelador es un agente digestivo enzimático que corta todos los anticuerpos anti-IgE unidos. Este último emite fluorescencia bajo condiciones alcalinas. La reacción se detiene conLa adición de solución de parada alcalina. Después de esto, el instrumento comprime la estructura de fase sólida para extraer el eluido y medir la fluorescencia del eluato resultante a una longitud de onda de 470 nm. La fluorescencia está linealmente correlacionada con el nivel absoluto de las moléculas de analito de interés en el eluato. Un mayor valor de fluorescencia significa más SIGE en la muestra de suero. Para interpretar los resultados de la prueba, el sistema transforma automáticamente las respuestas de las muestras a concentraciones usando una curva de calibración. Los datos de medición se transfieren electrónicamente al software IDM, que integra funciones para el cálculo de los resultados analíticos, el cálculo de las estadísticas y el informe de resultados.
Siguiendo los criterios de inclusión y exclusión, el presente estudio investigó el suero de 346 pacientes. El grupo de estudio incluyó 78 sujetos con rinitis alérgica sola, 92 con asma sola y 88 concomitantesCon asma y rinitis. El grupo control incluyó 88 pacientes con alergias no respiratorias. Estos pacientes tenían entre 1 y 87 años de edad y se confirmó que eran residentes permanentes de todas las partes del Gran Guangzhou, la región de estudio objetivo. Todos los grupos de estudio y el grupo control fueron comparables en características demográficas y sociales, incluyendo el género, la edad y la historia familiar. De los pacientes del grupo de estudio, el 22,5% dio positivo a Bermuda, 13,6% a Timothy y 7,0% a Humulus scandens . En el grupo de estudio, la tasa de sensibilización a cualquier polen de hierba fue mucho mayor que en el grupo de control ( Tabla 1 ). Todos los pacientes de Bermuda grass sIgE-negative fueron también negativos para Timothy grass y Humulus scandens . Es interesante observar que los pacientes con rinitis alérgica y / o asma demostraron una tasa notablemente más alta de sensibilización a la hierba Bermuda (n = 58, 22.5%) que aquellos con otras alergias (n = 4, 4.5%).
Humulus scandens o CCD fue inferior al 30%. Por el contrario, los pacientes con reactividad de la clase 4 de Bermuda grass sIgE tuvieron un 67-100% de probabilidad de positividad concomitante a Cyn d 1, Timothy grass alergenos, Humulus scandens o CCD ( Figura 1 ). Los niveles de reactividad de la berga de bermudas mostraron una correlación significativa, con posibilidades de positividad para otras IgE de polen de hierba ( r s = 0,669, P <0,001).
La sensibilización del pasto Timothy fue evaluada adicionalmente por sIgE a los componentes del pasto Timothy. Entre los 35 pacientes con Timothy grass positivo, el componente alergénico más frecuentemente detectado fue Phl p 4 (100%, 35/35), seguido de Phl p 1(17,1%, 6/35). Tres pacientes cada uno (3/35, 8,6%) fueron positivos para cualquiera de Phl p 5, 6, 7, 11 y 12 ( Tabla 2 ). Los niveles séricos séricos de Phl p 4 se correlacionaron fuertemente con los niveles totales de alergeno de hierba de Timothy y de SIGC de CCD ( r s = 0,941 y 0,928, respectivamente, P <0,001, Tabla 3 ). El 41,4% (24/58) de los pacientes con césped positivo en Bermuda y el 68,6% (24/35) de los pacientes sensibilizados con pasto Timothy fueron positivos al CCD. El análisis de correlación de rangos de Spearman mostró una asociación significativa en la sensibilización entre CCD y otros alérgenos de hierba ( Tabla 3 ).
Figura 1: Co-sensibilización entre pacientes positivos a Bermuda Grass sIgE.
Esta figura muestra el porcentaje de pacientes con diferentes clases de reactividad de sIGe a la hierba de Bermuda (n = 58) y un concomitLa sensibilización de la hormiga a la hierba Timothy, Humulus scandens , CCD, y otros componentes alergénicos de hierba. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
| Tasa de pruebas positivas [% (n / pacientes)] | |||
| grama | Hierba de Timothy | Humulus scandens | |
| Los pacientes con AR y / o AS | 22,5% (58/258) †† ‡ | 13,6% (35/258) † | 7,0% (18/258) |
| Pacientes con AR | 21,8% (17/78) †† | 10,2% (8/78) | 7,7% (6/78) |
| Pacientes con AS | 22,8% (21/92)Unesdoc.unesco.org unesdoc.unesco.org | 14,1% (13/92) † | 5,4% (5/92) |
| Pacientes con AR y AS | 22,7% (20/88) †† | 15,9% (14/88) | 8,0% (7/88) |
| Años | |||
| <14 años o menos | 18,6% (8/43) | 14,0% (6/43) | 7,0% (3/43) |
| > 4 años | 23,3% (50/215) | 13,5% (29/215) | 7,0% (15/215) |
| Sexo | |||
| Masculino | 25,7% (35/136) | 13,9% (19/136) | 7,4% (10/136) |
| Hembra | 18,8% (23/122) | 13,1% (16/122) | 6,6% (8/122) |
| Pacientes con otras alergias | 4,5% (4/88) ** | 1,1% (1/88) ** | 0 * |
Tabla 1: Pacientes con Pruebas positivas para Bermeja, Timothy Grass y Humulus scandens basadas en la Entidad de la Enfermedad y los Detalles Demográficos. Una mayor proporción de pacientes con enfermedades respiratorias alérgicas fue positiva para la hierba de Bermuda (χ 2 = 14.35, P <0.001), Timothy grass (χ 2 = 10.88, P <0.001) y Humulus scandens (χ 2 = 5.14, P = 0.02 ) Frente a los otros controles de alergia ( ** P <0,01, * P <0,05). La proporción de pacientes con una prueba de bermuda positiva fue notablemente mayor que la proporción de pasto Timothy ( ‡; P <0,05) y Humulus scandens ( †† P <0,01). La proporción de pacientes con un test de gramíneas Timothy positivo fue mayor que la de Humulus scandens ( † P <0.05). La proporción de pruebas positivas a Bermuda grass, Timothy grass y Humulus scandens sIgE no varió significativamente entre los grupos menores y adultos (χ 2 = 0.07, P = 0.79, χ 2 = 0.06, P = 0.80, χ 2 = 0.11, P = 0,74, respectivamente). Las tasas de sensibilidades de polen de hierba no fueron estadísticamente diferentes entre machos y hembras (χ 2 = 1.338, P = 0.25, χ 2 = 0.063, P = 0.80, χ 2 = 0.38, P = 0.54, respectivamente). Del mismo modo, no se indicaron diferencias significativas en las tasas de sensibilidad entre los pacientes con rinitis y asma (χ 2 = 0,030, P = 0,985, χ 2 P = 0,558; $ Χ $ = 0,528, P = 0,768; respectivamente).
| Pacientes (%) | Phl p 4 | Phl p 1 | Phl p 5 | Phl p 6 | Phl p 11 | Phl p 7 | Phl p 12 | |
| 28 (80,0%) | + | |||||||
| 4 (11,4%) | + | + | ||||||
| 1 (2,9%) | + | + | + | + | + | + | ||
| 2 (5,7%) | + | + | + | ++ | + | + | ||
| Total | 35 (100%) | 6 (17,1%) | 3 (8,6%) | 3 (8,6%) | 3 (8,6%) | 3 (8,6%) | 3 (8,6%) | |
| SIgE a (kU / L) | 0,52, 0,06-2,02 | 0,02, 0,01-0,10 | 0,04, 0,03 - 0,24 | 0,12, 0,03 - 0,34 | 0,05, 0,02 - 0,27 | 0,03, 0,02 - 0,36 | 0,10, 0,04 - 0,28 |
Tabla 2: Sensibilización de Timothy Grass según la positividad de sIgE y niveles de componentes de Timothy Grass (N = 35). +, Pruebas positivas; A , sIgE niveles (kU / L) se muestran como la mediana y IQR. De los 35 pacientes con sIgE positivos de Timothy grass, el 80,0% eran únicamente Phl p 4 positivos, mientras que el 11,4% eran positivos para Phl p 4 o Phl p 1.
| Alergeno | islas Bermudas | Timoteo | Humulus scandens | CCD |
| islas Bermudas | - | 0,709 ** | 0,682 ** | 0,565 ** |
| Cyn d 1 | 0,583 ** | 0,787 ** | 0,751 ** | 0,865 ** |
| Timoteo | 0,709 ** | - | 0,921 ** | 0,856 ** |
| Phl p 4 | 0,645 ** | 0,941 ** | 0,886 * | 0,928 ** |
| Phl p 1 | 0,616 ** | 0,681 ** | 0,712 ** | 0.507 ** |
| Phl p 5 | 0,46 | 0,273 | 0,590 * | 0,624 * |
| Phl p 6 | 0.445 | 0,306 | 0,583 * | 0,569 |
| Phl p 7 | 0,681 * | 0,481 | 0,632 * | 0,531 |
| Phl p 11 | 0,589 * | 0,372 | 0,620 * | 0,568 |
| Phl p 12 | 0,671 * | 0.411 | 0,565 | 0,446 |
| Humulus scandens | 0,682 ** | 0,921 ** | - | 0,853 ** |
Tabla 3: Coeficientes de correlación † para la positividad entre CCD y los alérgenos de polen de hierba. † se presenta como el coeficiente de correlación r s ; Los análisis de correlación de Spearman se realizaron para este conjunto de datos no paramétrico. * P <0,05, ** P <0,01.
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Discussion
Los analizadores de inmunoanálisis totalmente automatizados pueden ofrecer una consistencia satisfactoria entre regiones, laboratorios e instituciones y con el tiempo. Se ha descubierto que un procedimiento automático de este tipo respalda sustancialmente la investigación de laboratorio y los estudios clínicos, permite la detección estandarizada de muchos alergenos y / o componentes de alérgenos e identifica probables reacciones cruzadas de alergenos que no se habrían revelado fácilmente antes del advenimiento de los CRD. Además, todo el procedimiento de prueba puede completarse con un estricto control de calidad, lo que permite métodos de alto rendimiento, como se requiere en una encuesta de una gran región geográfica. Aunque el procedimiento de prueba es en su mayoría ejecutado por una consola de computadora, varios problemas críticos deben ser llamados a la atención. Es obligatorio que el instrumento se utilice en cumplimiento riguroso con el manual del usuario; Cualquier aberración podría resultar en errores de prueba innecesarios, daños mecánicos o accidentes personales debido al rayo láser o al alto voltaje eléctrico. Siempre esAsegúrese de que se ha almacenado una curva de calibración adecuada y correcta en el sistema, ya que está relacionada con la precisión de la prueba. De lo contrario, la concentración de sIgE de un calibrador especificado debe medirse antes de las pruebas de muestras de suero. Posteriormente, el sistema puede calcular y almacenar automáticamente la curva de calibración para su uso posterior. Al igual que con otras técnicas de laboratorio, también es importante observar la seguridad de la manipulación del suero humano para proteger a los técnicos de infecciones y evitar contaminar el medio ambiente.
Por primera vez, utilizando un analizador de inmunoensayo totalmente automatizado como un enfoque CRD, este estudio mostró una prevalencia considerable de la positividad de la hierba Bermuda (22,5%) en pacientes con rinitis alérgica y / o asma en Guangzhou, sur de China. Puesto que Timothy grass y Humulus scandens no son comunes, ni siquiera existen en Guangzhou, las tasas de positividad de Timothy grass (13.6%) y Humulus scandens sIgE (7.0%) mPueden atribuirse a la reactividad cruzada entre los pollos de gramíneas.
Al analizar los alérgenos de polen de hierba, se demostró claramente que todos los pacientes con IgE Timothy grass positivos eran también positivos para el antígeno de hierba Timothy específico Phl p 4. Muy pocos (17,1%) dieron positivo a Phl p 1, que fue sorprendentemente diferente de los datos En Europa, donde la tasa de positividad a Phl p 1 es mucho mayor que la de Phl p 4 18 , 20 , 21 . Puesto que Phl p 1 es el componente principal de la hierba Timothy, la tasa predominante de Phl p 4 positividad sobre Phl p 1 en esta población de estudio también puede sugerir probables reactividad cruzada que no sea "genuina" sensibilización, porque Phl p 4 comparte una similitud estructural Con CCD y un número de otros alérgenos, incluyendo árboles, verduras y frutas tropicales 19 , 22 , 23, 24 . La relevancia clínica de esta observación podría ser que la mayoría de Timothy grass positivos pacientes en este estudio nunca debería haber sido aconsejado para recibir Timothy hierba inmunoterapia, que actualmente utiliza Phl p [ 25] .
Deben mencionarse varias limitaciones de los métodos y técnicas de estudio. En primer lugar, ya que hasta 3 tiras de calibrador diferentes se pueden colocar en una bandeja de pipeta / reactivo en el analizador de inmunoensayo, al máximo, se pueden ejecutar tres lotes de prueba al mismo tiempo. Cuando se requiere una gran carga de trabajo, como en una encuesta regional más amplia, todavía se necesita una cantidad significativa de tiempo para procesar. En segundo lugar, la reactividad cruzada con IgA, IgD, IgM e IgG humana es inexistente a concentraciones fisiológicas cuando se utiliza el analizador de este estudio, por lo que se necesitan otros enfoques de investigación cuando se trata de reactividad cruzada con estas inmunoglobulinas. En tercer lugar, a pesar de la sofisticación delE, los hallazgos realizados con el analizador de inmunoanálisis totalmente automatizado no deben sustituir a otras investigaciones de laboratorio, evaluaciones clínicas y experiencia médica cuando se realiza un diagnóstico definitivo. Cuarto, debido a la introducción tardía de CRD de alergeno en China, varios productos comerciales de componentes polínicos de pasto subtropical no están disponibles o no han sido aprobados para investigación hasta hace poco. Por lo tanto, el uso de esta técnica como un enfoque CRD para alérgenos depende sustancialmente de la disponibilidad comercial de suministros de productos del fabricante para uso específico en una región. En regiones tropicales y subtropicales con una complejidad omnipresente de polen de plantas, un estudio de CRD puede ser insuficiente y difícil debido a la falta de productos alergénicos correspondientes para las pruebas. Este dilema podría comprometer enormemente la eficacia de esta técnica.
Sin embargo, a la última de nuestro conocimiento, este es un estudio pionero que utiliza el enfoque CRD tO examinar la sensibilización a los alérgenos de polen de hierba en el sur de China. Otros estudios pueden continuar en esta línea y validar estos hallazgos.
Hasta el momento, las técnicas que utilizan el analizador de inmunoensayo totalmente automático han sido aceptadas como el patrón oro para las pruebas de alergenos in vitro 26 , 27 . Dado el escaso número de datos sobre la sensibilización alergénica en el vasto territorio de China, los estudios de gran muestra que utilizan el inmunoensayo totalmente automatizado como un enfoque CRD pueden llenar las lagunas y añadir a la evidencia disponible en este campo. Es importante señalar que tales estudios, por lo general colabora- ciones multicéntricas y nacionales, pueden necesitar la creación de redes de inmunoensayos basados en un protocolo de normalización.
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Disclosures
Los autores no tienen nada que revelar.
Acknowledgments
Damos las gracias a Yueming Su por su ayuda en la preparación de la figura. Este estudio fue financiado por la Fundación Guangdong de Ciencia y Tecnología (Proyecto No .: 2014A020212352), la Oficina de Educación de Guangzhou (1201630044; 1201630393) y la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (NSFC 81572063; NSFC 81601394).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| ImmunoCAP 1000 Instrument | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 12-3800-01 | |
| Phadia Information Data Manager Software Package | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 12-3801-11 | |
| Software Package, ImmunoCAP 1000 | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 12-3801-12 | |
| g2 (Bermuda grass) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-4131-01 | |
| g6 (Timothy grass) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-4100-01 | |
| w22 (Japanese Hop) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-4452-01 | |
| g216 (nCyn d 1) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-4972-01 | |
| g205 (rPhl p 1) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5234-01 | |
| g208 (nPhl p 4) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5288-01 | |
| g215 (rPhl p 5b) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5338-01 | |
| g209 (rPhl p 6) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5289-01 | |
| g210 (rPhl p 7) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5290-01 | |
| g211 (rPhl p 11) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5291-01 | |
| g212 (rPhl p 12) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5292-01 | |
| o214 Cross-reacting carbohydrate determinants (CCDs) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5339-01 | |
| Specific IgE Conjugate 400 | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9310-08 | |
| Specific IgE Calibrator Strip | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9459-08 | |
| Specific IgE Curve Control Strip | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9312-08 | |
| Specific IgE Anti-IgE ImmunoCAP | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-4417-01 | |
| ImmunoCAP Specific IgE Negative Control | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9445-01 | |
| ImmunoCAP Specific IgE Control L | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9528-01 | |
| ImmunoCAP Specific IgE Control M | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9529-01 | |
| ImmunoCAP Specific IgE Control H | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9530-01 | |
| Development Solution | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9439-08 | |
| Stop Solution | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 34-2271-58 | |
| Washing Solution | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9202-08 | |
| FluoroC | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9264-01 | |
| Maintenance Solution Kit | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9476-01 |
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