Sektion Mammary Gland Ganze Mounts für Läsion Identifizierung
Summary
Wir entwickelten eine Methode zur erfolgreichen Entfernung, Verarbeitung, Sektion und Flecken, zur histopathologischen Auswertung, Mammagewebe, das ursprünglich auf Rutschen als ganze Reittiere fixiert worden war. Diese Methode kann die Sammlung und Auswertung von Brustdrüsen-Vollbehältern in Reproduktions- und Entwicklungsprüfungsstudien fördern.
Abstract
Die normale Brustdrüsenentwicklung kann durch die Exposition gegenüber Umweltgiftstoffen und pharmazeutischen Produkten, übermäßige Exposition gegenüber Hormonen und genetischen Veränderungen verändert werden. Mamma-Drüsen-Vollmontage sind eine kostengünstige Methode, um die Progression von morphologischen Veränderungen, die nach der Exposition auftreten können, zu erfassen. Allerdings, im späteren Leben, wenn Anomalien anfälliger zu entwickeln sind, kann alleiniges Vertrauen auf diese eine Methode nicht immer genug Informationen liefern, um eine korrekte Diagnose der Anomalie zu machen. Historisch gesehen wird bei chemischen Prüfrichtungsstudien eine einzelne Brustdrüse bei Nekropsie entfernt und als Hämatoxylin- und Eosin (H & E) -befleckter Abschnitt hergestellt. Die Einbeziehung der kontralateralen Mamma-Ganzkörpersammlung und -analyse verringert die Wahrscheinlichkeit einer falsch-negativen Bewertung. Die Auswertung des ganzen Berges ist durch die Anwesenheit von ein oder zwei ganzen Brustdrüsen auf einer Folie begrenzt, und in einigen Fällen sind die Anomalien, die im ganzen Berg beobachtet werden, neinT gleichmäßig im H & E-Bereich vertreten. Das Ziel dieser Studie war es, ein Protokoll für die Umwandlung von Deckel-Mamma-Vollbefestigungen zu H & E-gefärbten Abschnitten zu entwickeln, so dass Läsionen, die sonst verpasst wurden oder schwer zu diagnostizieren sind, identifiziert werden können. Hier beschreiben wir eine Methode zur Herstellung eines hochwertigen, von Paraffin eingebetteten H & E-Abschnitts aus einer Brustdrüse, die zunächst als Ganzes hergestellt wurde. Im Vergleich zu einem Gewebe, das absichtlich auf H & E-Schnitt vorbereitet wurde, erfordert die gesamte Halterung eine zusätzliche Vorbereitung für die Gewebeentfernung und -verarbeitung. Allerdings wird diese Methode als preiswert angesehen, da es übliche Laborreagenzien und wenig zusätzliche Zeit erfordert. Infolgedessen kann diese Methode wertvolle Informationen darüber liefern, wie chemische und umweltbedingte Expositionen die normale Mamma-Entwicklung verändern, sowie Anzeigeänderungen, die aufgrund genetischer Veränderungen auftreten.
Introduction
Das Mamma-Ganzes ist eine nützliche und preiswerte Methode, die in vielen Ratten- und Maus-Studien durchgeführt wird, um sowohl normale als auch chemisch induzierte, abnormale Entwicklung zu verstehen. Im Allgemeinen wird eine in verschiedenen Stadien während der Nagetierentwicklung gesammelte Brustdrüse ( dh Adoleszenz, Pubertät, Mittel- bis Spätschwangerschaft und Involutionsphase) morphologische Veränderungen in der Gewebe- und Zellarchitektur zeigen, die durch parokrine, endokrine und autokrine Faktoren beeinflusst werden 1 In der alternden Ratte werden die epithelialen und stromalen Teile der Drüse immer dichter, was die Messung morphologischer Parameter in einem ganzen Berg schwierig macht. So ist es üblich, eine Drüse zur histologischen Auswertung zu sammeln, um Veränderungen auf mikroskopischer Ebene zu identifizieren. Beide Verfahren sind besonders nützlich bei Studien mit chemischer Exposition ( dh Umwelt oder Pharma) oder zur Untersuchung der morphologischen Veränderungen, begleitet von genetischen VeränderungenAtions
Techniken und Fähigkeiten zur Verwendung der Brustdrüse bei der Risikobewertung entwickeln sich weiter. Während die Vollmontagevorbereitung routinemäßig und standardisiert ist, gehen die Modifikationen zum Schnitt weiter 2 , 3 . Viele Forschungsgruppen aus verschiedenen Bereichen ( das heißt, die Wissenschaft, die Regierung und die Industrie) haben koronale / Längsschnitte von Brustgeweben als ein bevorzugtes Verfahren angepasst, während einige Labors noch Querschnittschnitt durch die 4 Haut. Die letztere Methode führt zu einer unangemessenen Darstellung der Epidermis (Haut), anstatt des Gewebes von Interesse: das Brustdrüsenepithel 2 . Koronale oder Längsschnitte sind für die Charakterisierung des normalen Gewebes 5 nützlicher und verbessern den Nachweis von Anomalien und Läsionen aufgrund der erhöhten Oberfläche und der Anzahl der vorhandenen Strukturen erheblich. Insgesamt macht das das ganze moEine geeignete Methode für die vergleichende histopathologische Beurteilung der Brustdrüse 1 , 2 . Ob mit einer Maus oder eine Ratte, Abrufen und Erhaltung des 4. und 5. Inguinaldrüsen hoch für den Vergleich der gesamten empfohlen montieren zu einem kontralateralen H & E Abschnitt.
Bei der Verwendung in Kombination, die H & E Abschnitt und ganze Mount bieten eine genaue Darstellung der zellulären und morphologischen Veränderungen durch Umweltbelastung induziert. Dies trifft besonders bei bestimmten Nagetierstämmen zu, bei denen das Modell eine geringe Anfälligkeit für die Tumorbildung besitzt oder ein Tumor nicht grob sichtbar ist. Unter bestimmten Umständen kann das Erhalten des erforderlichen Gewebes nicht immer mit beiden Techniken ( dh unzureichende Gewebemenge, Ressourcen oder unerwartete experimentelle Ergebnisse) möglich sein. In unserem Fall wurden Anomalien in der Mamma ganze Berg beobachtet, während HistopathoLogische Befunde in der kontralateralen H & E-Drüse waren meist normal. Die überwältigende Diskrepanz zwischen den kontralateralen Drüsen führte uns dazu, ein wirtschaftliches und effizientes Verfahren zu entwickeln, um die Anomalien in den ganzen Bergen zu identifizieren. Unter Verwendung eines modifizierten Verarbeitungs- und Einbettungsverfahrens wurden qualitativ hochwertige H & E-gefärbte Abschnitte aus Paraffin-eingebetteten ganzen Montierungen hergestellt. Wir stellen uns vor, dass dieses Protokoll zu einem leistungsfähigen Erkennungsinstrument für chemische Expositionseffekte wird, die Inter-Lab-Vergleiche verbessern.
Protocol
Representative Results
Discussion
Die Brustdrüsen-Vollmontage ist ein mächtiges Werkzeug, das verwendet werden kann, um die normale Mamma-Entwicklung und morphologische Veränderungen zu veranschaulichen, die auftreten können und bestehen nach der Exposition gegenüber Chemikalien, einschließlich endokriner Disruptoren. Wenn ein ganzer Berg und ein H & E-Abschnitt aus demselben Tier zusammen beurteilt werden, können sie einen genauen visuellen Schnappschuss von frühen Veränderungen liefern, die in einen krankeren Zustand übergehen können. <…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Die Autoren möchten Pam Ovwigho, Tenette Jones und Natasha Clayton, NIEHS, für ihre technische Kompetenz und Unterstützung bei diesem Projekt anerkennen.
Materials
| Xylene | Sigma-Aldrich | 214736 | |
| Permount | Thermo Fisher Scientific | SP15-100 | mounting media for coverslipping whole mounts and H&E sections |
| Leica automated processor | Leica Biosystems | Model # ST5020 | |
| HM 355S Automatic Microtome | Thermo Fisher Scientific | 905200 | |
| Paraffin | Leica Biosystems | EM-400 | |
| Superfrost plus microscope slides | Thermo Fisher Scientific | 4951PLUS-001 | electrostatically charged |
| Fisher Finest 24x60x1 | Thermo Fisher Scientific | 12-548-5P | coverslips |
| Varistain Gemini ES Automatic slide stainer | Thermo Fisher Scientific | A78000014 | |
| Sta-On | Leica Biosystems | 3803107 | liquid adhesive; used in water bath at sectioning |
| Modified Harris Hematoxylin 72711 | Richard-Allan Scientific (Part of Thermo Scientific) | 72711 | |
| Eosin | Leica Biosystems | 3801600 | |
| Lithium Carbonate | SkyTech Laboratories | LCQ500 | |
| Glacial Acetic Acid | Thermo Fisher Scientific | A38-500 | needed in Carnoy's fixative |
| Chloroform | Macron Fine Chemicals | 4440-04 | needed in Carnoy's fixative |
| 100% Ethanol | The Warner Graham Company | 6505001050000 | needed in Carnoy's fixative and washing slides |
| 95% Ethanol | The Warner Graham Company | 6505011137320190 | |
| Carmine Alum | Sigma-Aldrich | C1022-25G | |
| Aluminum potassium sulfate dodecahydrate, Sigma Ultra | Sigma-Aldrich | A7210-500G | |
| Automation wash buffer, 20X | Biocare Medical | TWB945 |
References
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