التحليل الآلي من النيماتودا القائم على السكان الحسية الكيميائية تفضيل التفضيل

Summary

نقدم إعداد تسجيل السلوك والبروتوكول الذي يتيح التحليل الآلي من الديدان الخيطية، تفضيل كاينورهابديتيس ايليجانس "للمركبات القابلة للذوبان في مقايسة سكانية. توضح هذه المقالة بناء غرفة السلوك، بروتوكول الفحص السلوكي، واستخدام برامج تحليل الفيديو.

Abstract

النيماتودا، كاينورهابديتيس ايليجانس 'الجهاز العصبي المضغوط من 302 الخلايا العصبية فقط يكمن ذخيرة متنوعة من السلوكيات. لتسهيل تشريح الدوائر العصبية الكامنة وراء هذه السلوكيات، وتطوير المقايسات السلوكية قوية وقابلة للتكرار ضروري. السابق C. وقد استخدمت الدراسات السلوكية ايليجانس الاختلافات من "اختبار السقوط"، "فحص الكيميائي"، و "فحص الاحتفاظ" للتحقيق في استجابة C. ايليجانس إلى المركبات القابلة للذوبان. الطريقة الموصوفة في هذه المقالة تسعى إلى الجمع بين نقاط القوة التكميلية من المقايسات الثلاثة المذكورة أعلاه. لفترة وجيزة، وتنقسم دائرة صغيرة في منتصف كل لوحة فحص إلى أربعة أرباع مع السيطرة والحلول التجريبية وضعت بالتناوب. بعد إضافة الديدان، يتم تحميل لوحات الفحص في غرفة السلوك حيث كاميرات المجهر تسجيل لقاءات الديدان مع المناطق المعالجة. ثم يتم إجراء تحليل الفيديو الآليويتم إنشاء قيمة مؤشر التفضيل (بي) لكل مقطع فيديو. اقتناء الفيديو وميزات التحليل الآلي لهذه الطريقة يقلل من مشاركة المجرب وأي أخطاء المرتبطة بها. وعلاوة على ذلك، يتم استخدام كميات دقيقة من المجمع التجريبي لكل مقايسة ويزيد الإعداد كاميرا متعددة غرفة السلوك الإنتاجية التجريبية. هذه الطريقة مفيدة بشكل خاص لإجراء الشاشات السلوكية من المسوخ الوراثية والمركبات الكيميائية الجديدة. ومع ذلك، فإن هذه الطريقة ليست مناسبة لدراسة التحفيز التدرج الملاحة نظرا لقربها من مناطق السيطرة والتحكم التجريبية. وينبغي أيضا أن لا تستخدم إلا عندما يكون عدد قليل من السكان من الديدان المتاحة. في حين أن مناسبة لفحص الردود فقط على المركبات القابلة للذوبان في شكله الحالي، ويمكن تعديل هذه الطريقة بسهولة لاستيعاب التفاعل الحسي المتعدد الوسائط والدراسات أوبتوجينيتيك. ويمكن أيضا أن تتكيف هذه الطريقة لفحص الردود الكيميائية الحسية من الأنواع الأخرى من الديدان الخيطية.

Introduction

يجب على الحيوانات العلفية دمج المدخلات من طرائق الحسية متعددة وتحديد الاستراتيجيات السلوكية المناسبة من أجل التنقل بنجاح بيئتهم. فهم كيفية تلقي المدخلات الحسية الخارجية وترانزدوسد إلى المعلومات العصبية لتوجيه اختيار العمل هو هدف مركزي في مجال علم الأعصاب. إن الديدان الخيطية القابلة للجراثيا، C. إليغانز ، هي كائن نموذج جذاب يجسد فيه الآليات العصبية الكامنة وراء البيولوجيا الحسية والتكامل المتعدد الوسائط. على الرغم من أن C. ايليجانس لديها فقط 302 الخلايا العصبية، فإنه يمكن الكشف والتمييز بين مجموعة واسعة من المحفزات البيئية بما في ذلك المركبات القابلة للذوبان، الرائحة الطيارة، ودرجة الحرارة المحيطة ^{1 ، 2 ، 3 ، 4 ، 5 ، 6 ، 7} . الالنيماتودا C. تعتمد ايليجانس بشكل كبير على جهازها الكيميائي الحسي لتوطين مصادر الغذاء وتنبيه نفسها إلى التهديدات المحتملة. وبالتالي، المقايسات السلوكية المصممة لفحص ردود من النوع البري وC. ايليجانس متحولة للمؤثرات الكيميائية تلعب دورا حاسما في تشريح الآليات الوراثية الخلوية، والعصبية الكامنة وراء القدرات الحسية ملحوظة C. ايليجانس.

لفحص الاستجابة للمركبات القابلة للذوبان، وقد وصفت ثلاثة أنواع من المقايسات - اختبار السقوط، فحص الكيميائي، وفحص الفحص. في اختبار السقوط، يتم وضع قطرة صغيرة من المركب في ذيل دودة متحركة وقرار دودة لعكس أو المضي قدما بمجرد وصول السائل يصل إلى الجهاز الحسي الأمامي ⁴ . اختبار السقوط يتطلب القليل من الإعداد التجريبي ومفيد عندما يكون حجم العينة من الديدان الصغيرة، كما هو الحال في الديدان التي تعمل بالليزر. ومع ذلك، كما دودة واحدة فقطيمكن أن يعاير في وقت واحد ويجب أن يكون المجرب حاضرا طوال مدة الفحص، واختبار قطرة يمكن أن تستغرق وقتا طويلا. اختبار السقوط هو أيضا عرضة للتغيرات في تسليم قطرة بين كل دودة داخل العينة، والتي قد تؤثر على النتائج الإجمالية للفحص. وهناك قيد آخر لاختبار السقوط هو أنه لا يمكن استخدامه إلا لفحص استجابة دودة للمركبات النادرة حيث أنه من غير الممكن التمييز بين تأثير جذاب أو محايد للمركب من حركة دودة إلى الأمام.

فحص الكيميائي للمركبات القابلة للذوبان ينطوي عادة تقسيم لوحة أجار إلى أربعة أرباع، مع الحل التجريبي مختلطة في أجار اثنين من الأرباع المتعارضة وحل التحكم مختلطة في اثنين من الأرباع الأخرى ^{8 ، 9} . في بداية الفحص، يتم وضع قطرة من العازلة التي تحتوي على الديدان في وسط لوحة وعدد من الديدان في وسجل كل رباعي في نقاط زمنية مختلفة. الفحص الكيميائي يوفر قوة إحصائية أكبر مقارنة مع اختبار قطرة كما يتم اختبار عدد كبير من الديدان في كل فحص. ومع ذلك، واحد الحد من هذه الطريقة هو أن إعداد لوحات الفحص الكيميائي يتطلب كميات كبيرة من المجمع التجريبي. وهذا سيجعل من الصعب إجراء شاشات السلوك على نطاق واسع إذا كان هناك حاجة لعملية تنقية معقدة مع غلة محدودة للحصول على المركب من الفائدة، كما هو الحال في جزيئات الإشارة أسكاروسيد ¹⁰ . بالإضافة إلى ذلك، العد اليدوي من الديدان في جميع أنحاء الفحص هو عرضة للأخطاء و اضطراب لوحات خلال عملية العد قد تؤثر على النتائج.

على عكس اثنين من الأساليب المذكورة أعلاه، واستبقاء الفحص يستخدم رؤية الجهاز، مما يقلل من الخطأ أثناء عملية التهديف ويقلل من تدخل المجرب خلال الفحص > 11. التحليل المحوسب لتسجيلات الفيديو من سلوك دودة يمكن أيضا أن تكشف عن ديناميات سلوكية أكثر صعوبة التي سيتم تفويتها عندما يتم تنفيذ التهديف فقط في بضع نقاط زمنية منفصلة. في الفحص الاحتفاظ، يتم إضافة اثنين من البقع الحلول على طرفي نقيض من صغيرة التعميم البقعة الغذائية البكتيرية تليها وضع عدد قليل من الديدان في منتصف التصحيح الغذائي. ثم يتم تسجيل سلوك الديدان، وتحليلها، ويتم احتساب قيمة مؤشر تفضيل استنادا إلى العدد الإجمالي للبكسل بكسل في كل منطقة الحل. على الرغم من أن وجود التصحيح الغذائي جذابة تمكن السكان الأصغر من الديدان لاستخدامها في كل فحص، وقد سبق أن أظهرت الغذاء لتوعية السلوكيات تجنب لذوبان الطارد ¹² . وعلاوة على ذلك، تظهر الديدان استجابة فوتوفوبيك لضوء الموجة القصيرة واستخدام مصادر الضوء المجهر التي تنبعث الضوء الأبيض في الإعداد تسجيل السلوك قد تؤثر على السلوكs = "كريف"> 13.

الغرض من الطريقة التي نوقشت في هذه المقالة هو لتسجيل وتحليل C. ايليجانس " تفضيل المركبات القابلة للذوبان باستخدام مقايسة سكانية. وتحقيقا لهذه الغاية، فإن الأسلوب الحالي يدمج ويحسن الجوانب من كل ثلاث طرق سبق مناقشتها. فإنه يتيح مجموعات كبيرة من الديدان لفحصها ويتطلب كميات صغيرة فقط من الحل التجريبي لاستخدامها في كل فحص. وبالإضافة إلى ذلك، يتم إجراء مقايسة داخل غرفة السلوك المغلقة بنيت خصيصا مع الأشعة تحت الحمراء ليد الخلفية للحد من آثار ضوء الموجة القصيرة على السلوك. ويمكن أيضا أن تجهز كل غرفة مع الكاميرات المجهر متعددة، مما يزيد من الإنتاجية التجريبية دون المساس مساحة مقاعد البدلاء. وأخيرا، يخرج برنامج تحليل الفيديو قيمة مؤشر التفضيل لكل مقطع فيديو بالإضافة إلى مؤامرة إشغال دودة مصاحبة لتصور ديناميات سلوك السكان بمرور الوقت. إعداد غرفة وبروتوكول ساي يمكن تعديلها أكثر لدراسة ردود السلوك المتعدد الوسائط مثل تأثير الروائح أو درجة الحرارة على السلوكيات الحسية الحسية.

توضح هذه المقالة بناء غرفة السلوك وبروتوكول الفحص. كما أنه يدل على فائدة هذه الطريقة في فحص استجابة من نوع البرية الديدان والمسخنات المعيبة كيميائية الحسية إلى طارد للذوبان المعروفة، أيونات النحاس ⁴ . وأخيرا، يتم تفصيل عملية تحليل الفيديو باستخدام البرنامج المقدم.

Protocol

1. جمعية غرفة السلوك

ملاحظة: تتكون غرفة السلوك من إطار على شكل مكعب تقريبا مصنوعة من قضبان الألومنيوم مقذوف، مغطاة الأغطية النسيج مبهمة، مع أسفل الاكريليك واضحة ويدعم الكاميرا. إن الوصلات بين قضبان الألومنيوم المبثوقة التي تشكل غرفة السلوك كلها متعامدة ويتم تأمينها باستخدام أقواس الزاوية "L" على شكل حرف (1 بوصة واسعة مع أرجل 1 بوصة) والتي تثبت ساق قوس الزاوية الواحدة لكل شريط مع مسامير ومسامير T-المكسرات. يتم تأمين كل مشترك مع واحد أو اثنين من قوسين الزاوية كما هو موضح أدناه. يعلق النسيج على غرفة تعلق على قضبان الإطار الألومنيوم مع نفس مسامير والانزلاق في T- المكسرات ولكن من خلال الحلقات في زوايا النسيج. يتم إدراج مسامير بشكل صحيح في الجانب غاطسة من الشريحة في T- المكسرات، وليس في الجانب مع الشفة جاحظ. عند إرفاق مجموعة تثبيت برغي / T-نوت بقضيب ألومنيوم، انزلق T-نوت إلى القناةعلى الوجه المناسب من شريط مع رئيس المسمار تخرج من الفتحة.

1. إعداد يغطي النسيج.
   1. استخدام مقص لقطع خمس قطع من نسيج البوليستر مبهمة لتغطية الجزء العلوي وأربعة جوانب من الغرفة.
      1. قطع واحد مربع 14 × 14 بوصة ² ورقة من النسيج لأعلى من الغرفة. قطع أربعة مستطيلة 11 × 14 بوصة ² ورقة من القماش لجوانب الغرفة.
   2. تثبيت الحلقات في زوايا ورقة النسيج.
      1. وضع علامة على خط مرجعي 0.5 بوصة من كل حافة من كل خمسة أقمشة البوليستر النسيج باستخدام قلم رصاص واستقامة.
      2. بالنسبة للألواح المستطيلة الأربعة، استخدم كماشة جروميت لإدراج الحلقات المتمركزة حيث تتقاطع خطوط قلم الرصاص في كل زاوية (أي 4 الحلقات لكل ورقة).
      3. بالنسبة للورقة المربعة، أدخل حلقتين على طول كل حافة مع كل جروميت تتمحور حول خط قلم الرصاص ووضعه 1.5 بوصة من نهاية كل منوخطوط قلم رصاص أربعة (أي، 8 الحلقات مجموع، واثنين من كل زاوية).
   3. إدراج المسمار في كل ثقب جروميت وإرفاق فضفاضة T- الجوز إلى كل.
2. افتعال أشرطة جبل الكاميرا.
   1. استخدام رأى الفرقة أو ما يعادلها لقطع واحد 2 بوصة قطعة طويلة من شريط الألومنيوم البثق لكل كاميرا، وضمان نهاية قطع شريط عمودي على طول شريط لتسهيل التجمع في وقت لاحق.
   2. استخدام الصحافة الحفر مع مثقاب قطرها 0.25 بوصة لحفر حفرة من خلال الشبكات المركزية من كل شريط جبل الكاميرا، 0.75 بوصة من نهاية واحدة بحيث يكون الثقب عمودي على الوجهين العلوي والسفلي ويمر من خلال خط الوسط من شريط . اختياريا، حفر حفرة باستخدام الحفر الكهربائية المحمولة مع مثقاب 0.25 بوصة، ولكن تأكد من أن الحفرة عمودي على الوجهين العلوي والسفلي من شريط.
3. إعداد جميع قوسين الزاوية.
   1. إدراج المسمار من خلال ثقب فيكل قوس الزاوية الساق، إدراج المسمار من الجانب زاوية الداخل. فضفاضة موضوع T- الجوز على كل المسمار.
4. إعداد الكاميرا جبل التجمع ( الشكل 1B ، طبقة 2).
   ملاحظة: التجمع جبل الكاميرا هو "H" على شكل التجمع الذي يدعم ثلاثة حاملات الكاميرا.
   1. إرفاق أشرطة جبل الكاميرا إلى شريط مركز التجمع جبل الكاميرا.
      1. وضع الكاميرا ثلاثة أشرطة جبل ملفقة في الخطوة 1.2 مع الثقوب حفر موجهة عموديا. زلة اثنين من قوسين الزاوية على جانبي كل شريط جبل في نهاية أبعد من حفر حفرة.
      2. وضع قوسين قوسين مع الساقين بين قوسين دافق مع نهاية شريط وتشديد مسامير لتأمين في المكان. هذا يشكل شكل "T" مع حفرة حفر في الجزء السفلي من "T".
      3. وضع قذف الألومنيوم 1 القدم على سطح العمل. زلة T- المكسرات من كاميرا واحدة جبل شريط آسمبلي (من الخطوة السابقة) على جانب واحد من شريط 1 قدم. قم بتثبيت شريط التركيب على طول طول شريط القدم وقم بتثبيت البراغي لتأمينها في مكانها. زلة اثنين من الحانات جبل الأخرى على الجانب الآخر من شريط 1 القدم.
      4. ضع القضبان على مسافة متساوية من منتصف شريط 1 قدم، مع الأقواس الزاوية الداخلية ما يقرب من 2.5 بوصة وبصرف النظر. زلة قوسين الزاوية على جانبي شريط 1 قدم، واثنين في كل نهاية شريط. وضع قوسين قوسين مع الساقين بين قوسين دافق مع نهايات شريط وتشديد مسامير لتأمين في المكان.
   2. أرفق أشرطة النهاية إلى شريط الوسط.
      1. زلة اثنين من 1-- القدم سحب الألمنيوم على t-- المكسرات في نهاية كل من التجمع من الخطوة السابقة تشكيل "h" الشكل. مركز كل شريط نهاية على شريط مركز وتأمين عن طريق تشديد البراغي الأربعة.
      2. زلة أربعة أقواس الزاوية على الجزء العلوي من الحانات نهاية اثنين المضافة في الخطوة السابقة، واحدة في كل نهايةمن كل شريط. وضع قوسين قوسين مع الساقين بين قوسين دافق مع نهايات القضبان وتشديد مسامير لتأمين في المكان.
   3. نعلق تقف الكاميرا وحافظات إلى التجمع جبل الكاميرا.
      1. لكل حامل من مجاهر الكاميرات المجهرية الثالثة، قم بإزالة الحافظة بالكاميرا عن طريق تخفيف المسمار وانزلاق قضيب الحامل.
      2. لكل شريط جبل الكاميرا (المضمون الآن إلى شريط مركز "H")، ضع غسالة واحدة على المسمار رأس مستديرة، زلة المسمار حتى من خلال ثقب حفر في شريط جبل الكاميرا ووضع غسالة أخرى أسفل المسمار . خيط حفرة استغلالها من موقف الكاميرا قضيب إلى أسفل على المسمار، وتشديد آمن ضد شريط جبل الكاميرا.
      3. كرر الخطوات 14.3.2 لأخرى اثنين من أشرطة جبل الكاميرا.
      4. انزلق الحافظة الكاميرا على كل حامل قفص الكاميرا مع افتتاح أوسع الموجهة نحو الكاميرا جبل شريط والمسمار. تأمين الحافظة مؤقتا إلى الوقوف الكاميرا صأود مع المسمار الحافظة.
         ملاحظة: سيتم تعيين موضع التشغيل النهائي في القسم 2.
5. تجميع إطار غرفة السلوك ( الشكل 1A ).
   ملاحظة: لسهولة البناء، وتجميع الإطار رأسا على عقب، بدءا من "أعلى" من إطار الغرفة على سطح العمل ( الشكل 1B ، طبقة 1) والعمل صعودا نحو "قدم" للإطار ( الشكل 1B ، طبقة 3).
   1. لتجميع الطبقة العليا من غرفة السلوك، ونعلق أربعة القضبان الألومنيوم مقذوف 1 قدم إلى ورقة البوليستر مربع ( الشكل 1B ، طبقة 1).
      1. حرك شريط واحد على اثنين من المكسرات T على طول كل حافة من ورقة النسيج، وتمركز شريط على طول عرض النسيج. تشديد السحابات لتأمين ورقة النسيج إلى كل شريط.
      2. انتشار ورقة البوليستر مربع على سطح العمل وايث أربعة الألمنيوم المرفقة القضبان على القمة. زلة ثمانية أقواس الزاوية على السطوح العليا من أشرطة الألومنيوم أربعة، واحدة في كل نهاية كل شريط. وضع قوسين الزاوية على القضبان مع الساقين العمودي بين قوسين دافق مع نهايات الأشرطة. تأمين عن طريق تشديد المسامير في T- المكسرات.
   2. بدوره في كل ركن، والوقوف إضافية 1-أقدام الألومنيوم النتوء تستقيم، الانزلاق البثق على T- المكسرات على اثنين من قوسين الساقين قوس.
   3. تأمين شريط تستقيم إلى أشرطة أفقية عن طريق تشديد السحابات، وبالتالي الانضمام إلى اثنين من الأفقي المجاورة القضبان.
      ملاحظة: عند الانتهاء، وثماني قذف (أربعة أفقية وأربعة عمودي) تشكيل حلقة مربعة على الطاولة مع أربع وظائف الشائكة أعلى ( الشكل 1B ، طبقة 1).
   4. قم بتكسير المكسرات الرخوة من مجموعة تركيب الكاميرا على شكل حرف "H" من القسم 1.4 وصولا إلى مؤخرة الإطار من الخطوة السابقة. السماح ل "H &34؛ زلة على طول الطريق إلى بقية على أعلى قوسين الزاوية في كل زاوية من الإطار. قم بتأمین مجموعة تثبیت الکامیرا في موضعھا عن طریق تشدید مسامیر الرکیزة الأربعة.
   5. تجميع الطبقة السفلى من الغرفة باستخدام القضبان الألومنيوم أربعة مقذوف النهائي 1 القدم ( الشكل 1B ، طبقة 3).
      1. زلة واحد قوس الزاوية على كل نهاية من كل شريط 1 قدم، وضع قوسين قوسين مع الساقين بين قوسين دافق مع نهايات شريط وتشديد مسامير لتأمين في المكان.
      2. انزلق القضبان لأسفل بين الإطار مع المكسرات فضفاضة في قنوات أوبريتس. ضع القضبان بحيث تكون الحواف العلوية من أقواسها الزاوية 1 بوصة تحت نهاية مفتوحة من أوبريتس وتأمين في مكانها عن طريق تشديد مسامير قوس الزاوية.
6. حرك المكسرات T من صفائح البوليستر مستطيلة أربعة أسفل إلى القنوات على قضبان البثق تستقيم لتغطية جانبي الشامبr وتشديد السحابات لتأمين في المكان.
7. حدد جانب واحد ليكون الباب للوصول إلى المناطق الداخلية من الغرفة وإزالة اثنين من البراغي و T- المكسرات في الطبقة السفلى من الغرفة.
   ملاحظة: عندما يتم تشغيل الإطار في وضع مستقيم، فإن الجزء السفلي من هذا الغطاء شنق فضفاضة في الجزء السفلي، ويمكن رفعها للوصول إلى الداخلية للغرفة.
8. وضع غطاء من البلاستيك على الطرف العلوي من كل عضو الزاوية لتكون بمثابة أقدام للإطار الانتهاء. أدر الإطار إلى الجانب الأيسر. إدراج اثنين من حاملي لوحة لكل جانب داخل طبقة قاعدة الإطار والتطور لتأمين لهم في مكان ( الشكل 1B ، طبقة 3). وضع 12 × 12 بوصة ² قطعة من الاكريليك واضحة على رأس أصحاب لوحة لتوفير مرحلة لوحات فحص ( الشكل 1B ، طبقة 3).

2. الكاميرا ومرحلة قالب تحديد المواقع

1. تحميل وتثبيت كاميرا اكتساب الفيديو المجهر البرمجيات على الكمبيوترمن موقع الشركة المصنعة.
2. زلة كاميرا المجهر في كل من ثلاثة حوامل الكاميرا مع البصريات الكاميرا وأشار أسفل نحو مرحلة الاكريليك والإضاءة الخلفية. قم بتوصيل الكاميرات بمنفذ أوسب الخاص بالكمبيوتر. وضع لوحة الإضاءة الخلفية ليد تحت الحمراء تحت الإطار، وتمركز تحت المرحلة. قم بتوصيل لوحة الإضاءة الخلفية للتشغيل.
3. اطبع قوالب الحل الموضوعة ووضع المواءمة على صفائح الشفافية (انظر الملف التكميلي ).
   ملاحظة: في قالب حل محل، دائرة محيط لوحة هو 3.8 سم في القطر و المنطقة الداخلية من دائرة الفائدة هو 0.9 سم في القطر.
4. قطع على طول خطوط الشبكة للحصول على قطع شفافة مستطيلة ترفق القوالب الدائرية.
5. ابدأ برنامج اكتساب الفيديو وانقر على الصور المصغرة المرقمة أعلى النافذة لعرض خلاصات الكاميرات.
6. ضبط المجهر محاذاة الكاميرا والتكبير.
7. وضع قالب لوحة محاذاة تحت عدسة الكاميرا المجهر ( الشكل 2B ).
8. تغيير مسافة العمل عن طريق انزلاق عموديا الحافظة الكاميرا على طول قضيب حامل الكاميرا وضبط التكبير الكاميرا عن طريق تناوب الطلب التكبير الكاميرا حتى علامات القالب عدد واضحة للعيان على حواف مجال الكاميرا الرؤية.
9. شريط قالب لوحة محاذاة إلى مرحلة الاكريليك.
10. وضع لوحة عينة من الديدان على قالب لوحة المحاذاة تحت كاميرا المجهر وزيادة صقل التكبير والعمل المسافة حتى يتم تحقيق صورة حادة من الديدان مع الحفاظ على علامات الأرقام في مجال الرؤية.
11. كرر الخطوات من 2.6.1-2.6.4 لكاميرات المجهر الأخرى.

3. نمو النيماتودا والمزامنة

1. قبل أربعة أيام من التجارب، البذور أربعة وعشرين 60 ملم(نغم) لوحات أجار مع 50 ميكرولتر من OP50 الإشريكية القولونية في لوريا-بيرتاني (لب) مرق (انظر القسم 5 وصفة).
   ملاحظة: كل لوحة 60 ملم سوف توفر ما يكفي من الديدان لفحص لوحة واحدة. ويوصى الحصول على ستة مكررات لكل معاملة أو النمط الوراثي.
2. ترك لوحات المصنف لتجف تستقيم مع الأغطية على، بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة.
3. في اليوم التالي، نقل خمسة عشر خنثى غرافيد جيد التغذية على كل لوحة المصنف والسماح الديدان لوضع البيض لمدة ست ساعات. وهذا سيؤدي إلى> 360 بيضة لكل لوحة.
4. بعد 6 ساعات، وإزالة الديدان من لوحات المصنفة والسماح للنسل تنمو لمدة ثلاثة أيام في البالغين عند 20 درجة مئوية.

4. تشيموسنزوري الأفضلية الفحص

1. في اليوم السابق للتجربة، وإعداد 35 ملم نغم أجار لوحات الفحص.
   1. إعداد 250 مل من أجار نغم (انظر القسم 5 وصفة).
   2. ترتيب ثمانية وعشرين لوحات فارغة 35 ملم في أكوام من خمسة أو أقل على سو شقةrface. ملء كل لوحة الفحص مع 5 مل من أجار نغم. ترك لوحات الفحص لتجف تستقيم مع الأغطية على، بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة.
      ملاحظة: كقاعدة من الإبهام، وإعداد لوحة فحص إضافية واحدة لكل معاملة أو النمط الجيني ليتم مقايضة في حالة الطوارئ.
2. في يوم التجربة، بدوره على الإضاءة الخلفية، وتمهيد الكمبيوتر، وإطلاق المجهر كاميرا التقاط الفيديو البرمجيات.
3. قم بتوصيل كاميرا المجهر إلى الكمبيوتر وضبط إعدادات تسجيل الفيديو.
   1. انقر على الصورة المصغرة للكاميرا المرقمة أعلى نافذة البرنامج لعرض الخلاصة المباشرة للكاميرا.
   2. اسحب قائمة "تنسيق الفيديو" في الزاوية العلوية اليمنى من تغذية الكاميرا وحدد "مجب 1280 x 1024". اسحب قائمة "المجلد" بجوار قائمة "تنسيق الفيديو" وحدد مجلد لحفظ ملفات الفيديو.
   3. انقر على أيقونة "التعرض التلقائي" في الركن العلوي الأيسر منتغذية الكاميرا وإيقاف لصناعة السيارات في التعرض. انقر على أيقونة "ليد" على الفور إلى يمين رمز "التعرض التلقائي" لإيقاف يحمل في ثناياه عوامل المصابيح الكاميرا المجهر. انقر على أيقونة "إعدادات" المجاورة: حدد "أحادية اللون"، وتعظيم "التباين"، وضبط "السطوع" حتى تظهر الديدان متميزة عن الخلفية.
4. الحصول على أشرطة فيديو المعايرة.
   1. محاذاة قالب الحل-وضع على رأس قالب لوحة لوحة المحاذاة ( الشكل 2A ). انقر على أيقونة "فيديو انقضى الوقت" تسجيل على الجانب الأيسر من تغذية الكاميرا وأدخل '5' ق لمدة و '1 الصورة لالفاصل لتسجيل الفيديو 5 ثانية في 1 إطار / ثانية. انقر على "ابدأ" لبدء تسجيل الفيديو.
5. كرر الخطوات في 4.3 و 4.4 لغيرها من الكاميرات المجهر.
6. إزالة قالب حل محل من الغرفة.
8. استخدام ماصة الزجاج 5 مل لإضافة 1.2 مل من العازلة نغم إلى لوحة من الديدان متزامنة ويهيج بلطف لوحة لتحل محل الديدان في المخزن المؤقت. ماصة العازلة تصل من لوحة والاستغناء الديدان في العازلة في أنبوب ميكروسنتريفوج نظيفة.
   ملاحظة: الديدان حساسة للانحرافات من زراعة آغار تركيز الملح ¹⁴ . لتقليل التغيرات في تركيز الملح أجار بعد وضع الديدان، واستخدام العازلة نغم لعملية الغسيل يوصى (انظر القسم 5 للحصول على وصفة). لا تستخدم الماصات البلاستيكية لإزالة الديدان من لوحات، والديدان التمسك الجانبين. إعداد عدد مماثل من الأنابيب كما عدد لوحات الفحص ليتم تشغيلها في وقت واحد.
9. اسمحوا الأنابيب الثلاثة الوقوف لمدة 1-2 دقيقة للسماح الديدان لتسوية إلى أسفل. استخدام طرف ماصة البلاستيك لإزالة الكثير من غسل العازلة من الأنابيب ممكن دون إزعاج بيليه من أغريغاتالديدان، إلى، ال التعريف، أرض منخفضة، بسبب، ال التعريف، تيوبيس. إعادة ملء أنابيب مع 1 مل من العازلة نغم نظيفة لكل منهما.
10. كرر الخطوة 4.7.2 مرة واحدة.

إضافة 10 ملي كوكل ₂ و M13 حلول عازلة لوحات فحص (انظر القسم 5 لوصفات).

1. الشريط قالب الحل وضع على رأس مرحلة المجهر تشريح.
2. وضع شريط من الشريط على الوجهين على جانبي قالب لوحة محاذاة. تأكد من أن الشريط يتداخل مع دائرة محيط اللوحة ولكن لا يلغي منطقة تسجيل الفائدة في مركز القالب.
3. محاذاة محيط لوحة الفحص مع دائرة على قالب لوحة محاذاة واضغط لأسفل حتى قالب تلتزم الجزء السفلي من لوحة. محاذاة علامات لوحة قالب رقم الفحص مع علامات قالب الحل وضع على المجهر تشريح.
4. استخدام ماصة P2 والبلاستيك طرف لوضع 1 ميكرولتر من العازلة M13 كل في الأرباع 1 و 4 ( 2 حل كل في الأرباع 2 و 3 ( الشكل 2A ).
5. كرر الخطوات 4.8.2-4.8.4 للوحات الفحص اثنين آخرين.

مرة واحدة الحل قطرات تم استيعابها تماما في أجار، واستخدام ماصة باستور الزجاج لنقل الديدان غسلها من كل أنبوب ميكروسنتريفوج إلى لوحة الفحص المقابلة.

وضع قطرة من الديدان كل على المنطقة أعلاه وتحت المنطقة المعالجة دائرية. أضعاف الأنسجة أربع مرات واستخدام حافة حادة لامتصاص العازلة غسل الزائدة على جميع لوحات الفحص.

ترتيب فورا لوحات فحص ثلاثة تحت الكاميرات المجهر في غرفة السلوك من خلال محاذاة الأرقام في زوايا القالب. انتظر لمدة 2-3 دقائق للسماح للديدان تتأقلم لوحات الفحص.
ملاحظة: تأكد من إغلاق رفرف باب غرفة السلوك قبل بدء تسجيل الفيديو في الخطوة التالية.

كرر الخطوات 4.7-4.12 للجولة القادمة من لوحات الفحص. الحصول على ما لا يقل عن ستة مكررات أو جولتين من تسجيل لكل علاج أو النمط الوراثي.

5. إعداد كاشف

1. إعداد نغم أجار والعازلة.
   1. في زجاجة 1 لتر، إضافة 1.5 غرام من كلوريد الصوديوم، 8.5 غرام من أجار، و 1.25 غرام من الببتون. يضاف 500 مل من الماء المقطر وحامل ضخ إلى الزجاجة. زجاجة الأوتوكلاف مع محتويات.
   2. وضع زجاجة على لوحة ضجة والتبديل على وظيفة ضجة.
   3. إضافة في النظام باستخدام تقنية معقمة: 0.5 مل من 5 ملغ / مل الكولسترول، 0.5 مل من 1 M الكالسيومكلوريد، 0.5 مل من 1 M كبريتات المغنيسيوم، و 12.5 مل من 1 M فوسفات البوتاسيوم.
   4. كرر الخطوات من 5.1.1 إلى 5.1.2 لجعل نغم العازلة ولكن الخروج من أجار والببتون في الخطوة 5.1.1.
2. إعداد مرق لب.
   1. في زجاجة 1 لتر، إضافة 5 غرام من التربتون، 2.5 غرام من استخراج الخميرة، 2.5 غرام من كلوريد الصوديوم، 500 مل من الماء المقطر، و 0.5 مل من 1 N هيدروكسيد الصوديوم. زجاجة الأوتوكلاف مع محتويات.
3. إعداد M13 العازلة.
   1. في زجاجة 1 لتر، إضافة 1.817 غرام من تريس، 2.922 غرام من كلوريد الصوديوم، 0.373 غرام من كلوريد البوتاسيوم، و 500 مل من الماء المقطر. الأوتوكلاف زجاجة مع محتويات.
4. إعداد كلوريد النحاس (كوكل ₂ ) الحل.
   1. تزن 0.134 غرام من سوكل ₂ . إضافة المذيبات إلى 10 مل من M13 العازلة في أنبوب بلاستيكي 15 مل لجعل 100 ملي كوكل ₂ حل المخزون. عكس أنبوب البلاستيك حتى كل المذاب ديسوlved.
   2. استخدام حقنة و 0.2 ميكرون فلتر غشاء لتصفية تنقية 100 ملي كوكل ₂ الحل في أنبوب بلاستيكي 15 مل نظيفة.
   3. لجعل 10 ملي كوكل ₂ الحل، إضافة 900 ميكرولتر من العازلة M13 و 100 ميكرولتر من 100 ملي كوكل ₂ حل الأسهم إلى أنبوب ميكروسنتريفوج. عكس أنبوب ميكروسنتريفوج لخلط جيدا.

6. تحليل الفيديو

1. تحميل بيثون 3 (https://www.python.org/downloads/) ومكتبة البرمجيات أوبينكف (http://opencv.org/downloads.html).
2. تحميل البرامج النصية الثلاث بيثون للتحليل (https://github.com/WormLabCaltech/ResidentWorm).
   ملاحظة: تأكد من أن جميع ملفات الفيديو التي سيتم استخدامها في تنسيق MP4 قبل المتابعة.
3. لعرض الدالة ووصف المعلمة، اكتب 'هيلب (إنتر فونكتيون نيم)' في وحدة التحكم واضغط على إنتر. على سبيل المثال، اكتب "مساعدة (معايرة)" واضغط على إنتر.
4. قم بتنفيذ وظيفة المعايرةمع معلمات الإدخال لتحديد مناطق الفيديو ذات الاهتمام (روي).
   1. أدخل اسم ملف فيديو المعايرة المأخوذ في القسم 4 للمتغير 'mp4filename'. ضمن علامات الاقتباس عند إدخال اسم الملف.
   2. ابدأ بالقيمتين 600 و 360 للمتغيرات 'Q * x' و 'Q * y'. * أدخل أرقام رباعي 1 إلى 4. ابدأ بقيمة 310 للمتغير 'راد'. اضبط قيم المتغير حتى يقابل عائد الاستثمار مع الخطوط العريضة الأربعة للنموذج.
   3. سجل العدد الإجمالي للبكسل في كل عائد استثمار سيتم طباعته في وحدة التحكم عند تنفيذ هذه الوظيفة. أدخل هذه القيمة للمعلمة 'ROI_size' في الدالة preference_index.
5. تنفيذ الدالة term_constant لتحديد ثابت ثابت ثريشولدينغ. ضبط قيمة "ثابت" حتى الديدان (أبيض) يمكن أن ينظر إليه بوضوح، وهناك الحد الأدنى من الضوضاء الملح والفلفل في الخلفية (أسود).
6. تنفيذ الدالة preference_index لإنشاء ورقة بيانات كسف ومؤشر تفضيل الفيديو، ومؤامرة إشغال دودة المصاحبة.
   1. استخدم القيم 'Q * x' و 'Q * y' و 'راد' و 'ROI_size' و 'ثابت' المحددة من الخطوتين 6.4 و 6.5 كمعلمات دخل لوظيفة preference_index.
      ملاحظة: بالنسبة إلى كل إطار فيديو، تحسب الدالة preference_index عدد وحدات بكسل الدودة في كل عائد استثمار وتحسب النسبة المئوية لوحدات بكسل الدودة من إجمالي عدد وحدات بكسل العائد على الاستثمار. ثم تقوم الدالة بإنشاء قيمة فهرسة تفضيل لكل رتل فيديو باستعمال الصيغة:
      
      ملاحظة: بمجرد أن يقوم البرنامج بتحليل جميع الإطارات في الفيديو، يتم إنشاء قيمة مؤشر متوسط ​​تفضيل للفيديو. مؤامرة إشغال دودة مع مؤشر تفضيل الفيديو المطبوعة في الجزء العلوي، فضلا عن ورقة بيانات كسف تحتوي علىودودة بكسل، وقيم نسبة الإشغال دودة، وسيتم حفظ مؤشر تفضيل لكل إطار الفيديو إلى المجلد المعين بمجرد انتهاء البرنامج قيد التشغيل.

Representative Results

ويبين الشكل 3A قيم مؤشر التفضيل التي تم الحصول عليها لمختلف التراكيب الوراثية والعلاج. تشير قيمة مؤشر التفضيل 1 إلى جذب قوي إلى الحل الموضوعة في عائد الاستثمار التجريبي بينما تشير قيمة مؤشر التفضيل -1 إلى تنافر قوي. تم الحصول على مؤشر التفضيل 0.02 عندما تم وضع محلول العازلة M13 في كل من عوائد الاستثمار الضابطة والتجريبية، مما يدل على عدم وجود تحيز مكاني نحو عائد الاستثمار. وتجنبت الديدان N2 بقوة أيونات النحاس مما أدى إلى مؤشر تفضيلية -0.67، مما يؤكد النتائج السابقة أن أيونات النحاس هي طارد قوي ( الفيلم التكميلي 1 ) ⁴ . أوسم-3 المسوخ، الذي يفتقر إلى التكوين السليم للقطاعات البعيدة من أهداب الحسية، وأظهرت انخفاض كبير في تجنب أيونات النحاس (بي = -0.19) ¹⁵ . أوكر-2 المسوخ، والتي هي دي فاكتيف في العديد من الاستجابات المسببة للألم بوساطة آش بما في ذلك تجنب النحاس، كما تظهر انخفاض كبير في تجنب وحتى بعض جاذبية خفيفة إلى أيونات النحاس (بي = 0.19) ( فيلم التكميلي 2 ) ¹⁶ .

ويبين الشكل 3B مؤامرات الإشغال دودة التمثيلية، والتي تشير إلى كثافة الديدان في السيطرة مقابل روي عوائد التجريبية مع مرور الوقت في كل فيديو. كلما كان لون منطقة التآمر أكثر قتامة، كلما زاد عدد وحدات بكسل الديدان في عائد الاستثمار. مؤامرة شغل للديدان N2 تعامل مع السيطرة M13 العازلة يدل على أن عدد الديدان في كلا عائد الاستثمار لا تزال مماثلة طوال الفحص. ومع ذلك، فإن مؤامرة شغل للديدان N2 تعامل مع أيونات النحاس يشير إلى أن الديدان بقوة وباستمرار تجنب العائد على الاستثمار التجريبي طوال الفحص.

جيمغ "سرك =" / فيليز / ftp_upload / 55963 / 55963fig1.jpg "/>
الشكل 1: تمثيل الصور والتصوير التخطيطي لتصميم غرفة السلوك. ( A ) عرض الجبهة من السلوك غرفة الإعداد (يسار) والتمثيل التخطيطي المقابلة من إطار الغرفة (يمين). أوراق البوليستر غير شفافة ترفق الغرفة على جميع الوجوه باستثناء الوجه السفلي، والذي يسمح الضوء من خلال لوحة الأشعة تحت الحمراء الخلفية. الأرقام 1 و 2 و 3 تتوافق مع طبقات البثق في (B). ( B ) تخطيطي من أعلى وجهة نظر طبقات البثق تضم إطار غرفة السلوك. وهذا يشمل الطبقة العليا (1)، والطبقة الوسطى جبل جبل التجمع (2)، وطبقة المرحلة السفلى (3). الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 2: قوالب الحل والموضع محاذاة اللوحة. ( أ ) يحتوي قالب الحل-التنسيب على أربعة أرباع وعلامات محاذاة الأرقام. يتم وضع حل التحكم في الجزء العلوي الأيسر والأيسر أسفل الأرباع في حين يتم وضع الحل التجريبي في العلوي الأيمن والأيسر السفلي الأرباع. ( B ) قالب لوحة محاذاة لديها علامات محاذاة عدد فقط للحد من انسداد الديدان في مجال الرؤية أثناء تسجيل الفيديو والتحليل. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 3: مثال للبيانات التي تم جمعها باستخدام هذا الفحص. ( أ ) قيم مؤشر التفضيل (بي) للنوع البري N2 والمتحولة C. ايليجانس م> ردا على M13 العازلة و 10 ملي كوكل ₂ . أظهرت الديدان N2 عدم وجود تفضيل بين التحكم وعائد الاستثمار التجريبي عند وضع حل التحكم M13 في كلا عائد الاستثمار ولكن تجنب بقوة عائد الاستثمار التجريبي عند وضع أيونات النحاس فيه (بي = 0.02 و -0.67 على التوالي). أوسم-3 (p802) المسوخ و أوكر -2 (ak47) المسوخ أظهرت انخفاض كبير في تجنب أيونات النحاس مقارنة N2 (بي = -0.1 و 0.2 على التوالي). N = 6 مقايسات لكل الاقتران العلاج الجيني،> 360 الديدان لكل مقايسة، تشير أشرطة الخطأ ± 1 سيم، *** p <0.001، في اتجاه واحد أنوفا تليها بعد توكي اختبار صريح الفرق هسد (هسد). ( B ) ممثلات الإمساك دودة الممثل ل N2 الديدان مع العازلة M13 في كل من روي (أعلى) و N2 الديدان مع M13 العازلة في العائد على الاستثمار روي وأيونات النحاس في روي التجريبي (أسفل). ويمثل مقياس الألوان أسفل كل قطعة أرض عدد وحدات البكسل.بلود / 55963 / 55963fig3large.jpg "تارجيت =" _ بلانك "> الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الفيلم التكميلي 1: استجابة السلوكية من الديدان N2 إلى 10 ملم كلوريد النحاس. وتنجذب الديدان إلى الأرباع السيطرة مع العازلة M13 (العلوي الأيسر وأسفل اليمين) ولكن تجنب بشدة الأرباع التي تحتوي على أيونات النحاس الذائبة في العازلة M13 (العلوي الأيمن واليسار إلى اليسار). تم تسجيل الفيديو في إطار واحد في الثانية الواحدة، وسجل 15x. الرجاء النقر هنا لتحميل هذا الملف.

الفيلم التكميلي 2: استجابة السلوكية من أوكر-2 (ak47) الديدان إلى 10 ملي كلوريد النحاس. الديدان تتجول إلى حد متساو تقريبا في كل من الأرباع السيطرة مع M13 عازلة (أعلى اليسار واليمين السفلي) ورباعيةثانية تحتوي على أيونات النحاس المذابة في العازلة M13 (أعلى اليمين واليسار إلى اليسار) طوال مدة التسجيل. تظهر المسوخ تفضيل طفيف للأرباع التي تحتوي على أيونات النحاس في بداية التسجيل. تم تسجيل الفيديو في إطار واحد في الثانية الواحدة، وسجل 15x. الرجاء النقر هنا لتحميل هذا الملف.

ملف تكميلي: قوالب الحل والموضع محاذاة اللوحة. الرجاء النقر هنا لتحميل هذا الملف.

Discussion

خطوة حاسمة في البروتوكول هو ضمان أن لوحات الفحص لديها مستوى ثابت من جفاف في مختلف أيام التجريبية. سوف مستويات جفاف مختلفة يؤدي إلى معدلات انتشار مختلفة من الحل في أجار وبالتالي، والتغيرات في النتائج السلوكية. وبالتالي، لوحات الفحص يجب دائما أن تكون جديدة في فترة ما بعد الظهر قبل التجارب. وينبغي أيضا أن ينظم عدد الديدان اختبار لكل فحص لسهولة المقارنة بين العلاجات. للاشارة، دودة من النوع البري يضع 4-10 بيضة / ساعة في المتوسط ​​ينتج> 360 الديدان لكل مقايسة إذا تم اتباع بروتوكول تزامن دودة أعلاه ¹⁷ . إذا سلالات متحولة معينة هي وضع البيض معيبة، واختيار الديدان الكبار أكثر حمولة لوضع البيض للوصول إلى العدد المستهدف من النسل. خطوة هامة أخرى في البروتوكول هو التعامل مع الديدان بلطف خلال عملية الغسيل ودودة التنسيب. الديدان حساسة للمؤثرات الميكانيكية، والتي تثير ردود الإجهاد مثل هذا s و تثبيط وضع البيض ¹⁸ . وعلاوة على ذلك، ينبغي توخي الحذر لتحديد العائد على الاستثمار بدقة وتحديد القيمة الثابتة العتبة المثلى لظروف الإضاءة المحددة قبل الشروع في تحليل الفيديو. ويوصى أيضا بأن تتكرر عمليات المعايرة والعطف إذا انقضت فترة طويلة من الزمن منذ تشغيل التجربة الأخيرة.

الحد من هذه الطريقة هو أنها ليست مناسبة لفحص السكان دودة صغيرة. ومع ذلك، إذا تم تنفيذ الضوابط المناسبة لتحديد تأثير وجود الطعام على السلوك الحسي، ثم استخدام الغذاء لتقييد موقع الاستكشاف المكاني الديدان كما هو الحال في فحص الاحتفاظ هو ممكن أيضا مع هذا الإعداد. وبالإضافة إلى ذلك، لا يقصد هذا الأسلوب لدراسة التحفيز الملاحة التدرج نظرا لقربها وكميات صغيرة من السيطرة والحلول التجريبية قطرات المستخدمة.

e_content "> في المستقبل، يمكن دمج برامج البرمجة التي تمكن تتبع متعددة الدودة واستخلاص ميزة دودة واحدة في هذا النظام ^{19 ، 20.} تسجيل المعلمات سلوك خفية من سلوك دودة واحدة مثل سرعات عكسية واتساع منحنى الجسم ستوفر صورة أكثر تفصيلا للسلوك الحسي الكيميائي للديدان الفردية في سياق مقايسة تعتمد على السكان.يمكن أيضا أن يتم تعديل الفحص لدراسة التعود الثقوب مملة من خلال عائد الاستثمار باستخدام الإبر حقنة مع حجم قياس مناسب وملء الثقوب مع أجار غارقة مع المختبر التجريبي أو المخزن المؤقت السيطرة.هذا سيضمن تركيز سطح أكثر اتساقا للمركب على مدى فترة أطول من وقت التسجيل كما هو ضروري خلال دراسات التكرار.ومن التطبيقات المحتملة الأخرى لهذه الطريقة لإجراء دراسات السلوك المقارنة عبر أنواع مختلفة من الديدان الخيطية. بالإضافة إلى ذلك، غرفة السلوكيمكن تعديلها بطرق متعددة لدراسة الاستجابات السلوكية للمؤثرات متعددة الوسائط. لتطبيقات أوبتوجينيتيك، عالية الكثافة الصمام صفائف يمكن تركيبها بجانب جبل الكاميرا لتنشيط الخلايا العصبية ذات الاهتمام الانتقائي خلال الفحص. ويمكن أيضا إضافة عناصر التدفئة، وأنظمة التبريد، وأجهزة استشعار درجة الحرارة إلى الإعداد لدراسة آثار درجة الحرارة على السلوكيات الحسية. وعلاوة على ذلك، يمكن تركيب أنظمة تسليم الرائحة داخل الغرفة للتحقيق في التفاعلات بين الطرائق الحسية والروحية الحسية.

Disclosures

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

Acknowledgments

تم توفير بعض السلالات من قبل مركز علم الوراثة كاينورهابديتيس (سغك)، الذي يتم تمويله من قبل المعاهد الوطنية للصحة مكتب برامج البنية التحتية للبحوث (P40 OD010440). ويدعم هذا العمل معهد هوارد هيوز الطبي، الذي بوس هو المحقق.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Aluminum T-slotted framing extrusions	McMaster-Carr	47065T101	Single profile, 1" size, solid
Brackets	McMaster-Carr	47065T236	1" long for 1" high single profile extrusions
Compact end-feed fasteners	McMaster-Carr	47065T139	1" (single), pack of 4
Twist-in solid panel holders	McMaster-Carr	47065T251	For 1" high extrusion
Plastic end caps	McMaster-Carr	47065T91	For 1" high extrusion
Optically clear cast acrylic sheet	McMaster-Carr	8560K211	3/16" thick, 12" x 12"
Vinyl-coated polyester fabric	McMaster-Carr	88505K57	0.027" thick, 61" width, black
Brass grommets	McMaster-Carr	9604K22	Trade size 0, 0.545" outer diameter
Steel washers	McMaster-Carr	90107A029	1/4" screw size
Rounded head screws	McMaster-Carr	90272A546	1/4" - 20 thread size, 1 - 1/2" long
Standard operating backlight	Smart Vision Lights	See local vendor	8" x 8", infrared 850 nm
IVP-C1 Variable Control Pot	Smart Vision Lights	See local vendor
T1 Power Supply	Smart Vision Lights	See local vendor
Dino lite Pro AM4113T	Dino-Lite Digital Microscope	See local vendor
MS09B microscope stand	Dino-Lite Digital Microscope	See local vendor

References

1. White, J. G., Southgate, E., Thomson, J. N., Brenner, S. The structure of the nervous system of the nematode Caenorhabditis elegans. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 314, 1-340 (1986).
2. Bargmann, C. I., Horvitz, H. R. Chemosensory neurons with overlapping functions direct chemotaxis to multiple chemicals in C. elegans. Neuron. 7 (5), 729-742 (1991).
3. Bargmann, C. I., Hartwieg, E., Horvitz, H. R. Odorant-selective genes and neurons mediate olfaction in C. elegans. Cell. 74 (3), 515-527 (1993).
4. Hilliard, M. A., Bargmann, C. I., Bazzicalupo, P. C. elegans responds to chemical repellents by integrating sensory inputs from the head and the tail. Curr Biol. 12 (9), 730-734 (2002).
5. Hilliard, M. A., Bergamasco, C., Arbucci, S., Plasterk, R. H., Bazzicalupo, P. Worms taste bitter: ASH neurons, QUI-1, GPA-3 and ODR-3 mediate quinine avoidance in Caenorhabditis elegans. EMBO J. 23 (5), 1101-1111 (2004).
6. Zariwala, H. A., Miller, A. C., Faumont, S., Lockery, S. R. Step response analysis of thermotaxis in Caenorhabditis elegans. J Neurosci. 23 (10), 4369-4377 (2003).
7. Ward, S. Chemotaxis by the nematode Caenorhabditis elegans: identification of attractants and analysis of the response by use of mutants. Proc Natl Acad Sci U S A. 70 (3), 817-821 (1973).
8. Wicks, S. R., de Vries, C. J., van Luenen, H. G., Plasterk, R. H. CHE-3, a cytosolic dynein heavy chain, is required for sensory cilia structure and function in Caenorhabditis elegans. Dev Biol. 221 (2), 295-307 (2000).
9. Jansen, G., Weinkove, D., Plasterk, R. H. A. The G-protein subunit gpc-1 of the nematode C. elegans is involved in taste adaptation. EMBO J. 21 (5), 986-994 (2002).
10. Srinivasan, J., et al. A blend of small molecules regulates both mating and development in Caenorhabditis elegans. Nature. 454 (7208), 1115-1118 (2008).
11. Choe, A., et al. Ascaroside signaling is widely conserved among nematodes. Curr Biol. 22 (9), 772-780 (2012).
12. Ezcurra, M., Tanizawa, Y., Swoboda, P., Schafer, W. R. Food sensitizes C. elegans avoidance behaviours through acute dopamine signalling. EMBO J. 30 (6), 1110-1122 (2011).
13. Ward, A., Liu, J., Feng, Z., Xu, X. Z. S. Light-sensitive neurons and channels mediate phototaxis in C. elegans. Nat Neurosci. 11 (8), 916-922 (2008).
14. Kunitomo, H., et al. Concentration memory-dependent synaptic plasticity of a taste circuit regulates salt concentration chemotaxis in Caenorhabditis elegans. Nat Commun. 4, 2210 (2013).
15. Snow, J. J., et al. Two anterograde intraflagellar transport motors cooperate to build sensory cilia on C. elegans neurons. Nat Cell Biol. 6 (11), 1109-1113 (2004).
16. Tobin, D. M., et al. Combinatorial expression of TRPV channel proteins defines their sensory functions and subcellular localization in C. elegans neurons. Neuron. 35 (2), 307-318 (2002).
17. Waggoner, L. E., Zhou, G. T., Schafer, R. W., Schafer, W. R. Control of alternative behavioral states by serotonin in Caenorhabditis elegans. Neuron. 21 (1), 203-214 (1998).
18. Sawin, E. R. Genetic and cellular analysis of modulated behaviors in Caenorhabditis elegans. , M.I.T. Cambridge, MA. (1996).
19. Ramot, D., Johnson, B. E., Berry, T. L., Carnell, L., Goodman, M. B. The parallel worm tracker: A platform for measuring average speed and drug-induced paralysis in nematodes. PLoS One. 3 (5), e2208 (2008).
20. Swierczek, N. A., Giles, A. C., Rankin, C. H., Kerr, R. A. High-throughput behavioral analysis in C. elegans. Nat Methods. 8 (7), 592-598 (2011).

Tags

السلوك، العدد 125، النيماتودا،