Summary
ノドの部分肝切除 (PHx) と脾臓を介して細胞移植を実行するためのプロトコルを説明しました。SCID (うなずく。CB17-Prkdcscid/J) マウス。このプロトコルを公開し、脾細胞移植のための別の切開に続いて肝臓の左葉を切除する切開します。
Abstract
肝切除は、肝再生と各種病態における細胞による治療の効果を研究する汎用性と再現性のある方法です。肝部分切除は加速新生血管と肝臓への細胞移行によってまた増加移植と移植細胞の増殖を促進します。ここでは、免疫不全のうなずきを組み合わせた非肥満糖尿病/重度の脾臓で 30% 肝切除や細胞移植を実行するための単純なプロトコルについて述べる.SCID (うなずく。CB17-Prkdcscid/J) マウス。
この手順では、2 つの小さな切開が作られています。最初の切開を公開し, 肝左葉を切除、脾内移植細胞の脾臓を公開するもう一つの小さな切開を行った。この手順は、すべての専門的な手術のスキルを必要はありません、少ないストレスと痛み、高速回復、生存率と 5-7 分で完了することができます。マウス (トランスジェニック C57BL/6-Tg (UBC GFP) 30Scha/J)、として部分的肝切除会釈で人間の起源 (NeoHep) の細胞のような肝細胞を表現する緑色蛍光タンパク質 (GFP) から分離された肝細胞の移植を行った。SCID マウス。
Introduction
現在、重度の肝障害を有する患者の治療のための全体の臓器移植に代わるものとして肝細胞移植を提案する.それが全臓器移植1患者を埋めることができるといわれています。同種肝2、に加えてまた異種肝3と4幹細胞由来肝細胞を動物モデルで検討されています。このコンテキスト、ホーミングと生着受信者に移植細胞の潜在性は急性肝不全 (AHF) で基づく細胞療法の重要な基準です。
肝細胞の肝細胞様細胞5移植を調査、AHF が手術6か細胞移植薬理7手続、動物モデルで作成されます。薬理学的試薬、コンカナバリン A12、リポ多糖13, チオアセトアミド11四塩化炭素10アセトアミノフェン9d-ガラクトサミン8など多くの hepatotoxins によって AHF 動物モデルを作成するには、等.、使用されています。このリストからすべての試薬、AHF のユニークな一連の機能を生成しますが、単一試薬を人間 AHF 模倣ない残念なことに。また、hepatotoxins による AHF 慢性的なストレス下での動物を置く、長い時間がかかる、再現性のある結果が得にくい。
その一方で、肝部分切除 (PHx) の手術はスキル依存と再現性のある結果が必要なスキルを開発したら、入手しやすい。単独で外科的介入によって AHF を誘導して、肝臓の 70% 以上の切除が必要です。ただし、70% 肝切除は生着、増殖研究にまだ利用することができます未満は肝臓障害14中治療能力の分析の肝細胞を移植しました。肝細胞の移植は、腹膜15、16尾静脈、肝静脈17、または脾臓18を介して実行されるポスト肝切除をされています。現在、肝静脈注入と脾内移植肝細胞の最寄りの手順では、簡単に再現しています。
本稿でうなずきで 30% 部分肝切除のための手順を説明しました。SCID (うなずく。CB17-Prkdcscid/J) マウス肝臓の左葉が切除されます。それは、人間の起源は、脾臓で NeoHep19と同様、20 万の GFP 発現マウス (C57BL/6-Tg (UBC GFP) 30Scha/J) 肝細胞の移植が続きます。この手順は、肝臓移植細胞の生着につながります。この手順は、少なくとも侵襲的な少なくとも痛みを伴う方法です。
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Protocol
このプロトコルで説明されている手順は、ニューデリー国立免疫学研究所の機関の動物倫理委員会によって承認されています。承認のシリアル番号は IAEC #319/13.
注: 一般的な手術手順20と齧歯動物の外科21のための特定のプロトコルに優秀な資源があります。初めて動物の外科手術を行うため、勧め広範囲の練習にダミーに手術動物で動作する前に。
1. 準備
- 実験前に滅菌リン酸緩衝生理食塩水 (PBS) または生理食塩水の準備をしてください。
- はさみ、鋸歯鉗子、組織鉗子、コットン、綿棒、ナイロン スレッド、および異なるマイクロ ニードル ホルダーを含む手術キットを組み立てます。オートクレーブ手術キット。NOD は、免疫の低下した場合に、特別な注意が必要があります。SCID マウスは、プロトコルに含まれます。
- 手術の最後に準備から実験手順を実行、バイオ安全クラス I 内閣。
- うなずきの重量を量る。6-8 週間手術前に古いの SCID マウス。14 18 g の間の重量を量るマウスは本研究で使用されます。
- 髪トリマーにマウスの上部中央と肋腹部領域を剃る。髪のトリミングした毛を完全に削除にヘラで地域全体に均等にクリームを削除するを適用します。2-5 分後濡れた滅菌綿の部分のヘルプで軽く毛を削除します。
- イソフルラン チャンバーにマウスを置き、酸素ボンベのバルブのロックを解除します。4 L/分の速度で酸素の流れとイソフルラン気化麻酔を誘導するために 4% を維持します。
- マウスは、穏やかなつま先をつまんで適切に麻酔されていることを確認します。
- キャビネット バイオセイフティ内手術ボードを配置します。マウスの腹側を向いているし、マウスの前方部分はイソフルランと酸素の供給に接続されている鼻の円錐形内に配置するように、動物を手術基板に配置します。
- イソフルラン気化の 2% を削減し、手術を通してそれを維持します。
- マウスの皮膚を消毒して、70% エタノールに浸した滅菌綿で拭くことによってそれを殺菌.
2. 手術
-
肝部分切除
- 剣状突起と直線動作はさみの助けを借りて、胸部に平行に垂直、胸骨のすぐ下に皮膚の約 1 cm の横切開を加えます。
- 鉗子や皮膚や腹部の筋肉の層を区別する湿らせた滅菌綿棒付け切開領域近傍の腹部の筋肉層で皮膚を優しきます。乾燥を避けるために滅菌綿棒を使用して PBS の皮地域を浸します。
- 左葉の領域を剣のすぐ下に腹膜の層を介して横切開することによってスムーズに公開します。肝臓の左葉を持ち上げてを公開する 2 つの湿らせた綿棒を使用します。
- カットの腹部側に綿のヒントの一つに、ダイヤフラムの側面の別の綿のヒントを置きます。優しく、横隔膜に向かって配置ヒントを押すし、肝臓の左葉を持ち上げることによる他の先端スライド プッシュを与えます。
- リフトの左葉をループのナイロン糸を滑り、マイクロ鉗子または綿のヒントの助けを借りて、肺門の近くに左葉の底部に向けてループをスライドさせます。左の葉のベースにナイロン糸ループの下を軽く押します。
- マイクロサージャリー針ホルダーとマイクロ鉗子を使用して左の葉の上にナイロン糸の両端を結ぶ。反対側に 2 つの追加の結び目を作る。
- はさみの助けを借りて、結ばれた葉を分析します。スレッドに近い非常にカットしようとしないでください。場合に手順は、5 分以上続く、潤いを保つ腹腔内や臓器体液の損失のための乾燥を避けるために滅菌 PBS の。
- 連続 4-0 腸線縫合糸を使用して縫合、腹膜を縫います。その後、できるだけ早く不連続縫合で皮膚を閉じます。
-
細胞移植
注: GFP 発現肝細胞が GFP トランスジェニック マウスから分離された (C57BL/6-Tg (UBC GFP) 30 Scha/J)、李らによって記述された手順に従って。22と沈ら。23 24単球から分化したひと由来の肝細胞様細胞 (NeoHep) は、移植にも使用されました。ただし、他のソースから派生したセルは、プロトコルに使用もことがあります。- 20 万約 50 μ L Iscove の変更ダルベッコ媒体 (IMDM) の細胞を中断し、30 G 針でキャップ 1 mL インスリン注射器で吸引します。氷の上に置くことで、シリンジの寒さを維持します。
- 手術を行う人に向かって左の外側部分が上を向くようにマウスを配置します。脾の領域を識別するそして横脾臓を公開する腹膜の層を介して短い切開に続けて、肋領域付近の皮膚を解剖します。
- 優しく、脾臓を持ち上げて、2 つ PBS の助けを借りて共振器外には綿棒を湿らせた。
- 片手で 2 つ綿棒で慎重に脾臓を押し、注射器の針を脾臓に正確に垂直に配置します。優しく脾臓に穴を開けるし、針を押して内部で非常にゆっくりと。針は、2 mm よりも深い取得しないでください。
- 注射器のピストンをゆっくりと脾臓に細胞を注入するプッシュします。移植後注射器の針を安定に保つため、出血を避けるために脾臓または細胞の損失からゆっくりと取り外します。
- 綿のヒントと腹腔内に脾臓を配置した後 4-0 腸線縫合糸で連続縫合により腹膜の層を閉じます。不連続同じ縫合と皮膚を縫います。皮膚を閉じるため傷クリップを使用しないでください。代わりに、4-0 縫合して閉じます。傷クリップがマウスの自然な動きを制限して多くの場合クリップが緩むし、すぐに出てくる。
3. 手術後のケア
- 皮膚を閉じると後に、、ヨード溶液 (betadine) 滅菌綿棒を使用して縫合サイトの両方の周りを拭いてください。
- 600 mg/kg 本体重量 (通常は、100 μ L の生理食塩水/マウスで 12 mg セフォタキシム) 腹腔内と抗生物質セフォタキシムの線量を注入 1 mL の注射器を使用しています。
- 鎮痛剤メロキシカムの毎日の用量として与える 1 mg/kg 体重 (通常 12 μ g メロキシカム生理食塩水/マウスの 100 μ L の) 動物に腹腔内、手術後は、3 日間。
- 手術の終了後、イソフルラン麻酔ガスの流れを止めるし、個別換気ケージに戻ってマウス カーソルを置きます。
4. euthanization とキャラクタリゼーション
- 実験的エンドポイント (1 日、手術後 10 日) 後に、、動物倫理ガイドラインに従ってマウスを安楽死させます。
- 末期眼ターミナル神経叢を穿刺、動物の出血によって血を収集します。
- 血液から血清を分離します。
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Representative Results
30% 肝部分切除後の肝細胞増殖:細胞増殖マーカー、Ki 67 の染色 (IHC) を免疫組織化学によって 30% 肝切除後肝残りの肝細胞の増殖を調べた。1 日ポスト肝マウスを安楽死させ、残りの肝葉摘出、およびパラフィン切片が得られました。西洋わさびペルオキシダーゼ (HRP) 共役二次抗体とラベリングに続いて、Ki 67 抗体染色しました。・ ディ ・ アミノ ベンジジン (軽打) は、染色の細胞を識別するために茶色の色の開発の HRP の基板として使用されました。核はヘマトキシリンで染色され、20 X 客観的顕微鏡下でカウンターだった肝部代表 IHC イメージを図 1に示します。約細胞 (13.66 ± 0.317、N = 3) の 13% が Ki 67 正、30% 肝切除マウスの肝臓で肝細胞の増殖が容易になることを確認します。
解剖学的研究:うなずくの肝臓の代表的なイメージ。SCID マウス、10 日ポスト肝切除は図 2に示します。この画像は、残りの肝はない目に見える異常は、健康を確認しました。
手術の最初の時間中に移植された細胞の存在:移植細胞のホーミングは、移植後 2 時間 GFP 陽性肝細胞の存在を調べることによってフローサイトメトリーによる解析で確認されました。
単一細胞懸濁液は、摘出組織の酵素消化郵便 GFP 肝細胞移植の 2 時間後に脾臓とホスト マウスの肝臓から得られました。移植の GFP 陽性細胞の割合は、流れの cytometer を用いて推定しました。散布ゲートは、破片やダブレット細胞を排除する対応する SSC FSC ドット プロットから選ばれました。プロットの象限儀のゲートは、脾臓細胞が移植したないコントロール マウスの肝臓から得られた細胞懸濁液の背景螢光強度によって作成されました。約 1.7 %gfp 陽性肝細胞は脾臓で見つかり、GFP 肝細胞は見つかりませんでした、肝移植後 2 時間。図 3に代表的なデータを示します。
免疫組織化学:10 日手術後、マウスを安楽死させ、右外側の葉、内側右葉および肝臓の左内側の葉を摘出し、低温電子顕微鏡断面を 5 μ m のセクションを取得する行った。これらのセクションはホーミングと移植細胞の生着のため、調べた。図 4に対して抗 GFP (赤) をマウス肝細胞 (パネルA B、およびC) を表現する GFP を識別する染色 (IHC) 免疫組織化学の代表的なイメージを示しています。抗ひとアルブミン (赤) は抗ひとコネキシン 32 (緑) と同様にひと由来の肝細胞様細胞 (NeoHep) を識別するために賛否 ( D、 E F、およびGのパネル)。核は、4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI、青) どちらの場合で counterstained だった。これらのイメージ パネル (パネルA B、およびC) は肝細胞と NeoHep ( D、 E F、およびGのパネル) を表現するいくつかの明らかな移植 GFP が明確に表示されます。
肝臓の生化学的解析分泌酵素:手術後肝臓の機能をチェックするために別の肝臓の分泌酵素の生化学的解析を行った。図 5に棒グラフがアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ (AST)、アラニンアミノトランスフェラーゼ (ALT) の平均値を表すと健全な合図の血清アルカリ性フォスファターゼ (ALK フォス)。SCID マウスや部分的肝切除マウスの異なるグループ。肝切除の 1 日は、AST、ALT、およびフォス ALK 酵素のレベル大幅に増加、健康なマウスと比較してグラフから明らかです。
ALK フォス レベル高止まりしているポスト非移植マウスにおける 10 日手術中、ALT と AST の酵素レベルは正常に復元されました。ただし、すべての 3 つの酵素のレベルは 10 日後移植マウスで正常に削除されます。
肝組織学的研究:肝切除と移植マウスの肝のサンプルは、手術後解剖学的変化を研究する組織学的解析のためさらに処理されました。図 6は、1 日に手術をせずに健康なマウスの肝切片を染色ヘマトキシリンとエオシン (H と E) の画像投稿肝部分切除し、10 日後に肝部分切除と NeoHep 移植代表明るいフィールドを示します。これらの画像で軽度のペリ胆管線維症または結合組織増殖による肝臓損傷部分肝切除の 1 日後に観察され、異常は手術後 10 日間認められなかった。
図 1: Ki 67 は NOD の染色の代表的なイメージ。30% 肝切除の 1 日後肝 SCID セクション。セクションは、Ki 67 抗体で染色された、西洋ワサビペルオキシダーゼ (HRP) 共役二次抗体と DAB (ブラウン) は HRP 基板として使用され、核はヘマトキシリン (青) によって counterstained あった。示す矢印は、Ki 67 陽性 (ブラウン) 細胞のいくつかを指摘します。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 2: うなずくの肝葉を再生成します。SCID マウス 10 日後手術。A: 尾状葉 (尾状突起) b: 右内側葉、d: 左内側葉、e: 心残り f: c: 右葉外側切除後の肝左葉の外側の g: 尾状葉 (乳頭プロセス)。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 3: 脾臓および NOD の肝臓における GFP マウスの肯定的な heptatocytes の割合。SCID マウスします。上部のパネルは、細胞が移植したない年齢一致するコントロール マウスの携帯プロフィールを表示します。下のパネルは、GFP マウスの肝切除後肝細胞移植の 2 時間後携帯プロファイルを表示します。プロットの y 軸は対数スケール上の任意の単位で測定 (FITC チャンネル) GFP の蛍光強度を表し、x 軸は線形スケールで任意の単位で前方散乱 (FSC) を表します。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 4: 再ホスト肝マウス肝細胞と NeoHep を表現する移植の GFP のホーミング。部分肝切除後の肝切片の代表的なイメージはうなずきます。SCID マウス GFP 陽性マウス肝細胞 (A ~ C)、移植細胞の生着を示し、ホーミングします。パネル a: 核 (青: DAPI)、パネル b: 抗 GFP (赤: Alexa Fluor 594)、パネル c: マージされた画像。部分肝切除のうなずきの肝のセクションを表示するパネル (D G)。どの NeoHep の SCID マウスに移植しました。パネル d: 核 (青: DAPI)、パネル e: 人間アンチ コネキシン 32 (緑: Alexa Fluor 488)、パネル f: 抗アルブミン (赤: Alexa Fluor 594) とパネル g: マージされた画像。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 5: 異なる肝臓の生化学的解析がマウス血清中の酵素を分泌される。主筋は、異なる酵素 (AST/SGOT、ALT/SGPT、ALK フォス) の平均値を表します。研究手術後の時点は、X 軸に表示されます。対照群の年齢一致合図があった。SCID マウスとない手術を行った。誤差範囲を示す、N = 3 の平均値の標準誤差、* pを示します < 0.05、NS pで非重要性を示します > 0.05。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 6: マウス肝切片の病理学的研究.ヘマトキシリンとエオシン (H と E) の代表的な明るいフィールド顕微鏡画像は NOD の肝臓切片染色。SCID マウス 20 X 対物レンズの下で。パネルには、健康的な合図から肝セクションを示します。手術をしなくても同じ年齢の SCID マウス。パネル B 肝セクション 1 日ポスト部分肝切除を示しています。この画像では、矢印の頭は軽度ペリ胆道線維化または結合組織増殖領域を示します。パネル C は、肝臓のセクション 10 日ポスト部分肝切除と細胞移植を示しています。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
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Discussion
肝部分切除は調査の肝再生に確立された技術と過剰な切除は AHF モデルを模倣に報告されました。AHF の動物モデルは、齧歯動物、特にマウスは最も研究のモデルがあります。70% 肝切除までのマウス肝障害モデルを取得するには、良い生存率25,26で報告されています。しかし裸や他の免疫不全マウスは、70% 肝切除を致命的なものとして報告された、24 時間27以内に動物が死亡しました。
ミッチェル ・ Willenbring28は、再現性と忍容性マウスの 2/3 切除法を示した。合図。SCID マウス肝切除された肝総量の 30% 近くが左の肝葉切除までは制限時 100% 生存率を得た。ヌードマウス27の観察、に沿っていずれかのうなずきで肝切除の割合の拡大を見ました。SCID マウスは生存率の劇的な低下につながります。また、増殖残りの肝細胞の肝葉ポスト 30% 肝部分切除の 1 日は、移植の生着の研究この手順の有用性を確認しました。
最近の論文、アハメド思慮ら29は、免疫不全マウスにおける肝内肝細胞癌異種移植片の手順を示しています。彼らは様々 な臓器、脾臓を含むと肝移植を容易にするために肝切除を施行の腫瘍細胞の移植の手順を示しています。
ミッチェル28とアハメド29によって報告された手順、手術には一般的に小さな切開を推奨としてはるかに小さい切開することによって改良のための機会があります。カテコールアミン、コルチゾールなどのストレス ホルモンの分泌が減少するため、小さい長さの外科的切開証拠30があります。さらに、1 つの大きな切開を含むプロシージャが、スキルの高いレベルが必要し、より再現が困難な 2 つの小さな切開を持つプロシージャと比較して分かった。
本稿で肝左葉を公開する必要が最小切開の手順を述べるし、30% 肝切除を実行した後細胞が移植された脾臓を公開する別の小さな切開をしました。この手順は、任意の専門的な手術のスキルを必要としないし、5-7 分で完了することができます。さらに、我々 は組織学的研究によって証明されるよう、残りの肝固まりで形態学的あるいは解剖学的異常の証拠を見つけなかった。さらに、6-8 週の手術中に虚血や壊死がない場合があった-古い免疫不全マウス。肝部分切除後の肝障害の誘導は、肝酵素 AST、ALT、および ALK PHOSin マウスの血清レベルの上昇によって確認されます。脾内のルートは、門脈系の他の静脈のシステムよりも肝皮質に高いアクセシビリティその他の静脈ルートで細胞移植に選ばれました。私達は GFP トランスジェニック マウスから分離した肝細胞の移植を示し、NeoHep は区別される人間の起源は、うなずく部分肝切除後の肝細胞のような細胞。SCID の動物。プロシージャでは、移植用細胞の種類は制限しません。
ただし、この手順が発生しない AHF 条件、マウスでのみ 30% 切除を行う。この肝は、肝細胞の生着の移植肝細胞の追加の機会をもたらします残肝に存在する増殖能を提供します。それだけ示します移行し肝細胞と NeoHep の生着脾臓から肝臓と移植手順による肝臓への追加ダメージは行われません。
すべてにわたって、この手順は簡単ですと練習でき再現性のある結果を取得する簡単に習得します。肝障害や肝再生研究のコンテキストでいくつかの細胞ソース (幹細胞や肝細胞のような細胞) の再生の可能性は、この手術を簡単に評価できます。
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Disclosures
著者が明らかに何もありません。
Acknowledgments
この作品は、インド政府ニューデリー国立免疫学研究所生物資源科学部から受領したコアによって支えられました。博士バッタチャルジー現住所は消化器科、肝臓と栄養、子供のロサンゼルスの病院です。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Gas Anesthesia System | Ugo Basile; Italy | 211000 | |
| Weighing machine | Goldtech ; India | Local Procurement | |
| Biological safety cabinet ( Class I) | Kartos international; India | Local Procurement | |
| Hair Trimmer | Panasonic ; Japan | ER-GY10 | |
| Straight operating scissor with sharp /sharp blades | Major Surgicals; India | Local Procurement | |
| Forceps with Serrations | Major Surgicals; India | Local Procurement | |
| Micro needle holders straight & curved | Mercian ; England | BS-13-8 | |
| 1 ml insulin syringe with 30G *5/16 needles | Dispo Van; India | ||
| 1 ml syringe with 26 G * 1/2 needle | BD ; US | REF 303060 | |
| Nylon Threads | Mighty ; India | (1-0) Local Procurement | |
| MERSUTURES 4-0 Sterilised Surgical Needled Suture | Ethicon, Johnson & Johnson, India | NW 5047 | |
| TRUGUT 76 cm 4-0 absorbable surgical suture | Sutures India Pvt. Ltd; India | SN 5048 | Sterilised Surgical Needled Suture Catgut Chromic |
| Cotton Buds | Pure Swabs Pvt Ltd ; India | Local Procurement | |
| Surgical Tape | 3M India ; India | 1530-1 | Micropore Surgical Tape |
| Microtome | Histo-Line Laboratories, Italy | MRS3500 | |
| Shandon Cryotome E Cryostat | Thermo Electron Corporation ; US | ||
| Confocal laser scanning microscope | Carl Zeiss ; Germany | LSM 510 META | |
| Bright Field Microscope | Olympus, Japan | LX51 | |
| Automated analyser | Tulip, Alto Santracruz, India | Screen Maaster 3000 | Biochemical analyser for liver functional test |
| Flow Cytometer | BD ; US | BD FACSverse | Assesment of presence of cells post transplantation |
| Veet hair removal cream | Reckitt Benckiser , India | ||
| FORANE | Abbott ; US | isoflurane USP 99.9% | |
| Taxim | AlKem ; India | cefotaxime sodium injection | |
| Povidone-Iodine solution | Win-Medicare; India | Betadine | |
| Paraformaldehyde | Himedia; India | GRM 3660 | |
| Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM) | Life technologies, Thermo Fisher scientific ; US | 12200-036 | |
| Sucrose | Sigma ; US | S0389 | |
| Tissue-Tek | Sakura; US | 25608-930 | O.C.T compound |
| DAPI | Himedia; India | MB 097 | |
| anti-Albumin goat Polyclonal | Thermo Scientific,Pierce, US | PA126081 | |
| anti-connexin 32/GJB1 Polyclonal | abcam, UK | ab64609-500 | |
| antiGFP rabbit polyclonal | Santa Cruz biotechnology; US | SC 8334 | |
| Alexa Fluor 594 donkey anti-goat | Molecular Probes , Thermo Fisher Scientific ; US | A11058 | |
| Alexa Fluor 488 donkey anti-sheep | Molecular Probes , Thermo Fisher Scientific ; US | A11015 | |
| Alexa Fluor 594 chicken anti rabbit | Molecular Probes , Thermo Fisher Scientific ; US | A21442 | |
| Goat anti rabbit IgG HRP | Invitrogen, Thermo Fisher Scientific; US | 65-6120 | |
| anti-Ki67 antibody | abcam, UK | ab15580 | |
| Antigen Unmasking Solution, Citric acid base | Vector laboratories, US | H-3300 | |
| ProLong Diamond antifade mountant | Life technologies, Thermo Fisher scientific ; US | P36966 | |
| SGOT (ASAT) KIT | Coral Clinical System, India | ||
| SGPT (ALAT) KIT | Coral Clinical System, India | ||
| Alkaline Phosphatase Kit (DEA) | Coral Clinical System, India | ||
| Hematoxylin Solution, Mayer's | Sigma ; US | MHS16 | |
| Eosin Y solution, alcoholic | Sigma ; US | HT110132 | |
| DPX Mountant | Sigma ; US | 6522 | |
| Melonex (Pain Killer) | Intas Pharmaceuticals Ltd; India | Meloxicam injection | |
| DAB enhanced liquid substrate system tetrahydrochloride | Sigma ; US | D3939 |
References
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