Summary
Forskning på ioniserende stråling (IR)-indusert clonogenic celledød er viktig for å forstå effekten av IR på ondsinnethet svulst og normalt vev. Her beskriver vi en ettrinns analysen for å vurdere de store modusene av IR-indusert clonogenic celledød basert på morfologi av 4', 6-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride (DAPI)-farget kjerner visualisert ved fluorescens mikroskopi.
Abstract
Forskning på ioniserende stråling (IR)-indusert clonogenic celledød er viktig for å forstå effekten av IR på ondsinnethet svulst og normalt vev. Her beskriver vi en rask og kostnadseffektiv ettrinns analysen for å vurdere samtidig store moduser av clonogenic celledød indusert av IR, dvs, apoptose, mitotisk katastrofe og mobilnettet senescence. Denne metoden er celler dyrket på en cover slip bestrålt røntgenstråler og farget med 4', 6-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride (DAPI). Bruker fluorescens mikroskopi, apoptose, mitotisk katastrofe og mobilnettet senescence, identifiseres basert på de karakteristiske morphologies av DAPI-farget kjerner. Apoptose bestemmes av tilstedeværelsen av apoptotisk organer (dvs., knepet og fragmentert kjerner). Mitotisk katastrofe bestemmes av tilstedeværelse av kjerner som viser to eller flere forskjellige fliker og mikronuklei. Mobilnettet senescence bestemmes av tilstedeværelsen av senescence-assosiert heterochromatic foci (dvs., kjernefysiske DNA som inneholder 30-50 lyse, tett fokus). Denne tilnærmingen kan eksperimentator til lett skjermen for clonogenic celle død modus bruker ulike linjer, innstillingene eller tidspunkt, med mål om Klargjørende mekanismer for celledød i målcellene og forholdene rundt.
Introduction
Ioniserende stråling (IR) induserer flere driftsmoduser clonogenic celledød. Forskning på IR-indusert clonogenic celledød er viktig for å forstå toksisitet av IR på normalt vev og utvikle metoder for å øke behandling effekten av kreft strålebehandling. Apoptose, mitotisk katastrofe og mobilnettet senescence er store moduser av clonogenic celledød indusert av IR1. Apoptose er en regulert celledød som startes av DNA skade1. Mitotisk katastrofe er celledød som oppstår grunnet avvikende mitose skyldes ikke er reparert DNA dobbel-strand bryter1. Mobilnettet senescence er definert som en tilstand av irreversible celle vekst arrestasjon2; Merk at mobilnettet senescence er ikke celledød per se, men det er en måte å clonogenic celledød fordi det opphever clonogenic overlevelsen av den senescent cellen.
Ulike cellebasert analyser er utviklet for å vurdere individuelt apoptose, mitotisk katastrofe og mobilnettet senescence. Apoptose kan vurderes av terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick-end merking (tunnel) flekker, annexin V flekker, DNA fragmentering analyser og sub-G1 cellen syklus fase fastsettelse av flyt cytometri1. Mitotisk katastrofe kan vurderes av immunofluorescence flekker for mitotisk markører, inkludert MPM2, tunnel flekker og elektronmikroskop1. Mobilnettet senescence kan vurderes av senescence-assosiert β-galactosidase (SA-β-Gal) flekker, vekst-arrestasjon analyser og elektronmikroskop1. Viktigere, varierer den dominerende modusen av clonogenic celledød blant linjer og behandling for3,4. Derfor for å belyse generelle profilen til clonogenic celledød gitt eksperimentelle omgivelser, må flere analyser dekker alle disse modiene av død utføres sammen, som er arbeids - og kostnadskrevende.
I denne artikkelen beskriver vi en rask og kostnadseffektiv ettrinns analysen for samtidig vurdere apoptose, mitotisk katastrofe og mobilnettet senescence indusert av IR3,4. Denne metoden er celler dyrket på en cover slip bestrålt røntgenstråler og farget med 4', 6-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride (DAPI). Bruker fluorescens mikroskopi, identifiseres apoptose, mitotisk katastrofe og mobilnettet senescence hver basert på de respektive karakteristiske morphologies av DAPI-farget kjerner. Denne tilnærmingen vil være nyttig for programmer inkludert screening for clonogenic celle død profiler i ulike linjer, behandlingstilbud og tidspunkt, med mål om å undersøke mekanismer for celledød i målcellene og ansettelsesbetingelser interesse.
Protocol
1. forberedelse for materiale
- Autoclave cover følgesedler.
- Sett dekselet slips i et glass beaker.
- Dekker glass begeret med folie.
- Autoclave 121 ° c på 15 psi i 20 min.
- Tørr på 50 ° C. butikken ved romtemperatur i kultur hette.
- Forberede fiksering løsning: 3% paraformaldehyde + 2% sukrose i fosfat-bufret saltvann (PBS).
- En 1000 mL glassflaske, legge 700 mL PBS og 30 g paraformaldehyde.
FORSIKTIG: Paraformaldehyde er etsende, bruke aktuelle hansker. - Oppløsning paraformaldehyde helt ved å varme til 80 ° C med en mikrobølgeovn.
FORSIKTIG: Paraformaldehyde gasser er giftige, bære en maske. - La ved romtemperatur over natten.
- Legge til 20 g sukrose.
- Legge til PBS gjøre det totale volumet 1 L.
- Aliquot i 50 mL rør. Fiksering løsning kan lagres i 3 år på 20 ° C eller for 3 måneder på 4 ° C.
- En 1000 mL glassflaske, legge 700 mL PBS og 30 g paraformaldehyde.
2. Utarbeidelse av cellekultur
Merk: disse prosedyrene skal utføres i kultur hette.
- Kultur og passasje U2OS menneskelige osteosarcoma celler å opprettholde logaritmisk vekst 5.
Merk: Andre celletyper kan brukes etter bestemme den optimale bestråling dosen. - Tørke skalpell med papir håndkle fuktet med 70% etanol. Bruker skalpell, plasserer en cover slip på en 35 mm celle kultur parabol (heretter bare referert til som " rett ").
Merk: Antall cover slips i en rett kan økes etter den eksperimentelle design (se diskusjon). - Legge til 1 mL kultur medier: DMEM med 10% fosterets bovin serum.
Merk: Andre medier kan brukes i henhold til valgt celle type. - Tørke tang med papir håndkle fuktet med 70% etanol. Bruke pinsett, hold midten av cover slip. Sug opp kultur media fra parabolen helt, mens tak på cover slip.
Merk: dette trinnet fremmer immobilisering av cover slip til parabolen. - Koble tilhenger kulturperler celler ved hjelp av trypsin 5.
- Sug opp kultur medier fra parabolen.
- Legge til 1 mL PBS og riste parabolen forsiktig.
- Sug opp PBS fra parabolen.
- Legge til 1 mL trypsin [0.25w/v% Trypsin-1mmol/L EDTA] parabolen.
- Incubate i 5 min på 37 ° C i en atmosfære som inneholder 5% CO 2.
- Legge til 9 mL kultur medier parabolen.
- Bruker 1000 μL brønnene, forberede en enkeltcelle suspensjon.
- Telle celler 5.
- i en 1,5 mL tube, legge 0.9 mL celle suspensjon og 0,1 mL 0,4% Trypan blå løsning.
- Bruke 10 μL til en hemocytometer.
- Undersøke antallet unstained kvinne (dvs., live) celler under en invertert-fase mikroskop.
- i en 15 mL tube, forberede 3 mL celle suspensjon i kultur medier på en tetthet på 0,5 x 10 5 celler/mL.
Merk: Cellen tetthet kan endres i henhold til eksperimentelle må (se diskusjon). - Forsiktig legge 2 mL celle suspensjon til parabolen.
- Incubate overnatting på 37 ° C i en atmosfære som inneholder 5% CO 2.
3. Bestråling
Advarsel: håndtere X-ray irradiator nøye ifølge produsenten ' s instruksjoner.
- Undersøke cellene under et mikroskop invertert-fase. Kontroller at cellene er festet til dekselet slip og levende.
- Irradiate parabolen med 6 Gy røntgenbilder (1,4 Gy/min, 300 KVP, 20 mA).
- Incubate 72 h på 37 ° C i en atmosfære som inneholder 5% CO 2.
Merk: Inkubasjonstiden kan endres i henhold til den eksperimentelle design (se diskusjon).
4. Fiksering
- Sug opp kultur medier fra parabolen.
- Bruke saks, kutte spissen av 1000 μL brønnene tips 5 mm fra slutten.
Merk: Kutte spissen hjelper jevnt bruke fiksering løsningen. - Bruker kutte spissen, legge til 1 mL fiksering løsning (forberedt i trinn 1.2) rett fra sideveggen på parabolen.
Merk: Dette trinnet er tid-sensitive, og bør derfor utføres uten å endre brønnene tips når du håndterer flere eksempler. Anvendelsen av fiksering løsningen direkte til bunnen av parabolen kan skade cellene. - Plasser rett i en firkantet kultur parabol. Riste kvadrat kultur parabol forsiktig for å distribuere det fiksering over cover slip jevnt.
- Incubate i 10 min ved romtemperatur.
- Sug opp fiksering løsning fra parabolen.
- Legge til 2 mL PBS rett fra sideveggen på parabolen.
Merk: Bruk av PBS direkte til bunnen av parabolen kan skade cellene. - Sug opp PBS fra parabolen.
- Gjennta punkt 4.7 og 4.8 to ganger.
Merk: Retten kan bli lagret for 1 uke på 4 ° C med cover papirlapper badet i 2 mL PBS.
5. DAPI flekk
- et lysbilde glass, bruke 5 μL 1 μg/mL DAPI flekker reagens.
Merk: DAPI flekker reagens er stabil for 6 måneder når lagret beskyttet mot lyset på eller under -20 ° C. - Ved hjelp av en skalpell, fjerne cover slip fra parabolen.
- Trekke av overflødig PBS på cover slip ved å berøre kanten av cover slip med et papirhåndkle.
- Montere cover slip opp-ned på slipp av DAPI flekker reagens på lysbildet glasset slik at cellene er utsatt for DAPI flekker reagens.
Merk: Dette trinnet er tidssensitiv. Tørking av DAPI flekker reagens kan føre til suboptimal farging. - Prøvene kan lagres for 1 år på -20 ° C.
6. Image vinningen
- undersøke prøven på fluorescens mikroskop. Kjerner er visualisert ved hjelp av DAPI filteret.
Merk: Enten en 20 X eller en 60 X olje linsen kan brukes i henhold til forskeren ''s interesse. Når du bruker en 60 X olje linsen, legge en dråpe olje på cover slip. Vær forsiktig at prøvene ikke berør linsen; ellers linsen kan være skadet. - Hente bilder av kjerner bruker en CCD kamera og digital image oppkjøpet programvare med følgende innstillinger og parametere: DAPI-filter, monolayer bilder, få 1 X, og automatisk eksponering.
- Finish image vinningen: tørke 20 X linse med papir håndkle fuktet med linse renere. Tørk 60 X olje linsen med papir håndkle fuktet med kloroform.
7. Evaluering av Clonogenic celle død modus
- i tilfeldig valgte bilder, telle antall kjerner som oppfyller kriteriene for apoptose, mitotisk katastrofe og mobilnettet senescence til antall telt kjerner når 300. Utføre dette trinnet i tre eksemplarer for hver eksperimentelle innstilling.
- Kriterier for apoptose: tilstedeværelsen av apoptotisk organer (dvs., knepet og fragmentert kjerner) 6 , 7.
- Vilkår for mitotisk katastrofe: tilstedeværelsen av kjerner viser to eller flere forskjellige lobes eller micronuclei 8 , 9 , 10.
- Kriterier for mobilnettet senescence: tilstedeværelsen av senescence-assosiert heterochromatic foci (SAHF) (dvs., kjernefysiske DNA som inneholder 30-50 lyse, tett fokus) 2 , 11.
Representative Results
Som et eksempel, ble U2OS menneskelige osteosarcoma celler behandlet med 6 Gy røntgenstråler ruges 72 h og utsatt for DAPI flekker analysen i henhold til protokollen. Figur 1 viser zoomet bilder for de typiske kjernefysiske morphologies tilknyttet apoptose, mitotisk katastrofe og mobilnettet senescence får en 60 × olje linse. Se trinn 7.1.1-7.1.3 for de karakteristiske morphologies for hver modus av clonogenic celledød. Figur 2 viser oversikt bilder av kjerner får en 20 X linsen. Bestråling med 6 Gy røntgenstråler indusert mitotisk katastrofe ofte apoptose sjeldnere og mobilnettet senescence sjelden. På denne måten gjør eksamen på et lavt forstørrelse-felt det mulig å pågripe overblikk helhetsbildet av clonogenic celle død profilen i en gitt eksperimentelle. Figur 3 viser en grafisk representasjon av kvantifisert dataene.
Figur 1: zoomet bilder av DAPI-farget kjerner viser typisk morphologies apoptose, mitotisk katastrofe og mobilnettet senescence. U2OS celler var irradiated med 6 Gy røntgenstråler. Etter 72 h, var cellene fast og farget med DAPI. Kjernefysisk bildene ble anskaffet med en 60 X olje linsen. Skala bar = 20 μm. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2: oversikt over bilder av DAPI-farget kjerner i cellene behandlet røntgenstråler. U2OS celler var irradiated med 6 Gy røntgenstråler eller uekte-irradiated. Etter 72 h, var cellene fast og farget med DAPI. Bilder av kjerner ble kjøpt med en 20 X linsen. Sirkler, apoptose; piler, mitotisk katastrofe. Skala bar = 50 μm. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3: kvantifisert data for apoptose, mitotisk katastrofe og mobilnettet senescence indusert i cellene behandlet røntgenstråler. U2OS celler var irradiated med 6 Gy røntgenstråler eller uekte-irradiated. Etter 72 h, var cellene fast og farget med DAPI. Bilder av kjerner ble kjøpt med en 20 X linsen. Fra tilfeldige felt, totalt 300 kjerner ble vurdert for apoptose (Ap), mitotisk katastrofe (MC) og mobilnettet senescence (Sns). Evalueringene ble utført i tre eksemplarer. Gjennomsnittlige verdiene vises, og feilfelt viser standard avvik. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Discussion
De avgjørende skritt i protokollen er som følger: Først bør celler dyrkes på kultur parabolen som en monolayer fordi gjennomfører en morfologiske vurdering av DAPI-farget kjerner er vanskelig for flerlags celler. For dette formål, i trinn 2.9, anbefales forsiktig overføring av kultur retten til en inkubator; risting av kultur retten genererer en virvel av suspendert celler som fører til konsentrasjonen av celler i sentrum av kultur parabolen. I tillegg bør overconfluence fører til flerlags celler unngås. For dette formål, i trinn 2.7, kan antall celler seeded på kultur parabol endres basert på befolkningen dobling tid og intervallet mellom bestråling og fiksering. En samløpet av omtrent 80 ved fiksering anbefales. Andre er hastigheten viktig fiksering og DAPI flekker (dvs., trinn 4 og 5). Inter eksempel inkonsekvens i forhold til tiden fremgangsmåten kan føre til heterogenitet DAPI signal intensitet i kjerner, som ville skjule morfologiske vurdering.
I trinn 2.2, kan du øke antall cover slips i en enkelt kultur parabol; maksimalt fire cover slips kan plasseres i en 35 mm rett, og kan være ytterligere økt med større retter. Plassere flere cover slips i hver kultur parabol kan for tiden kurs vurdering for en gitt behandling (dvs., forsiden slips kan hentes fra en kultur parabol enkeltvis på flere tiden punkter av interesse).
I trinnet 3.2 kan bestråling dosen endres i henhold til forskernes interesse. Anvendelsen av en konsekvent dose til flere linjer gjør sammenligning av følsomhet for hver modus av clonogenic celledød blant linjene. På den annen side, gjør bruk av iso-clonogenic overlevelse doser for hver celle linje sammenligning av clonogenic celle død profiler blant linjene. Iso-clonogenic overlevelse dosen kan bestemmes av den clonogenic overlevelse analyse12. D10 verdien dosen som gir 10% clonogenic overlevelse, er et felles endepunkt for iso-clonogenic overlevelse dosen.
I trinnet 3.3 kan tiden fra bestråling til fiksering endres i henhold til forskernes interesse; Dette er viktig fordi årstiden for IR-indusert apoptose, mitotisk katastrofe og mobilnettet senescence varierer med cellen linje og behandling. I denne artikkelen vi brukte 72 h etter bestråling som tidspunktet som ville være mest nyttig for første screening av clonogenic celle død profiler, basert på flere studier av vår gruppe og andre beskrives som følger1,2, 3 , 4 , 8 , 9: (i) X-ray-indusert apoptose i celler som er opprettet fra solide svulster hovedsakelig skjer noen dager etter bestråling. (ii) X-ray-indusert mitotisk katastrofe i kreftcellene skjer mest fremtredende i andre eller tredje mitose etter løslatelse fra midlertidig celle syklus arrestasjon indusert av bestråling. Utgivelsen oppstår vanligvis ca 24 timer etter bestråling, etterfulgt av gjentatte mitoses i intervaller på ca 24 h. (iii) X-ray-indusert mobilnettet senescence blir tydelig etter en avhengig av den aktuelle celle linjen: 2 dager etter bestråling i noen tidlige saker og 7 dager etter bestråling for de fleste linjer. Etter innhente et generelt bilde av clonogenic cellen død profiler fra første screening, tid kurs eksperimenter vil gi en mer detaljert forklaring av årstiden for hver modus av clonogenic celledød i bestemt celle linje og/eller tilstand rundt4.
Det bør bemerkes at DAPI flekker analysen og clonogenic overlevelse analysen, en gull-standard metode for stråling følsomhet vurdering, ikke er utskiftbare. Apoptose og mitotisk katastrofe bare siste timer. Dermed oppdager DAPI flekker analysen for et gitt tidspunkt apoptose og mitotisk katastrofe som inntreffer på tidspunktet for vurdering. På den annen side, analysen resultatene av clonogenic overlevelse på et gitt tidspunkt punktet omfatter den totale mengden apoptose og mitotisk katastrofe som skjedde under inkubasjonstiden for vanligvis 10-14 dager etter bestråling. Forskjellig fra apoptose og mitotisk katastrofe, senescent celler forblir på kultur parabol; de samler seg gradvis over tid etter bestråling. Derfor resultatene for begge DAPI flekker analysen og clonogenic overlevelse analysen gjenspeiler den totale mengden senescence som oppstod under inkubasjonstiden. Viktigere, andelen av apoptose, mitotisk katastrofe og senescence av bestråling varierer i henhold til celle linje og bestråling dose. Samlet teoretisk sett resultatene av en analysen kan ikke oversettes direkte inn i de andre analysen.
DAPI flekker analysen har noen begrensninger. Først er det fortsatt kontroversielt om mitotisk katastrofe er en distinkt celledød. I feltet for stråling biologi som mitotisk katastrofe en stor modus av IR-indusert celledød som er forskjellig fra andre mekanismer clonogenic celle død1. Derimot, hevder andre at mitotisk katastrofe ikke er en distinkt modus celledød men heller en prosess foran celledød inkludert apoptose og nekrose13,14. Dermed overlappe apoptose og mitotisk katastrofe til en viss grad. Andre, tidligere studier tyder på at mobilnettet senescence kan skje i fravær av SAHF i noen linjer og behandling for2. I dag, andre analyser spesielt utformet for hver clonogenic celle bør død modus brukes å øke robustheten av konklusjonene i en bestemt eksperiment. Tredje vurdere DAPI flekker analysen ikke driftsmoduser clonogenic celledød enn apoptose, mitotisk katastrofe og mobilnettet senescence (f.eks, nekrose og autophagy). Fjerde har nytten av DAPI flekker analysen som en prediktor på tumor respons på strålebehandling ikke blitt belyst i klinikken. Fra dette synspunkt er clonogenic overlevelse analysen, som vurderer den totale mengden clonogenic celledød, overordnet DAPI flekker analysen fordi en sammenheng har blitt etablert mellom SF2, bevarte delen av celler bestrålt med 2 Gy Røntgen, og svulst svaret strålebehandling15. Likevel, det er bemerkelsesverdig at clonogenic overlevelse analysen ikke brukes mye i klinikken, hovedsakelig på behovet for høy grad av kompetanse og en lang periode (dvs.14 dager) for datainnsamling. Sammenligning prosedyren for DAPI flekker analysen enklere og tar betydelig kortere tid, ca 3-4 dager, for å generere resultater. Nytten av den DAPI flekkeranalysen som en prediktor på tumor respons på strålebehandling vil bli testet i klinikken i nær fremtid.
I sammendraget er DAPI flekker analysen en kostnadseffektiv ettrinns analysen å samtidig vurdere store moduser av IR-indusert clonogenic celledød. Denne tilnærmingen gjør det mulig å enkelt skjerm for moduser av clonogenic celledød for ulike linjer, behandlingstilbud og tidspunkt, med mål om Klargjørende mekanismer for celledød i målcellene og forholdene rundt.
Disclosures
Forfatterne erklærer at de har ingen konkurrerende økonomiske interesser.
Acknowledgments
Vi takker fru Akiko Shibata for teknisk assistanse. Dette arbeidet ble støttet av Grants-in-Aid fra Kunnskapsdepartementet, kultur, sport, vitenskap og teknologi i Japan for programmer for ledende utdannet skoler, dyrke globale ledere i tunge Ion Therapeutics og Engineering.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| cover slip | Matsunami | C013001 | |
| paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6148-1KG | |
| sucrose | Sigma-Aldrich | 84097-250G | |
| phosphate-buffered saline | Cosmo Bio | 16232000 | |
| scalpel | Kai Medical | No.20, 520-A | |
| 35 mm cell culture dish | Falcon | 353001 | |
| trypsin | Wako | 201-16945 | |
| inverted phase microscope | Shimazu | 114-909 | |
| X-ray irradiator | Faxitron Bioptics | Faxitron RX-650 | |
| square culture dish | Corning | 431110 | |
| slide glass | Matsunami | Pro-11 | |
| DAPI staining reagent | Cell Signaling | 8961S | |
| fluorescence microscope | Nikon | ECLIPSE Ni | |
| fluorescence microscope DAPI filter | Nikon | U-FUW, BP340-390, BA420IF, DM410 | |
| fluorescence microscope lens (20×) | Nikon | Plan Apo λ 20X/0.75 | |
| fluorescence microscope lens (60×, oil) | Nikon | Plan Apo λ 60X/1.40 oil | |
| oil | Olympus | N5218600 | |
| CCD camera | Nikon | DS-Qi2 | |
| digital image acquisition software | Nikon | NIS-Elements Document | |
| lens cleaner | Olympus | OT0552 | |
| chloroform | Wako | 035-02616 |
References
- Wouters, B. G. Cell death after irradiation: how, when and why cells die. Basic Clinical Radiobiology. 4th ed. Joiner, M. C., van der Kogel, A. J. , Hodder Education. London. 27-40 (2009).
- Aird, K. M., Zhang, R. Detection of senescence-associated heterochromatin foci (SAHF). Methods Mol. Biol. 965, 185-196 (2013).
- Kobayashi, D., et al. Mitotic catastrophe is a putative mechanism underlying the weak correlation between sensitivity to carbon ions and cisplatin. Sci. Rep. 7, 40588 (2017).
- Amornwichet, N., et al. Carbon-ion beam irradiation kills X-ray-resistant p53-null cancer cells by inducing mitotic catastrophe. PLoS One. , 115121 (2014).
- Masters, J. R., Stacey, G. N. Changing medium and passaging cell lines. Nat. Protoc. 2, 2276-2284 (2007).
- Sawai, Y., et al. Effectiveness of sulforaphane as a radiosensitizer for murine osteosarcoma cells. Oncol. Rep. 29, 941-945 (2013).
- Cummings, B. S., Wills, L. P., Schnellmann, R. G. Measurement of cell death in mammalian cells. Curr. Protoc. Pharmacol. , Suppl. 56, Chapter 12: Unit 12.8 (2012).
- Oike, T., et al. C646, a selective small molecule inhibitor of histone acetyltransferase p300, radiosensitizes lung cancer cells by enhancing mitotic catastrophe. Radiother. Oncol. 111, 222-227 (2014).
- Oike, T., et al. A synthetic lethality-based strategy to treat cancers harboring a genetic deficiency in the chromatin remodeling factor BRG1. Cancer Res. 73, 5508-5518 (2013).
- Russo, A. L., et al. In vitro and in vivo radiosensitization of glioblastoma cells by the poly (ADP-ribose) polymerase inhibitor E7016. Clin. Cancer Res. 15, 607-612 (2009).
- Di Micco, R., et al. Interplay between oncogene-induced DNA damage response and heterochromatin in senescence and cancer. Nat. Cell Biol. 13, 292-302 (2011).
- Franken, N. A., Rodermond, H. M., Stap, J., Haveman, J., van Bree, C. Clonogenic assay of cells in vitro. Nat. Protoc. 1, 2315-2319 (2006).
- Vakifahmetoglu, H., Olsson, M., Zhivotovsky, B. Death through a tragedy: mitotic catastrophe. Cell Death Differ. 15, 1153-1162 (2008).
- Imreh, G., Norberg, H. V., Imreh, S., Zhivotovsky, B. Chromosomal breaks during mitotic catastrophe trigger γH2AX-ATM-p53-mediated apoptosis. J. Cell Sci. 129, 1950 (2016).
- Torres-Roca, J. F. A molecular assay of tumor radiosensitivity: a roadmap towards biology-based personalized radiation therapy. Per. Med. 9, 547-557 (2012).
