マウスの腹部大動脈 Myointimal 過形成を誘導するために気球を利用した傷害
Summary
この記事は、大動脈バルーン傷害の後 myointimal 過形成 (MH) の開発を研究するマウスモデルを示します。
Abstract
動物モデルの使用は、MH、動脈狭窄症の主要な原因の 1 つのより良い理解のために不可欠です。この記事では、大動物で確立された容器損傷モデルに匹敵するマウス バルーン侵食モデルを示しています。バルーン カテーテルを大動脈侵食モデルは臨床設定を模倣し、匹敵する病態と生理学的な変化に 。簡潔に、実行後水平切開腹部大動脈で、バルーンカテーテル、血管に挿入、水増し、逆行性導入します。バルーンのインフレは内膜傷害と容器の overdistension に します。カテーテルを抜去後、大動脈切開は単一 stiches を閉鎖します。この資料に示すモデルは再生可能で、行うには、簡単、迅速かつ確実に確立することができます。特に経済的な方法で適用することができます高価な実験的治療剤の評価に適しています。別のノックアウト マウス系統を用いた MH 開発の別の遺伝子の影響を評価できます。
Introduction
冠動脈および末梢動脈における動脈狭窄患者1の死亡率と罹患率に大きな影響があります。1 つの根本的な病理メカニズムは myointima 過形成 (MH)、増加増殖、移行、および血管平滑筋細胞 (SMC)2からの細胞外マトリックス蛋白質の合成によって特徴付けられる。SMC は容器のメディア層にあり、内腔の表面への刺激に移行します。刺激信号は成長因子、サイトカイン、細胞間連絡、脂質、細胞外マトリックス成分、機械的せん断をストレッチ力3,4,5,6あります。病理学的または医原性、血管壁の損傷血管内皮細胞と平滑筋細胞の損傷を引き起こすと炎症反応を刺激し、MH7につながります。
異なる動物モデルが現在利用できる myointima 増殖症動脈損傷を研究です。豚のような大型の動物や犬共有同様の動脈と冠動脈解剖学人間の利点を持っているし、特に血管形成技術、手順、およびデバイス8を調査し研究に適しています。ただし、豚モデルは、犬のみが軽度の血管傷害11レスポンス高い血栓9,10の欠点を持っています。さらに、特別な住宅、機器、およびスタッフは、高コストで接続されているし、常に、教育機関で利用されていないすべての大型動物モデルが必要です。実験動物は、ラットやマウスに含まれます。ラットと比較して、マウスは、低コストの利点とさまざまなモデルをノックアウトの存在があります。このビデオで説明されているモデルは、アポ-/-マウス西部飼料動脈硬化血管12血管形成術の臨床設定を忠実に再現すると併用できます。以前のモデルは、ワイヤー傷害13、流体乾燥14、春15、またはカフ傷害16を介して血管損傷を誘発しました。開発と MH の憲法にけがの性質に大きく影響するので臨床場面を模倣する最良の方法は、バルーン カテーテルを使用して血管損傷を誘発します。
この記事ではマウスのバルーンカテーテルと MH を誘導する手法について述べる.RX ポート (図 1 a) バルーンカテーテル (1.2 mm × 6 mm) の使用する内膜層のと同時に、船の overdistension の誘導にこする。これらの要因の両方が MH の開発のための重要なトリガーです。このモデルの観測時間は 28 日17歳です。
Protocol
Representative Results
Discussion
この記事は、myointimal 過形成の開発を研究するマウスモデルを示し、根本的な病理学的プロセスの探査と新しい薬や治療法のテストをことができます。
このプロトコルでは最も重要なステップは、大動脈の剥離です。特別な注意は、過剰な侵食が動脈瘤の形成とモデルが失敗につながる、このステップの間にお支払いください。その一方で、侵食が十分に実行された場合…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者はクリスティアーネ ・ Pahrmann の彼女の技術的な援助をありがちましょう。
社殿は、最大 Kade 財団によって支えられました。両手を使った受信助成他 Kröner 財団 (2012_EKES.04) とドイツ研究振興協会 (DE2133/2-1 _。S. s. は、ドイツ研究振興協会 (DFG; から研究助成を受けてください。SCHR992/3-1、SCHR992/4-1)。
Materials
| 10-0 Ethilon suture | Ethicon | 2814G | |
| 3 mL Syringe | BD Medical | 309658 | |
| 37% HCl | Sigma-Aldrich | H1758 | |
| 5-0 prolene suture | Ethicon | EH7229H | |
| 6-0 prolene suture | Ethicon | 8706H | |
| Acid Fuchsin | Sigma-Aldrich | F8129-25G | Trichrome staining |
| Antigen retrieval solution | Dako | S1699 | |
| Azophloxin | Waldeck | 1B-103 | Trichrome staining |
| Bepanthen Eye and Nose ointment | Bayer | 1578675 | Eye ointment |
| Betadine Solution | Betadine Purdue Pharma | NDC:67618-152 | |
| C57BL/6J | Charles River | Stock number 000664 | |
| Clamp applicator | Fine Science Tools | 18056-14 | |
| Collagen 3 | abcam | ab7778 | Antibody |
| DAPI | Thermo Fischer | D1306 | |
| Donkey anti-Goat IgG AF555 | Invitrogen | A21432 | Secondary antibody |
| Donkey anti-Rabbit IgG AF488 | Invitrogen | A21206 | Secondary antibody |
| Donkey anti-Rabbit IgG AF488 | Invitrogen | A11055 | Secondary antibody |
| Donkey anti-Rabbit IgG AF555 | Invitrogen | A31572 | Secondary antibody |
| Ethanol 70% | Th. Geyer | 2270 | |
| Ethanol 96% | Th. Geyer | 2295 | |
| Ethanol absolute | Th. Geyer | 2246 | |
| FAP | abcam | ab28246 | Antibody |
| Forceps fine | Fine Science Tools | 11251-20 | |
| Forceps standard | Fine Science Tools | 11023-10 | |
| Glacial Acetic Acid | Sigma-Aldrich | 537020 | |
| Hair clipper | WAHL | 8786-451A ARCO SE | |
| Heparin | Rotexmedica | PZN 3862340 | 25.000 I.E./mL |
| High temperature cautery kit | Bovie | 18010-00 | |
| Image-iT FX Signal Enhancer | Invitrogen | I36933 | Blocking solution |
| Light Green SF | Waldeck | 1B-211 | Trichrome staining |
| Microsurgical clamp | Fine Science Tools | 18055-04 | Micro-Serrefine – 4mm |
| MINI TREK Coronary Dilatation Catheter 1.20 mm x 6 mm / Rapid-Exchange | Abbott | 1012268-06U | |
| Molybdatophosphoric acid hydrate | Merck | 1.00532.0100 | Trichrome staining |
| NaCl 0,9% | B.Braun | PZN 06063042 Art. Nr.: 3570160 | |
| Needle holder | Fine Science Tools | 12075-14 | |
| Novaminsulfon | Ratiopharm | PZN 03530402 | Metamizole |
| Orange G | Waldeck | 1B-221 | Trichrome staining |
| Paraffin | Leica biosystems | REF 39602004 | |
| PBS pH 7,4 | Gibco | 10010023 | |
| PFA 4% | Electron Microscopy Sciences | #157135S | |
| Ponceau S solution | Serva Electrophoresis | 33427 | Trichrome staining |
| Primary antibody diluent | Dako | S3022 | |
| Prolong Gold Mounting solution | Thermo Fischer | P36930 | Mounting solution for immunofluorescence stained slides |
| Replaceable Fine Tip | Bovie | H101 | |
| Resorcin-Fuchsin Weigert | Waldeck | 2E-30 | Trichrome staining |
| Rimadyl | Pfizer | 400684.00.00 | Carprofen |
| Scissors | Fine Science Tools | 14028-10 | |
| Scissors Vannas-style | Fine Science Tools | 15000-03 | |
| Secondary antibody diluent | Dako | S0809 | |
| Fast acting Adhesive MINIS 3x1g | UHU | 45370 | Cyanoacrylate |
| Slide Rack | Ted Pella | 21057 | |
| SM22 | abcam | ab10135 | Antibody |
| SMA | abcam | ab21027 | Antibody |
| Staining dish | Ted Pella | 21075 | |
| Surgical microscope | Leica | M651 | |
| Tabotamp fibrillar | Ethicon | 431962 | Absorbable hemostat |
| Transpore Surgical Tape | 3M | 1527-1 | |
| U-100 Insulin syringe | BD Medical | 324825 | |
| Vessel Dilator | Fine Science Tools | 18603-14 | |
| Vitro-Clud | Langenbrinck | 04-0001 | |
| Weigerts iron hematoxylin Kit | Merck | 1.15973.0002 | Trichrome staining |
| Xylene | Th. Geyer | 3410 |
References
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