Summary

풍선-기반 부상 마우스 복 부 대동맥에서 Myointimal 증식을 유도 하

Published: February 07, 2018
doi:

Summary

이 문서에서는 대동맥 풍선 부상 후 murine 모델 myointimal 증식 (수소)의 개발 연구를 보여줍니다.

Abstract

동물 모델의 사용은 수소, 동맥 협 착 증에 대 한 하나의 주요 원인의 더 나은 이해를 위해 근본적 이다. 이 문서에서는, 큰 동물에 설립된 선박 부상 모델 비교는 murine 풍선 노출 모델을 설명 합니다. 풍선 카 테 터 대동맥 노출 모델 임상 설정을 모방 하 고 유사한 pathobiological 및 생리 적 변화를 리드. 간단히, 대동맥 abdominalis에 수평 절 개 후, 풍선 카 테 터 혈관에 삽입, 팽창, 고 됩니다 retrogradely 소개. 풍선의 인플레이션 intima 상해 및 선박의 overdistension 이어질 것입니다. 카 테 터 제거 후 대동맥 절 개 한 stiches 함께 종료 됩니다. 이 문서에 표시 된 모델은 재현, 수행, 쉬운 및 신속 하 고 안정적으로 설정할 수 있습니다. 그것은 특히 비싼 실험 치료제, 경제적인 방식으로 적용 될 수 있는 평가 적합 합니다. 다른 녹아웃 마우스 종자를 사용 하 여 수소 개발에 다른 유전자의 영향 평가 될 수 있다.

Introduction

동맥 협 착 증 관상 동맥 및 주변 동맥에 병 적 상태와 환자1의 사망률에 큰 효과가 있다. 1 기본 병 적인 메커니즘은 myointima 증식 (MH), 증가 확산, 마이그레이션, 및 혈관 평활 근 세포 (SMC)2에서 세포 외 기질 단백질의 합성에 의해 특징입니다. SMC는 선박의 미디어 계층에 있으며 루멘의 표면에 자극에 따라 마이그레이션할. 물질로 신호 등 성장 인자, cytokines, 셀 연락처, 지질, 기질 구성 요소, 기계적 전단 고 힘3,4,,56을 스트레칭. 부상 병 적인 또는 의원 성, 혈관 벽의 내 피 세포 및 평활 근 세포 손상 원인 및 염증 성 반응, 자극 고 따라서 수소7.

다른 동물 모델 동맥 상해 및 myointima 증식 연구를 현재 사용할 수 있습니다. 큰 동물 같은 돼지 또는 개 인간과 유사한 동맥 및 관상 동맥 해부학을 공유의 장점은 특히 혈관 기술, 절차, 및 장치8조사 연구에 적합. 그러나, 돼지 모델 개 하나만 배 부상11가벼운 응답 하는 동안 더 높은 thrombogenicity9,10, 단점이 있다. 또한, 모든 큰 동물 모델 특별 한 주택, 장비, 및 직원, 높은 비용으로 연결 되 고 항상 기관에 제공 하지 않습니다 필요 합니다. 작은 동물 모델에는 쥐와 쥐 포함 됩니다. 쥐에 비해, 쥐 있고 저렴 한 비용의 장점 다양 한 모델에 밖으로 노크의 존재. 이 비디오에서 설명 하는 모델 ApoE-/-생쥐 서양 다이어트 먹이 밀접 하 게 혈관 동맥 경 화성 혈관12의 임상 설정 모방 하 결합 될 수 있다. 이전 모델 유도 철사 부상13, 액체 건조14,15봄 또는 팔목 부상16통해 혈관 상해. 상해의 자연 크게 개발 및 수소의 헌법에 영향을 미칠 것 이다, 혈관 상해를 유발 하는 풍선 카 테 터를 사용 하 여 이므로 임상 설정을 모방 하는 가장 좋은 방법은.

이 문서에서 우리는 쥐에서 풍선 카 테 터와 수소를 유도 하는 소설 방법을 설명 합니다. 풍선 카 테 터 (1.2 m m x 6 m m) RX 포트 (그림 1A)와 함께 사용 하면 된다고 내 층의 하 고, 동시에, 선박에의 한 overdistension의 유도에 있습니다. 이러한 요소 둘 다는 MH의 개발에 대 한 중요 한 트리거입니다. 이 모델에 대 한 관측 시간 28 일17이다.

Protocol

동물은 실험실 동물의 원칙에 대 한 가이드 준수 인도적인 치료를 받은 하 고 준비 하 여 연구소의 실험 동물 자원, 건강의 국가 학회에 의해 출판. 모든 동물 프로토콜 (‘Amt에 Gesundheit und Verbraucherschutz, 타트 (건강 및 소비자 보호를 위한 사무실) 함부르크’) 책임 있는 지방 기관에 의해 승인 되었다. 1. 카 테 터 준비 참고: 카 테 터에 관한 정보에 대 한 ?…

Representative Results

풍선 노출은 쥐에 있는 수소의 개발 연구에 적합 한 모델. 동물 수술에서 잘 복구와 우수한 건강 상태 후 작업을 표시 합니다. 우리는 수술으로 인해 3% 사망률 보다 적은 50 쥐에이 모델을 설립. 그림 1B -C 키 수술 단계를 보여줍니다. 따라 피부 절 개 후는 교육 알바, 대동맥 abdominalis식별. Microsurgical 클램프 (그…

Discussion

이 문서는 myointimal 증식 개발 연구는 murine 모델을 보여 줍니다 고 기본 병 적인 프로세스의 탐사와 새로운 약물 이나 치료 옵션의 테스트 수 있습니다.

이 프로토콜의 가장 중요 한 단계는 대동맥의 노출입니다. 으로 과도 한 노출 동맥 류 형성과 모델 실패 이어질 것입니다이 단계 동안 특별 한 주의 지불 합니다. 다른 한편으로, 노출 충분히 수행 됩니다, 너무 작은 myointima 개?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

저자는 그녀의 기술 지원에 대 한 크리스티안 Pahrmann 감사합니다.

D.W. 최대 kade 수 있다 재단에 의해 지원 되었다. T.D. 받은 보조금 다른 Kröner Fondation (2012_EKES.04)와 도이치 가운데 (DE2133/2-1_. S. S. 도이치 가운데 (DFG;에서 연구 보조금을 받은 SCHR992/3-1, SCHR992/4-1).

Materials

10-0 Ethilon suture Ethicon 2814G
3 mL Syringe BD Medical 309658
37% HCl Sigma-Aldrich H1758
5-0 prolene suture Ethicon EH7229H
6-0 prolene suture Ethicon 8706H
Acid Fuchsin Sigma-Aldrich F8129-25G Trichrome staining
Antigen retrieval solution Dako S1699
Azophloxin Waldeck 1B-103 Trichrome staining
Bepanthen Eye and Nose ointment Bayer 1578675 Eye ointment
Betadine Solution Betadine Purdue Pharma NDC:67618-152
C57BL/6J Charles River Stock number 000664
Clamp applicator Fine Science Tools 18056-14
Collagen 3 abcam ab7778 Antibody
DAPI Thermo Fischer D1306
Donkey anti-Goat IgG AF555 Invitrogen A21432 Secondary antibody
Donkey anti-Rabbit IgG AF488 Invitrogen A21206 Secondary antibody
Donkey anti-Rabbit IgG AF488 Invitrogen A11055 Secondary antibody
Donkey anti-Rabbit IgG AF555 Invitrogen A31572 Secondary antibody
Ethanol 70% Th. Geyer 2270
Ethanol 96% Th. Geyer 2295
Ethanol absolute Th. Geyer 2246
FAP abcam ab28246 Antibody
Forceps fine Fine Science Tools 11251-20
Forceps standard Fine Science Tools 11023-10
Glacial Acetic Acid Sigma-Aldrich 537020
Hair clipper WAHL 8786-451A ARCO SE
Heparin Rotexmedica PZN 3862340 25.000 I.E./mL
High temperature cautery kit Bovie 18010-00
Image-iT FX Signal Enhancer Invitrogen I36933 Blocking solution
Light Green SF Waldeck 1B-211 Trichrome staining
Microsurgical clamp Fine Science Tools 18055-04 Micro-Serrefine – 4mm
MINI TREK Coronary Dilatation Catheter 1.20 mm x 6 mm / Rapid-Exchange Abbott 1012268-06U
Molybdatophosphoric acid hydrate Merck 1.00532.0100 Trichrome staining
NaCl 0,9% B.Braun PZN 06063042 Art. Nr.: 3570160
Needle holder Fine Science Tools 12075-14
Novaminsulfon Ratiopharm PZN 03530402 Metamizole
Orange G Waldeck 1B-221 Trichrome staining
Paraffin Leica biosystems REF 39602004
PBS pH 7,4 Gibco 10010023
PFA 4% Electron Microscopy Sciences #157135S
Ponceau S solution Serva Electrophoresis 33427 Trichrome staining
Primary antibody diluent Dako S3022
Prolong Gold Mounting solution Thermo Fischer P36930 Mounting solution for immunofluorescence stained slides
Replaceable Fine Tip Bovie H101
Resorcin-Fuchsin Weigert Waldeck 2E-30 Trichrome staining
Rimadyl Pfizer 400684.00.00 Carprofen
Scissors Fine Science Tools 14028-10
Scissors Vannas-style Fine Science Tools 15000-03
Secondary antibody diluent Dako S0809
Fast acting Adhesive MINIS 3x1g UHU 45370 Cyanoacrylate
Slide Rack Ted Pella 21057
SM22 abcam ab10135 Antibody
SMA abcam ab21027 Antibody
Staining dish Ted Pella 21075
Surgical microscope Leica M651
Tabotamp fibrillar Ethicon 431962 Absorbable hemostat
Transpore Surgical Tape 3M 1527-1
U-100 Insulin syringe BD Medical 324825
Vessel Dilator Fine Science Tools 18603-14
Vitro-Clud Langenbrinck 04-0001
Weigerts iron hematoxylin Kit Merck 1.15973.0002 Trichrome staining
Xylene Th. Geyer 3410

References

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Cite This Article
Tediashvili, G., Wang, D., Reichenspurner, H., Deuse, T., Schrepfer, S. Balloon-based Injury to Induce Myointimal Hyperplasia in the Mouse Abdominal Aorta. J. Vis. Exp. (132), e56477, doi:10.3791/56477 (2018).

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