Summary

Blessure axée sur le ballon pour provoquer l’hyperplasie Myointimal dans l’aorte abdominale de souris

Published: February 07, 2018
doi:

Summary

Cet article illustre un modèle murin pour étudier le développement de l’hyperplasie myointimal (MH) après une lésion aortique ballon.

Abstract

L’utilisation de modèles animaux est essentielle pour une meilleure compréhension de la MH, une des principales causes de la sténose artérielle. Dans cet article, nous démontrons un modèle murin de ballon dénudation, qui est comparable aux modèles de lésion du navire établies dans les grands animaux. Le modèle de dénudation aorte avec des cathéters à ballonnet imite le contexte clinique et conduit à des changements physiologiques et pathobiological comparables. En bref, après avoir effectué une incision horizontale dans l’ aorte abdominalis, un cathéter à ballonnet sera inséré dans le vaisseau, gonflé et introduit marqués. Gonflage du ballonnet conduira à des blessures de l’intima et une surdistension du navire. Après avoir retiré le cathéter, l’incision aortique sera fermée avec des points de suture unique. Le modèle présenté dans cet article est reproductible, facile à réaliser et peut être établie de manière rapide et fiable. Il est particulièrement approprié pour l’évaluation de coûteux agents thérapeutiques expérimentales, qui peuvent être appliqués de façon économique. À l’aide de différentes souches de souris knock-out, l’impact de différents gènes du développement MH peut être évaluée.

Introduction

La sténose artérielle dans les artères coronaires et périphériques a un effet important sur la morbidité et la mortalité des patients1. Un mécanisme pathologique sous-jacent est l’hyperplasie myointima (MH), qui se caractérise par une augmentation de la prolifération, la migration et la synthèse des protéines de la matrice extracellulaire du muscle lisse vasculaire des cellules (SMC)2. SMC se trouvent dans la couche de support du navire et de migrer lors de la stimulation à la surface de la lumière. Signaux stimulants incluent les facteurs de croissance, cytokines, contact cellule-cellule, lipides, les composants de la matrice extracellulaire et cisaillement mécanique et étirement les forces3,4,5,6. Lésions de la paroi des vaisseaux, pathologique ou iatrogène, causent des cellules endothéliales et les dommages aux cellules de muscle lisse et stimulent les réactions inflammatoires et donc conduisent à MH7.

Différents modèles animaux sont actuellement disponibles pour étudier les lésions artérielles et hyperplasie myointima. Grands animaux comme les porcs ou les chiens ont l’avantage d’une artère similaire et l’anatomie coronaire de partage avec les humains et sont particulièrement adaptées aux études portant sur l’angioplastie techniques, procédures et dispositifs8. Cependant, modèles de cochon ont l’inconvénient de supérieur thrombogénicité9,10, tandis que les chiens n’ont une réponse douce à navire blessures11. En outre, tous les grands modèles animaux nécessitent logement spécifique, l’équipement et le personnel, qui est lié à des coûts élevés et n’est pas toujours disponibles dans une institution. Petits modèles animaux comprennent les rats et les souris. Comparativement à des rats, des souris ont les avantages d’un coût moindre et l’existence d’une variété d’assommer de modèles. Le modèle décrit dans cette vidéo peut être associé d’ApoE-/-souris nourries avec un régime occidental pour imiter étroitement le contexte clinique d’angioplastie dans navires athéroscléreuse12. Les modèles précédents induit des lésions vasculaires via fil blessures13, dessiccation fluide14, printemps15ou des rotateurs blessures16. Étant donné la nature de la lésion affectera grandement le développement et la constitution de MH, à l’aide d’un cathéter à ballonnet pour induire la lésion en est le meilleur moyen d’imiter le contexte clinique.

Dans cet article, nous décrivons une nouvelle méthode pour induire des MH avec un cathéter à ballonnet chez la souris. L’utilisation d’un cathéter à ballonnet (1,2 mm x 6 mm) avec un RX-Port (Figure 1 a) permet le grattage de la couche intimale et, en même temps, l’induction d’une surdistension du navire. Ces deux facteurs sont des déclencheurs importants pour le développement de MH. L’heure de l’observation pour ce modèle est de 28 jours,17.

Protocol

Animaux a reçu tous les soins en conformité avec le Guide pour les principes des animaux de laboratoire, préparé par l’Institut des ressources animales de laboratoire et publié par le National Institutes of Health. Tous les protocoles d’animaux ont été approuvées par l’autorité locale responsable (” Amt für Gesundheit und Verbraucherschutz, (Bureau pour la santé et la Protection des consommateurs) de Hansestadt Hamburg”). 1. préparation du cathéter <p class="jove_content…

Representative Results

Dénudation du ballon est un modèle approprié pour étudier le développement du MH chez la souris. Les animaux se remettre bien de la chirurgie et montrent une post-opération excellente condition physique. Nous avons créé ce modèle en 50 souris ayant moins de 3 % la mortalité due à l’intervention chirurgicale. Figures 1 b -C montrent les principales étapes chirurgicales. Après une incision de la peau le long de la linea alba<…

Discussion

Cet article illustre un modèle murin pour étudier le développement de l’hyperplasie myointimal et permet l’exploration des processus pathologiques sous-jacent et les essais de nouveaux médicaments ou les options thérapeutiques.

L’étape la plus critique dans le présent protocole est la dénudation de l’aorte. Une attention particulière devrait être accordée au cours de cette étape car dénudation excessive conduira à la formation de l’anévrisme et la défaillance de modè…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Les auteurs remercient Christiane Pahrmann pour son aide technique.

D.W. a été soutenu par la Foundation de Kade Max. T.D. a reçu des subventions de la Fondation de Kröner Else (2012_EKES.04) et la Deutsche Forschungsgemeinschaft (DE2133/2-1_. S. S. a reçu des subventions de recherche de la Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG ; SCHR992/3-1, SCHR992/4-1).

Materials

10-0 Ethilon suture Ethicon 2814G
3 mL Syringe BD Medical 309658
37% HCl Sigma-Aldrich H1758
5-0 prolene suture Ethicon EH7229H
6-0 prolene suture Ethicon 8706H
Acid Fuchsin Sigma-Aldrich F8129-25G Trichrome staining
Antigen retrieval solution Dako S1699
Azophloxin Waldeck 1B-103 Trichrome staining
Bepanthen Eye and Nose ointment Bayer 1578675 Eye ointment
Betadine Solution Betadine Purdue Pharma NDC:67618-152
C57BL/6J Charles River Stock number 000664
Clamp applicator Fine Science Tools 18056-14
Collagen 3 abcam ab7778 Antibody
DAPI Thermo Fischer D1306
Donkey anti-Goat IgG AF555 Invitrogen A21432 Secondary antibody
Donkey anti-Rabbit IgG AF488 Invitrogen A21206 Secondary antibody
Donkey anti-Rabbit IgG AF488 Invitrogen A11055 Secondary antibody
Donkey anti-Rabbit IgG AF555 Invitrogen A31572 Secondary antibody
Ethanol 70% Th. Geyer 2270
Ethanol 96% Th. Geyer 2295
Ethanol absolute Th. Geyer 2246
FAP abcam ab28246 Antibody
Forceps fine Fine Science Tools 11251-20
Forceps standard Fine Science Tools 11023-10
Glacial Acetic Acid Sigma-Aldrich 537020
Hair clipper WAHL 8786-451A ARCO SE
Heparin Rotexmedica PZN 3862340 25.000 I.E./mL
High temperature cautery kit Bovie 18010-00
Image-iT FX Signal Enhancer Invitrogen I36933 Blocking solution
Light Green SF Waldeck 1B-211 Trichrome staining
Microsurgical clamp Fine Science Tools 18055-04 Micro-Serrefine – 4mm
MINI TREK Coronary Dilatation Catheter 1.20 mm x 6 mm / Rapid-Exchange Abbott 1012268-06U
Molybdatophosphoric acid hydrate Merck 1.00532.0100 Trichrome staining
NaCl 0,9% B.Braun PZN 06063042 Art. Nr.: 3570160
Needle holder Fine Science Tools 12075-14
Novaminsulfon Ratiopharm PZN 03530402 Metamizole
Orange G Waldeck 1B-221 Trichrome staining
Paraffin Leica biosystems REF 39602004
PBS pH 7,4 Gibco 10010023
PFA 4% Electron Microscopy Sciences #157135S
Ponceau S solution Serva Electrophoresis 33427 Trichrome staining
Primary antibody diluent Dako S3022
Prolong Gold Mounting solution Thermo Fischer P36930 Mounting solution for immunofluorescence stained slides
Replaceable Fine Tip Bovie H101
Resorcin-Fuchsin Weigert Waldeck 2E-30 Trichrome staining
Rimadyl Pfizer 400684.00.00 Carprofen
Scissors Fine Science Tools 14028-10
Scissors Vannas-style Fine Science Tools 15000-03
Secondary antibody diluent Dako S0809
Fast acting Adhesive MINIS 3x1g UHU 45370 Cyanoacrylate
Slide Rack Ted Pella 21057
SM22 abcam ab10135 Antibody
SMA abcam ab21027 Antibody
Staining dish Ted Pella 21075
Surgical microscope Leica M651
Tabotamp fibrillar Ethicon 431962 Absorbable hemostat
Transpore Surgical Tape 3M 1527-1
U-100 Insulin syringe BD Medical 324825
Vessel Dilator Fine Science Tools 18603-14
Vitro-Clud Langenbrinck 04-0001
Weigerts iron hematoxylin Kit Merck 1.15973.0002 Trichrome staining
Xylene Th. Geyer 3410

References

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Cite This Article
Tediashvili, G., Wang, D., Reichenspurner, H., Deuse, T., Schrepfer, S. Balloon-based Injury to Induce Myointimal Hyperplasia in the Mouse Abdominal Aorta. J. Vis. Exp. (132), e56477, doi:10.3791/56477 (2018).

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