Summary
यहां वर्णित orthotopic डिम्बग्रंथि प्रत्यारोपण प्रोटोकॉल प्राप्तकर्ता माउस के फिजियोलॉजी पर डिंबग्रंथि के प्रभाव को संशोधित करने के लिए कर रहे हैं । इस शल्य प्रक्रिया डिम्बग्रंथि प्रभाव के विभिन्न प्रकार के लिए महिला चूहों को बेनकाब करने के लिए प्रयोग किया जाता है और heterochronic प्रत्यारोपण और अंडाशय के प्रत्यारोपण कि विभिन्न पूर्व vivo उपचार आया है शामिल हो सकते हैं ।
Abstract
डिंबग्रंथि प्रत्यारोपण पहले १९६३ में यूटा राज्य विश्वविद्यालय में आयोजित किया गया था । अधिक हाल के काम में, स्तनधारी अंडाशय के heterochronic ट्रांसप्लांटेशन युवा महिलाओं में युवा अंडाशय के स्वास्थ्य सुरक्षात्मक प्रभाव की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया जा रहा है । वर्तमान प्रक्रियाओं एक orthotopic ट्रांसप्लांटेशन विधि, जहां allogenic अंडाशय डिंबग्रंथि बर्सा में अपने मूल स्थिति में वापस प्रत्यारोपित कर रहे है रोजगार । यह अंडाशय/डिम्बग्रंथि ऊतक के अधिक सामांयतः इस्तेमाल heterotopic प्रत्यारोपण के विपरीत है या गुर्दे कैप्सूल के नीचे । सभी तीन स्थानों पर प्रत्यारोपण ऊतकों के कुशल revascularization प्रदान करते हैं । हालांकि, orthotopic ट्रांसप्लांटेशन सबसे प्राकृतिक संकेत पर्यावरण के साथ अंडाशय प्रदान करता है और केवल प्रक्रिया है कि पशु के लिए अवसर प्रदान करता है स्वाभाविक रूप से बाद में प्रतिलिपि है । एक ovariectomy प्रक्रिया के दौरान सभी अंतर्जात डिम्बग्रंथि ऊतक को दूर करने के लिए ध्यान रखना चाहिए । यदि किसी भी अंतर्जात ऊतक रहता है या केवल एक अंडाशय हटा दिया जाता है, तो प्रत्यारोपण ऊतक मौजूदा ऊतक वृद्ध होनेवाला हो जाता है जब तक निष्क्रिय बना रहेगा । प्रत्यारोपित अंडाशय के revascularization बहुत जल्दी होता है, जबकि प्रत्यारोपण प्राप्तकर्ता एक नया हाइपोथैलेमस के लिए अनुकूल करने के लिए समय की एक काफी राशि ले जा सकते हैं/पिट्यूटरी/जननांगों (HPG) एक्सिस रोपाई से जुड़े शासन संकेत ऊतक. यह आम तौर पर माउस में लगभग १०० दिन लगते हैं । इसलिए, ट्रांसप्लांटेशन प्रयोगों इस अनुकूलन अवधि को समायोजित करने के लिए डिज़ाइन किया जाना चाहिए । डिम्बग्रंथि प्रत्यारोपण के साथ विशिष्ट परिणामों में प्राप्तकर्ता के स्वास्थ्य में परिवर्तन शामिल होंगे जो प्रत्यारोपित अंडाशय की आयु को प्रतिबिंबित करते हैं, न कि प्राप्तकर्ता की कालानुक्रमिक आयु के बजाय ।
Introduction
स्वास्थ्य और जीवन काल पर प्रजनन के प्रभाव अक्सर गलती के रूप में केवल प्रजनन क्षमता को शामिल अवधि के लिए प्रतिबंधित के बारे में सोचा है । जीवन काल के पुनर्उत्पादकतापूर्ण सक्षम चरण से जुड़ी जीवनशैली और phenotypes, जबकि जीवन काल के सभी चरणों में प्रजनन स्थिति स्वास्थ्य को प्रभावित करती है, पूर्व और postreproductive चरणों से आसानी से विभेदित होती है । प्रजनन क्षमता की अवधि अक्सर प्रजनन जीवन अवधि के रूप में जाना जाता है, कालानुक्रमिक जीवन काल से ही फर्क । यह शब्दावली ही दो जीवन अवधि के पदनाम के एक कृत्रिम जुदाई को उधार देता है जब वास्तविकता में, दोनों बारीकी से एक को प्रभावित करने की घटनाओं के साथ एक दूसरे से बंधे हैं, अधिक से अधिक बार नहीं, अंय के रूप में अच्छी तरह से प्रभावित ।
पिछले एक दशक से अधिक सबूत इंगित करता है कि एक व्यक्ति की प्रजनन स्थिति क्रोनिक स्वास्थ्य शर्तों के विकास का एक बढ़ा जोखिम के साथ जुड़ा हुआ है1. एक अध्ययन कम जीवन spans और पुरुषों के एक पलटन के लिए प्रजनन विफलता के बीच एक संघ के दस्तावेज2। एसोसिएशन महिलाओं में और भी अधिक हड़ताली है । हृदय रोग पूर्व3महिलाओं में दुर्लभ है, लेकिन डिम्बग्रंथि विफलता रजोनिवृत्ति4 और समयपूर्व डिम्बग्रंथि विफलता के साथ युवा महिलाओं में तेजी से हृदय रोग बढ़ जाती है5. इंसुलिन प्रतिरोध6 और रजोनिवृत्ति पर हड्डी हानि वृद्धि7 और अल्जाइमर रोग के साथ अमेरिकियों के लगभग दो तिहाई महिलाओं8कर रहे हैं. डिम्बग्रंथि संकेत में अच्छी तरह से परिभाषित परिवर्तन एक रजोनिवृत्ति, रोग प्रतिरोधी राज्य से संक्रमण के निशान, एक रजोनिवृत्ति के लिए, रोग-बोझ राज्य । इस स्थिर संक्रमण, एक के लिए तंत्र की पहचान है कि उंर बढ़ने में रोग जोखिम में तेजी लाने का अवसर प्रस्तुत करता है ।
हाल ही में, cryopreserved डिम्बग्रंथि ऊतक के प्रत्यारोपण के लिए महिलाओं है कि चिकित्सा प्रक्रियाओं है जो इस तरह कीमोथेरेपी के रूप में रोगाणु लाइन कोशिकाओं, खतरे में पड़ सकता है गुजर में प्रजनन क्षमता बहाल किया गया है । डिम्बग्रंथि ऊतक प्रत्यारोपण भी ट्रांसजेनिक चूहों9सहित गैर डिम्बग्रंथि आधारित बांझपन के साथ पशुओं में व्यवहार्य वंश का उत्पादन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । डिम्बग्रंथि प्रत्यारोपण एक कुशल विधि से प्रजनन समारोह या प्रजनन उंर बढ़ने के प्रभाव से अलग करना कालानुक्रमिक बुढ़ापे से प्रति ।
महिला स्वास्थ्य के कई पहलुओं में डिम्बग्रंथि हार्मोन के लिए अच्छी तरह से स्थापित सहायक भूमिका रजोनिवृत्ति में वृद्धि हुई रोग जोखिम के प्रमुख कारण के रूप में सक्रिय रूप से साइकिल रोगाणु कोशिकाओं से हार्मोन उत्पादन के नुकसान को फंसाती है । जबकि महिला स्वास्थ्य में डिंबग्रंथि हार्मोन का मूल्य संदिग्ध है, पेरि में इन हार्मोन की जगह-और रजोनिवृत्ति उपरांत महिलाओं के स्वास्थ्य लाभ की बहाली में अविश्वसनीय किया गया है युवा अंडाशय के साथ युवा महिलाओं द्वारा मज़ा आया । इन स्वास्थ्य लाभ मज़बूती से postreproductive महिला चूहों के लिए युवा अंडाशय के heterochronic प्रत्यारोपण द्वारा बहाल कर रहे हैं10,11,12,13,14.
दाता और प्राप्तकर्ता चूहों दोनों की प्रजनन स्थिति से पहले और प्रत्यारोपण या ovariectomy प्रक्रियाओं के बाद निर्धारित किया जाना चाहिए । प्रकल्पित postreproductive चूहों कि 12 महीने की उंर में सर्जरी से पहले जननांगों इनपुट के लक्षण प्रदर्शित इन प्रयोगों से बाहर रखा गया है । जननांगों इनपुट योनि cytology द्वारा निर्धारित किया जाता है । योनि cytology पर डेटा को प्राप्तकर्ता चूहों में एक postreproductive राज्य और दाता चूहों में सक्रिय रूप से साइकिलिंग अंडाशय सुनिश्चित करने के लिए कम से कम 10 दिन पूर्व सर्जरी के लिए एकत्र कर रहे हैं । एक मद चक्र की अवधि के रूप में परिभाषित किया गया है दिन nucleated उपकला कोशिकाओं पहले दिखाई देते हैं (यानी, proestrus) योनि धब्बा में nucleated उपकला कोशिकाओं के अगले उपस्थिति के पूर्ववर्ती दिन, बशर्ते कि वहाँ leukocytic की अवधि है उपस्थिति (यानी, diestrus) बीच में । मद के साथ या बिना नाभिक बड़े, स्क्वैमस उपकला कोशिकाओं की उपस्थिति से निर्धारित होता है. चूहों कि एक 10 दिन की अवधि के लिए कोई चक्रीय गतिविधि से पहले और/या सर्जरी के बाद प्रदर्शित अवधि के लिए कोई जननांगों इनपुट है निर्धारित कर रहे हैं । चूहों कि पहले और/या सर्जरी के बाद एक 10 दिन की अवधि में कम से एक पूर्ण मद चक्र प्रदर्शन के लिए कहा अवधि के लिए जननांगों इनपुट है निर्धारित कर रहे हैं । मादा चूहों पुरुष चूहों की उपस्थिति में घर या एक पुरुष के पिंजरे से मिट्टी का बिस्तर उजागर करने के लिए चक्र उत्प्रेरण उत्तेजनाओं के अनुरूप प्रदर्शन सुनिश्चित किया जाना चाहिए ।
इन प्रत्यारोपण प्रक्रियाओं सबसे कुशलतापूर्वक दो दाता और प्राप्तकर्ता चूहों पर एक साथ काम कर सर्जन के साथ पूरा कर रहे हैं । हालांकि, प्रक्रियाओं को आसानी से एक सर्जन द्वारा पूरा कर रहे हैं, दाता अंडाशय के साथ सबसे अधिक बार प्राप्तकर्ता माउस पर ovariectomy प्रक्रिया शुरू करने से पहले बरामद किया । यह प्रोटोकॉल एकल सर्जन के लिए प्रक्रिया का वर्णन करता है । प्रजनन मार्ग और साइट के बंद होने के जोखिम आम तौर पर एक खुर्दबीन के बिना किया जाता है, जबकि हटाने और अंडाशय के प्रतिस्थापन एक खुर्दबीन के नीचे किया जाता है । किसी भी शल्य प्रक्रिया सीखने के साथ के रूप में, चीरा साइटों बड़ा हो सकता है और सर्जरी समय पहले प्रक्रिया सीखने और आम तौर पर अनुभव के साथ कम हो जाएगा ले सकते हैं ।
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Protocol
सभी विधियां यहां वर्णित राष्ट्रीय अनुसंधान परिषद के दिशा निर्देशों के तहत विकसित की देखभाल और प्रयोगशाला पशुओं के उपयोग के लिए गाइड में पाया गया है और यूटा राज्य विश्वविद्यालय संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया है ।
नोट: डिम्बग्रंथि प्रत्यारोपण प्रक्रियाओं चूहों (CBA/जम्मू तनाव) उम्र के 21 दिनों से उम्र के 18 महीने के लिए शामिल हो सकता है । CBA/जंमू तनाव के चूहों ४५ और ६० की उंर के दिन और उंर के 10 और 12 महीने के बीच reवृद्ध होनेवाला के बीच पुनर्उत्पादक सक्षम हो ।
1. वृद्ध चूहों को बरकरार अंडाशय की रोपाई
नोट: यह पहला प्रोटोकॉल एक युवा माउस से अंडाशय के हस्तांतरण के दौरान इस्तेमाल किया प्रक्रिया का वर्णन (६० उंर के दिन) एक ही नस्ल तनाव के एक postreproductive महिला (उंर के 12 महीने) के लिए । एक ही प्रक्रिया किसी भी दो मादा चूहों के बीच डिम्बग्रंथि प्रत्यारोपण के लिए प्रयोग किया जाता है ।
- वजन और anesthetize द्वारा दाता पशु intraperitoneal (आईएफसआई, 27 ga सुई) इंजेक्शन, उदाहरण के लिए ketamine, xylazine और acepromazine का एक कॉकटेल का उपयोग (६५ मिलीग्राम/किलो ketamine, 13 मिलीग्राम/xylazine २.० मिलीग्राम/किलो, acepromazine; कॉकटेल खुराक-६.५ मिलीलीटर/ जब तक संज्ञाहरण प्रभावी हो गया है गर्म घर पिंजरे में पशु लौटें ।
- एक बार anesthetized, घर पिंजरे और गर्म कागज तौलिए पर जगह से पशु निकालें । कतरनों का उपयोग करना (#40 ब्लेड पसंदीदा), बालों को हटाने के कुछ मिमी प्रत्येक पक्ष पर midline पार्श्व, बस पसलियों के नीचे शुरू करने और अधिक बढ़ रहा है, एक ' काटा ' पैच की तैयारी लगभग 2-3 सेमी वर्ग प्रवण माउस के दोनों ओर एक बाल की पट्टी छोड़ने लगभग 1-2 सेमी midline को कवर ।
- हल्के से ७०% इथेनॉल के साथ काटा क्षेत्रों पोंछ और, एक कपास के साथ काटा हुआ साइट पर betadine समाधान लागू-झाड़ू इत्तला दे दी ।
- नेत्र सुरक्षा के लिए एंटीबायोटिक जेल लागू करें और meloxicam प्रशासन (२.० मिलीग्राम/) चमड़े के नीचे (एस॰सी॰, 27 ga सुई) पश्चात दर्द से राहत के लिए पशुओं के गले के पार्श्व पहलू पर ।
- एक गर्म बाँझ सर्जिकल क्षेत्र पर प्रवण स्थिति में पशु प्लेस, और एक ७०% इथेनॉल से लथपथ 2 सेमी एक्स 2 सेमी कपास धुंध के साथ काटा क्षेत्र पोंछ ।
- एक 1.0-1.5 सेमी paralumbar चीरा और कुंद कर अंतर्निहित प्रावरणी से त्वचा काटना । प्रावरणी के माध्यम से एक और चीरा बनाओ । कुंद काटना बाद में इस प्रावरणी के तहत सतही रूप से संभव के रूप में उदर गुहा तक पहुंचने तक
- चीरा पर एक छोटे से सर्जिकल कपड़े प्लेस (2 सेमी एक्स 2 सेमी धुंध से कटौती) और बाँझ खारा के साथ कपड़े गीला.
- छोटे संदंश का प्रयोग, वसा ऊतक है कि उदर गुहा में अंडाशय के चारों ओर का पता लगाने और धीरे वसा पैड और अंडाशय निकालने के लिए और यह गीला धुंध कपड़ा पर जगह है । डिम्बग्रंथि वसा पैड आसपास के वसा ऊतक से अधिक ' सफेद ' दिखाई देगा ।
- एक १.५ इंच बुलडॉग वसा पैड पर दबाना प्लेस (डिम्बग्रंथि बर्सा बाधा करने के लिए ध्यान नहीं ले) प्रक्रिया के दौरान जगह में पथ पकड़ करने के लिए ।
- जगह में विदारक माइक्रोस्कोप ले जाएं और स्पष्ट रूप से डिम्बग्रंथि बर्सा की पहचान करें । दो घड़ीसाज़ संदंश के साथ बर्सा समझ और अंडाशय को बेनकाब करने के लिए डिम्बग्रंथि बर्सा विपरीत डिम्बग्रंथि hilum incise । बर्सा का इरादा पहुँच क्षेत्र अत्यधिक संवहनी है, तो फाड़ के समय रक्तस्राव को कम करने के लिए bursal सतह के लिए एक सिरिंज के साथ एड्रेनालाईन (1:100000) की एक बूंद लागू होते हैं ।
- धीरे डिम्बग्रंथि बर्सा से अंडाशय को हटाने और रक्तस्राव को रोकने के लिए एक घड़ीसाज़ संदंश के साथ डिम्बग्रंथि hilum पर दबाना द्वारा अंडाशय उत्पाद ।
- देखो गिलास 4 डिग्री सेल्सियस बाँझ खारा से भरा में दाता अंडाशय प्लेस, ढीला कवर और अलग निर्धारित जब तक प्रत्यारोपण के लिए तैयार । आदर्श रूप में, एक अतिरिक्त विदारक माइक्रोस्कोप के नीचे वॉच ग्लास को रखें जिससे कि अंडाशय प्रत्यारोपण के समय सर्जन द्वारा आसानी से समझा जा सके ।
- इस बिंदु पर, या तो euthanize या अलग दाता माउस सेट (लगातार पर नजर रखी जानी चाहिए) एक प्रत्यारोपण अंडाशय, ऊतक, कोशिकाओं या एक प्लेसहोल्डर गिलास मनका बाद में समय बिंदु पर प्राप्त करने के लिए ।
- एक स्वच्छ शल्य क्षेत्र और उपकरणों के साथ, ऊपर के रूप में प्राप्तकर्ता जानवर ovariectomize । पुराने चूहों वसा ऊतक की एक वृद्धि हुई राशि है और एक वृद्धि हुई संवेदनाहारी खुराक की आवश्यकता हो सकती है (अप करने के लिए 20%).
- प्राप्तकर्ता से अंडाशय के उत्पाद के बाद, खाली बर्सा के अंदर hemostatic फोम पैड का एक छोटा सा टुकड़ा जगह खून बह रहा है और थक्के में सहायता नियंत्रण और उजागर साइट पर खारा से लथपथ धुंध का एक छोटा सा टुकड़ा जगह है ।
- एक हाथ में एक घड़ीसाज़ संदंश के साथ एक दाता अंडाशय (या ऊतक, कोशिकाओं, प्लेसहोल्डर ग्लास मनका) का पता लगाने और माइक्रोस्कोप क्षेत्र-के-दृश्य में ले जाएँ । विपरीत हाथ में एक और संदंश के साथ, धुंध को हटा दें और साथ ही बर्सा के अंदर नए अंडाशय रखने जबकि बर्सा से hemostatic फोम पैड को हटा दें ।
- यदि नए अंडाशय प्राप्तकर्ता बर्सा के अंदर फिट नहीं है, आधे में दाता अंडाशय काट (या 1/3 या 1/4) और टुकड़ों में बर्सा में जगह है । यदि बर्सा पूरी तरह से पूरे अंडाशय को कवर नहीं करता है, बर्सा के माध्यम से एक टांका, अंडाशय के माध्यम से और स्थान में अंडाशय पकड़ करने के लिए बर्सा के माध्यम से वापस रखें (चर्चा अनुभाग देखें) ।
नोट: ग्लास प्लेस-धारक मोतियों को घड़ीसाज़ के संदंश के साथ संभालना मुश्किल हो सकता है । - जब बर्सा के अंदर एक गिलास मनका रखने, बड़ा संदंश और मोटी डिम्बग्रंथि बर्सा के बगल में पैड के शीर्ष पर छोड़ के साथ मनका उठाओ । बर्सा में मनका रोल ।
- पहले से ही एक पतला सुई और 9-0 या 10-0 monofilament टांका के साथ भरी हुई एक Castroviejo सुई धारक उठाओ, बर्सा के फटे किनारे का पता लगाने और एक या दो Halsted टांके का उपयोग बर्सा बंद ।
नोट: Suturing वैकल्पिक रूप से घड़ीसाज़ या अंय छोटे संदंश के साथ किया जा सकता है । - बाँझ खारा के साथ हल्के ढंग से साइट की सिंचाई, वसा पैड दबाना निकालें और अंडाशय वापस पेट के लिए/
- कपड़े निकालें और 6-0 क्रोमिक आंत या vicryl के साथ पेट की दीवार बंद करो । इस कदम के साथ या माइक्रोस्कोप के बिना किया जा सकता है ।
- एक तरफ खुर्दबीन हटो (अगर पिछले कदम में ले जाया नहीं) और 9 मिमी घाव क्लिप के साथ त्वचा को बंद करें ।
- एक गर्म वसूली पिंजरे में पशु प्रकाश से छायांकित प्लेस और संज्ञाहरण से वसूली तक लगातार जानवर की निगरानी । अतिरिक्त meloxicam का उपयोग किया जा सकता है 24 घंटे के बाद ऑपरेटिव अगर संकेत दिया । घाव क्लिप लगभग नौ दिनों के बाद ऑपरेटिव निकालें ।
नोट: कोई immunosuppressive तकनीक कार्यरत है और भ्रष्टाचार बनाम मेजबान रोग का कोई सबूत के बाद प्रत्यारोपण या मौत पर पता लगाया गया है ।
2. कीटाणु कोशिका के प्रत्यारोपण बरकरार चूहों के लिए अंडाशय समाप्त हो गया ।
नोट: इस प्रोटोकॉल एक postreproductive महिला को एक युवा, रोगाणु कोशिका समाप्त माउस से अंडाशय के हस्तांतरण शामिल है । इस प्रोटोकॉल में, अंडाशय प्राप्तकर्ताओं और ovariectomy और प्रत्यारोपण प्रक्रियाओं अपवाद के साथ ऊपर के रूप में कर रहे हैं कि प्रत्यारोपित अंडाशय रासायनिक मौलिक और प्राथमिक कूप/रोगाणु कोशिकाओं के समाप्त हो गया है । शेष माध्यमिक और कोटरीय कूप भर्ती/अविवरता से गुजरना होगा अंडाशय रोगाणु कोशिकाओं के विहीन छोड़ । 4-vinylcyclohexene diepoxide (वीसीडी) के साथ रोगाणु कोशिका घट अच्छी तरह से16बताई जाती है । वीसीडी एक विष है । क्योंकि वीसीडी-इलाज अंडाशय एक गैर इलाज माउस को प्रत्यारोपित किया जा रहा है, एक वीसीडी से यह प्रक्रिया लाभ एक माउस में अंडाशय का इलाज वीसीडी के विषाक्त प्रभाव को उजागर नहीं । इस प्रोटोकॉल युवा, अंडाशय दाता चूहों में रोगाणु कोशिका-घट के लिए प्रक्रिया का वर्णन है ।
- पतला वीसीडी (६४ मिलीग्राम/एमएल) इंजेक्शन और स्टोर के लिए तिल के तेल में 4 डिग्री सेल्सियस उपयोग तक ।
- 15 दिनों की उंर के 28 दिनों में शुरुआत के लिए वीसीडी आईएफसआई (१६० मिलीग्राम/किग्रा) के साथ एक दिन में एक बार अंडाशय दाताओं इंजेक्षन । एक ही समय के बाद तिल के तेल के साथ नियंत्रण चूहों इंजेक्षन ।
- उंर के ५० दिनों में, ऊपर के रूप में 10 दिनों के लिए प्रजनन cyclicity की समाप्ति के लिए वीसीडी-इलाज और तेल केवल इलाज चूहों की जांच करें । उंर के ६० दिनों में, वीसीडी-इलाज चूहों जननांगों इनपुट का कोई कोशिकाविज्ञान सबूत प्रदर्शित करना चाहिए ।
- ऊपर के रूप में ६० दिन पुराने चूहों और प्रत्यारोपण से अंडाशय की वसूली ।
- प्रजनन सायक्लिंग की कमी का पता लगाने और परिसंचारी androstenedione के स्तर में वृद्धि के द्वारा रोगाणु कोशिका समाप्त अंडाशय के सफल प्रत्यारोपण निर्धारित करें । एण्ड्रोजन: एस्ट्रोजन अनुपात काफी वृद्धि के बाद रोगाणु सेल कमी17वीसीडी के साथ ।
- cyclicity के सटीक निर्धारण को सुनिश्चित करने के लिए, योनि cytology 10-14 दिन पश्चात् आरंभ करें और कम से लगातार 10 दिनों के लिए डेटा एकत्र करें ।
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Representative Results
उंर के 21 दिनों में Ovariectomy प्रमुख ऊपर से बचना होगा-यौवन की शुरुआत में प्रजनन प्रणाली के विनियमन और अंय प्रभावों को समाप्त महिला gonad जननांगों हार्मोन के प्रत्यक्ष प्रभाव के अलावा हो सकता है । CBA/जे चूहों में प्रजनन गिरावट आमतौर पर उंर के 8-10 महीने में अनियमित चक्र के साथ शुरू होता है । उम्र के 11 महीनों में, चूहों की इस पंक्ति में अधिकांश महिलाओं को 12 महीने की उम्र के द्वारा उत्तरदायी अंडाणुओं की एक पूरी हानि के साथ प्रजनन विफलता के एक बिंदु तक पहुँच गया है15 . ये उम्र चूहों के विभिन्न उपभेदों में बदलती है । द्विपक्षीय ovariectomy/डिम्बग्रंथि प्रत्यारोपण सामान्य रूप से कुछ ही दिनों के भीतर प्रत्यारोपण अंडाशय के सक्रियण में परिणाम । दोनों प्राप्तकर्ता के अंतर्जात अंडाशय (hemi-ovariectomy) प्रत्यारोपण करने से पहले निकालने के लिए विफलता प्रत्यारोपित अंडाशय शेष अंतर्जात अंडाशय हटा दिया जाता है जब तक निष्क्रिय रह में परिणाम होगा । सर्जिकल प्रक्रियाओं सबसे अधिक बार एक खुले क्षेत्र में आयोजित कर रहे है (पथ exteriorizing) और एक विदारक माइक्रोस्कोप के तहत (ovariectomy और प्रत्यारोपण प्रक्रियाओं) ।
जीवन काल का विस्तार
CBA/जे मादा चूहों के लिए मतलब जीवन अवधि ६४४ दिन18है । चूहों कि सर्जरी से गुजरा (शम [अंडाशय हटाने और तत्काल प्रतिस्थापन] या प्रत्यारोपण) सर्जरी के समय से कम करने के लिए रहने के लिए चयन किया गया । प्रयोग के आधार पर यह उम्र 11 से 18 महीने के बीच थी । प्रारंभिक प्रयोगों में19, सर्जरी उंर के 11 महीने में आयोजित की और अन्तर्वासना चूहों ७२८ दिनों के एक औसत रहते थे (३९३ दिन सर्जरी के समय के बाद) और बरकरार चूहों कि नए अंडाशय प्राप्त ८११ दिन (४७६ दिन पिछले सर्जरी, जीसी-TX-1, चित्रा 1) रहते थे । एक और हाल के प्रयोग में, सर्जरी उंर के 17 महीने और चूहों कि नए अंडाशय प्राप्त ७९८ दिन (२८१ दिन पिछले सर्जरी, जीसी-TX-2) रहते थे पर आयोजित की गई । चूहों कि रोगाणु कोशिका समाप्त अंडाशय प्राप्त ८८० दिनों के एक मतलब जीवन अवधि के लिए इस विस्तारित (३६३ दिन के बाद ऑपरेटिव) ।
स्वास्थ्य स्पैन का विस्तार
चूहों कि नए प्राप्त, रोगाणु कोशिका युक्त अंडाशय काफी कमी हृदय रोग10 और आर्थोपेडिक रोग11 और कई स्वास्थ्य अवधि के मापदंडों के महत्वपूर्ण सुधार का प्रदर्शन प्रदर्शित किया । Postreproductive चूहों कि उम्र के 12 महीनों में नए अंडाशय प्राप्त किया और उम्र के 16 महीने में परख रहे थे, कम से कम sarcopenia12का प्रदर्शन, प्रतिरक्षा और गुर्दे समारोह में सुधार13, और बेहतर संज्ञानात्मक व्यवहार और संवेदी समारोह14 .
रोगाणु कोशिका घट का सत्यापन
28 दिवसीय महिला CBA के उपचार/मौलिक और प्राथमिक (रोगाणु कोशिका युक्त) कूप की कमी में वीसीडी परिणामों के साथ 15 दिनों के लिए । CBA/जे चूहों केवल ३७ दिनों में वीसीडी उपचार की दीक्षा के बाद विश्लेषण पहले से ही प्रजनन cyclicity की समाप्ति (लगातार योनि cornification), कम डिंबग्रंथि वजन (१.७ मिलीग्राम तेल में केवल बनाम ०.९ वीसीडी-इलाज में मिलीग्राम) और घट मौलिक और प्राथमिक डिम्बग्रंथि कूप, नियंत्रण के साथ तुलना में (चित्र 2) ।
चित्र 1: postreproductive प्राप्तकर्ताओं में जीवन काल पर युवा अंडाशय के प्रभाव । युवा अंडाशय 11 माह के लिए प्रत्यारोपण-पुराने चूहों 11% (GC-Tx-1 n = 14, ६० दिन-पुराने, रोगाणु कोशिका युक्त नए अंडाशय की उंर के 11 महीने में) द्वारा जीवन काल बढ़ाया । उम्र के 17 महीनों में युवा अंडाशय के प्रत्यारोपण जीवन काल विस्तार में कोई परिवर्तन नहीं (GC-Tx-2 n = 5, प्राप्त ६० दिन-पुराने, रोगाणु कोशिका युक्त नए अंडाशय उम्र के 17 महीनों में). युवा अंडाशय से रोगाणु कोशिकाओं को समाप्त रोपाई से पहले जीवन काल के विस्तार को दोगुना कर दिया 21% (GD-Tx n = 5, प्राप्त ६० दिन-पुराने, रोगाणु सेल-उंर के 17 महीनों में नए अंडाशय समाप्त) । मृत्यु के समय आयु: AAD । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 2: CBA/जे चूहों में छोटे कूप की वीसीडी कमी । एच एंड ई सना वर्गों (25X) दिखा (एक) तेल में प्रचुर मात्रा में छोटे रोम इलाज (n = 6) चूहों, (ख) वीसीडी-इलाज में छोटे कूप की संख्या कम (एन = 4) चूहों और (ग) और दोनों मौलिक और प्राथमिक में महत्वपूर्ण अंतर कूप संख्या । तीर मौलिक और प्राथमिक कूप इंगित करते हैं । त्रुटि पट्टियां का प्रतिनिधित्व एसई. इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए यहां क्लिक करें.
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Discussion
Ovariectomy और प्रत्यारोपण बरकरार और रोगाणु कोशिका समाप्त अंडाशय के 21 दिन से 18 महीने की उंर के लिए लेकर चूहों में आयोजित किया गया है । जब एक ovariectomy जहां यह डिंबग्रंथि बर्सा बरकरार बनाए रखने के लिए वांछनीय है प्रदर्शन, देखभाल जब bursal ऊतक incising लिया जाना चाहिए । उंर के छह महीने से अधिक पुराने चूहों में, बर्सा के बहुत वसा पैड, जो क्षेत्रों है कि उपयोग के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है सीमा के साथ मढ़ा हो जाता है । इन मामलों में, यह अक्सर वसा पैड सीमा के पास खुला बर्सा आंसू करने के लिए फायदेमंद है । इस विधि अक्सर एक और अधिक आसानी से सुलभ ' bursal ऊतक की जेब ' के लिए ' टक ' बर्सा अंदर नए अंडाशय छोड़ देता है । इस दृष्टिकोण भी कम suturing की आवश्यकता को bursal ऊतक बंद कर सकते हैं । बर्सा में खोलने के बाद भी suturing के दौरान नए अंडाशय जगह में रखने में मदद कर सकते है घूर्णन ।
कभी-कभार, bursal ऊतक अत्यधिक वसा पैड कवरेज की वजह से व्यापक रूप से खोला जा करने के लिए की जरूरत, पथ के असामान्य अभिविन्यास या मुश्किल-डिम्बग्रंथि ऊतक टुकड़े को पुनः प्राप्त करने के लिए. इन मामलों में, नए अंडाशय प्रभावी रूप से बर्सा में ' tucked ' नहीं हो सकता है । यदि अंडाशय खुले बर्सा के शीर्ष पर सेट है और अंडाशय के आधे से अधिक शेष bursal ऊतक द्वारा कवर किया जाता है, एक बटुआ-स्ट्रिंग सीवन बर्सा और अंडाशय के आसपास के फटे किनारे से अच्छी तरह से रखा गया है । के रूप में पर्स-स्ट्रिंग धीरे से मजबूत है, अंडाशय शेष बर्सा में नीचे धकेल दिया है और बर्सा जगह में अंडाशय रखने के लिए काफी दूर बंद है, लेकिन पूरी तरह से बंद नहीं हो सकता है । यदि अंडाशय खुले बर्सा के शीर्ष पर सेट है और अंडाशय के आधे से कम शेष bursal ऊतक के द्वारा कवर किया जाता है, एक सीवन बर्सा के एक तरफ, अंडाशय के माध्यम से, बर्सा के माध्यम से विपरीत दिशा में और शीर्ष पर knotted के माध्यम से अच्छी तरह से रखा गया है अंडाशय के । इस विधि एकाधिक टांके की आवश्यकता हो सकती है और bursal ऊतक द्वारा अंडाशय की पूरी कवरेज में परिणाम नहीं होगा । हालांकि, इस विधि जगह में अंडाशय पकड़ और कुशल revascularization और डिम्बग्रंथि गतिविधि के अंतिम बहाली की अनुमति देगा ।
जब एक ovariectomy जहां यह डिम्बग्रंथि बर्सा बरकरार बनाए रखने के लिए वांछनीय है प्रदर्शन, देखभाल भी अंतर्जात डिम्बग्रंथि ऊतक के सभी को दूर किया जाता है सुनिश्चित करने के लिए लिया जाना चाहिए । यह एक बड़ी अंतर्जात अंडाशय के साथ मुश्किल हो सकता है । जितना संभव हो उतना bursal ऊतक को संरक्षित करने के लिए बड़े अंडाशय को टुकड़ों में हटाया जा सकता है । हालांकि, इस विधि का उपयोग करते समय, सभी अंतर्जात डिम्बग्रंथि ऊतक निकाल दिया जाता है यह सुनिश्चित करने के लिए अतिरिक्त सतर्कता का उपयोग किया जाना चाहिए । अंडाशय के भाग निकाल दिया जाता है और बर्सा खून से भर गया है के बाद यह मुश्किल हो सकता है । hemostatic फोम पैड का एक छोटा सा टुकड़ा खुले बर्सा में रखा जा सकता है रक्त और बर्सा अंदर थक्के में सहायता विस्थापित करने के लिए । 30-60 एस के बाद, hemostatic फोम पैड हटा दिया जाता है और बर्सा (बर्सा भी खारा के साथ हल्के से कुल्ला किया जा सकता है) किसी भी शेष डिम्बग्रंथि के टुकड़े की उपस्थिति के लिए निरीक्षण किया है ।
डिम्बग्रंथि प्रत्यारोपण की आवश्यकता है कि प्रत्यारोपण अंडाशय अपनी स्थापित रक्त की आपूर्ति और अपने नए घर में अंडाशय के revascularization से अलग किया जा तत्काल नहीं है । इस वजह से, प्रत्यारोपण अंडाशय कुछ परिगलन से गुजरती है, मुख्य रूप से शामिल परिपक्व और/ हालांकि, प्रत्यारोपण अंडाशय के विशाल बहुमत शीघ्र ही प्रत्यारोपण के बाद चक्रीय गतिविधि प्रदर्शन और कुछ प्रत्यारोपण प्राप्तकर्ताओं को मौत तक साइकिल के लिए जारी रहेगा । इसलिए, प्रत्यारोपण परिगलन के कारण कूप की हानि दृढ़ता से अपने नए मेजबान में प्रत्यारोपित अंडाशय के एकीकरण की स्थापना को प्रभावित करने के लिए प्रकट नहीं होता है ।
स्तनधारी उंर बढ़ने में एक प्रचलित दृश्य है कि एस्ट्रोजन स्वास्थ्य पर ही महत्वपूर्ण प्रजनन प्रभाव का प्रतिनिधित्व करता है । नए अंडाशय प्राप्त पुराने चूहों के स्वास्थ्य में मनाया नाटकीय परिवर्तन आसानी से एस्ट्रोजन का स्तर घूम के एक सरल बहाली के रूप में खारिज किया जा सकता है । हालांकि, हाल के एक अध्ययन में, तीन प्रयोगशालाओं द्वारा स्वतंत्र रूप से दोहराया गया20, 17-α-एस्ट्राडियोल जब उंर के 10 महीने से तंग आ महिला जीवन काल पर कोई प्रभाव नहीं था । यह निश्चित रूप से और अधिक प्रसिद्ध 17-β-एस्ट्राडियोल के रूप में एक ही हार्मोन नहीं है, लेकिन एस्ट्रोजन के स्वास्थ्य जुड़े प्रभाव के कई 17-α-एस्ट्राडियोल संकेतन के लिए जिंमेदार माना किया गया है 21. एस्ट्रोजन चिकित्सा रजोनिवृत्ति उपरांत महिलाओं में कई उम्र से संबंधित विकृतियों पर दोनों सकारात्मक और नकारात्मक प्रभाव पड़ता है और स्पष्ट रूप से रजोनिवृत्ति उपरांत महिलाओं में एक ही प्रभाव के अधिकारी के रूप में यह युवा महिलाओं में नहीं करता है दिखाया गया है । जबकि रोगाणु कोशिका-एस्ट्रोजन का उत्पादन उत्तेजित प्रजनन के लिए महत्वपूर्ण है, रजोनिवृत्ति में, रोगाणु कोशिका समाप्त अंडाशय अभी भी स्वास्थ्य को बढ़ावा देने विशेषताओं के अधिकारी, postreproductive अंडाशय को हटाने के रूप में और मृत्यु दर की वृद्धि हुई है, सहित उम्र से संबंधित बीमारियां22. Ovariectomized चूहों थोड़ा कम जीवन है अन्तर्वासना सर्जरी चूहों (७१५ दिन बनाम ७२८ दिन, क्रमशः19) की तुलना में spans. यदि दीर्घायु को प्रभावित तंत्र evolutionarily संरक्षण कर रहे हैं, मॉडल जीवों से सबूत एक एस्ट्रोजन के खिलाफ तर्क-स्तनधारियों में स्वास्थ्य अवधि विस्तार के लिए ही विवरण ।
दोनों के साथ और सक्रिय रोगाणु कोशिकाओं के बिना अंडाशय के प्रत्यारोपण एक स्तर है कि हार्मोन थेरेपी अकेले पाने के लिए संघर्ष किया है करने के लिए स्वास्थ्य लाभ बहाल किया गया है । स्वास्थ्य के कई पहलुओं, जो नकारात्मक महिलाओं में उंर बढ़ने से प्रभावित कर रहे हैं, सकारात्मक वृद्ध चूहों में सक्रिय डिम्बग्रंथि समारोह की पुनः स्थापना से प्रभावित किया जा सकता है । हालांकि, हाल ही में पायलट अध्ययनों से पता चलता है कि इन प्रभावों, कुछ हद तक हो सकता है, डिम्बग्रंथि रोगाणु कोशिका हार्मोन के स्वतंत्र ।
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Disclosures
लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।
Acknowledgments
अनुसंधान इस प्रकाशन में रिपोर्ट उंर बढ़ने पर राष्ट्रीय संस्थान से 14 महीने की वृद्ध महिला CBA चूहों के एक उदार उपहार द्वारा समर्थित किया गया था, वृद्ध कुतर कॉलोनी (नैंसी नादौन) और यूटा राज्य विश्वविद्यालय, पशु चिकित्सा, पशु विभाग, डेयरी के स्कूल द्वारा और पशु चिकित्सा विज्ञान ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Dissecting microscope | Any dissecting scope with an adjustable working distance. | ||
| Warm Water Recirculator and appropriate pad for your size surgical/recovery field. | Stryker/Gaymar | TP700 | Circulating water pads produce even and consistent temperature operating and recovery fields. |
| Surgical instruments-dissection instruments for access to the reproductive tract | Choice of specific surgical instruments is highly surgeon-specific | ||
| Surgical instruments-fine instruments for the transplantation procedure. | Choice of specific surgical instruments is highly surgeon-specific | ||
| Suture material for abdominal wall | eSutures | G3756K: 6-0 MILD CHROMIC GUT 18" HE-7 CUTTING, DOUBLE ARMED | |
| Suture material for ovarian bursa | eSutures | 2809G: 9-0 or 2810G: 10-0 ETHILON BLACK 5" BV130-5 TAPER | 10-0 suture can be difficult to locate if dropped on the surgery field. |
| Absorbable gelatin sponge | PFIZER. | Gelfoam- PFIZER 09-0315-08. | cut into small (~2mm) pieces under sterile conditions. |
| Staples for skin closure | Becton Dickinson | MikRon Autoclip 9mm (BD 427631) | |
| Eye ointment. | MWI Veterinary Supply Co. | Puralube sterile opthalmic ointment | |
| Syringes for anesthesia, analgesia and epinephrine | MWI Veterinary Supply Co. | BD 305536 | 27g x 3/8in,Intradermal Bevel 1/2ml |
| Syringes for saline. | MWI Veterinary Supply Co. | BD 309657. | 3ml syringe, luer-lok tip, 27g needle |
| Clippers/blade | Andis | Super AGR+™ Cordless Detachable Blade Clipper and a CeramicEdge® #40 blade. | Any clippers with a fine blade. |
| Ethanol | University chemical supply | dilute to 70% for use. | |
| Betadine solution | MWI Veterinary Supply Co. | 003233 | |
| 2x2 gauze pads | MWI Veterinary Supply Co. | 003073 | autoclaved with surgery packs |
| Borosilicate glass beads | Sigma-Aldrich Co. | Z273619 | Autoclave in sintilation vials |
| 4-vinylcyclohexene diepoxide | Sigma-Aldrich Co. | 94956 | |
| Sesame oil | Sigma-Aldrich Co. | S3547 |
References
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