במחקר זה, אנו מתארים את הגישה תעלת semicircular האחורי בתור שיטה אמינה למסירה גן באוזן הפנימית בעכברים neonatal. אנו מראים כי המסירה הגן דרך תעלת semicircular האחורי הוא היכולת perfuse האוזן הפנימית כולה.
Abstract
ריפוי גנטי באוזן הפנימית מציע הבטחה גדולה בתור טיפול פוטנציאלי עבור אובדן שמיעה וסחרחורות. אחת גורמים קריטיים של ההצלחה של טיפול גנטי באוזן הפנימית היא למצוא שיטת משלוח אשר התוצאות היעילות התמרה חושית עקבית של סוגי תאים ממוקד תוך מזעור אובדן שמיעה. במחקר זה, אנו מתארים את הגישה תעלת semicircular האחורי כשיטה מעשית למסירה גן באוזן הפנימית בעכברים neonatal. אנו מראים כי המסירה הגן דרך תעלת semicircular האחורי הוא היכולת perfuse האוזן הפנימית כולה. זיהוי אנטומיים קלה של תעלת semicircular אחורי, כמו גם מניפולציה מינימלי של העצם הטמפורלית הנדרש, לעשות ניתוח זה הגישה אופציה אטרקטיבית עבור המסירה הגן באוזן הפנימית.
Introduction
ריפוי גנטי באוזן הפנימית הוא שדה המתפתחת של החקירה. זה הוחל במודלים בבעלי חיים שונים ototoxicity לחימה, טראומת רעש של אובדן שמיעה תורשתי1. מספר מחקרים שנעשו לאחרונה הראו שחזור פונקציונלי של שמיעה ופונקציות לאיזון בעכברים המוטנטים לאחר באוזן הפנימית ג’ין טיפול משלוח2,3,4,5,6,7. אחת של המפתח גורמים בקביעת ההצלחה של טיפול גנטי באוזן הפנימית היא גישה כירורגית המשמשים לגישה האוזן הפנימית. באופן אידיאלי, הגישה כירורגי יהיה קל לביצוע, ציוני הדרך אנטומיים יהיה עקבי וקל לזיהוי, ו התמרה חושית וכתוצאה מכך של סוגי תאים יישוב יהיה גבוה.
במחקר שנערך לאחרונה, הראינו כי כאשר הטיפול הגנטי הנגיפי הוזרק דרך תעלת semicircular האחורי של העכבר מוטציה whirler (דגם של אובדן שמיעה, בעיות בתפקוד שיווי המשקל), התמרה חושית יעילה של תאי חישה השיער נראה את שיווי המשקל כמו גם איברים כמו שבלול5. יעילות גבוהה של התמרה חושית החישה תא שיער הביאו לשיפור של פונקציות השמיעה ואת שיווי המשקל בעכברים המוטנטים האלה.
במאמר זה, נתאר בפירוט את הגישה תעלת semicircular האחורי כדי לגשת האוזן הפנימית העכבר neonatal.
Protocol
כל ההליכים בבעלי חיים אושרו על ידי חיה על עצמך ועל שימוש הוועדה במכון הלאומי על חירשות והפרעות אחרות תקשורת (NIDCD ASP1378-15). 1. הליך ההתקנה והכנות לעקר את כל הכלים על ידי אתילן אוקסיד בתחילת הניסוי. בין בעלי החיים, לנקות כלים באמצעות עיקור חרוז. לטעון את הפתרון הכולל ריפ?…
Representative Results
הזרקה של טיפול גנטי AAV8 whirlin לתוך neonatal whirler עכברים דרך תעלת semicircular אחורי, גרמו whirlin ביטוי תאים שיער utricular (איור 2), (ירוק) עם היעילות הכוללת של זיהום של 53.1% (SD 38.1, n = 28)5 . תאים שיער transduced היה מוארך stereocilia (אדום) לעומת תאים שיער מהאוזניים ללא הזרקת contralatera…
Discussion
מספר גישות כירורגיות תוארו לגשת לאוזניים הפנימיות מכרסמים. Cochleostomy וגישות חלון עגול הנפוץ ביותר לגישה שבלול, ואילו התעלה semicircular האחורי ועל גישות שק endolymphatic משמשים בדרך כלל כדי לגשת את אברי שיווי המשקל1. במחקר שנערך לאחרונה, הראינו כי תעלת semicircular האחורי זריקות של טיפול גנטי ויר?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה על ידי כספים NIDCD חלוקה של מגזר מחקר /NIH (DC000082-02 כדי W.W.C.), כמו גם DC000081 אל ליבה הדמיה מתקדמות. . אנחנו אסירי תודה על הצוות מתקן בעלי חיים NIDCD על הדאגה לבעלי-חיים שלנו.
Materials
Operating microscope
Zeiss
OPMI Pico ENT microscope. Other dissection microscopes would also work.
Isgrig, K., Chien, W. W. Posterior Semicircular Canal Approach for Inner Ear Gene Delivery in Neonatal Mouse. J. Vis. Exp. (133), e56648, doi:10.3791/56648 (2018).