Summary
यहाँ, हम आंशिक पित्त नलिका बंधाव को कुतर में जिगर की चोट और पुनर्जनन के एक शल्य चिकित्सा मॉडल के रूप में प्रस्तुत करते हैं ।
Abstract
कुतर में, पूर्ण पित्त नलिका बंधाव (cBDL) आम पित्त नलिका के प्रतिरोधी cholestasis और पित्त नलिका प्रसार का अध्ययन करने के लिए एक स्थापित शल्य तकनीक है । हालांकि, दीर्घकालिक प्रयोगों से रुग्णता और मृत्युदर में वृद्धि हो सकती है । अंतर्निहित जिगर की बीमारी के साथ चयन माउस उपभेदों में, सार्थक तुलना भी जिगर की एक पालि के बंधाव के साथ किया जा सकता है, जो पशुओं के नुकसान और खर्च को कम कर सकते हैं । यहाँ, हम आंशिक पित्त नली बंधाव (pBDL) माउस में वर्णन, जिसमें केवल बाएँ यकृत पित्त नलिका ligated है, बाएँ पालि में पित्त रुकावट के कारण नहीं बल्कि शेष पालियों. सावधान microsurgical तकनीक के साथ, pBDL प्रयोगों लागत प्रभावी हो सकता है, के बाद से unligated पालि ligated पालियों के लिए एक आंतरिक नियंत्रण के रूप में कार्य करता है, जब एक ही जानवर में एक ही परिस्थितियों के अधीन । cBDL के विपरीत, पृथक शम-संचालित नियंत्रण समूह आवश्यक नहीं है । pBDL सीधे स्थानीयकृत बनाम cholestasis और अन्य बनाए गए पित्त घटकों के प्रणालीगत प्रभाव की तुलना करने के लिए बहुत उपयोगी है । pBDL भी दवाओं और सेल प्रवास से संबंधित तंत्र की जांच करने के लिए एक उपंयास विधि के रूप में reपर्पज किया जा सकता है ।
Introduction
तीव्र जिगर की चोट और आंशिक hepatectomy या आम पित्त वाहिनी बंधाव (cBDL) के रूप में मरम्मत के सर्जिकल मॉडल, चूहे में दशकों के लिए इस्तेमाल किया गया है जिगर पुनर्जनन और pathobiology1,2का अध्ययन करने के लिए । cBDL में, आम पित्त नलिका (जो जिगर में उत्पादित सभी पित्त नालियों) ligated है, प्रतिरोधी cholestasis, सूजन में जिसके परिणामस्वरूप, और फाइब्रोसिस पहले 2-3 सप्ताह सर्जरी के बाद में,3सिरोसिस के लिए अंतिम प्रगति के साथ । पित्त वाहिनी प्रसार, transdifferentiation, और निवासी जिगर जनक कोशिकाओं की प्रेरण भी cBDL4,5की विशेषताएं हैं । हालांकि cBDL elucidates प्रतिरोधी cholangiopathy, जो अच्छी तरह से कर रहे है reproducible परिणामों के साथ जंगली प्रकार चूहों में विशेषता और सामांय जिगर के साथ उन उपभेदों में विशिष्ट तंत्र6,7,8, प्रक्रिया तकनीकी रूप से जिगर की बीमारियों के कुछ ट्रांसजेनिक माउस मॉडल में मांग कर सकते हैं, उच्च रुग्णता और समय के साथ पित्त रुकावट की मृत्यु के कारण प्रत्याशित से अधिक जानवरों की आवश्यकता होती है । इस तकनीक अंतर्निहित जिगर की बीमारी है, जो अंयथा cBDL निंनलिखित लंबे समय तक पाठ्यक्रम प्रयोगों के तनाव को सहन नहीं हो सकता है के साथ ट्रांसजेनिक चूहों का अध्ययन करने के लिए भी फायदेमंद है ।
pBDL इन चुनौतियों में से कुछ को दूर करने में मदद करने के लिए एक उचित विकल्प प्रदान कर सकते हैं । प्रारंभिक pBDL में अध्ययन जंगली प्रकार के चूहों में स्थानीय रूप से अभिनय और सूजन के प्रणालीगत मध्यस्थों भेद करने के उद्देश्य से9। pBDL में, आम पित्त नलिका के ऊपर सही और बाएँ यकृत पित्त नलिकाओं का मुख्य पित्त संगम ध्यान से hilum में कल्पना की है, और केवल बाईं यकृत पित्त नलिका ligated एक स्थानीय प्रतिरोधी cholestasis उत्पन्न करने के लिए है । pBDL cBDL के लिए कई फायदे प्रदान करता है । pBDL में, unligated सही पालि ligated छोड़ पालि के लिए एक हूबहू मिलान आंतरिक नियंत्रण के रूप में कार्य करता है, एक ही प्रणालीगत प्रभाव के अधीन है, जैसे पोषण की स्थिति या परिसंचारी कारकों के रूप में । हालांकि प्रणालीगत समर्थक भड़काऊ मध्यस्थों मौजूद थे, Osawa एट अल । unligated पालियों में कम फाइब्रोसिस और परिगलन मनाया, लेकिन भड़काऊ कोशिकाओं को बदलने और वृद्धि कारक-β अभिव्यक्ति ligated पालि9में वृद्धि हुई है ।
हाल ही में, pBDL बनाए रखा पित्त10के जिगर parenchymal प्रभाव का अध्ययन करने के लिए फिर से परिभाषित किया गया है । आंतरिक नियंत्रण (unligated "अन्तर्वासना") और प्रयोगात्मक समूहों के लिए एक ही जानवर का उपयोग करके, pBDL प्रभावी ढंग से प्रयोग प्रति की जरूरत है, जो बारी में और अधिक लागत प्रभावी है जानवरों की संख्या आधा । चूहे pBDL के प्रभाव को ज्यादा बेहतर ढंग से सहन करते हैं, ताकि आदर्श समय पाठ्यक्रम प्रयोग (≥ 2 सप्ताह) को ligated पालि में प्राप्त किया जा सके. सबसे महत्वपूर्ण बात, pBDL प्रतिरोधी cholestasis के प्रत्यक्ष intrahepatic प्रभाव भेद कर सकते है और ligated पालि में बनाए रखा पित्त घटकों, unligated नियंत्रण पालि की तुलना में । कुल मिलाकर, pBDL जिगर में स्थानीय cholestasis के पालि विशिष्ट प्रभावों का अध्ययन करने के लिए एक आकर्षक विधि है ।
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Protocol
सभी प्रक्रियाओं को संस्थागत पशु देखभाल और पिट्सबर्ग विश्वविद्यालय के उपयोग समिति के नैतिक दिशानिर्देशों के अनुसार आयोजित किया गया ।
1. बुनियादी तकनीक और सामांय प्रक्रियाओं
- उपयोग करने से पहले सभी microsurgical उपकरण आटोक्लेव ।
- संज्ञाहरण द्वारा चूहे की हत्या से बचने के लिए, अपने श्वास पैटर्न ध्यान से जांच करें ।
- स्पर्श अंगों और आंतों के रूप में कम संभव के रूप में हानिकारक अंगों और रक्तस्राव के कारण से बचने के लिए । प्रेस गीला कपास झाड़ू या धुंध स्पंज के साथ अंक रक्तस्राव ।
- अंगों के कोमल हेरफेर के लिए गीले सूती झाड़ू का प्रयोग करें । गीला, गैर बुना धुंध स्पंज दो आकारों में उपयोग किया जाता है, 3.5 × 3.5 सेमी और 6.0 × 6.0 सेमी । पूरे जिगर को वापस लेने के लिए छोटे एक का प्रयोग करें । छोटी और बड़ी आंतों को लपेटने के लिए एक बड़ा प्रयोग करें ।
2. शल्य चिकित्सा तैयारी
- पुरुष c57/b6 चूहों का प्रयोग करें, 8-12 सप्ताह की आयु (जब शरीर का वजन लगभग 20-35 ग्राम है) आंशिक पित्त वाहिनी बंधाव के लिए ।
- की अनुमति दें चूहों संज्ञाहरण के प्रेरण तक पानी और भोजन के लिए मुफ्त का उपयोग ।
3. आंशिक पित्त वाहिनी बंधाव आपरेशन
- Anesthetize 1.5-2.0% isoflurane और 1 L/न्यूनतम ऑक्सीजन के मिश्रण के साथ एक प्रेरण कक्ष में पशु डाल द्वारा माउस को शामिल किया गया । श्वसन दर को देख कर ध्यान से जानवर की निगरानी । जब पशु की श्वसन दर प्रति सेकंड एक सांस है, माउस अच्छी तरह से anesthetized है । के बाद से सामने अंग वापसी पलटा और अधिक तेजी से गायब हो जाता है, हिंद अंग पैर चुटकी के रूप में अच्छी तरह से वापसी पलटा की पूरी अनुपस्थिति की पुष्टि करने के लिए । आंखें corneal अल्सर को रोकने के लिए एक नेत्र चिकनाई एजेंट के साथ चिकनाई होना चाहिए । एनाल्जेसिक की पहली खुराक पूर्व-ऑपरेटिव दर्द रिसेप्टर्स की उत्तेजना को रोकने के लिए दिया जा सकता है कि ध्यान दें.
- बाल कतरनी के साथ पेट की दीवार दाढ़ी, और शल्य माइक्रोस्कोप के तहत शल्य मेज पर माउस जगह है । टेप के साथ तालिका के लिए सभी अंगों को ठीक करें । सामान्य संज्ञाहरण के तहत माउस को बनाए रखने के लिए isoflurane साँस लेना का प्रयोग करें.
- समायोजित isoflurane vaporizer और उपयोग 2.0-3.0% प्रेरण के लिए isoflurane ।
- बाँझ झाड़ू का प्रयोग, पेट की दीवार के साथ पहले से संक्रमित 0.3-0.5 मिलीलीटर povidone-आयोडीन लागू सामयिक, 70% इथेनॉल के बाद. पशु एक बाँझ कपड़ा के साथ कवर किया जाना चाहिए ।
- कैंची और Adson संदंश का उपयोग कर जघनरोम को असिरूप से एक लंबे midline उदर चीरा बनाओ । पेट चीरा बनाने के बाद, isoflurane को कम करने के लिए 0.8-1.0% रखरखाव के लिए.
- एक माइक्रो-रिट्रेक्टर का उपयोग करके उदर गुहा बेनकाब । मच्छर संदंश के साथ असिरूप पकड़ो और माउस के सिर की ओर मुकर । जगह में मच्छर संदंश नरम मिट्टी का उपयोग कर ठीक ।
- गर्म (37 डिग्री सेल्सियस) के 1-2 मिलीलीटर टपकाना पेट अंगों को घायल करने से बचने के लिए उदर गुहा में फॉस्फेट बफर खारा (पंजाब) । गीले सूती झाड़ू के साथ छोटी आंत पकड़ो और धीरे उंहें माउस के सिर की ओर वापस लेना । छोटी आंत और retroperitoneum के बीच के बंधनों को काट कर छोटे आंतों (चित्र 1a) को घायल करने से बचें ।
- एक गीला, गैर बुना धुंध स्पंज के साथ छोटी और बड़ी आंतों लपेटें । इन्हें उदर गुहा के caudal ओर रखें. बाँझ धुंध में लिपटे आंतों बाँझ लिपटी क्षेत्र पर रखा जा सकता है संक्रमण से बचने के लिए.
- धीरे यकृत hilum और हेपतो ग्रहणी बंधन का पर्दाफाश करने के लिए एक छोटे से गीले गैर बुना धुंध स्पंज का उपयोग करके असिरूप की ओर पूरे जिगर वापस लेना (आंकड़ा 1b) ।
- यकृत hilum के एनाटॉमी की पुष्टि करने के लिए जांच करें । आम पित्त नलिका पोर्टल नस के ventral ओर स्थित है । सही और बाईं यकृत पित्त नलिका, जो यकृत hilum में मुख्य पित्त संगम में नाली के स्थानों की पुष्टि करें ।
- छोड़ दिया यकृत पित्त नलिका जो छोड़ दिया पालि नालियों की पहचान, और एक $१० नायलॉन सीवन एक टांका सुई (चित्रा 2a) के कुंद पक्ष का उपयोग कर के साथ यह घेरना । पोर्टल नस, यकृत धमनी, और जिगर की सतह को घायल करने से बचें ।
- Ligate बाईं पित्त नलिका को १०-० नायलॉन के साथ. (चित्र b) ।
- छोटी और बड़ी आंतों को उसी स्थिति में रखें जैसे गीले सूती झाड़ू का उपयोग करके ऑपरेशन से पहले ।
- पुष्टि कोई आंत्र मरोड़ और अंतर पेट से खून बह रहा है, तो दो परतों में मांसपेशियों और त्वचा को 4-0 vicryl के साथ बंद करें । लट सीवन (Vicryl) त्वचा बंद करने के लिए इस्तेमाल किया गया था, लेकिन monofilament संक्रमण की संभावना को कम करने के लिए पसंद है ।
नोट: बंद प्रावरणी असिरूप से जघनरोम करने के लिए जारी सीवन द्वारा, और जघनरोम से असिरूप करने के लिए जारी टांका द्वारा त्वचा बंद । - चीरा बंद करने के बाद संज्ञाहरण बंद करो ।
4. पश्चात उपचार और अनुवर्ती
- बस सर्जरी के बाद माउस के पृष्ठीय त्वचा चुटकी और Buprenex इंजेक्षन (0.1 मिलीग्राम/) और Cefazolin (100 मिलीग्राम/चमड़े के नीचे, Buprenex इंजेक्शन के बाद हर 12 3 दिनों के लिए एच, और Cefazolin हर 24 h 3 दिनों के लिए क्रमशः11,12 ,13. एनाल्जेसिक की पहली खुराक पूर्व-ऑपरेटिव दर्द रिसेप्टर्स की उत्तेजना को रोकने के लिए दिया जा सकता है कि ध्यान दें. Cefazolin और अन्य पेरि को-ऑपरेटिव एंटीबायोटिक्स केवल प्रतिरक्षा-दबा जानवरों के लिए आवश्यक हैं, जैसे प्रत्यारोपण अध्ययन में इस्तेमाल होने वाले जानवर ।
नोट: सर्जरी सफलतापूर्वक किया जाता है, तो माउस आमतौर पर 30 मिनट के भीतर ठीक हो जाता है । चूहों की गतिविधि लगभग पूर्व शल्य चिकित्सा के रूप में एक ही होगा । - संकट के किसी भी लक्षण के लिए दैनिक चूहों की जांच करें ।
- सामान्य संज्ञाहरण के तहत गर्भाशय ग्रीवा के विस्थापन द्वारा चूहों की कुर्बानी जिगर और अन्य ऊतक नमूनों को निर्धारित समय बिंदुओं (यानी, 7, 14, 21 दिन) पर pBDL के बाद खरीद करने के लिए ।
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Representative Results
इस विशिष्ट प्रयोग के लिए pBDL तपसिल PiZ ट्रांसजेनिक चूहों में प्रदर्शन किया गया, जो अल्फा-१ दोहराऊंगा (antitrypsin) की कमी में पाए जाने वाले मानव यकृत रोग को A1AT है. PiZ माउस एक डीएनए के कई जीनोमिक टुकड़े से मिलकर transgene है कि उत्परिवर्ती मानव A1AT जीन और प्रमोटर की कोडिंग क्षेत्रों में शामिल है, एक साथ introns और ~ 2 नदी के ऊपर और नीचे की kilobases क्षेत्रों के पार्श्व के साथ14को व्यक्त करता है, 15. सामांय A1AT एक गुप्त सीरम जिगर में उत्पादित प्रोटीन है । A1AT के उत्परिवर्ती रूप अघुलनशील प्रोटीन समुच्चय है कि अनायास विषाक्त तनाव के कारण जिगर में जमा उत्पंन करता है । प्रयोगों 3 महीने पुराने पुरुष PiZ चूहों, जो इस रोग का सबसे गंभीर phenotype व्यक्त करते हैं, जब प्रोटीन एकत्रीकरण चोटियों16का उपयोग किया ।
सीरम लिवर biochemistries pBDL और cBDL PiZ चूहों (तालिका 1)10में तुलना की गई । लिवर एंजाइम्स alanine aminotransferase (ALT) और aspartate aminotransferase (AST) hepatocellular इंजरी के स्मार्क्स होते हैं, जबकि टोटल सीरम बिलीरुबिन (TSB) cholestasis की डिग्री के उपाय करते हैं । कुल मिलाकर, pBDL के अधीन चूहों गंभीर जिगर की चोट या cholestasis के लक्षण नहीं दिखा था, के रूप में उनके सीरम मूल्यों आधारभूत10के समान थे. यह नोट करना महत्वपूर्ण है कि विफल pBDL के साथ चूहों (तकनीकी समस्याओं के कारण, पित्त नली या संवहनी चोटों के रूप में) cBDL चूहों के समान सीरम मूल्यों दिखाएगा, काफी ऊंचा जिगर एंजाइमों और TSB के साथ. नैदानिक, चूहों के साथ विफल pBDL अधिक पीलिया और व्यथित दिखाई देगा, पित्त लीक के निष्कर्षों के साथ, जलोदर, पेरिटोनिटिस, और/अंत में बलिदान करने की आवश्यकता होगी ।
के बाद से pBDL के अधीन चूहों पालि विशिष्ट प्रतिरोधी cholestasis का विकास, वे विनिर्दिष्ट, अंधेरे, पित्त-भरा पित्ताशय की थैली cBDL में देखा अधिग्रहण नहीं करते । केवल ligated पालि रंग में paler प्रकट होता है, जबकि unligated पालियों में अपने सामान्य, गहरे, लाल-भूरे रंग का रंगाई (चित्र 3) बनाए रखेगा. यकृत प्रोटोकॉल में मुख्य अंतर के रूप में अच्छी तरह से कर रहे हैं, ligated पालि में वृद्धि हुई पित्त नलिका प्रसार और फाइब्रोसिस (चित्रा 4) के साथ. 10
तालिका 1: प्रतिनिधि सीरम जिगर biochemistries से आंशिक पित्त वाहिनी बंधाव (pBDL) की तुलना में पूरा पित्त वाहिनी बंधाव (cBDL) 10 . हर बार बिंदु 3-4 चूहों का प्रतिनिधित्व करता है । नोट PiZ ट्रांसजेनिक चूहों पर एक c57/bl6 पृष्ठभूमि पर हैं । प्रयोगशाला संदर्भ पर्वतमाला भी कोष्ठकों में दिया जाता है । (WT, वंय-प्रकार; TSB, कुल सीरम बिलीरुबिन; ALT, alanine aminotransferase; ALP, क्षार फॉस्फेट).
चित्रा 1:उदर गुहा और hepatobiliary प्रणाली के जोखिम । (एक) छोटी आंत धीरे आंत्र चोट से बचने के लिए मुकर रहे हैं, और जोड़ने के बंधन retroperitoneum से मुक्त काट रहे हैं । (ख) जिगर यकृत hilum (तीर) पर पित्त पेड़ के अधिक से अधिक दृश्य की अनुमति देने के लिए धीरे से मुकर जाता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 2 : आंशिक पित्त वाहिनी बंधाव । (क) शल्य सुई के कुंद अंत ध्यान से छोड़ दिया यकृत पित्त नलिका के आसपास नायलॉन सीवन घेरना, संगम के ऊपर आम पित्त नलिका (मूल आवर्धन 40x) के लिए प्रयोग किया जाता है । (ख) वाम यकृत पित्त नलिका, जो आम तौर पर छोड़ दिया जिगर पालि नालियों की सफल संयुक्ताक्षर । शेष पित्त नलिकाएं unligated (मूल आवर्धन 40X) होती हैं । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 3: WT की सकल उपस्थिति (c57/) माउस जिगर 14 दिनों के बाद pBDL । ध्यान दें कि ligated बायां पालि रंग (तीरों) में paler दिखाई देता है, जबकि unligated पालियों में उनका सामान्य, गहरा, लाल-भूरा रंगाई बरकरार रहता है. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 4 : पालि-विशिष्ट परिवर्तन प्रतिनिधि जिगर ऊतक वर्गों में दिन से 14 pBDL unligated दाएँ (R) पालि से ligated बाएँ (L) पालि में WT (c57/b6) चूहों. (क) Hematoxylin और eosin (एच एंड ई) दाग ligated पालि में बढ़ी हुई पित्त वाहिनी प्रसार (तीरों) को दिखा रहा है. (ख) Sirius लाल दाग ligated पालि में फाइब्रोसिस साथ पित्त वाहिनी प्रसार के साथ ब्रिजिंग दिखा । PiZ माउस के लिए प्रोटोकॉल पहले रिपोर्ट किया गया है10। कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
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Discussion
हालांकि cBDL प्रतिरोधी cholestasis के लिए सबसे आम प्रयोगात्मक तकनीक है, यह कुतर में कई चुनौतियों मौजूद कर सकते हैं । एक समापन बिंदु प्राप्त करने के लिए आवश्यक पोस्ट-ऑपरेटिव दिनों की संख्या के आधार पर, जानवरों महत्वपूर्ण रुग्णता और मृत्यु के समय की प्रगति का अनुभव कर सकते हैं । जिगर की बीमारी के कुछ ट्रांसजेनिक माउस मॉडल, जो असामान्य जिगर पैरेन्काइमा और बेसलाइन पर समारोह का प्रदर्शन के साथ काम कर जब ऊतक चोट और पित्त परिगलन की डिग्री आगे बढ़ाई है । cBDL की तुलना में, pBDL की रिपोर्ट सीमित हैं, लेकिन इस तकनीक का चयन प्रयोगों में एक विकल्प के रूप में लागू किया जा सकता है नकारात्मक परिणामों और पशुओं के नुकसान को कम ।
pBDL पद्धति में भिन्नता भी बताई गई है. हेनरिक एट अलकी विधि में, एक बाहरी घुमावदार सुई आम पित्त नलिका, दोनों आम पित्त नलिका और सुई17के आसपास संयुक्ताक्षर के बाद से सटे रखा गया है । सुई तो पेट की दीवार बंद करने से पहले हटा दिया जाता है, एक संकीर्ण लुमेन के माध्यम से सीमित पित्त प्रवाह में जिसके परिणामस्वरूप (यानी, पित्त वाहिनी17के उप-योग बाधा). इस प्रक्रिया के दौरान, पित्ताशय को रोकने के लिए भी निकाल दिया जाता है17पित्ताशय । लेखकों ने निष्कर्ष निकाला कि इस पद्धति में जीर्ण परिवर्तन के बजाए१७तीव्र cholestasis का अध्ययन अधिक लाभकारी था. इसके विपरीत, हम यहाँ वर्णित pBDL विधि कसकर नियंत्रित है, एक ही जानवर में ligated और unligated ("अन्तर्वासना") पालियों के साथ, इसलिए कम जानवरों के प्रति प्रयोग की आवश्यकता है । यहां तक कि गंभीर अंतर्निहित जिगर की बीमारी के साथ ट्रांसजेनिक चूहों अब अंत अंक (2-3 सप्ताह) के लिए निरंतर किया जा सकता है । देखभाल के लिए पूरी तरह बेनकाब और पित्त microdissection तकनीक का उपयोग कर पेड़, संवहनी संरचनाओं और पित्त नलिकाओं के सीमित हेरफेर के साथ चोट को रोकने के लिए पहचान लिया जाना चाहिए ।
आदर्श प्रयोग में, ligated (बाएँ) और unligated (दाएँ) पालियों से ऊतकों को एक ही समय में काटा जाएगा, अतः पित्त स्रावी समारोह और ट्रांसपोर्टरों की प्रत्यक्ष तुलना histologic और आणविक तकनीकों का उपयोग करके की जा सकती है. हालांकि सीरम जिगर biochemistries गंभीर cholestasis प्रतिबिंबित नहीं होगा, ligated पालि histologic प्रतिरोधी cholestasis के साथ जुड़े परिवर्तन का प्रदर्शन करेंगे10। इस मॉडल के जिगर के भीतर (उदा, पित्त एसिड, लिपिड, कोलेस्ट्रॉल) बनाए रखा पित्त घटकों के प्रत्यक्ष microenvironmental प्रभाव का अध्ययन करने के लिए उपयोगी है । एक भविष्य के अध्ययन के रूप में, pBDL cholehepatic बाईपास सर्जरी, जहां कुछ पित्त एसिड और दवाओं सीधे cholangiocytes से हेपैटोसाइट्स18,19से अवशोषित कर रहे है की जांच करने के लिए विचार किया जा सकता है । अंतर्जात पित्त एसिड अकुशल हेपैटोसाइट्स द्वारा संयुग्मित निष्क्रिय पित्त उपकला द्वारा अवशोषित कर रहे हैं cholehepatic बाईपास सर्जरी के रूप में अच्छी तरह से गुजरना करने के लिए, hypercholeresis और वृद्धि हुई alkanlinization स्राव द्वारा पित्त के बिकारबोनिट के लिए अग्रणी20. pBDL तकनीक के आवेदन जिगर की बीमारी के लिए जांच के तहत उपंयास पित्त एसिड चिकित्सकीय के लिए औषधीय तंत्र की पहचान के द्वारा दवा की खोज की सुविधा सकता है ।
pBDL के लिए अतिरिक्त आवेदन पित्त पेड़ से परे का विस्तार कर सकते हैं । cBDL और उससे जुड़े प्रभावों का Reversibility वर्णन किया गया है, और यह आंतरिक नियंत्रण21से सीधी तुलना के साथ pBDL पर भी लागू किया जा सकता है । इसी तरह, माउस जिगर में फ्लोरोसेंट रिपोर्टर अभिव्यक्ति की vivo में अनुदैर्ध्य22cBDL के बाद अध्ययन किया गया है, pBDL प्रयोगों के लिए शक्तिशाली निहितार्थ के साथ. इसके अलावा, pBDL का उपयोग कर कुतर प्रयोगों की क्षमता को शामिल करने के वंश अनुरेखण या "होमिंग" कोशिकाओं के परिसंचारी, जैसे अस्थि मज्जा-व्युत्पंन mesenchymal कोशिकाओं, जिगर की चोट की साइट के लिए, उंहें और अधिक के साथ vivo में ट्रैक किया जा करने की अनुमति प्रेसिजन23,24,25।
जाहिर है, वहां एक आंतरिक नियंत्रित और reproducible तकनीक जिगर की चोट और मरंमत के अध्ययन के रूप में अकेले pBDL के लिए बड़े पैमाने पर आवेदन कर रहे हैं, पित्त शरीर क्रिया विज्ञान और दवा चयापचय के साथ । प्रयोगों के लिए है कि पुरानी cholestasis की प्रगति और प्रणालीगत प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए लक्ष्य, cBDL अभी भी सबसे पसंदीदा तरीका है; हालांकि, pBDL अभी भी इस तरह के निष्कर्षों का समर्थन करने के लिए पूरक डेटा जोड़ होगा ।
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Disclosures
लेखकों ने कोई खुलासे नहीं किए हैं ।
Acknowledgments
डॉ खान NIH/niched K12HD052892, अल्फा-1 फाउंडेशन, Hillman फाउंडेशन, और पिट्सबर्ग जिगर अनुसंधान केंद्र से अनुदान सहायता स्वीकार करता है । Dr. Michalopoulos NIH/NIDDK P01DK096990 से अनुदान सहायता स्वीकार करता है । हम ऐनी ओआरआर के उत्कृष्ट और उदार तकनीकी सहायता की सराहना करते हैं । हम डॉ डेविड ए के भी आभारी हैं की प्रत्यारोपण के लिए पहुँच प्रदान करने के लिए पकडने के लिए Microsurgery लैब/
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Microscope-Leica Wild M650, 6–40× magnification | Leica Microsystems | n/a | |
| Tec 3 isoflurane funnel fill vaporizer | General Anesthetic Services | n/a | |
| Stevens Tenotomy Scissors | Accurate Surgical & Scientific Instruments Corporation | ASSI.9193 | |
| Adson Forceps | Fine science tools | 11006-12 | |
| Mosquito classic delicate hemostatic forceps | Codman | 30-4472 | |
| Micro-retractor | Murdock; Roboz Surgical Instrument | RS-6550 | |
| Nonwoven gauze sponges | Fisherband | 870-PC-DBL | |
| Puritan 6” Small Cotton Swab w/Wooden Handle | Puritan Medical Products Company | 868-WCS | |
| Dumont SS Forceps - Standard Tips/Straight/Inox/13.5cm | Fine science tools | 11203-23 | |
| Dumont SS Forceps - Standard Tips/Angled 45°/Inox/13.5cm | Fine science tools | 11203-25 | |
| Vannas Spring Scissors - 3mm Cutting Edge | Fine science tools | 15000-00 | |
| Microneedle holder | Aesculap Surgical Instruments | FD231R | |
| Micro AROSuture, sterile 10-0 nylon suture, 70 µm, TAP points | AROSurgical Instruments Corporation | T4A10N07 | |
| 4-0 Vicryl | Ethicon | J662H | |
| 5-ml Syringe | BD | 309646 | |
| Falcon tissue culture dish, 60 × 15 mm | Corning | 353002 | |
| Isoflurane, United States Pharmacopeia (USP) liquid for inhalation, 250 ml | Piramal Healthcare | NDC 66794-017-25 | |
| Buprenex injectable (buprenorphine hydrochloride) | Reckitt Benckiser Pharmaceuticals | NDC 12496-0757-1 | |
| Cefazolin for injection , USP | APP Pharmaceuticals | NDC 63323-238-61 | |
| PVP scrub solution (povidone–iodine 7.5%) | Medline | NDC 12496-0757-1 | |
| 70% Ethanol | Decon Labs | 2716 | |
| Phosphate Buffered Saline Without Calcium or Magnesium | LONZA | 17-516F | |
| Sirius Red | Sigma | 365548 | |
| Hematolxylin | Fisher (Richard-Allan Scientific) | 22-050-111 (7211) | |
| Eosin | Anatech (Fisher) | 832 (NC9686037) | |
| Formalin | Fisher | SF100-20 |
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