Presentamos un protocolo para investigar los biomarcadores de la expresión de mRNA de células derivadas del periostio (PDC) inducidas por la vitamina C (vitamina C) y 1, 25-dihidroxi vitamina D [1,25-(OH) D23]. Además, evaluamos la capacidad de PDC se diferencian en osteocitos, condrocitos y adipocitos.
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Artículo de método
Aislamiento de células madre mesenquimatosas del periostio Alveolar humano y efectos de la vitamina D en la actividad osteogénica de células derivadas del periostio
En este artículo
Resumen
Resumen
Las células madre mesenquimales (MSCs) están presentes en una variedad de tejidos y puede diferenciarse en numerosos tipos celulares, incluyendo osteoblastos. Entre las fuentes dentales de MSCs, el periostio es un tejido fácilmente accesible, que se ha identificado a contener MSCs en la capa de cambium. Sin embargo, esta fuente no todavía sido ampliamente estudiada.
Vitamina D3 y 1,25-(OH)2D3 se han demostrado para estimular en vitro la diferenciación de MSCs en osteoblastos. Además, la vitamina C facilita crecimiento de colágeno formación y hueso celular. Sin embargo, ningún estudio ha investigado aún los efectos de la vitamina D3 y la vitamina C en MSCs.
Aquí, presentamos un método de aislamiento MSCs de periostio alveolar humano y examinar la hipótesis de que 1,25-(OH)2D3 puede ejercer un efecto Osteoinductor en estas células. También investigar la presencia de MSCs en el periostio alveolar humano y evaluar proliferación y adhesión de la célula de vástago. Para evaluar la capacidad de la vitamina C (como control) y diferentes concentraciones de 1,25-(OH)2D3 (10−1010−9, 10−8y 10−7 M) a alterar clave biomarcadores de mRNA en la expresión del mRNA de MSCs aislada de la fosfatasa alcalina (ALP), ósea sialoprotein (BSP), atascamiento de la base del factor alfa-1 (CBFA1), colágeno-1 y osteocalcina (OCN) se calculan utilizando la reacción en cadena de polimerasa en tiempo real (RT-PCR).
Introducción
Aunque se han desarrollado numerosas técnicas relevantes en los últimos años, los huesos restos de reconstrucción limitada por restricciones múltiples y estimar que el grado de reconstrucción necesaria es a menudo imposible. Aumento de tejido duro es necesaria para alcanzar objetivos estéticos y funcionales además de una tasa de éxito a largo plazo favorable. Métodos comúnmente utilizados para estos procedimientos incluyen injerto óseo autógeno y alógeno, xenografting y el injerto de hueso de alloplastic. Entre los distintos tipos de injerto óseo, injertos de hueso autógeno se consideran los más efectivos. Sin embargo, morbosidad del sitio donante, vascularización com....
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Protocolo
El protocolo de estudio fue aprobado por el institucional de Junta de Chang Gung Memorial Hospital. Todos los participantes proporcionaron consentimiento informado por escrito.
1. preparación de tejido
- Cosechan los tejidos periósticos de pacientes durante una cirugía dental (figura 1). Después de la reflexión de la aleta bajo anestesia local, tome un pedazo de tejido del periostio del hueso alveolar utilizando un separador perióstico de31.
- Después de la cosecha, almacenar las rebanadas de tejido perióstico de aproximadamente 5 mm × 2 mm en de Dulbecco tampón fosfato s....
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Resultados
Para los ensayos cuantitativos, los datos se presentan como media ± desviación estándar (SD). Todos los análisis estadísticos se realizaron mediante de Student t-test. En total, se obtuvieron 34 muestras con una edad media de participantes de 48,1 ± 12,3 y once de estas muestras se obtuvieron de pacientes masculinos y 23 pacientes femeninos. Se obtuvieron muestras de veinte y ocho de las regiones molares y de seis de las regiones anteriores; 26 se obtuvieron de la maxila y 8 de l.......
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Discusión
Una modalidad terapéutica desarrollada recientemente, es decir, recreando el tejido del que implique MSCs, tiene numerosas ventajas. MSCs, que están presentes en varios tipos de tejidos, son células pluripotentes que pueden diferenciarse en una variedad de células de tejidos mesodérmicos funcionales37 y otras células como los osteoblastos.
El periostio sirve como un nicho para las células del progenitor y como una fuente de rica vasculatura para el hueso envuelve a
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
El protocolo de estudio fue aprobado por la Junta de revisión institucional para investigación de Chang Gung Memorial Hospital Clínico (IRB99-1828B, C 100-3019, 99-3814B, C 102-1619, 101-4728B y C 103-4223). Este estudio fue apoyado por Chang Gung Memorial Hospital (CMRPG392071, CMRPG3A1141, CMRPG3A1142 y NMRPG3C0151). Este manuscrito fue editado por Wallace de edición académica.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 0,25% tripsina-EDTA | Gibco | 25200-056 | |
| Ácido 2-fosfo-L-ascórbicoSal trisódica | Sigma | 49752 | |
| Placas de cultivo de 35 mm | Corning | 430165 | |
| 3-isobutil-1-metilxantina | Sigma | I5879 | |
| Placa de 6 pocillos | Corning | 3516 | |
| Fosfatasa alcalina | Kit | ||
| BioVision | K412-500 | ||
| Transcriptasa inversa del virus de la mieloblastosis aviar | Roche | 10109118001 | |
| CD146 | BD | 561013 | |
| CD19 | BD | 560994 | |
| CD34 | BD | 560942 | |
| CD44 | BD | 561858 | |
| CD45 BD | 561088 | ||
| CD73 | BD | 561014 | |
| CD90 | BD | 561974 | |
| Cell banker1 | ZEAOAQ | 11888 | |
| factor de unión al núcleo alfa-1 | ABI | Hs00231692_m1 | |
| dexametasona | Sigma | D4902 | |
| DPBS | Gibco | 14190250 | |
| FBS | Gibco | 26140-079 | |
| GAPDH | ABI | Hs99999905_m1 | |
| HLA-DR | BD | ||
| indometacina | Sigma | I7378 | |
| insulina | sigma | 91077C | |
| insulina– transferrin– selenio-A | Sigma | I1884 | |
| MicroAmp Fast Placa de reacción de 96 pocillos (0,1 ml) | Vida | 4346907 | |
| película adhesiva óptica MicroAmp | Vida | 4311971 | |
| medio esencial mínimo 1X Modificación alfa | HyClone | SH30265.02 | |
| Penicilina/estreptomicina | Gibco | 15140-122 | |
| Tampón de permeabilización | eBioscience | 00-8333-56 | |
| Piruvato de sodio | Gibco | 11360070 | |
| STRO-1 | BioLegend | 340103 | |
| SYBER Green PCR Master Mix | AppliedBiosystems | 4309155 | |
| TaqMan Master Mix | Life | 4304437 | |
| transformador factor de crecimiento y beta; | Sigma | T7039 | |
| Reactivo de trizol (para el aislamiento de ARN) | Life | 15596018 | |
| β-glicerofosfato | Sigma | G9422 | |
| colágeno-1 | Invitrogen | imprimación directa 5' CCTCAAGGGCTCCAACGAG-3 imprimación inversa 5'-TCAATCACTGTCTTGCCCCA-3'OCN | |
| Invitrogen | imprimación directa 5'-GTGCAGCCTTTGTGTCCAAG-3' imprimación inversa 5'-GTCAGCCAACTCGTCACAGT-3'BSP | ||
| Invitrogen | imprimación delantera 5' AAAGTGAGAACGGGGAACCT-3' imprimación inversa 5'-GATGCAAAGCCAGAATGGAT-3'Imprimaciones | ||
| comerciales ALP Imprimaciones | |||
| comerciales CBFA1 |
Referencias
- Kao, R. T., Murakami, S., Beirne, O. R. The Use of Biologic Mediators and Tissue Engineering in Dentistry. Periodontol. 50, 127-153 (2000).
- Rosenbaum, A. J., Grande, D. A., Dines, J. S. The Use of Mesenchymal Stem Cells in Tissue Engineering: A Global Assessment. Or....
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Reimpresiones y permisos
