Biz daha fazla ateş altında yatan erken etkinlik kazandırabileceğini kurulan eski-vivo beyin tekniğine dayalı bir yöntemini in vivo ve in vitro deneyler avantajlarını birleştiren mevcut. Ayrıca, tedavi ve tedavi edilmezse grubun aynı anatomik düzlemde doğrudan karşılaştırma için eşsiz bir fırsat temsil eder.
Hangi birincil yansıtan temel ateş işler güvenilir hayvan modelleri geliştirmek için çalışan çok sayıda çalışma rağmen çok az yaygın olarak kabul etmiştir. Burada, biz daha yakın vivo içindesunan iyi bilinen ex vivo beyin dilim tekniği, uyarlanmış yeni bir yordam teklif- vitro hücre dejenerasyonu, uyarının harekete geçirilmesine karşılık olarak erken olayları araştıran için hazırlıklar, daha senaryo gibi Alzheimer hastalığı içinde (Ah) görülmektedir. Bu varyasyon seçili beyin bölgesi ve yerel işlevselliğini fizyolojik ortamında bir anatomik cytoarchitecture korunması etkinleştirme basit ve kolayca tekrarlanabilir adımlar oluşur. Farklı anatomik alanlarda birden fazla deneyler söz konusu tedavileri ile bir site-, doz- ve saat-bağımlı bir şekilde gerçekleştirmek için fırsat sağlayan aynı beyin elde edilebilir. Bu metodoloji ile ilgili sonuçları etkileyebilecek potansiyel sınırlamalar doku, Yani, anatomik bütünlüğünü sırasında dilimleme ve kuluçka adımları ve bölüm kalınlık bakımından korunması için ile ilgili hangi biyokimyasal ve immunohistokimyasal analiz etkileyebilir. Bu yaklaşım moleküler mekanizmaları fizyolojik ve patolojik koşulları, uyuşturucu tarama veya doz-yanıt deneyleri dahil keşfetmek gibi farklı amaçlar için istihdam edilebilir. Son olarak, bu iletişim kuralını da hayvan davranış çalışmalarda istihdam sayısını azaltabilir. Rapor burada uygulama son zamanlarda açıklanan ve ex vivo sıçan beyin dilimler içeren bir reklam öncelikle etkilenen beyin bölgelerinden biri olan Bazal ön (BF), tarihinde ilk kez test. Asetilkolinesteraz (AChE) C-terminus elde edilen zehirli bir peptid yönetim tetikleme, BF, antero-posterior ekseni boyunca farklı bir ifade bir reklam gibi profil sor kanıtlanmıştır özellikle, Reklamda, alpha7 nikotinik reseptör (α7-nAChR), gibi değişmiş proteinlerin Tau (p-Tau) ve amiloid beta (Aβ) fosforile.
Kronik bir patoloji entorhinal korteks (EC), BF, Hipokampus (HC) ve olfaktör ampul gibi farklı beyin bölgeleri etkileyen kademeli nörodejeneratif bozukluğu (OB)1,2,3ile karakterize reklamdır, 4,5. Reklam gelişimin geç yaklaşık % 70’ini tüm durumlarda6muhasebe demans en sık görülen bu hastalık yapma ilerici bir bilişsel gerileme yol. Reklam neden ilk etap anlamak için yoğun girişimlerine rağmen bir şey yok şu anda tanımlanmış bir deneysel gösterge onları elucidating. Reklam pathobiology, ne de etkili7,8 kanıtlamıştır bir ilaç hedef açıklayan tam bir profil sağlamaz beri Ayrıca, en popüler teori – “amiloid hipotezi” – giderek sorgulanmaktadır ,9.
Ateş sırasında meydana gelen ilk mekanizmaları nöronal küme reklam3,10,11 ‘ öncelikle duyarlı ilişkili artan ilgi alma alternatif bir teori önerir , 12 , 13 , 14. bu türdeş olmayan hücresel Merkez AK, HC ve OB15,16gibi birden çok bölgeye BF, orta ve beyin sapı, projeler içinde kapsıyordu. Nöronal morfoloji ve nörotransmitter sentez çeşitliliği rağmen bu çekirdek hücrelerin enzimatik olmayan işlev17,18de içerebilir ağrısı ifade içinde ortak bir özelliği paylaşır. Molekül trofik veya toksik olayları ile ilgili olarak Ca2 + doz, kullanılabilirlik ve nöronal yaş17,18 geçirmek için nöronlar kalsiyum (Ca2 +) akışına aracılık sinyal bir roman olarak klasik olmayan bu rolü , 19.
Ateş sırasında gözlenen hücresel kaybı bu nedenle ağrısı C-terminus i ciddi bir 30mer peptid (T30) atfedilebilecek olduğu bu enzimatik olmayan işlev17,18,20‘ ye, ilişkili olabilir 20. hücre kültürü ve optik görüntüleme18,21 hazırlıklar, önceki sonuçları doğrultusunda biz, ex vivo sıçan beyin dilimleri T30 indüklenen BF yapıları içeren dayalı yeni bir yaklaşım ile gösterdi bir reklam gibi profil22. Özellikle, birçok anatomik devre koruma için bir zaman penceresi saat de olsa için arasında değişen bir sağlam doku özelliklerini korur beri bu yeni yöntem daha fizyolojik bir senaryo hücre kültürü daha sunuyor. Biz ateş, erken aşamalarında yer alan olayları keşfetmek için bu iletişim kurallarını T30 başvurusu üzerine akut yanıt izleme uygulanır.
Beyin kullanma edebiyatının büyük beden rağmen moleküler yolları araştırmak için dilimler nöronal hasar örtük veya neurogenesis23,24, bu protokolü ilk kez daha acil sağlar ve okumak duyarlı karşılaştırıldığında organotypic dilimleri yaygın kullanımı için. Beyin bölümleri organotypic için olduğu gibi Ancak, bu akut dilim yordamı da değerlendirilmesi nöroprotektif veya Nörotoksik molekülleri, belirli bir süreç içinde birincil moleküler değişimleri keşfi gibi çeşitli amaçlar için kabul edilebilir, immunohistokimyasal analizleri ve merkezi sinir sistemi için farmakolojik deneyleri patolojiler ilgili.
Bu iletişim kuralı, köklü ex vivo beyin tekniğine dayalı asıl yönünü zaman uyumlu olarak belirli bir uygulama sonra onların yanıt izleme aynı anatomik uçak elde edilen iki aynasal hemislices test etmek için izin verir Koşul (kontrol veya tedavi); Bu nedenle deneysel bir paradigma olarak sıkı mümkün olduğunca kontrol sunuyor. Bir saat, doz ve nöronal bozukluğu için ilgili siteye özgü şekilde farklı fizyolojinin nörodejeneratif olaylar22sırasında görüldüğ?…
The authors have nothing to disclose.
Bu eser nöro-Bio Ltd. tarafından finanse edildi Dr. Giovanni Ferrati ve doktor Sergio Rotondo (nöro-BIO) teşekkür etmek onların yorum ve tavsiyeler el yazması için istiyoruz.
Sodium chloride (NaCl) | Sigma-Aldrich, Germany | S7653 | Reagent for aCSF preparation |
Potassium chloride (KCl) | Sigma-Aldrich, Germany | P9333 | Reagent for aCSF preparation |
Sodium bicarbonate (NaHCO3) | Sigma-Aldrich, Germany | S5761 | Reagent for aCSF preparation |
Magnesium sulphate heptahydrate (MgSO4 (7H2O)) | Sigma-Aldrich, Germany | 63138 | Reagent for aCSF preparation |
Potassium phosphate monobasic (KH2PO4) | Sigma-Aldrich, Germany | P5655 | Reagent for aCSF preparation |
Hepes salt | Sigma-Aldrich, Germany | H7006 | Reagent for aCSF preparation |
Hepes acid | Sigma-Aldrich, Germany | H3375 | Reagent for aCSF preparation |
Glucose | Sigma-Aldrich, Germany | G7528 | Reagent for aCSF preparation |
Calcium chloride dehydrate | Sigma-Aldrich, Germany | 223506 | Reagent for aCSF preparation |
T30 peptide | Genosphere Biotechnologies, France | AChE-derived peptide tested | |
Surgical dissecting kit | World Precision Instruments, USA | Item #: MOUSEKIT | Brain removal step |
Surgical blades | Swann-Morton, UK | BS 2982 | Brain removal step |
Filter paper | Fisher Scientific, USA | 11566873 | Brain preparation for slicing |
Glue | Brain preparation for slicing | ||
Vibratome | Leica, Germany | VT1000 S | Slicing |
Brushes | Tissue handling | ||
Oxygen canister | Sectioning and incubation phase | ||
1x Phosphate buffer saline (PBS) | Fisher Scientific, USA | BP2438-4 | Homogenization step |
Phosphatase inhibitors | Fisher Scientific, USA | 1284-1650 | Homogenization step |
Protease inhibitors | Roche complete PIC, USA | 4693116001 | Homogenization step |
Pestles | Starlab, UK | I1415-5390 | Homogenization step |
Microcentrifuge | |||
Pierce 660 nm Protein Assay | Thermo Scientific, USA | 22660 | Protein concentration |