Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Developmental Biology

שיטת Organotypic תרבות ללמוד על התפתחות עובריים עוף רקמות

doi: 10.3791/57619 Published: August 25, 2018

Summary

כאן, אנו מציגים organotypic culturing פרוטוקול לגדול עוף עובריים באיברים במבחנה. באמצעות שיטה זו, התפתחות עובריים עוף רקמות ניתן יהיה ללמוד, תוך שמירה על רמה גבוהה של שליטה על הסביבה תרבות.

Abstract

העוף עובריים הוא נפוץ כאורגניזם מודל אמין לפיתוח חוליות. הנגישות שלה, דגירה קצרה תקופה הופך אותו לאידיאלי עבור ניסויים. כיום, המחקר של המסלולים הללו התפתחותית של העובר עוף מבוצע על-ידי החלת מעכבי וסמים באתרים המותאמות לשפות אחרות, בריכוזים נמוכים, תוך שימוש במגוון שיטות. במבחנה culturing רקמות היא טכניקה המאפשרת המחקר של רקמות הופרדו האורגניזם המארח, בזמן בו זמנית תוך עקיפת רבים של המגבלות הפיזיות נוכח בעת עבודה עם כל העוברים, כגון הרגישות של העוברים על מינונים גבוהים של כימיקלים קטלני. כאן, אנו מציגים את organotypic culturing פרוטוקול culturing את העוף מתחלקים חצי ראש במבחנה, המציג הזדמנויות חדשות עבור בחינת תהליכים פיתוחיים מעבר השיטות כיום הוקמה.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

העוף עובריים (גאלוס גאלוס) הוא אורגניזם מודל מצוין נפוץ בתחום הביולוגיה. תקופת הדגירה שלו הוא בערך 21 ימים, ביצים רבות יכול להיות מודגרות בו זמנית, ביצוע ניסויים מהיר ויעיל. ואולי הכי חשוב, העובר בקלות גם מטופל, המאפשרים לימוד מקיף של תהליכים התפתחותיים המפתח, של גנים, חלבונים כי הכונן תהליכים אלה.

עין עוף עובריים היא איבר מורכב אשר מפתחת דרך האינטראקציה של מספר ברקמות שונות דומה מערכות גוף רבות אחרות. שיטה זו מאפשרת למידת ההתפתחות של רקמות אלה, במיוחד בשלבים מתקדמים של פיתוח. לדוגמה, ייתכן הרשתית רב שכבתית עניין מיוחד הלומדים הפיתוח של מערכת העצבים. שיטות אלטרנטיביות שמאפשרות המחקר של רקמות העין אחרות כגון הקרנית, הגוף vitreal, העדשה, את sclera העפעפיים הם להועיל לחוקרים. העין עובריים עוף מכיל גם סדרה של עצמות שטוחות, עצמות השמע scleral, אשר יכול לשמש כמודל לחקר של עצם intramembranous אינדוקציה, התקשות חולייתנים1.

כיום, ישנן מספר שיטות חקר התפתחות. Microinjections של נוגדנים מעכבות או אחרים מולקולות מעכבות2,3, שהושתל. גרגרי טבולים מעכב4, אלקטרופורציה5 הם כל השיטות יכול לשמש downregulate גנים או חלבונים עניין בהעובר. שיטות דומות משמשות upregulate חלבונים. שיטות אלה אינן ללא המגבלות שלהם. לדוגמה, בעת שימוש בכימיקלים כדי לשנות את ההתפתחות, הערכת ההשפעות קטלני על העובר, זה מגביל את השימוש השיטות דלעיל לאתרים לשפות אחרות של יישום במינונים נמוכים מספיק כדי להבטיח את השרידות של . אני אדם מסוכן

במבחנה culturing רקמות שימש במגוון רחב של אורגניזמים ללמוד פיתוח, יכול לשמש כדי לעקוף חלק מהמגבלות הנ. לדוגמה, femora6, נוצה ניצנים7,8ו הגפיים9 של העוף כל נחקרו באמצעות רקמות culturing שיטות, כמו שיש את האשכים של העכבר10 ושורשים והגבעולים של צמחים11. שיטות אלה מעניקים מדענים רמה גבוהה של שליטה על הפיתוח רקמות, כגון היכולת להשתנות הטמפרטורה ולשנות את זמינות חומרי הזנה. בידודו של הרקמה של העובר כל גם עושה את זה הרבה פחות רגישים להשפעות קטלני של כימיקלים, ובכך מאפשר מניפולציה מחקרים בקנה מידה עולמי בריכוזים גבוהים. יתרון בולט נוסף של במבחנה culturing הוא שימור הסביבה התאית של הרקמה; הסידור של רקמות נותר כמעט ללא שינוי, כך שניתן ללמוד את האינטראקציות בין סוגי רקמות שונות9. לפיכך, במבחנה culturing פותח דלתות נוספות ניסיוני גישות שאינן זמינות במודלים vivo או בכל ovo .

כיום, ללמוד על התפתחות העין עוף עובריים שימוש בכימיקלים הוא מאתגר במיוחד. מספר של ממברנות extraembryonic לכסות את העובר, ולכן קשה ליישם את גרגרי או כימיקלים; העובר הוא מאוד פעיל בתוך הביצה גם כאשר הוא מזדקן, שמסבך עוד יותר את שיטת כבר קשה. פרוטוקול זה מאפשר גישה נוחה לעין, הרקמות הסובבות שלו, ביטול מחסומים אלה, גם בעת מתן הזדמנויות חדשות לבחון תהליכים התפתחותיים בתוך העין. פרוטוקול זה הוקם כדי ללמוד את תנאי הגיוס של עצמות השמע scleral בתוך העין עובריים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

הערה: עבור העובר בשלבים, לנצל את ההמבורגר והמילטון12 (HH) היערכות טבלה.

1. העובר דגירה

  1. דגירה הביצים עוף מופרית חממה סטרילי, בטמפרטורה מבוקרת-37 ° C ± 1 ° C ו ~ 40% לחות.
  2. להפוך את הביצים 1 x ליום ולאפשר להם דגירה עד HH34 (8 ימים לאחר ההפריה).

2. הכנה ועיקור של החומרים

  1. עבור 12 עוברי, החיטוי 2 ל' מים מזוקקים, 1 ליטר של תמיסת מלח צ'יק 0.85%, פיפטות זכוכית 12, 1 קופסה של נייר טישו, 24 2.5 ס"מ x 2.5 ס"מ ריבועי נייר סינון נקבוביים למחצה ו- 24 2.5 ס"מ x 2.5 ס"מ ריבועים של תיל פלדה רשת עם קצוות מעוגלים כלפי מטה. כדי לעקר את החומרים, החיטוי אותם ב 121 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות לפחות.
    הערה: autoclaving של החומרים יכול להיעשות מראש.
  2. לעקר את החממה עם 70% אתנול שתמחקי את הצדדים, מדפים, הדלת. מניחים 2 מיכלי פלסטיק המכיל בלוק מזוקקים מים בתוך החממה כדי לשמור על לחות. Prewarm החממה תרבות כדי 37 ° C ± 1 ° C ו ~ 40% לחות. להבטיח שהחממה חשוך לחלוטין; אם הדלת שקוף, מכסה אותו עם נייר כסף.
  3. Prewarm 100 מ של חומר מזין בינוני, 1 מ"ל של פניצילין על-ידי הצבתם בחממה תרבות.
  4. מכסה את סביבת העבודה עם מגבת נייר, לעקר את הספסל על ידי התזה עם 70% אתנול. לחטא 2 זוגות של מלקחיים, חיתוך מספריים, סכין גילוח, כפית פלסטיק עם 70% אתנול באופן דומה.
  5. צלחות פטרי סטריליות 100 מ מ מקום 12 ו- 24 צלחות פטרי סטריליות 35 מ מ על הספסל לשימוש. ודא שהמנות נשארים בשקית סטרילית עד השימוש.

3. עובר הכנה

הערה:, מנקודה זו ואילך, תלבש מסיכת פנים מגן אבק כדי להימנע מזיהום התרבויות. זיהום חיידקי או פטרייתי יהרוס את התרבות, ויש סיכון של זה מתפשטת במהירות בכל התרבויות בחממה.

  1. לפצח את הביצה ולהעביר את העובר צלחת פטרי 100 מ מ המכיל תמיסת מלח צ'יק 0.85%. בשלב העובר על פי התכונות אנטומי תיאר המבורגר, המילטון היערכות הנחיות12 , לאשר העובר הוא HH34.
  2. חתך את הצוואר, ואז קטיעות ראש העובר בקו האמצע באמצעות תער מעוקר. בעזרת מלקחיים סטרילי, מסירים את המוח. להשאיר את האף ללא פגע.

4. תרבות ההתקנה

  1. 2. המקום של 35 מ מ פטרי בתוך צלחת פטרי 100 מ מ אחד.
  2. מניחים רשת תיל פלדה בתוך צלחת פטרי כל 35 מ מ.
  3. באמצעות מלקחיים, העברה 1 של ראשי זיבצנטן פיסת נייר סינון נקבוביים למחצה 2.5 ס"מ x 2.5 ס"מ עם העין פונה כלפי מעלה. ודא הרקמה מאובטחת לא להחליק על-ידי הטיית אותו מעט.
  4. באמצעות מלקחיים, בזהירות המקום רקמת העין, נייר הסינון על גבי רשת התיל פלדה 1 של 35 מ מ פטרי, יצירת במה מוגבהת עם רקמת העין על העליונה.
  5. חזור על שלבים 4.3 ו- 4.4 עם חצי ראש אחרים.
  6. בזהירות בעזרת פיפטה של זכוכית סטריליים, להוסיף את מזין בינוני ישירות לתוך צלחת פטרי כל 35 מ מ עד שהוא מגיע לרמת נייר הסינון. לא להטביע את הראש חצי במדיום התזונתי.
  7. להוסיף 50 µL של 10,000 U/mL פניצילין-סטרפטומיצין המדיום מזין בכל צלחת פטרי.
  8. מקפלים פיסת נייר טישו לתוך כיכר קטנה ומניחים אותו בתוך 100 מ מ פטרי. להרטיב אותה במים מזוקקים בלוק.
  9. מקם את המנה תרבות לתוך החממה סטרילי, כהה-37 ° C ± 1 ° C ו ~ 40% לחות עד 4 ימים.
  10. חזור על שלבים 3 ו- 4 עבור כל העובר.
    הערה: מספר העוברים צריך יהיה תלוי בניסוי מסוים; כאן, אנו מתארים את פרוטוקול עוברי 12.

5. תרבות תחזוקה

  1. פעם אחת ביום, למעלה למעלה את מיכלי פלסטיק בחממה עם מים מזוקקים טריים, בלוק.
  2. מדי יום בדוק בכל התרבויות עבור זיהומים חיידקים או פטריות. תרבויות זה יש התפוררה או שבהם המדיום השתנה צבע נגועים. למחוק את כל התרבויות שהודבקו.

6. קיבוע

  1. בעקבות culturing, הסר את כל המנות של החממה.
  2. באמצעות זוג מלקחיים, להסיר בעדינות את העין נייר הסינון, מטפל לא לקרוע את הרקמה.
  3. לתקן את רקמת העין paraformaldehyde 4% 1 x באגירה פוספט תמיסת מלח בן לילה ב 4 ° C או בפורמלין באגירה נייטרלי 10% למשך הלילה בטמפרטורת החדר.
  4. אחסן את הרקמה ב 4 ° C 1 x באגירה פוספט תמיסת מלח.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

באמצעות שיטה זו, עין עוף עובריים יכולים להיות מחונן יום 8 של התפתחותו (HH34) במבחנה 4 ימים ארבעה ימים של ovo פיתוח מקביל HH38.

שיטה זו culturing תומך בפיתוח של נוצה ניצנים סביב העין, על העפעפיים (איור 1B). אלה ניצנים נוצה אינם נוכחים ב ovo -HH34 לפני culturing (איור 1 א'), המציין כי פיתוח באד נוצה מאותחלת במהלך תקופת culturing, כפי שהוא ב ovo13 (איור 1C). העפעפיים ואת קרום nictitating לגדול כדי לכסות את העין במהלך culturing (איור 1B). העפעפיים מופיעות יותר בוגרת לאחר במבחנה culturing מאשר בתחילת culturing ב HH34 (איור 1 א') אבל הם פחות מפותחת יותר ב- HH38 (איור 1C). נתונים אלה מראה כי היבטים מרכזיים של התפתחות נתמכים, אמנם עם עיכוב קטן.

לאחר culturing, ניתחנו את החלק הקדמי של העין כדי להראות את conjunctival ואדומות סטיגמטה והיו שלמים (טבעת ארעית של בליטות אפיתל 13-14), אשר פועלים כמו עוד ציון דרך המציין כי האירועים התפתחותית נתמכים בתרבות. בדרך כלל, אלה ואדומות סטיגמטה והיו שלמים נוצרות באופן מלא על-ידי HH34 (איור 1D), ומנוון לאורך זמן גם הם לגרום skeletogenic condensations ב מזנכימה כבסיס; הם נעלמים HH381 (איור 1F). הנתונים מראים כי להידרדרות מתרחשת במבחנה (איור 1E) לפניו שיטוח של ואדומות סטיגמטה והיו שלמים בעקבות התבנית של ovo של פיתוח. מוכתם condensations, לעומת זאת, אינם גלויים הדגימות במבחנה , שלא כמו ב HH38 (איור 1F). השתמשנו אלקליין פוספטאז מכתים, אשר מזהה פעילות אוסטאובלסט מוקדם להעריך עוד יותר את תנאי הגיוס של אלה condensations14; תהליך זה מתרחש לצד התנוונות ה conjunctival ואדומות סטיגמטה והיו שלמים ב ovo. אינדוקציה של condensations skeletogenic, אשר מתחילה ב- HH34 (איור 1 ג'י), המשך במבחנה , כפי שמעידים על phosphatase אלקליין מכתים (איור 1 H). אלה condensations, עם זאת, לא כמו גדולים כפי שהם HH3814 (איור 1I), שוב המציין כי יש עיכוב קטן בפיתוח. אנו מעריכים כי ימי 4 culturing ייצגו כ יומיים של התפתחות עובריים; ומכאן עיכוב של-50%. באופן קולקטיבי, תוצאות אלו מראות כי אינדוקציה של התפתחות של עצמות intramembranous, condensations scleral, היא נתמכת במבחנה והמשך כי תהליכים התפתחותיים כגון היווצרות ניצן נוצה וצמיחה של העפעף ב חוץ גופית.

Figure 1
איור 1 . מאפיינים מורפולוגיים של במבחנה תרבותי עיניים, HH34 העיניים, והעיניים HH38. A - F הן מוכתם ו- G - אני מוכתמים עבור האנזים אלקליין פוספטאז (AP) להבחין בין תאי העצם פעיל בתוך condensations scleral. A, D, ו- G העיניים הצג בתחילת התקופה culturing ב HH34. B, Eו- H הצג את העיניים לאחר 4 ימים במבחנה culturing. C, F, ואני להראות את העיניים לאחר 4 ימים של ovo culturing, ב- HH38. כל העיניים נצפים רוחבית. (א) conjunctival ואדומות סטיגמטה והיו שלמים גלויים טבעת סביב הקרנית. כוכבית מציינת papilla #12, הטופס הראשון. החץ מצביע על הקצה של העפעף באזור האף של העין. (B) conjunctival ואדומות סטיגמטה והיו שלמים שיטוח, החלו להידרדר. החץ מצביע על ניצן נוצה הולך וגדל. (C) conjunctival ואדומות סטיגמטה והיו שלמים לחלוטין התדרדרו, מכוסים על ידי העפעפיים ואת קרום nictitating. החץ פתוח מציין את הקצה של העפעף באזור האף של העין. החץ מוצק מציין ניצן נוצה הולך וגדל. (ד) A ביתור החלק הקדמי של העין HH34. הכוכבית מציינת papilla #12. (E) A גזור בחלק הקדמי של HH34 + 4 במבחנה העין מציג ואדומות סטיגמטה והיו שלמים שעברו שיטוח. ואדומות סטיגמטה והיו שלמים באזור הטמפורלי (חץ מוצק) החלו להידרדר; אלה ואדומות סטיגמטה והיו שלמים העתיק ביותר בזירה. (F) של החלק הקדמי ביתור של עין HH38 עם העפעפיים, nictitating ממברנות הוסר, מראה כי כל ואדומות סטיגמטה והיו שלמים התדרדרו. קווים מקווקווים המתאר את המיקום של שני סמוכים condensations וללא רבב. (G) A HH34 העין מוכתם AP מציג skeletogenic קטן מאוד condensations מעידה על ההתחלה של אינדוקציה. (ח) A HH34 + 4 עיניים מוכתם עבור AP מציג מוגדלים, גדל skeletogenic condensations. (אני) A HH38 העין מוכתם AP מציג skeletogenic גדול condensations. כל סולם ברים הם 1 מ מ. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

פרוטוקול זה עושה שימוש רקמת הוקמה culturing הטכניקות להשגת צמיחת יש עין עוף מיום עובריים 8 (HH34) במבחנה 4 ימים. שיטה זו רשת culturing תוארה במקור על ידי Trowell15. אנחנו אופטימיזציה פרוטוקול מ של פינטו ואולם 1991 המחקר16 ניצול קרום נקבוביים למחצה עם רשת ללמוד אינדוקטיבית אותות בין רקמות מופרדים שכבות של העין עובריים עוף15. באמצעות שיטה זו, מקק תרבותי עוף 14 - בן יום עצם הירך6. שיטה זו גם הוכח כיעיל ב culturing העכבר רקמות6,17. השימוש של נייר הסינון הוא קריטי להצלחת הפרוטוקול כמו זה עוזר הרקמה כדי לקחת את החומרים המזינים של המדיום ביעילות ללא קולח או submersing הרקמה.

מזין בינוני ב- pH נכונה חיוני לצמיחה אופטימלית. המדיום צריך להיות ליד ה-pH פיזיולוגיים, והשימוש של פנול אדום במדיום או כמו מחוון מספק יתרון בכך pH שינויים ניתן להבחין בקלות. ניתן להשתמש במדיית ללא סרום, שינוי התקשורת מדי יום אינה נחוצה, אינה משפיעה על התוצאות. הפרוטוקול פותח בעזרת אמצעי זמין מסחרית (ראה טבלה של חומרים), אשר מכיל רמות גבוהות של חומצות אמינו ו גלוקוז; אין תוספת נוספת של התקשורת דרוש. רוב המופעים של צמיחת רקמת המסכן באמצעות פרוטוקול זה אירעה כאשר התקשורת התזונתי היה גם ב- pH לא תקין או מזוהם.

העין יכולה לשרוד ולצמוח עבור עד 4 ימים במבחנה, החל מ- עובריים יום 8, כאשר הפרוטוקול מבוצע בתנאים מיטביים. מגבלה אחת של פרוטוקול זה היא כי השרידות מושפע מעבר 4 ימים culturing. לפיכך, תהליכים פיתוחיים המתפרסים על פני פרק זמן ארוך יותר ידרוש שינויים בפרוטוקול. מגבלה נוספת של הפרוטוקול הוא העדר זרימת הדם פעיל, ו vascularization. כלי דם חשובים עבור תהליכים התפתחותיים רבים, לא רק עבור המשלוח של חומרים מזינים הרקמות9, אשר מושגת נימיות במבחנה באמצעות דרך נייר הסינון שעליו מונח הרקמה.

פרוטוקול זה ניתן ללמוד על התפתחות איברי כולו או חתיכות גדולות של רקמות במבחנה. האיברים חוליות מורכבים מאוד, התפתחותם מוסדר על ידי דפוסים רבים ייתכן ברורים. המחקר של המסלולים הללו התפתחותית מסתמך על היכולת לתפעל את אותות לווסת אותם. שיטות להגביל זו מניפולציה אזורים קטנים יחסית לשפות אחרות, וכדי ריכוזים נמוכים מספיק כדי להימנע lethality עובריים. לדוגמה, ex ovo לשיטת culturing העובר עוף שלם תרבות18 או בשיטת החלון ביצים19 לערוך מניפולציות מוגבלים כי גם העובר כולו יש להתייחס אליו, אשר יכול לגרום קטלני, או בלבד באזור מקומי קטן מטופלת. היתרון של פרוטוקול המוצג כאן הוא ההשפעה של אותות אלה ניתן יהיה ללמוד על כל האיברים או כמויות גדולות של רקמות, מבלי להשפיע על הכדאיות עובריים. פרוטוקול זה אינו דורש כל תוספי עם פחמן דו חמצני, כמו פרוטוקולים קודמת15. העיכוב בהתפתחות שהבחנו הוא יתרון בכך שניתן יהיה לחקור תהליכים פיתוחיים מהירה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

המחברים אין לחשוף.

Acknowledgments

המחברים רוצה להודות גרגורי האלר (הר סנט וינסנט אוניברסיטת) עבור עבודתו ראשוני בפיתוח של הפרוטוקול. המחברים רוצה גם להודות ג'ונס ניקולס (אוניברסיטת סנט וינסנט הר) עבור שלו מומחיות טכנית ועזרה עם הצילומים וייצור של חלק אודיו-ויזואלית של כתב היד. דניאל אנדרוז נתמכה על ידי מימון MSVU ו מדעי הטבע הנדסה מחקר המועצה של קנדה (NSERC) דרך פרס מחקר של סטודנטים לתואר ראשון. תמרה א פרנץ-Odendaal נתמך על ידי מענק גילוי NSERC.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
35 mm cell culture petri dishes Corning 353001 easy grip tissue culture dish, polystyrene, non-pyrogenic
100 mm cell culture petri dishes Corning 353003 tissue culture dish, polystyrene, non-pyrogenic
paper tissue Kimtech 34155 Kimtech Science Brand Task Wipers, 280 per carton
wire mesh n/a n/a stainless steel wire mesh (grid size 0.7 mm)
disposable glass pipettes VWR 14673-010 Borosilicate glass disposable 5 3/4"
nutrient medium Gibco 12591-038 Fitton-Jackson Modification, [+] L-glutamine with phenol red (BGJB)
penicillin-streptomycin Sigma-Aldrich P4458 10000 units/mL penicillin streptomycin solution stabilised
filter paper Whatman 1454 090 semi-porous filter paper 90mm
fertilized chicken eggs Dalhousie University Agricultural College n/a can be obtained from local farms
sodium chloride (NaCl) EMD SX0420-3 sodium chloride crystals, reagent grade
1 L glass bottle VWR 89000-240 1 L pyrex autoclavable glass bottle
ethanol Fisher Scientific BP82011 70% molecular biology grade
tupperware containers n/a n/a store-bought and sterilized with EtOH
disposable razor blades VWR 55411-050 single edge industrial razor blades (surgical carbon steel)
plastic spoons n/a n/a store-bought and sterilized with EtOH
dust mask 3M n/a 3M 8500 Comfort Mask
paraformaldehyde Sigma-Aldrich P6148 paraformaldehyde, reagent grade, crystalline
neutral-buffered formalin Fisher Scientific 72210 10% neutral buffered formalin
phosphate buffered saline (PBS) n/a n/a 10X phosphate buffered saline pH 7.4 (137mM NaCl, 2.5mM KCl, 4.3mM Na2HPO4, 1.4mM KH2PO4)
15 ml falcon tubes VWR 21008-216 presterilized centrifuge tubes
forceps FST n/a fine forceps
chick saline  n/a n/a  0.85% NaCl
tinfoil n/a n/a store-bought
paper towel n/a n/a store-bought

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Franz-Odendaal, T. A. Towards understanding the development of scleral ossicles in the chicken, Gallus gallus. Developmental Dynamics. 237, (11), 3240-3251 (2008).
  2. Scholey, J. M. Functions of motor proteins in echinoderm embryos: an argument in support of antibody inhibition experiments. Cell Motility and the Cytoskeleton. 39, (4), 257-260 (1998).
  3. Horakova, D., et al. Effect of FGFR inhibitors on chicken limb development. Development, Growth & Differentiation. 56, (8), 555-572 (2014).
  4. Gerlach, G. F., Morales, E. E., Wingert, R. A. Microbead Implantation in the Zebrafish Embryo. Journal of Visualized Experiments. (101), e52943 (2015).
  5. Luz-Madrigal, A., Grajales-Esquivel, E., Del Rio-Tsonis, K. Electroporation of Embryonic Chick Eyes. Bio-protocol. 5, (12), e1498 (2015).
  6. Roach, H. I. Long-term organ culture of embryonic chick femora: a system for investigating bone and cartilage formation at an intermediate level of organization. Journal of Bone and Mineral Research. 5, (1), 85-100 (1990).
  7. Jung, H. S., et al. Local inhibitory action of BMPs and their relationships with activators in feather formation: implications for periodic patterning. Developmental Biology. 196, (1), 11-23 (1998).
  8. McKinnell, I. W., Turmaine, M., Patel, K. Sonic Hedgehog functions by localizing the region of proliferation in early developing feather buds. Developmental Biology. 272, (1), 76-88 (2004).
  9. Smith, E. L., Kanczler, J. M., Oreffo, R. O. A new take on an old story: chick limb organ culture for skeletal niche development and regenerative medicine evaluation. European Cells & Materials. 26, 91-106 (2013).
  10. Sato, T., et al. In Vitro Spermatogenesis in Explanted Adult Mouse Testis Tissues. PLoS One. 10, (6), e0130171 (2015).
  11. Ochoa-Villarreal, M., et al. Plant cell culture strategies for the production of natural products. BMB Reports. 49, (3), 149-158 (2016).
  12. Hamburger, V., Hamilton, H. L. A series of normal stages in the development of the chick embryo. Journal of Morphology. 88, (1), 49-92 (1951).
  13. Yu, M., et al. The developmental biology of feather follicles. The International Journal of Developmental Biology. 48, (0), 181-191 (2004).
  14. Jabalee, J., Hillier, S., Franz-Odendaal, T. A. An investigation of cellular dynamics during the development of intramembranous bones: the scleral ossicles. Journal of Anatomy. 223, (4), 311-320 (2013).
  15. Trowell, O. A. The culture of mature organs in a synthetic medium. Experimental Cell Research. 16, (1), 118-147 (1959).
  16. Pinto, C. B., Hall, B. K. Toward an understanding of the epithelial requirement for osteogenesis in scleral mesenchyme of the embryonic chick. Journal of Experimental Zoology. 259, (1), 92-108 (1991).
  17. Mbiene, J. P., MacCallum, D. K., Mistretta, C. M. Organ cultures of embryonic rat tongue support tongue and gustatory papilla morphogenesis in vitro without intact sensory ganglia. Journal of Comparative Neurology. 377, (3), 324-340 (1997).
  18. Cloney, K., Franz-Odendaal, T. A. Optimized ex-ovo culturing of chick embryos to advanced stages of development. Journal of Visualized Experiments. (95), e52129 (2015).
  19. Korn, M. J., Cramer, K. S. Windowing chicken eggs for developmental studies. Journal of Visualized Experiments. (8), e306 (2007).
שיטת Organotypic תרבות ללמוד על התפתחות עובריים עוף רקמות
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Andrews, D. D. T., Franz-Odendaal, T. A. Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues. J. Vis. Exp. (138), e57619, doi:10.3791/57619 (2018).More

Andrews, D. D. T., Franz-Odendaal, T. A. Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues. J. Vis. Exp. (138), e57619, doi:10.3791/57619 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter