JoVE Journal > Medicine
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Results
Discussion
Disclosures
Acknowledgements
Materials
References
Automatic Translation
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
Medicine

Geliştirme ve işlevsel fare Tolerogenic dendritik hücrelerin karakterizasyonu

Published: May 18, 2018
doi:
10.3791/57637
, ,
1Department of Biochemistry, School of Medicine,Case Western Reserve University, 2Department of Pediatrics, Division of Pediatric Hematology/Oncology,Case Western Reserve University, 3Angie Fowler Cancer Institute, Rainbow Babies & Children’s Hospital,University Hospitals, Cleveland

Summary

Burada, geliştirmek ve tolerogenic dendritik hücreler (TolDCs) karakterize ve onların immunotherapeutic yardımcı programı değerlendirmek için bir protokol mevcut.

Abstract

Bağışıklık sisteminin yabancı antijenlere karşı denetleyici yanıt arasında sıkı bir denge tutarak çalışır ve öz-antijenleri yanı sıra antijenlere karşı tepkisiz bir durum komensal organizmalar türetilmiş. Bu bağışıklık homeostazı bozulma kronik inflamasyon ve otoimmünite gelişmesine yol açabilir. Dendritik hücreler (DC) doğuştan gelen bağışıklık sisteminin yabancı antijenlere karşı bağışıklık yanıtı başlatmak için saf T hücreleri aktive dahil profesyonel antijen sunan hücreler vardır. Ancak, DCs da korumak ve T hücre tolerans teşvik ve efektör hücreleri ya da otoimmün veya kronik inflamasyon koşulları gelişimine katkıda bastırmak için hareket TolDCs içine farklı. TolDCs son ilerlemesi anlayışımız içinde DC tolerans ayırt etme durumları oransal tarafından elde edilebilir öneriyor. Bu olay TolDC tedaviler çok sayıda bağışıklık bozuklukları nedeniyle neden olduğu bağışıklık toleransı kırmak için gelişmekte olan muazzam büyüme yol açmıştır. Preklinik otoimmünite fare modelleri başarılı çalışmalar daha da TolDCs immunotherapeutic yardımcı programı otoimmün hastalıklar tedavi doğrulanmış var. Bugün, TolDCs kliniğinde çeşitli bağışıklık hastalıkları bağışıklık toleransı koruyucu bağışıklık olduğu gibi bırakarak patojenik otoimmün yanıtları hedefleyerek geri getirmemesi için umut verici bir immunotherapeutic aracı haline gelmiştir. Stratejilerinin bir dizi TolDCs ikna etmek için birden fazla labs tarafından önerilen, orada olsa da hiçbir tutarlılık bu hücrelerinin hücresel ve fonksiyonel fenotip karakterize. Bu iletişim kuralı kemik iliği türevi DCs çok sayıda, onları bir sentetik triterpenoid 2-cyano-3,12-dioxooleana-1,9-dien-28-oic TolDCs ayırt etmek için kullanılan benzersiz bir yöntem geliştirilmesi için adım adım yönergeler sağlar asit-difluoro-propil-Amid (CDDO-DFPA) ve TolDCs temel moleküler imza analizleri de dahil olmak üzere kendi fenotip onaylamak için kullanılan teknikler. Son olarak, biz onların immünsüpresif yanıt vitro ve in vivo preklinik manken multipl skleroz test ederek TolDC işlevini değerlendirmek için bir yöntem gösterir.

Introduction

Dendritik hücreler (DC) doğuştan gelen bağışıklık sisteminin ayrılmaz bir parçası olan ilk keşfetti ve Ralph Steinman ve Zanvil Cohn birincil profesyonel antijen sunan hücreler1olarak 1973 yılında ile karakterizedir. DCs T hücreleri ve B hücreleri MHC kompleksi (MHC) ile işlenmiş antijen ikincil lenfoid organlara içinde doğuştan gelen ve edinilmiş bağışıklık sistemleri2bağlantı sunarak bağışıklık harekete geçirmek içinde önemli bir rol oynadığı gösterilmiştir. Memeli bağışıklık sisteminde miyeloid DCs ve plazmasitoid DCs (PDC)3açıklanan DC’lerin en az iki kategorisi vardır. Myeloid DCs, geleneksel DCs (KGK), CD11c ifade tarafından karakterize ve olgunlaşmamış DCs (iDCs) içinde vitro kemik iliği progenitör hücre veya kullanarak periferik kan monosit olarak farklı olarak da bilinir granülosit-makrofaj-koloni uyarıcı faktör (GM-CSF) ve Il-4 fare veya insan türler, sırasıyla4.

Sürücü moleküler desenleri (PAMP) patojen ilişkili veya moleküler desenleri (nem), hasar ilişkili öyle aynı derecede immunojenik DCs doğru iDCs olgunlaşma olgun DCs (mDCs) olarak çeşitli desen tanıma reseptörleri bağlama via ‘tehlike’ aktive, sinyalleri DC yüzey5. İmmunojenik DCs daha da prime saf T hücre çoğalması ve MHCII2, costimulatory ligandlar (CD80, CD86 ve CD40)6, sitokinler ve diğer çözünür arabulucu7upregulation aracılığıyla farklılaşma. Pro-inflamatuar arabulucu üretim immünojenik DCs gelen bir çağlayan sitokin aracılıklı T hücre farklılaşması için esastır. Örneğin, IL-12 ve IFN γ Th1 farklılaşma8 ve Il-1, için gerekli olan Il-6 ve IL-23 saf T hücre polarizasyon Th17 hücreleri9doğru için önemlidir. Her ne kadar olgun DCs yabancı antijenleri için tepki, kontrolsüz DC etkinleştirme tarafından öz-antijenleri tolerans ablasyon neden olabilir ve autoreactive T hücreleri olan harekete geçirmek10 doku yıkıma yol oluşturarak otoimmün hastalıklar gelişimi teşvik .

Son raporlar DC plastisite, yeteneklerini kendi doku microenvironment içinde farklı ipuçları ile etkileşim ve farklı efektör/bastırıcı DC alt kümeleri ayırt etmek için tarafından örneği açık kanıtlar sağlamıştır. IL-1011, TGF-β12ve HO-113 gibi anti-inflamatuar arabulucu tolerogenic DCs (TolDCs) inducing tarafından bağışıklık suppression içinde önemli bir rol oynadığı gösterilmiştir. Bu TolDCs düzenleyici işlevleri elde etmek ve T hücre proliferasyonu14bastırmak. Ayrıca, DC’ler tarafından ortak uyarım eksikliği ve anti-inflamatuar arabulucu TolDCs gelen üretim hem düzenleyici T hücreleri (Tregs) indüksiyon katkı ve aynı zamanda etkili Th1 ve Th17 farklılaşma ve genişleme15inhibe. İki yıl, TolDCs tedavi edici potansiyelini birkaç müfettişler tarafından bildirilmiştir. Bu çalışmalarda ex vivo yönetim sadece iyileştirmiştir TolDCs patolojik belirtiler otoimmün hastalıklar16 farklı preklinik modellerin oluşturulan ama aynı zamanda17 hastalarda immün tolerans gelişmesine yol açtı ,18. Otoimmün hastalıklar da dahil olmak üzere çeşitli klinik çalışmalarda 1 diyabet19, romatoid artrit20, türü için ilginç bir şekilde, bugün TolDCs terapi alternatif veya ek bir yaklaşım kabul edilmiştir 21, multipl skleroz (MS)22,23,24ve Crohn hastalığı25.

Çeşitli TolDCs geliştirmek için kullanılan iletişim kuralları vardır ve birkaç laboratuar yöntemleri üretimi ve TolDCs fenotipik karakterizasyonu için bildirdin. Bu yöntemler tekrarlanarak TolDCs vitro hematopoetik ataları oluşturmak ve stabil bir tolerogenic devlet vivo içinde26,27,28,29onları korumak için kullanılabilir. İDCs-ebilmek var olmak değiştirmek TolDCs çeşitli immunomodulatory farmakolojik ajanlar veya anti-inflamatuar sitokinlerin maruz. Örneğin, D3 vitamini IL-10 üretimi artırmak ve DCs gelen IL-12 salgılanması bastırmak ve böylece onların immünsüpresif işlevi30artırmak için bilinen bir iyi bilinen farmakolojik ajandır. DCs lipopolisakkaritler (LPS), gibi güçlü inflamatuar uyarıcılara maruz kaldığında Ayrıca, deksametazon31, rapamycin32ve kortikosteroidler33 gibi çeşitli farmakolojik ajanlar ikna etmek için gösterilmiştir CD40, CD80, CD86 ve MHCII34DC yüzey ifade azaltarak TolDC fenotip. IL-10 ve TGF-β DC tolerans35 ve eşlik eden maruz kalma bu sitokinler her ikisi de ikna etmek için en okudu anti-inflamatuar sitokinlerin tolerogenic fenotip DCs36içinde ikna etmek için göstermiştir vardır.

Yerine fenotipik işaretleri tarafından orada DC fonksiyonel özelliklere göre tanımlanır tolerogenic beri büyük bir TolDCs hücresel ve fonksiyonel karakterizasyonu için tutarlı bir yöntem geliştirmek zorundayız. Eğer biz etkili ve tekrarlanarak TolDC fenotip ikna etmek için yetenek yeni ajanların karşılaştırmak için Ayrıca, titiz ve tutarlı iletişim kuralı tutarlı değerlendirme ve tolerogenic DC fenotip karakterizasyonu için oluşturulmalıdır Laboratuvar. Burada ayrıntılı bir protokol ile adım adım yöntemler iDCs farelerin hematopoetik ataları gelen izole etmek ve daha sonra değerlendirme kapasitelerini TolDCs iDCs dönüştürmek için altında yeni ajanların etkinliğini çözümlemek için sağlam sağlayan sağlamak TolDCs fenotipik ve fonksiyonel karakterizasyonu vitro ve içinde vivo. Bu açıklama TolDCs onların yüzey ligandlar, sitokin profil ve immünsupresif işlevleri vitrotarafından karakterize etmek için ayrıntılı bir yöntem içerir. Biz de bu TolDCs MS, deneysel otoimmun ensefalomiyelit (EAE), önceden klinik bir modeli potansiyel tedavi uygulanması keşfetmek için bir yöntem örneği sağlar. Bu oluşturulmuş protokol TolDCs indüksiyon teşvik için yeni acentalar kapasitesini değerlendirmek için Müfettişler yardımcı olacak ve TolDC terapötik geliştirme kapsamını genişletmek için çaba kolaylaştıracaktır.

Protocol

Case Western Reserve Üniversitesi Tıp Fakültesi’nın kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi tarafından onaylanmış yordamlar ile uyumlu tüm çalışmaları yapıldı. 1. dendritik hücreler (BMDCs) kemik iliği türevi hazırlayın Isıyla üzerinden tüm cerrahi aletler sterilize ve sınıf II biyolojik Emanet yürüttüğü güvenlik prosedürleri ile kabine deneme gerçekleştirin. C57BL/6 fareler CO2 odası kullanarak 8-10 hafta-in yaş ötenazi. …

Representative Results

Farklılaşma ve BMDCs seçimi: Kemik iliği progenitör hücre GM-CSF ve Il-4 iDCs 7 gün (Şekil 1A) ayırt etmek için tam RPMI ortamda kültürlü. Gün 1, hücreleri küçük içinde büyüklük ve küresel morfoloji gösterdi. Önce gün 3 taze orta yerine hücreleri form kümeleri için yardımcı oldu ve aynı zamanda CD11c nüfusu arttı PBS ile yıkama+ hücrele…

Discussion

Bu kağıt için tekrarlanarak iDCs oluşturmak ve daha sonra onları TolDCs ayırt etmek için kullanılabilir verimli bir iletişim kuralı tanımlar ve önerdiğimiz bu TolDC ikna etmek için yeni moleküler hedef aracıları kapasitesini değerlendirmek için uygulanabilir fenotip. Bu raporda açıklanan, hangi biz ilk yüzey ligandlar TolDC ifade tarafından qRT-PCR ve ELISA tarafından ölçülen DC sitokin profil bir değerlendirmesini ve ardından akış sitometresi analiz bir sıra takip ettik. Son olarak, TolDC…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Tekrar ilaç CDDO DFPA verdiğiniz için teşekkür ederiz. Ayrıca Jane ve Lee Seidman sandalye Pediatrik kanser yenilik (John Letterio) desteğiyle anıyoruz. Bu eser Savunma Bakanlığı tarafından [W81XWH-12-1-0452]; desteklenmiştir Angie Fowler ergen ve Genç Yetişkin kanser araştırma girişimiyle durumda kapsamlı Kanser Merkezi; ve FJ Callahan temelden Hsi-Ju Wei Callahan mezunu Scholar Ödülü.

Materials

CDDO-DFPA (RTA-408) Reata Pharmaceuticals in house synthesis Cell culture
Mouse GM-CSF Peprotech Inc. 315-03 BMDC differentiation
Mouse IL-4 Peprotech Inc. 214-14 BMDC differentiation
Lipopolysaccharides (LPS) Sigma Aldrich Inc. L2880 Cell culture
β-mercaptoethanol Sigma Aldrich Inc. 516732 Cell culture
Pertussis toxin (PTX) R&D systems 3097 EAE induction
MOG (35–55) peptide 21stCentury Biochemicals in house synthesis EAE induction
Trypan blue Gibco, Life Technologies 15250-061 Cell culture
RPMI-1640 plus L-glutamine ThermoFisher Scientific 11875-093 Cell culture
Non-essential amino acid (100X) ThermoFisher Scientific 11140050 Cell culture
HEPES ThermoFisher Scientific 15630080 Cell culture
penicillin/streptomycin ThermoFisher Scientific 15140122 Cell culture
40 μm cell strainer Corning 352340 Cell isolation
PE-conjugated CD80 BD Biosciences 557227 Flow cytometry
PE-conjugated CD86 BD Biosciences 555665 Flow cytometry
PE-conjugated PD-L1 BioLegend 124307 Flow cytometry
APC-conjugated MHCII Miltenyi Biotec Inc. 130-112-388 Flow cytometry
APC-conjugated CD11c BD Biosciences 340544 Flow cytometry
Isotype matched PE Miltenyi Biotec Inc. 130-091-835 Flow cytometry
Isotype matched APC Miltenyi Biotec Inc. 130-091-836 Flow cytometry
CFSE BioLegend 423801 T cell proliferation assay
Pan dendritic cell isolation kit Miltenyi Biotec Inc. 130-100-875 T cell proliferation assay
FcR Blocking Reagent Miltenyi Biotec Inc. 130-100-875 T cell proliferation assay
Pan Dendritic Cell Biotin-Antibody Cocktail Miltenyi Biotec Inc. 130-100-875 T cell proliferation assay
Anti-Biotin MicroBeads Miltenyi Biotec Inc. 130-100-875 T cell proliferation assay
CD4+ T cell isolation kit Miltenyi Biotec Inc. 130-104-454 T cell proliferation assay
CD4+ T cell Biotin-Antibody Cocktail Miltenyi Biotec Inc. 130-104-454 T cell proliferation assay
Anti-Biotin MicroBeads Miltenyi Biotec Inc. 130-104-454 T cell proliferation assay
ACK lysing buffer ThermoFisher Scientific A1049201 BMDC differentiation
1 ml syringe BD Biosciences 309626 T cell proliferation assay
3 ml syringe BD Biosciences 309588 BMDC differentiation
25G needle BD Biosciences 309626 T cell proliferation assay
23G needle BD Biosciences 309588 BMDC differentiation
BSA Sigma Aldrich Inc. A2058 T cell proliferation assay
EDTA ThermoFisher Scientific 15575020 T cell proliferation assay
LS Column Miltenyi Biotec Inc. 130-042-401 T cell proliferation assay
Pre-Separation Filter Miltenyi Biotec Inc. 130-095-823 T cell proliferation assay
collagenase D Sigma Aldrich Inc. 11088858001 T cell proliferation assay
HBSS ThermoFisher Scientific 14025076 T cell proliferation assay
ovalbumin (OVA) peptide 323–329 Sigma Aldrich Inc. O1641 T cell proliferation assay
Mouse IFN-γ TaqMan probe ThermoFisher Scientific Mm01168134_m1 qRT-PCR
Mouse IL-12a TaqMan probe ThermoFisher Scientific Mm00434165 qRT-PCR
Mouse IL-12 p70 DuoSet ELISA R&D systems DY419-05 ELISA
Mouse EDN-1 ELISA RayBiotech ELM-EDN1-1 ELISA
TNF-α TaqMan probe ThermoFisher Scientific Mm00443258 qRT-PCR
Mouse TNF-α Quantikine ELISA Kit R&D systems MTA00B ELISA
IL-6 TaqMan probe ThermoFisher Scientific Mm00446190 qRT-PCR
Mouse IL-6 Quantikine ELISA Kit R&D systems M6000B ELISA
IL-23a TaqMan probe ThermoFisher Scientific Mm01160011 qRT-PCR
Mouse IL-23 DuoSet ELISA R&D systems DY1887-05 ELISA
IL-4 TaqMan probe ThermoFisher Scientific Mm99999154_m1 qRT-PCR
IL-10 TaqMan probe ThermoFisher Scientific Mm01288386_m1 qRT-PCR
TGF-β TaqMan probe ThermoFisher Scientific Mm01178820_m1 qRT-PCR
Anti-Heme Oxygenase 1 antibody Abcam ab13248 Western blotting
Anti-β-actin antibody Abcam ab8226 Western blotting
CFX96 Touch Real-Time PCR Detection System Bio-Rad Inc. qRT-PCR
BD FACSCalibur Cell Analyzer BD Biosciences Flow cytometry
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Steinman, R. M., Cohn, Z. A. Identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs of mice. I. Morphology, quantitation, tissue distribution. J Exp Med. 137 (5), 1142-1162 (1973).
  2. Inaba, K., et al. Efficient presentation of phagocytosed cellular fragments on the major histocompatibility complex class II products of dendritic cells. J Exp Med. 188 (11), 2163-2173 (1998).
  3. Banchereau, J., et al. Immunobiology of dendritic cells. Annu Rev Immunol. 18, 767-811 (2000).
  4. Sallusto, F., Lanzavecchia, A. Efficient presentation of soluble antigen by cultured human dendritic cells is maintained by granulocyte/macrophage colony-stimulating factor plus interleukin 4 and downregulated by tumor necrosis factor alpha. J Exp Med. 179 (4), 1109-1118 (1994).
  5. Hemmi, H., Akira, S. TLR signalling and the function of dendritic cells. Chem Immunol Allergy. 86, 120-135 (2005).
  6. Caux, C., et al. B70/B7-2 is identical to CD86 and is the major functional ligand for CD28 expressed on human dendritic cells. J Exp Med. 180 (5), 1841-1847 (1994).
  7. Chastain, E. M., Duncan, D. S., Rodgers, J. M., Miller, S. D. The role of antigen presenting cells in multiple sclerosis. Biochim Biophys Acta. 1812 (2), 265-274 (2011).
  8. Smeltz, R. B., Chen, J., Ehrhardt, R., Shevach, E. M. Role of IFN-gamma in Th1 differentiation: IFN-gamma regulates IL-18R alpha expression by preventing the negative effects of IL-4 and by inducing/maintaining IL-12 receptor beta 2 expression. J Immunol. 168 (12), 6165-6172 (2002).
  9. Gyulveszi, G., Haak, S., Becher, B. IL-23-driven encephalo-tropism and Th17 polarization during CNS-inflammation in vivo. Eur J Immunol. 39 (7), 1864-1869 (2009).
  10. Kronenberg, M., Rudensky, A. Regulation of immunity by self-reactive T cells. Nature. 435 (7042), 598-604 (2005).
  11. Boks, M. A., et al. IL-10-generated tolerogenic dendritic cells are optimal for functional regulatory T cell induction–a comparative study of human clinical-applicable DC. Clin Immunol. 142 (3), 332-342 (2012).
  12. Anderson, A. E., et al. Tolerogenic dendritic cells generated with dexamethasone and vitamin D3 regulate rheumatoid arthritis CD4+ T cells partly via transforming growth factor-beta1. Clin Exp Immunol. 187 (1), 113-123 (2017).
  13. Chauveau, C., et al. Heme oxygenase-1 expression inhibits dendritic cell maturation and proinflammatory function but conserves IL-10 expression. Blood. 106 (5), 1694-1702 (2005).
  14. Maldonado, R. A., von Andrian, U. H. How tolerogenic dendritic cells induce regulatory T cells. Adv Immunol. 108, 111-165 (2010).
  15. Schmidt, S., Nino-Castro, A., Schultze, J. Regulatory dendritic cells: there is more than just immune activation. Frontiers in Immunology. 3 (274), (2012).
  16. Hilkens, C. M., Isaacs, J. D., Thomson, A. W. Development of dendritic cell-based immunotherapy for autoimmunity. Int Rev Immunol. 29 (2), 156-183 (2010).
  17. Dhodapkar, M. V., Steinman, R. M. Antigen-bearing immature dendritic cells induce peptide-specific CD8(+) regulatory T cells in vivo in humans. Blood. 100 (1), 174-177 (2002).
  18. Dhodapkar, M. V., Steinman, R. M., Krasovsky, J., Munz, C., Bhardwaj, N. Antigen-specific inhibition of effector T cell function in humans after injection of immature dendritic cells. J Exp Med. 193 (2), 233-238 (2001).
  19. Giannoukakis, N., Phillips, B., Finegold, D., Harnaha, J., Trucco, M. Phase I (safety) study of autologous tolerogenic dendritic cells in type 1 diabetic patients. Diabetes Care. 34 (9), 2026-2032 (2011).
  20. Benham, H., et al. Citrullinated peptide dendritic cell immunotherapy in HLA risk genotype-positive rheumatoid arthritis patients. Sci Transl Med. 7 (290), 290ra287 (2015).
  21. Bell, G. M., et al. Autologous tolerogenic dendritic cells for rheumatoid and inflammatory arthritis. Ann Rheum Dis. 76 (1), 227-234 (2017).
  22. University Hospital, A. A “Negative” Dendritic Cell-based Vaccine for the Treatment of Multiple Sclerosis: a First-in-human Clinical Trial (MS tolDC). ClinicalTrials.gov. , (2015).
  23. Pujol, F. I. G. T. i. Tolerogenic Dendritic Cells as a Therapeutic Strategy for the Treatment of Multiple Sclerosis Patients (TOLERVIT-MS) (TOLERVIT-MS). ClinicalTrials.gov. , (2016).
  24. Varea, S. Treatment of Multiple Sclerosis and Neuromyelitis Optica With Regulatory Dendritic Cell: Clinical Trial Phase 1 B. ClinicalTrials.gov. , (2017).
  25. Jauregui-Amezaga, A., et al. Intraperitoneal Administration of Autologous Tolerogenic Dendritic Cells for Refractory Crohn’s Disease: A Phase I Study. J Crohns Colitis. 9 (12), 1071-1078 (2015).
  26. Mahnke, K., Schmitt, E., Bonifaz, L., Enk, A. H., Jonuleit, H. Immature, but not inactive: the tolerogenic function of immature dendritic cells. Immunol Cell Biol. 80 (5), 477-483 (2002).
  27. Lutz, M. B., Schuler, G. Immature, semi-mature and fully mature dendritic cells: which signals induce tolerance or immunity?. Trends Immunol. 23 (9), 445-449 (2002).
  28. Suciu-Foca, N., et al. Molecular characterization of allospecific T suppressor and tolerogenic dendritic cells: review. Int Immunopharmacol. 5 (1), 7-11 (2005).
  29. Wakkach, A., et al. Characterization of dendritic cells that induce tolerance and T regulatory 1 cell differentiation in vivo. Immunity. 18 (5), 605-617 (2003).
  30. Szeles, L., et al. 1,25-dihydroxyvitamin D3 is an autonomous regulator of the transcriptional changes leading to a tolerogenic dendritic cell phenotype. J Immunol. 182 (4), 2074-2083 (2009).
  31. Unger, W. W., Laban, S., Kleijwegt, F. S., vander Slik, A. R., Roep, B. O. Induction of Treg by monocyte-derived DC modulated by vitamin D3 or dexamethasone: differential role for PD-L1. Eur J Immunol. 39 (11), 3147-3159 (2009).
  32. Reichardt, W., et al. Impact of mammalian target of rapamycin inhibition on lymphoid homing and tolerogenic function of nanoparticle-labeled dendritic cells following allogeneic hematopoietic cell transplantation. J Immunol. 181 (7), 4770-4779 (2008).
  33. Woltman, A. M., et al. The effect of calcineurin inhibitors and corticosteroids on the differentiation of human dendritic cells. Eur J Immunol. 30 (7), 1807-1812 (2000).
  34. Hackstein, H., Thomson, A. W. Dendritic cells: emerging pharmacological targets of immunosuppressive drugs. Nat Rev Immunol. 4 (1), 24-34 (2004).
  35. Torres-Aguilar, H., Blank, M., Jara, L. J., Shoenfeld, Y. Tolerogenic dendritic cells in autoimmune diseases: crucial players in induction and prevention of autoimmunity. Autoimmun Rev. 10 (1), 8-17 (2010).
  36. Rutella, S., Danese, S., Leone, G. Tolerogenic dendritic cells: cytokine modulation comes of age. Blood. 108 (5), 1435-1440 (2006).
  37. Wei, H. J., Pareek, T. K., Liu, Q., Letterio, J. J. A unique tolerizing dendritic cell phenotype induced by the synthetic triterpenoid CDDO-DFPA (RTA-408) is protective against EAE. Sci Rep. 7 (1), 9886 (2017).
  38. van Etten, E., Mathieu, C. Immunoregulation by 1,25-dihydroxyvitamin D3: basic concepts. J Steroid Biochem Mol Biol. 97 (1-2), 93-101 (2005).
  39. Pan, J., et al. Dexamethasone inhibits the antigen presentation of dendritic cells in MHC class II pathway. Immunol Lett. 76 (3), 153-161 (2001).
  40. Zhu, J., Paul, W. E. Heterogeneity and plasticity of T helper cells. Cell Res. 20 (1), 4-12 (2010).
  41. Spirig, R., et al. TLR2 and TLR4 agonists induce production of the vasoactive peptide endothelin-1 by human dendritic cells. Mol Immunol. 46 (15), 3178-3182 (2009).
  42. Walton, E. L. Make immunological peace not war: Potential applications of tolerogenic dendritic cells. Biomed J. 40 (2), 77-79 (2017).
  43. Constantinescu, C. S., Farooqi, N., O’Brien, K., Gran, B. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) as a model for multiple sclerosis (MS). Br J Pharmacol. 164 (4), 1079-1106 (2011).
  44. Xu, Y., Zhan, Y., Lew, A. M., Naik, S. H., Kershaw, M. H. Differential development of murine dendritic cells by GM-CSF versus Flt3 ligand has implications for inflammation and trafficking. J Immunol. 179 (11), 7577-7584 (2007).
  45. Angelov, G. S., Tomkowiak, M., Marcais, A., Leverrier, Y., Marvel, J. Flt3 ligand-generated murine plasmacytoid and conventional dendritic cells differ in their capacity to prime naive CD8 T cells and to generate memory cells in vivo. J Immunol. 175 (1), 189-195 (2005).
  46. Lowes, M. A., et al. Increase in TNF-alpha and inducible nitric oxide synthase-expressing dendritic cells in psoriasis and reduction with efalizumab (anti-CD11a). Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (52), 19057-19062 (2005).
  47. Schnorrer, P., et al. The dominant role of CD8+ dendritic cells in cross-presentation is not dictated by antigen capture. Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (28), 10729-10734 (2006).
  48. Wang, W., Li, J., Wu, K., Azhati, B., Rexiati, M. Culture and Identification of Mouse Bone Marrow-Derived Dendritic Cells and Their Capability to Induce T Lymphocyte Proliferation. Med Sci Monit. 22, 244-250 (2016).
  49. Lutz, M. B., et al. An advanced culture method for generating large quantities of highly pure dendritic cells from mouse bone marrow. J Immunol Methods. 223 (1), 77-92 (1999).
  50. Griffin, M. D., et al. Dendritic cell modulation by 1alpha,25 dihydroxyvitamin D3 and its analogs: a vitamin D receptor-dependent pathway that promotes a persistent state of immaturity in vitro and in vivo. Proc Natl Acad Sci U S A. 98 (12), 6800-6805 (2001).
  51. Bscheider, M., Butcher, E. C. Vitamin D immunoregulation through dendritic cells. Immunology. 148 (3), 227-236 (2016).
  52. Castiello, L., et al. Monocyte-derived DC maturation strategies and related pathways: a transcriptional view. Cancer Immunol Immunother. 60 (4), 457-466 (2011).
  53. Decker, W. K., et al. Deficient T(H)-1 responses from TNF-alpha-matured and alpha-CD40-matured dendritic cells. J Immunother. 31 (2), 157-165 (2008).
  54. Longhi, M. P., et al. Dendritic cells require a systemic type I interferon response to mature and induce CD4+ Th1 immunity with poly IC as adjuvant. J Exp Med. 206 (7), 1589-1602 (2009).
  55. Link, H., Huang, Y. M., Xiao, B. G. Dendritic cells in experimental allergic encephalomyelitis and multiple sclerosis. J Neuroimmunol. 100 (1-2), 102-110 (1999).
  56. Leech, M. D., et al. Cutting edge: IL-6-dependent autoimmune disease: dendritic cells as a sufficient, but transient, source. J Immunol. 190 (3), 881-885 (2013).
  57. Saul, L., Besusso, D., Mellanby, R. J. LPS-matured CD11c+ bone marrow-derived dendritic cells can initiate autoimmune pathology with minimal injection site inflammation. Lab Anim. 51 (3), 292-300 (2017).
  58. Aghdami, N., Gharibdoost, F., Moazzeni, S. M. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) induced by antigen pulsed dendritic cells in the C57BL/6 mouse: influence of injection route. Exp Anim. 57 (1), 45-55 (2008).
  59. Wilson, H. L. Limitations with in vitro production of dendritic cells using cytokines. J Leukoc Biol. 75 (4), 600-603 (2004).
  60. Ni, K., O’Neill, H. C. Development of dendritic cells from GM-CSF-/- mice in vitro : GM-CSF enhances production and survival of cells. Dev Immunol. 8 (2), 133-146 (2001).

Tags

MurineTolerogenicDendritic CellsAutoimmune DisordersMultiple SclerosisImmunotherapyCell DevelopmentFunctional CharacterizationC57BL/6 MiceBone MarrowGM-CSFIL-4Cell CultureCell HarvestingCell LysisCell FilteringCell PlatingCell FeedingCell Incubation

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Cite This Article
Wei, H., Letterio, J. J., Pareek, T. K. Development and Functional Characterization of Murine Tolerogenic Dendritic Cells. J. Vis. Exp. (135), e57637, doi:10.3791/57637 (2018).
Download Citation
Reprints and Permissions

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image