JoVE Journal > Medicine
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Results
Discussion
Disclosures
Acknowledgements
Materials
References
Automatic Translation
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
Medicine

Utveckling och funktionell karakterisering av murina tolerogena dendritiska celler

Published: May 18, 2018
doi:
10.3791/57637
, ,
1Department of Biochemistry, School of Medicine,Case Western Reserve University, 2Department of Pediatrics, Division of Pediatric Hematology/Oncology,Case Western Reserve University, 3Angie Fowler Cancer Institute, Rainbow Babies & Children’s Hospital,University Hospitals, Cleveland

Summary

Här presenterar vi ett protokoll för att utveckla och karakterisera tolerogena dendritiska celler (TolDCs) och utvärdera deras immunoterapeutisk nytta.

Abstract

Immunförsvaret fungerar genom att upprätthålla en stram balans mellan samordnande svaren mot främmande antigener och att upprätthålla ett tillstånd som inte svarar mot själv-antigener samt antigener som härrör från kommensaler organismer. Störningar av denna immun homeostas kan leda till kronisk inflammation och utveckling av autoimmunitet. Dendritiska celler (DCs) är de professionella antigen-presenterande cellerna av det medfödda immunförsvaret som är inblandade i Aktivera naiva T-celler för att initiera immunsvar mot främmande antigener. DCs kan dock också differentieras till TolDCs att agera att upprätthålla och främja T cells tolerans och att undertrycka effektor celler bidrar till utvecklingen av antingen autoimmuna eller kronisk inflammation villkorar. Senaste befordran i vår förståelse av TolDCs tyder på att DC tolerans kan uppnås genom att modulera deras differentiering villkor. Detta fenomen har lett till enorma tillväxten i utveckla TolDC terapier för talrika immunsjukdomar som orsakat på grund av att bryta i immuntolerans. Framgångsrika studier i prekliniska autoimmunitet murina modeller har ytterligare validerade verktyget immunoterapeutisk av TolDCs för behandling av autoimmuna sjukdomar. TolDCs har idag blivit ett lovande immunoterapeutisk verktyg i kliniken för att återinföra immuntolerans i olika immunsjukdomar genom att rikta patogena autoimmuna svar medan skyddande immunitet intakt. Även om en rad strategier har föreslagits av flera labs att framkalla TolDCs, finns det ingen konsekvens i karaktärisera den cellulära och funktionella fenotypen av dessa celler. Detta protokoll ger en steg för steg-guide för utveckling av benmärgen-derived DCs i stora skaror, en unik metod som används för att skilja dem i TolDCs med en syntetisk triterpenoid 2-cyano-3,12-dioxooleana-1,9-dien-28-oic syra-difluor-propyl-Amid (CDDO-DFPA), och de tekniker som används för att bekräfta sin fenotyp, inbegripet analyser av väsentliga molekylära signaturer av TolDCs. Slutligen visar vi en metod för att bedöma TolDC funktion genom att testa deras immunosuppressiva svar in vitro- och in-vivo i en preklinisk modell av multipel skleros.

Introduction

Dendritiska celler (DCs) är en integrerad del av det medfödda immunsystemet och först upptäcktes och kännetecknas av Ralph Steinman och Zanvil Cohn 1973 som primära professionella antigen presenterande celler1. DCs har visat sig spela en viktig roll i immunsystemets aktivering genom att presentera bearbetade antigener att T-celler och B-celler via stora histocompatibility komplex (MHC) i sekundära lymfoida organ att länka den medfödda och adaptiv immunsystem2. I däggdjur immunsystemet finns det minst två kategorier av DCs som har beskrivits som myeloisk DCs och dess DCs (PDC)3. Myeloisk DCs, även känd som konventionella DCs (cDCs), kännetecknas av uttrycket av CD11c och kan skiljas som omogna DCs (iDCs) in vitro från stamceller i benmärg eller perifert blod monocyter med hjälp granulocyt-makrofag-granulocytkolonistimulerande faktor (GM-CSF) och IL-4 i murina eller mänskliga arter, respektive4.

Aktivera ‘fara’ signaler, såsom patogen-associerade molekylära mönster (PAMP) eller skada-associerade molekylära mönster (DAMP), kommer att driva iDCs mognad mot immunogent DCs som mogen DCs (mDCs) via bindande olika mönster erkännande receptorer den DC yta5. Immunogent DCs ytterligare prime naiva T-cellproliferation och differentiering genom uppreglering av MHCII2, costimulatory ligander (CD80 CD86 och CD40)6, cytokiner och andra lösliga medlare7. En kaskad av pro-inflammatoriska medlare produktion från immunogent DCs är viktigt för cytokin-medierad T celldifferentiering. Exempelvis både IFN-γ och IL-12 är nödvändiga för Th1 differentiering8 och IL-1, IL-6 och IL-23 är kritiska för naiva T-cell polarisering mot Th17 celler9. Även om mogen DCs reagerar på främmande antigener, kan okontrollerad DC aktivering av self-antigener orsaka tolerans ablation och främja utvecklingen av autoimmuna sjukdomar genom att generera autoreaktiva T celler vars aktivering leder till vävnad förstörs10 .

De senaste rapporterna har gett tydliga bevis på DC plasticitet, exemplifieras genom sin förmåga att interagera med olika ledtrådar inom deras vävnad närmiljön och differentieras till distinkta effektor/suppressor DC delmängder. Den anti-inflammatoriska mediatorer, som IL-1011, TGF-β12och HO-113 har visat sig spela en viktig roll i immunsystemet genom att inducera tolerogena DCs (TolDCs). Dessa TolDCs förvärva tillsynsuppdrag och undertrycka T cell spridning14. Dessutom avsaknaden av samtidig stimulering av DCs och produktionen av antiinflammatoriska mediatorer från TolDCs både bidra till induktion av regulatoriska T-celler (Tregs) och även effektivt hämmar både Th1 och Th17 differentiering och expansion15. I senaste två årtiondena, har den terapeutiska potentialen av TolDCs rapporterats av flera utredare. I dessa studier var administrering av ex-vivo genereras TolDCs inte bara förbättras sjukliga symtom i olika prekliniska modeller för autoimmuna sjukdomar16 men också lett till utveckling av immuntolerans hos patienter17 ,18. Intressant, idag TolDCs terapin har ansetts som alternativa eller kompletterande tillvägagångssätt för autoimmuna sjukdomar i flera kliniska prövningar, inklusive typ 1 diabetes mellitus19, reumatoid artrit20, 21, multipel skleros (MS)22,23,24, och Crohns sjukdom25.

Det finns en mängd olika protokoll som har anställts för att utveckla TolDCs och flera laboratorier har rapporterat metoder för generering och fenotypisk karakterisering av TolDCs. Dessa metoder kan användas för att generera reproducibly TolDCs in vitro- från hematopoetiska progenitorceller och stabilt upprätthålla dem i en tolerogena staten i vivo26,27,28,29. IDCs kan omvandlas till TolDCs av exponering för olika immunmodulerande farmakologiska agenter eller antiinflammatoriska cytokiner. Vitamin D3 är exempelvis en välkänd farmakologiska agent kända att öka IL-10 produktion och undertrycka IL-12 sekretion från DCs och att därmed öka deras immunosuppressiva funktion30. Dessutom när DCs utsätts för potenta inflammatoriska stimuli, såsom lipopolysackarider (LPS), flera farmakologiska medel såsom dexametason31, rapamycin32och kortikosteroider33 har visats inducera den TolDC fenotyp genom att minska DC ytan uttryck för CD40, CD80 och CD86, MHCII34. IL-10 och TGF-β är de mest studerade antiinflammatoriska cytokiner inducera DC tolerans35 och samtidig exponering för båda av dessa cytokiner har visats inducera en tolerogena fenotyp i DCs36.

Sedan den tolerogena DC definieras av funktionella egenskaper snarare än av fenotypiska markörer, det finns behöver en stor utveckla en konsekvent metod för cellulära och funktionell karakterisering av TolDCs. Dessutom ett strikt och konsekvent protokoll måste fastställas för konsekvent utvärdering och karakterisering av tolerogena DC fenotypen om vi effektivt och reproducibly jämföra nya agenter förmåga att inducera TolDC fenotypen i den laboratorium. Här tillhandahåller vi ett detaljerat protokoll med steg för steg metoder att isolera iDCs från hematopoetiska progenitorceller möss och därefter analysera effekten av nya agenter under utvärdering för deras förmåga att omvandla iDCs till TolDCs, som ger en robust funktionella och fenotypisk karakterisering av TolDCs både in vitro- och in vivo. Beskrivningen omfattar en utarbetad metod för att karakterisera TolDCs av deras yta ligander, cytokin profil och immundämpande funktioner i vitro. Vi ger också ett exempel på en metod att utforska potentiella terapeutiska tillämpningen av dessa TolDCs i en preklinisk modell av MS, experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE). Detta etablerat protokoll kommer att hjälpa utredare att utvärdera nya agenter förmåga att främja induktion av TolDCs och kommer att underlätta arbetet med att bredda TolDC terapeutisk utveckling.

Protocol

Alla studier har utförts i enlighet med förfaranden som godkänts av de fall Western Reserve University School of Medicines institutionella djur vård och användning kommittén. 1. Förbered benmärg-derived dendritiska celler (BMDCs) Sterilisera alla kirurgiska instrument via autoklavering och utför experimentet i klass II biologiska säkerhetsskåp med tillgripits säkerhetsrutiner. Euthanize C57BL/6 möss 8-10 veckors ålder med hjälp av CO2 kammare. Plac…

Representative Results

Den differentiering och urval av BMDCs: Benmärg stamceller odlades i komplett RPMI medium i närvaro av GM-CSF och IL-4 differentieras till iDCs i 7 dagar (figur 1A). Dag 1, celler var små i storlek och visade sfäriska morfologi. Tvättning med PBS innan byte av färskt medium på dag 3 hjälpte celler till att bilda kluster och också ökade befolkningen i CD11c+ cell…

Discussion

Detta dokument beskriver en effektiv protokoll som kan användas till reproducibly att generera iDCs och därefter skilja dem in i TolDCs, och vi föreslår att detta kan tillämpas för att utvärdera nya molekylära målet agenter förmåga att inducera TolDC fenotyp. Som beskrivs i detta betänkande, följde vi en sekvens där vi först analyserade TolDC uttryck för surface ligander av flödescytometri, följt av en bedömning av DC cytokin profil mätt med qRT-PCR och ELISA. Slutligen bekräftades immunoregulatorisk…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Vi tackar Reata läkemedel för att ge CDDO-DFPA. Vi erkänner också stöd av Jane och Lee Seidman stol i Pediatric Cancer Innovation (John Letterio). Detta arbete stöds av Department of Defense [W81XWH-12-1-0452]; Angie Fowler ungdomar och unga vuxna cancerpatienter forskning initiativet på fall omfattande Cancer Center. och Callahan Graduate Scholar Award för Hsi-Ju Wei från F.J. Callahan Foundation.

Materials

CDDO-DFPA (RTA-408) Reata Pharmaceuticals in house synthesis Cell culture
Mouse GM-CSF Peprotech Inc. 315-03 BMDC differentiation
Mouse IL-4 Peprotech Inc. 214-14 BMDC differentiation
Lipopolysaccharides (LPS) Sigma Aldrich Inc. L2880 Cell culture
β-mercaptoethanol Sigma Aldrich Inc. 516732 Cell culture
Pertussis toxin (PTX) R&D systems 3097 EAE induction
MOG (35–55) peptide 21stCentury Biochemicals in house synthesis EAE induction
Trypan blue Gibco, Life Technologies 15250-061 Cell culture
RPMI-1640 plus L-glutamine ThermoFisher Scientific 11875-093 Cell culture
Non-essential amino acid (100X) ThermoFisher Scientific 11140050 Cell culture
HEPES ThermoFisher Scientific 15630080 Cell culture
penicillin/streptomycin ThermoFisher Scientific 15140122 Cell culture
40 μm cell strainer Corning 352340 Cell isolation
PE-conjugated CD80 BD Biosciences 557227 Flow cytometry
PE-conjugated CD86 BD Biosciences 555665 Flow cytometry
PE-conjugated PD-L1 BioLegend 124307 Flow cytometry
APC-conjugated MHCII Miltenyi Biotec Inc. 130-112-388 Flow cytometry
APC-conjugated CD11c BD Biosciences 340544 Flow cytometry
Isotype matched PE Miltenyi Biotec Inc. 130-091-835 Flow cytometry
Isotype matched APC Miltenyi Biotec Inc. 130-091-836 Flow cytometry
CFSE BioLegend 423801 T cell proliferation assay
Pan dendritic cell isolation kit Miltenyi Biotec Inc. 130-100-875 T cell proliferation assay
FcR Blocking Reagent Miltenyi Biotec Inc. 130-100-875 T cell proliferation assay
Pan Dendritic Cell Biotin-Antibody Cocktail Miltenyi Biotec Inc. 130-100-875 T cell proliferation assay
Anti-Biotin MicroBeads Miltenyi Biotec Inc. 130-100-875 T cell proliferation assay
CD4+ T cell isolation kit Miltenyi Biotec Inc. 130-104-454 T cell proliferation assay
CD4+ T cell Biotin-Antibody Cocktail Miltenyi Biotec Inc. 130-104-454 T cell proliferation assay
Anti-Biotin MicroBeads Miltenyi Biotec Inc. 130-104-454 T cell proliferation assay
ACK lysing buffer ThermoFisher Scientific A1049201 BMDC differentiation
1 ml syringe BD Biosciences 309626 T cell proliferation assay
3 ml syringe BD Biosciences 309588 BMDC differentiation
25G needle BD Biosciences 309626 T cell proliferation assay
23G needle BD Biosciences 309588 BMDC differentiation
BSA Sigma Aldrich Inc. A2058 T cell proliferation assay
EDTA ThermoFisher Scientific 15575020 T cell proliferation assay
LS Column Miltenyi Biotec Inc. 130-042-401 T cell proliferation assay
Pre-Separation Filter Miltenyi Biotec Inc. 130-095-823 T cell proliferation assay
collagenase D Sigma Aldrich Inc. 11088858001 T cell proliferation assay
HBSS ThermoFisher Scientific 14025076 T cell proliferation assay
ovalbumin (OVA) peptide 323–329 Sigma Aldrich Inc. O1641 T cell proliferation assay
Mouse IFN-γ TaqMan probe ThermoFisher Scientific Mm01168134_m1 qRT-PCR
Mouse IL-12a TaqMan probe ThermoFisher Scientific Mm00434165 qRT-PCR
Mouse IL-12 p70 DuoSet ELISA R&D systems DY419-05 ELISA
Mouse EDN-1 ELISA RayBiotech ELM-EDN1-1 ELISA
TNF-α TaqMan probe ThermoFisher Scientific Mm00443258 qRT-PCR
Mouse TNF-α Quantikine ELISA Kit R&D systems MTA00B ELISA
IL-6 TaqMan probe ThermoFisher Scientific Mm00446190 qRT-PCR
Mouse IL-6 Quantikine ELISA Kit R&D systems M6000B ELISA
IL-23a TaqMan probe ThermoFisher Scientific Mm01160011 qRT-PCR
Mouse IL-23 DuoSet ELISA R&D systems DY1887-05 ELISA
IL-4 TaqMan probe ThermoFisher Scientific Mm99999154_m1 qRT-PCR
IL-10 TaqMan probe ThermoFisher Scientific Mm01288386_m1 qRT-PCR
TGF-β TaqMan probe ThermoFisher Scientific Mm01178820_m1 qRT-PCR
Anti-Heme Oxygenase 1 antibody Abcam ab13248 Western blotting
Anti-β-actin antibody Abcam ab8226 Western blotting
CFX96 Touch Real-Time PCR Detection System Bio-Rad Inc. qRT-PCR
BD FACSCalibur Cell Analyzer BD Biosciences Flow cytometry
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Steinman, R. M., Cohn, Z. A. Identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs of mice. I. Morphology, quantitation, tissue distribution. J Exp Med. 137 (5), 1142-1162 (1973).
  2. Inaba, K., et al. Efficient presentation of phagocytosed cellular fragments on the major histocompatibility complex class II products of dendritic cells. J Exp Med. 188 (11), 2163-2173 (1998).
  3. Banchereau, J., et al. Immunobiology of dendritic cells. Annu Rev Immunol. 18, 767-811 (2000).
  4. Sallusto, F., Lanzavecchia, A. Efficient presentation of soluble antigen by cultured human dendritic cells is maintained by granulocyte/macrophage colony-stimulating factor plus interleukin 4 and downregulated by tumor necrosis factor alpha. J Exp Med. 179 (4), 1109-1118 (1994).
  5. Hemmi, H., Akira, S. TLR signalling and the function of dendritic cells. Chem Immunol Allergy. 86, 120-135 (2005).
  6. Caux, C., et al. B70/B7-2 is identical to CD86 and is the major functional ligand for CD28 expressed on human dendritic cells. J Exp Med. 180 (5), 1841-1847 (1994).
  7. Chastain, E. M., Duncan, D. S., Rodgers, J. M., Miller, S. D. The role of antigen presenting cells in multiple sclerosis. Biochim Biophys Acta. 1812 (2), 265-274 (2011).
  8. Smeltz, R. B., Chen, J., Ehrhardt, R., Shevach, E. M. Role of IFN-gamma in Th1 differentiation: IFN-gamma regulates IL-18R alpha expression by preventing the negative effects of IL-4 and by inducing/maintaining IL-12 receptor beta 2 expression. J Immunol. 168 (12), 6165-6172 (2002).
  9. Gyulveszi, G., Haak, S., Becher, B. IL-23-driven encephalo-tropism and Th17 polarization during CNS-inflammation in vivo. Eur J Immunol. 39 (7), 1864-1869 (2009).
  10. Kronenberg, M., Rudensky, A. Regulation of immunity by self-reactive T cells. Nature. 435 (7042), 598-604 (2005).
  11. Boks, M. A., et al. IL-10-generated tolerogenic dendritic cells are optimal for functional regulatory T cell induction–a comparative study of human clinical-applicable DC. Clin Immunol. 142 (3), 332-342 (2012).
  12. Anderson, A. E., et al. Tolerogenic dendritic cells generated with dexamethasone and vitamin D3 regulate rheumatoid arthritis CD4+ T cells partly via transforming growth factor-beta1. Clin Exp Immunol. 187 (1), 113-123 (2017).
  13. Chauveau, C., et al. Heme oxygenase-1 expression inhibits dendritic cell maturation and proinflammatory function but conserves IL-10 expression. Blood. 106 (5), 1694-1702 (2005).
  14. Maldonado, R. A., von Andrian, U. H. How tolerogenic dendritic cells induce regulatory T cells. Adv Immunol. 108, 111-165 (2010).
  15. Schmidt, S., Nino-Castro, A., Schultze, J. Regulatory dendritic cells: there is more than just immune activation. Frontiers in Immunology. 3 (274), (2012).
  16. Hilkens, C. M., Isaacs, J. D., Thomson, A. W. Development of dendritic cell-based immunotherapy for autoimmunity. Int Rev Immunol. 29 (2), 156-183 (2010).
  17. Dhodapkar, M. V., Steinman, R. M. Antigen-bearing immature dendritic cells induce peptide-specific CD8(+) regulatory T cells in vivo in humans. Blood. 100 (1), 174-177 (2002).
  18. Dhodapkar, M. V., Steinman, R. M., Krasovsky, J., Munz, C., Bhardwaj, N. Antigen-specific inhibition of effector T cell function in humans after injection of immature dendritic cells. J Exp Med. 193 (2), 233-238 (2001).
  19. Giannoukakis, N., Phillips, B., Finegold, D., Harnaha, J., Trucco, M. Phase I (safety) study of autologous tolerogenic dendritic cells in type 1 diabetic patients. Diabetes Care. 34 (9), 2026-2032 (2011).
  20. Benham, H., et al. Citrullinated peptide dendritic cell immunotherapy in HLA risk genotype-positive rheumatoid arthritis patients. Sci Transl Med. 7 (290), 290ra287 (2015).
  21. Bell, G. M., et al. Autologous tolerogenic dendritic cells for rheumatoid and inflammatory arthritis. Ann Rheum Dis. 76 (1), 227-234 (2017).
  22. University Hospital, A. A “Negative” Dendritic Cell-based Vaccine for the Treatment of Multiple Sclerosis: a First-in-human Clinical Trial (MS tolDC). ClinicalTrials.gov. , (2015).
  23. Pujol, F. I. G. T. i. Tolerogenic Dendritic Cells as a Therapeutic Strategy for the Treatment of Multiple Sclerosis Patients (TOLERVIT-MS) (TOLERVIT-MS). ClinicalTrials.gov. , (2016).
  24. Varea, S. Treatment of Multiple Sclerosis and Neuromyelitis Optica With Regulatory Dendritic Cell: Clinical Trial Phase 1 B. ClinicalTrials.gov. , (2017).
  25. Jauregui-Amezaga, A., et al. Intraperitoneal Administration of Autologous Tolerogenic Dendritic Cells for Refractory Crohn’s Disease: A Phase I Study. J Crohns Colitis. 9 (12), 1071-1078 (2015).
  26. Mahnke, K., Schmitt, E., Bonifaz, L., Enk, A. H., Jonuleit, H. Immature, but not inactive: the tolerogenic function of immature dendritic cells. Immunol Cell Biol. 80 (5), 477-483 (2002).
  27. Lutz, M. B., Schuler, G. Immature, semi-mature and fully mature dendritic cells: which signals induce tolerance or immunity?. Trends Immunol. 23 (9), 445-449 (2002).
  28. Suciu-Foca, N., et al. Molecular characterization of allospecific T suppressor and tolerogenic dendritic cells: review. Int Immunopharmacol. 5 (1), 7-11 (2005).
  29. Wakkach, A., et al. Characterization of dendritic cells that induce tolerance and T regulatory 1 cell differentiation in vivo. Immunity. 18 (5), 605-617 (2003).
  30. Szeles, L., et al. 1,25-dihydroxyvitamin D3 is an autonomous regulator of the transcriptional changes leading to a tolerogenic dendritic cell phenotype. J Immunol. 182 (4), 2074-2083 (2009).
  31. Unger, W. W., Laban, S., Kleijwegt, F. S., vander Slik, A. R., Roep, B. O. Induction of Treg by monocyte-derived DC modulated by vitamin D3 or dexamethasone: differential role for PD-L1. Eur J Immunol. 39 (11), 3147-3159 (2009).
  32. Reichardt, W., et al. Impact of mammalian target of rapamycin inhibition on lymphoid homing and tolerogenic function of nanoparticle-labeled dendritic cells following allogeneic hematopoietic cell transplantation. J Immunol. 181 (7), 4770-4779 (2008).
  33. Woltman, A. M., et al. The effect of calcineurin inhibitors and corticosteroids on the differentiation of human dendritic cells. Eur J Immunol. 30 (7), 1807-1812 (2000).
  34. Hackstein, H., Thomson, A. W. Dendritic cells: emerging pharmacological targets of immunosuppressive drugs. Nat Rev Immunol. 4 (1), 24-34 (2004).
  35. Torres-Aguilar, H., Blank, M., Jara, L. J., Shoenfeld, Y. Tolerogenic dendritic cells in autoimmune diseases: crucial players in induction and prevention of autoimmunity. Autoimmun Rev. 10 (1), 8-17 (2010).
  36. Rutella, S., Danese, S., Leone, G. Tolerogenic dendritic cells: cytokine modulation comes of age. Blood. 108 (5), 1435-1440 (2006).
  37. Wei, H. J., Pareek, T. K., Liu, Q., Letterio, J. J. A unique tolerizing dendritic cell phenotype induced by the synthetic triterpenoid CDDO-DFPA (RTA-408) is protective against EAE. Sci Rep. 7 (1), 9886 (2017).
  38. van Etten, E., Mathieu, C. Immunoregulation by 1,25-dihydroxyvitamin D3: basic concepts. J Steroid Biochem Mol Biol. 97 (1-2), 93-101 (2005).
  39. Pan, J., et al. Dexamethasone inhibits the antigen presentation of dendritic cells in MHC class II pathway. Immunol Lett. 76 (3), 153-161 (2001).
  40. Zhu, J., Paul, W. E. Heterogeneity and plasticity of T helper cells. Cell Res. 20 (1), 4-12 (2010).
  41. Spirig, R., et al. TLR2 and TLR4 agonists induce production of the vasoactive peptide endothelin-1 by human dendritic cells. Mol Immunol. 46 (15), 3178-3182 (2009).
  42. Walton, E. L. Make immunological peace not war: Potential applications of tolerogenic dendritic cells. Biomed J. 40 (2), 77-79 (2017).
  43. Constantinescu, C. S., Farooqi, N., O’Brien, K., Gran, B. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) as a model for multiple sclerosis (MS). Br J Pharmacol. 164 (4), 1079-1106 (2011).
  44. Xu, Y., Zhan, Y., Lew, A. M., Naik, S. H., Kershaw, M. H. Differential development of murine dendritic cells by GM-CSF versus Flt3 ligand has implications for inflammation and trafficking. J Immunol. 179 (11), 7577-7584 (2007).
  45. Angelov, G. S., Tomkowiak, M., Marcais, A., Leverrier, Y., Marvel, J. Flt3 ligand-generated murine plasmacytoid and conventional dendritic cells differ in their capacity to prime naive CD8 T cells and to generate memory cells in vivo. J Immunol. 175 (1), 189-195 (2005).
  46. Lowes, M. A., et al. Increase in TNF-alpha and inducible nitric oxide synthase-expressing dendritic cells in psoriasis and reduction with efalizumab (anti-CD11a). Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (52), 19057-19062 (2005).
  47. Schnorrer, P., et al. The dominant role of CD8+ dendritic cells in cross-presentation is not dictated by antigen capture. Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (28), 10729-10734 (2006).
  48. Wang, W., Li, J., Wu, K., Azhati, B., Rexiati, M. Culture and Identification of Mouse Bone Marrow-Derived Dendritic Cells and Their Capability to Induce T Lymphocyte Proliferation. Med Sci Monit. 22, 244-250 (2016).
  49. Lutz, M. B., et al. An advanced culture method for generating large quantities of highly pure dendritic cells from mouse bone marrow. J Immunol Methods. 223 (1), 77-92 (1999).
  50. Griffin, M. D., et al. Dendritic cell modulation by 1alpha,25 dihydroxyvitamin D3 and its analogs: a vitamin D receptor-dependent pathway that promotes a persistent state of immaturity in vitro and in vivo. Proc Natl Acad Sci U S A. 98 (12), 6800-6805 (2001).
  51. Bscheider, M., Butcher, E. C. Vitamin D immunoregulation through dendritic cells. Immunology. 148 (3), 227-236 (2016).
  52. Castiello, L., et al. Monocyte-derived DC maturation strategies and related pathways: a transcriptional view. Cancer Immunol Immunother. 60 (4), 457-466 (2011).
  53. Decker, W. K., et al. Deficient T(H)-1 responses from TNF-alpha-matured and alpha-CD40-matured dendritic cells. J Immunother. 31 (2), 157-165 (2008).
  54. Longhi, M. P., et al. Dendritic cells require a systemic type I interferon response to mature and induce CD4+ Th1 immunity with poly IC as adjuvant. J Exp Med. 206 (7), 1589-1602 (2009).
  55. Link, H., Huang, Y. M., Xiao, B. G. Dendritic cells in experimental allergic encephalomyelitis and multiple sclerosis. J Neuroimmunol. 100 (1-2), 102-110 (1999).
  56. Leech, M. D., et al. Cutting edge: IL-6-dependent autoimmune disease: dendritic cells as a sufficient, but transient, source. J Immunol. 190 (3), 881-885 (2013).
  57. Saul, L., Besusso, D., Mellanby, R. J. LPS-matured CD11c+ bone marrow-derived dendritic cells can initiate autoimmune pathology with minimal injection site inflammation. Lab Anim. 51 (3), 292-300 (2017).
  58. Aghdami, N., Gharibdoost, F., Moazzeni, S. M. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) induced by antigen pulsed dendritic cells in the C57BL/6 mouse: influence of injection route. Exp Anim. 57 (1), 45-55 (2008).
  59. Wilson, H. L. Limitations with in vitro production of dendritic cells using cytokines. J Leukoc Biol. 75 (4), 600-603 (2004).
  60. Ni, K., O’Neill, H. C. Development of dendritic cells from GM-CSF-/- mice in vitro : GM-CSF enhances production and survival of cells. Dev Immunol. 8 (2), 133-146 (2001).

Tags

MurineTolerogenicDendritic CellsAutoimmune DisordersMultiple SclerosisImmunotherapyCell DevelopmentFunctional CharacterizationC57BL/6 MiceBone MarrowGM-CSFIL-4Cell CultureCell HarvestingCell LysisCell FilteringCell PlatingCell FeedingCell Incubation

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Cite This Article
Wei, H., Letterio, J. J., Pareek, T. K. Development and Functional Characterization of Murine Tolerogenic Dendritic Cells. J. Vis. Exp. (135), e57637, doi:10.3791/57637 (2018).
Download Citation
Reprints and Permissions

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image