Summary

Развития и функциональная характеристика мышиных Tolerogenic дендритных клеток

Published: May 18, 2018
doi:

Summary

Здесь мы представляем протокол к развивать и характеризуют tolerogenic дендритных клеток (TolDCs) и оценить их иммунотерапевтических полезности.

Abstract

Иммунная система работает, поддерживая туго баланс между координации реакции против иностранных антигенов и поддержание отвечать государства против себя антигены, а также антигены от синантропных организмов. Нарушение этого иммунного гомеостаза может привести к хроническому воспалению и развития аутоиммунных заболеваний. Дендритные клетки (DCs) являются профессиональные антиген представляющих клеток иммунной системы участвует в активации наивно T клетки инициировать иммунного ответа против иностранных антигенов. Однако DCs, также могут быть продифференцированы в TolDCs, которые действуют для поддержания и поощрения терпимости Т-клеток и подавить эффекторных клеток, способствуя развитию условий либо аутоиммунных или хронического воспаления. Недавние улучшения в нашем понимании TolDCs предполагает, что DC толерантность может быть достигнуто путем модулирования условий их дифференциация. Это явление привело к огромным ростом развивающихся TolDC терапии для многочисленных иммунных, причиненный из-за перерыва в иммунной толерантности. Успешные исследования в доклинических аутоиммунитета мышиных моделях дополнительно подтверждена иммунотерапевтических утилита TolDCs в лечении аутоиммунных заболеваний. Сегодня TolDCs стали перспективным иммунотерапевтических инструментом в клинике для восстановления иммунной толерантности в различных иммунных ориентации патогенных аутоиммунных реакций, оставляя нетронутыми защитного иммунитета. Хотя массив стратегии было предложено несколько лабораторий, чтобы побудить TolDCs, не существует согласия в характеристике сотовой и функциональных фенотип этих клеток. Этот протокол обеспечивает пошаговое руководство для развития костного мозга, полученных DCs в больших количествах, уникальный метод, используемый, чтобы отличить их в TolDCs с синтетическими тритерпеновые 2-cyano-3,12-dioxooleana-1,9-dien-28-oic кислота difluoro пропил Амид (CDDO-ОАФК) и методы, используемые для подтверждения их фенотип, включая анализ основных молекулярной подписей TolDCs. Наконец мы покажем метод для оценки TolDC функции путем проверки их иммуносупрессивные ответ в пробирке и в естественных условиях в доклинических модели рассеянного склероза.

Introduction

Дендритные клетки (DCs) являются неотъемлемой частью иммунной системы и были впервые обнаружены и характеризуется Ральф Стейнман и Zanvil кон в 1973 году как основной профессиональный антиген представляющих клеток1. Показано, что РСУ, играть важную роль в иммунной активации, представив обработанные антигенам Т-клетки и клетки B через комплексов гистосовместимости (MHC) в средних лимфоидных органов связать врожденная и адаптивного иммунитета2. В иммунной системе млекопитающих существует по крайней мере две категории DCs, которые были описаны как миелоидного DCs и плазмоцитарная контроллеров домена (PDC)3. Миелоидные DCs, также известный как обычных DCs (cDCs), характеризуются проявлением CD11c и можно дифференцировать как незрелых DCs (ОРС) в пробирке прогениторных клеток костного мозга и периферической крови моноциты с помощью Гранулоцитарно макрофагальный колониестимулирующий фактор (ГМ-КСФ) и Ил-4 в мышиных или человеческого вида, соответственно4.

Активация «угроза» сигналы, такие как патоген связанные молекулярные структуры (PAMP) или повреждения связанные молекулярные модели (сырой), будет управлять созревания ОРС к иммуногенность DCs как зрелые DCs (офицеров) через обязательную различных рецепторов признание шаблон DC поверхности5. Иммуногенность DCs далее премьер наивные Т-клеток пролиферации и дифференцировки через upregulation MHCII2, костимуляторных лигандами (CD80, CD86 и CD40)6, цитокины, и других растворимых медиаторов7. Каскад производства про воспалительных посредника от иммуногенных DCs имеет важное значение для дифференциации cytokine опосредованной Т-клеток. К примеру ИФН γ и Ил-12, необходимые для Th1 дифференцировки8 и IL-1, IL-6 и IL-23 имеют решающее значение для наивного поляризации Т-клеток к Th17 клетки9. Хотя пожилые DCs реагируют на иностранных антигены, неконтролируемая DC активации self-антигенами может привести к терпимости абляции и содействовать развитию аутоиммунных заболеваний путем создания аутореактивная T-клетки, чьи Активация приводит к разрушению тканей10 .

Недавние доклады представили четкие доказательства DC пластичности, подтверждается их способности взаимодействовать с различными подсказками в пределах их микроокружения ткани и дифференцироваться в различных эффекторных/подавитель DC подмножеств. Было показано, что противовоспалительное посредников, как Ил-1011, TGF-β12и Хо-113 играть важную роль в иммуносупрессия, вызывая tolerogenic DCs (TolDCs). Эти TolDCs приобретают функции регулирования и пресечения распространения клеток T14. Кроме того отсутствие сотрудничества стимуляции, DCs производство противовоспалительных медиаторов из TolDCs способствовать индукции регулирующих Т-клеток (Tregs) и также эффективно подавляют дифференциации и расширения Th1 и Th1715. В последние два десятилетия, терапевтический потенциал TolDCs было зарегистрировано несколько следователей. В этих исследованиях администрация экс vivo сгенерирована различных доклинических моделей аутоиммунных заболеваний16 TolDCs не только улучшили патологических симптомов, но и привели к развитию иммунной толерантности больных17 ,18. Интересно, что сегодня TolDCs терапии было рассматривать как альтернативные или добавочной подход для аутоиммунных заболеваний в нескольких клинических испытаний, в том числе тип 1 сахарный диабет19, ревматоидный артрит20, 21, рассеянный склероз (РС)22,23,24и болезнь Крона25.

Существует множество протоколов, которые были использованы для разработки TolDCs и несколько лаборатории сообщили методы для генерации и фенотипические характеристики TolDCs. Эти методы могут использоваться для герметизации создания TolDCs в пробирке из гемопоэтических прародителями и стабильно поддерживать их в tolerogenic государства в vivo26,27,28,29. ОРС могут быть преобразованы в TolDCs под воздействием различных фармакологических агентов иммуномодулирующих или противовоспалительных цитокинов. Например витамин D3 является хорошо известных фармакологических агент, известный для увеличения производства Ил-10 и подавляют секрецию Ил-12 от РСУ и тем самым увеличить их иммуносупрессивные функции30. Кроме того, когда DCs подвергаются мощной воспалительных раздражителей, таких как липополисахаридов (LPS), несколько фармакологических агентов, таких как дексаметазон31,32rapamycin и кортикостероиды33 было показано побудить TolDC фенотип путем сокращения поверхности выражение DC CD40, CD80, CD86 и MHCII34. Ил-10 и TGF-β-это было показано, что наиболее изучены противовоспалительных цитокинов побудить DC терпимости35 и сопутствующей подверженности обоих этих цитокинов побудить tolerogenic фенотип в DCs36.

Начиная с tolerogenic, DC определяется функциональных характеристик, а не фенотипические маркеры, есть большой необходимо разработать согласованный метод для сотовых и функциональных характеристик TolDCs. Кроме того, строгого и последовательного протокола должен быть создан для постоянной оценки и характеристика tolerogenic DC фенотип, если мы хотим эффективно и можно воспроизвести сравнить новых агентов способность вызывать TolDC фенотип в Лаборатория. Здесь мы предоставляем подробный протокол с шаг за шагом методы изолировать ОРС из гемопоэтических прародителями мышей и впоследствии анализировать эффективность новых агентов по оценке для их способность преобразовать ОРС в TolDCs, обеспечивая надежный функциональные и фенотипические характеристики TolDCs в пробирке и в естественных условиях. Это описание включает метод разработки характеризовать TolDCs их поверхности лигандов, цитокинового профиля и иммуносупрессивные функции в пробирке. Мы также предоставляем пример метода, позволяющего исследовать потенциал терапевтического применения этих TolDCs в доклинических модели МС, Экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (EAE). Этот протокол будет помочь следователям для оценки новых агентов способность содействовать индукции TolDCs и облегчит усилия по расширению сферы развития терапевтического TolDC.

Protocol

Все исследования были проведены в соответствии с процедурами, утвержденными случае Вестерн Резерв школы медицины университета в институциональный уход животных и использования Комитетом. 1. Подготовьте костного мозга-производные дендритных клеток (BMDCs) Стерилизо?…

Representative Results

Дифференциация и выбор BMDCs: Клетки-предшественники костного мозга были культивировали в полной RPMI среде в присутствии ГМ-КСФ и Ил-4, чтобы дифференцироваться в ОРС в течение 7 дней (рис. 1A). День 1 клетки были небол…

Discussion

В этом документе описывается эффективный протокол, который может использоваться для герметизации для создания ОРС и различать их впоследствии в TolDCs, и мы предлагаем, что это может применяться для оценки новых молекулярных целевых агентов способность заставить TolDC фенотип. Как описано …

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Мы благодарим повестования Фармацевтика за предоставление CDDO-ОАФК. Мы также признаем поддержку Джейн и ли Сейдман кафедры педиатрического рака инноваций (Джон Letterio). Эта работа была поддержана Министерством обороны [W81XWH-12-1-0452]; Энджи Фаулер подростков и молодых взрослых рака исследовательская инициатива в случае всеобъемлющем онкологический центр; и Каллахан выпускник Академии награду за Hsi Цзюй Вэй F.J. Каллахан фонда.

Materials

CDDO-DFPA (RTA-408) Reata Pharmaceuticals in house synthesis Cell culture
Mouse GM-CSF Peprotech Inc. 315-03 BMDC differentiation
Mouse IL-4 Peprotech Inc. 214-14 BMDC differentiation
Lipopolysaccharides (LPS) Sigma Aldrich Inc. L2880 Cell culture
β-mercaptoethanol Sigma Aldrich Inc. 516732 Cell culture
Pertussis toxin (PTX) R&D systems 3097 EAE induction
MOG (35–55) peptide 21stCentury Biochemicals in house synthesis EAE induction
Trypan blue Gibco, Life Technologies 15250-061 Cell culture
RPMI-1640 plus L-glutamine ThermoFisher Scientific 11875-093 Cell culture
Non-essential amino acid (100X) ThermoFisher Scientific 11140050 Cell culture
HEPES ThermoFisher Scientific 15630080 Cell culture
penicillin/streptomycin ThermoFisher Scientific 15140122 Cell culture
40 μm cell strainer Corning 352340 Cell isolation
PE-conjugated CD80 BD Biosciences 557227 Flow cytometry
PE-conjugated CD86 BD Biosciences 555665 Flow cytometry
PE-conjugated PD-L1 BioLegend 124307 Flow cytometry
APC-conjugated MHCII Miltenyi Biotec Inc. 130-112-388 Flow cytometry
APC-conjugated CD11c BD Biosciences 340544 Flow cytometry
Isotype matched PE Miltenyi Biotec Inc. 130-091-835 Flow cytometry
Isotype matched APC Miltenyi Biotec Inc. 130-091-836 Flow cytometry
CFSE BioLegend 423801 T cell proliferation assay
Pan dendritic cell isolation kit Miltenyi Biotec Inc. 130-100-875 T cell proliferation assay
FcR Blocking Reagent Miltenyi Biotec Inc. 130-100-875 T cell proliferation assay
Pan Dendritic Cell Biotin-Antibody Cocktail Miltenyi Biotec Inc. 130-100-875 T cell proliferation assay
Anti-Biotin MicroBeads Miltenyi Biotec Inc. 130-100-875 T cell proliferation assay
CD4+ T cell isolation kit Miltenyi Biotec Inc. 130-104-454 T cell proliferation assay
CD4+ T cell Biotin-Antibody Cocktail Miltenyi Biotec Inc. 130-104-454 T cell proliferation assay
Anti-Biotin MicroBeads Miltenyi Biotec Inc. 130-104-454 T cell proliferation assay
ACK lysing buffer ThermoFisher Scientific A1049201 BMDC differentiation
1 ml syringe BD Biosciences 309626 T cell proliferation assay
3 ml syringe BD Biosciences 309588 BMDC differentiation
25G needle BD Biosciences 309626 T cell proliferation assay
23G needle BD Biosciences 309588 BMDC differentiation
BSA Sigma Aldrich Inc. A2058 T cell proliferation assay
EDTA ThermoFisher Scientific 15575020 T cell proliferation assay
LS Column Miltenyi Biotec Inc. 130-042-401 T cell proliferation assay
Pre-Separation Filter Miltenyi Biotec Inc. 130-095-823 T cell proliferation assay
collagenase D Sigma Aldrich Inc. 11088858001 T cell proliferation assay
HBSS ThermoFisher Scientific 14025076 T cell proliferation assay
ovalbumin (OVA) peptide 323–329 Sigma Aldrich Inc. O1641 T cell proliferation assay
Mouse IFN-γ TaqMan probe ThermoFisher Scientific Mm01168134_m1 qRT-PCR
Mouse IL-12a TaqMan probe ThermoFisher Scientific Mm00434165 qRT-PCR
Mouse IL-12 p70 DuoSet ELISA R&D systems DY419-05 ELISA
Mouse EDN-1 ELISA RayBiotech ELM-EDN1-1 ELISA
TNF-α TaqMan probe ThermoFisher Scientific Mm00443258 qRT-PCR
Mouse TNF-α Quantikine ELISA Kit R&D systems MTA00B ELISA
IL-6 TaqMan probe ThermoFisher Scientific Mm00446190 qRT-PCR
Mouse IL-6 Quantikine ELISA Kit R&D systems M6000B ELISA
IL-23a TaqMan probe ThermoFisher Scientific Mm01160011 qRT-PCR
Mouse IL-23 DuoSet ELISA R&D systems DY1887-05 ELISA
IL-4 TaqMan probe ThermoFisher Scientific Mm99999154_m1 qRT-PCR
IL-10 TaqMan probe ThermoFisher Scientific Mm01288386_m1 qRT-PCR
TGF-β TaqMan probe ThermoFisher Scientific Mm01178820_m1 qRT-PCR
Anti-Heme Oxygenase 1 antibody Abcam ab13248 Western blotting
Anti-β-actin antibody Abcam ab8226 Western blotting
CFX96 Touch Real-Time PCR Detection System Bio-Rad Inc. qRT-PCR
BD FACSCalibur Cell Analyzer BD Biosciences Flow cytometry

References

  1. Steinman, R. M., Cohn, Z. A. Identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs of mice. I. Morphology, quantitation, tissue distribution. J Exp Med. 137 (5), 1142-1162 (1973).
  2. Inaba, K., et al. Efficient presentation of phagocytosed cellular fragments on the major histocompatibility complex class II products of dendritic cells. J Exp Med. 188 (11), 2163-2173 (1998).
  3. Banchereau, J., et al. Immunobiology of dendritic cells. Annu Rev Immunol. 18, 767-811 (2000).
  4. Sallusto, F., Lanzavecchia, A. Efficient presentation of soluble antigen by cultured human dendritic cells is maintained by granulocyte/macrophage colony-stimulating factor plus interleukin 4 and downregulated by tumor necrosis factor alpha. J Exp Med. 179 (4), 1109-1118 (1994).
  5. Hemmi, H., Akira, S. TLR signalling and the function of dendritic cells. Chem Immunol Allergy. 86, 120-135 (2005).
  6. Caux, C., et al. B70/B7-2 is identical to CD86 and is the major functional ligand for CD28 expressed on human dendritic cells. J Exp Med. 180 (5), 1841-1847 (1994).
  7. Chastain, E. M., Duncan, D. S., Rodgers, J. M., Miller, S. D. The role of antigen presenting cells in multiple sclerosis. Biochim Biophys Acta. 1812 (2), 265-274 (2011).
  8. Smeltz, R. B., Chen, J., Ehrhardt, R., Shevach, E. M. Role of IFN-gamma in Th1 differentiation: IFN-gamma regulates IL-18R alpha expression by preventing the negative effects of IL-4 and by inducing/maintaining IL-12 receptor beta 2 expression. J Immunol. 168 (12), 6165-6172 (2002).
  9. Gyulveszi, G., Haak, S., Becher, B. IL-23-driven encephalo-tropism and Th17 polarization during CNS-inflammation in vivo. Eur J Immunol. 39 (7), 1864-1869 (2009).
  10. Kronenberg, M., Rudensky, A. Regulation of immunity by self-reactive T cells. Nature. 435 (7042), 598-604 (2005).
  11. Boks, M. A., et al. IL-10-generated tolerogenic dendritic cells are optimal for functional regulatory T cell induction–a comparative study of human clinical-applicable DC. Clin Immunol. 142 (3), 332-342 (2012).
  12. Anderson, A. E., et al. Tolerogenic dendritic cells generated with dexamethasone and vitamin D3 regulate rheumatoid arthritis CD4+ T cells partly via transforming growth factor-beta1. Clin Exp Immunol. 187 (1), 113-123 (2017).
  13. Chauveau, C., et al. Heme oxygenase-1 expression inhibits dendritic cell maturation and proinflammatory function but conserves IL-10 expression. Blood. 106 (5), 1694-1702 (2005).
  14. Maldonado, R. A., von Andrian, U. H. How tolerogenic dendritic cells induce regulatory T cells. Adv Immunol. 108, 111-165 (2010).
  15. Schmidt, S., Nino-Castro, A., Schultze, J. Regulatory dendritic cells: there is more than just immune activation. Frontiers in Immunology. 3 (274), (2012).
  16. Hilkens, C. M., Isaacs, J. D., Thomson, A. W. Development of dendritic cell-based immunotherapy for autoimmunity. Int Rev Immunol. 29 (2), 156-183 (2010).
  17. Dhodapkar, M. V., Steinman, R. M. Antigen-bearing immature dendritic cells induce peptide-specific CD8(+) regulatory T cells in vivo in humans. Blood. 100 (1), 174-177 (2002).
  18. Dhodapkar, M. V., Steinman, R. M., Krasovsky, J., Munz, C., Bhardwaj, N. Antigen-specific inhibition of effector T cell function in humans after injection of immature dendritic cells. J Exp Med. 193 (2), 233-238 (2001).
  19. Giannoukakis, N., Phillips, B., Finegold, D., Harnaha, J., Trucco, M. Phase I (safety) study of autologous tolerogenic dendritic cells in type 1 diabetic patients. Diabetes Care. 34 (9), 2026-2032 (2011).
  20. Benham, H., et al. Citrullinated peptide dendritic cell immunotherapy in HLA risk genotype-positive rheumatoid arthritis patients. Sci Transl Med. 7 (290), 290ra287 (2015).
  21. Bell, G. M., et al. Autologous tolerogenic dendritic cells for rheumatoid and inflammatory arthritis. Ann Rheum Dis. 76 (1), 227-234 (2017).
  22. University Hospital, A. A “Negative” Dendritic Cell-based Vaccine for the Treatment of Multiple Sclerosis: a First-in-human Clinical Trial (MS tolDC). ClinicalTrials.gov. , (2015).
  23. Pujol, F. I. G. T. i. Tolerogenic Dendritic Cells as a Therapeutic Strategy for the Treatment of Multiple Sclerosis Patients (TOLERVIT-MS) (TOLERVIT-MS). ClinicalTrials.gov. , (2016).
  24. Varea, S. Treatment of Multiple Sclerosis and Neuromyelitis Optica With Regulatory Dendritic Cell: Clinical Trial Phase 1 B. ClinicalTrials.gov. , (2017).
  25. Jauregui-Amezaga, A., et al. Intraperitoneal Administration of Autologous Tolerogenic Dendritic Cells for Refractory Crohn’s Disease: A Phase I Study. J Crohns Colitis. 9 (12), 1071-1078 (2015).
  26. Mahnke, K., Schmitt, E., Bonifaz, L., Enk, A. H., Jonuleit, H. Immature, but not inactive: the tolerogenic function of immature dendritic cells. Immunol Cell Biol. 80 (5), 477-483 (2002).
  27. Lutz, M. B., Schuler, G. Immature, semi-mature and fully mature dendritic cells: which signals induce tolerance or immunity?. Trends Immunol. 23 (9), 445-449 (2002).
  28. Suciu-Foca, N., et al. Molecular characterization of allospecific T suppressor and tolerogenic dendritic cells: review. Int Immunopharmacol. 5 (1), 7-11 (2005).
  29. Wakkach, A., et al. Characterization of dendritic cells that induce tolerance and T regulatory 1 cell differentiation in vivo. Immunity. 18 (5), 605-617 (2003).
  30. Szeles, L., et al. 1,25-dihydroxyvitamin D3 is an autonomous regulator of the transcriptional changes leading to a tolerogenic dendritic cell phenotype. J Immunol. 182 (4), 2074-2083 (2009).
  31. Unger, W. W., Laban, S., Kleijwegt, F. S., vander Slik, A. R., Roep, B. O. Induction of Treg by monocyte-derived DC modulated by vitamin D3 or dexamethasone: differential role for PD-L1. Eur J Immunol. 39 (11), 3147-3159 (2009).
  32. Reichardt, W., et al. Impact of mammalian target of rapamycin inhibition on lymphoid homing and tolerogenic function of nanoparticle-labeled dendritic cells following allogeneic hematopoietic cell transplantation. J Immunol. 181 (7), 4770-4779 (2008).
  33. Woltman, A. M., et al. The effect of calcineurin inhibitors and corticosteroids on the differentiation of human dendritic cells. Eur J Immunol. 30 (7), 1807-1812 (2000).
  34. Hackstein, H., Thomson, A. W. Dendritic cells: emerging pharmacological targets of immunosuppressive drugs. Nat Rev Immunol. 4 (1), 24-34 (2004).
  35. Torres-Aguilar, H., Blank, M., Jara, L. J., Shoenfeld, Y. Tolerogenic dendritic cells in autoimmune diseases: crucial players in induction and prevention of autoimmunity. Autoimmun Rev. 10 (1), 8-17 (2010).
  36. Rutella, S., Danese, S., Leone, G. Tolerogenic dendritic cells: cytokine modulation comes of age. Blood. 108 (5), 1435-1440 (2006).
  37. Wei, H. J., Pareek, T. K., Liu, Q., Letterio, J. J. A unique tolerizing dendritic cell phenotype induced by the synthetic triterpenoid CDDO-DFPA (RTA-408) is protective against EAE. Sci Rep. 7 (1), 9886 (2017).
  38. van Etten, E., Mathieu, C. Immunoregulation by 1,25-dihydroxyvitamin D3: basic concepts. J Steroid Biochem Mol Biol. 97 (1-2), 93-101 (2005).
  39. Pan, J., et al. Dexamethasone inhibits the antigen presentation of dendritic cells in MHC class II pathway. Immunol Lett. 76 (3), 153-161 (2001).
  40. Zhu, J., Paul, W. E. Heterogeneity and plasticity of T helper cells. Cell Res. 20 (1), 4-12 (2010).
  41. Spirig, R., et al. TLR2 and TLR4 agonists induce production of the vasoactive peptide endothelin-1 by human dendritic cells. Mol Immunol. 46 (15), 3178-3182 (2009).
  42. Walton, E. L. Make immunological peace not war: Potential applications of tolerogenic dendritic cells. Biomed J. 40 (2), 77-79 (2017).
  43. Constantinescu, C. S., Farooqi, N., O’Brien, K., Gran, B. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) as a model for multiple sclerosis (MS). Br J Pharmacol. 164 (4), 1079-1106 (2011).
  44. Xu, Y., Zhan, Y., Lew, A. M., Naik, S. H., Kershaw, M. H. Differential development of murine dendritic cells by GM-CSF versus Flt3 ligand has implications for inflammation and trafficking. J Immunol. 179 (11), 7577-7584 (2007).
  45. Angelov, G. S., Tomkowiak, M., Marcais, A., Leverrier, Y., Marvel, J. Flt3 ligand-generated murine plasmacytoid and conventional dendritic cells differ in their capacity to prime naive CD8 T cells and to generate memory cells in vivo. J Immunol. 175 (1), 189-195 (2005).
  46. Lowes, M. A., et al. Increase in TNF-alpha and inducible nitric oxide synthase-expressing dendritic cells in psoriasis and reduction with efalizumab (anti-CD11a). Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (52), 19057-19062 (2005).
  47. Schnorrer, P., et al. The dominant role of CD8+ dendritic cells in cross-presentation is not dictated by antigen capture. Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (28), 10729-10734 (2006).
  48. Wang, W., Li, J., Wu, K., Azhati, B., Rexiati, M. Culture and Identification of Mouse Bone Marrow-Derived Dendritic Cells and Their Capability to Induce T Lymphocyte Proliferation. Med Sci Monit. 22, 244-250 (2016).
  49. Lutz, M. B., et al. An advanced culture method for generating large quantities of highly pure dendritic cells from mouse bone marrow. J Immunol Methods. 223 (1), 77-92 (1999).
  50. Griffin, M. D., et al. Dendritic cell modulation by 1alpha,25 dihydroxyvitamin D3 and its analogs: a vitamin D receptor-dependent pathway that promotes a persistent state of immaturity in vitro and in vivo. Proc Natl Acad Sci U S A. 98 (12), 6800-6805 (2001).
  51. Bscheider, M., Butcher, E. C. Vitamin D immunoregulation through dendritic cells. Immunology. 148 (3), 227-236 (2016).
  52. Castiello, L., et al. Monocyte-derived DC maturation strategies and related pathways: a transcriptional view. Cancer Immunol Immunother. 60 (4), 457-466 (2011).
  53. Decker, W. K., et al. Deficient T(H)-1 responses from TNF-alpha-matured and alpha-CD40-matured dendritic cells. J Immunother. 31 (2), 157-165 (2008).
  54. Longhi, M. P., et al. Dendritic cells require a systemic type I interferon response to mature and induce CD4+ Th1 immunity with poly IC as adjuvant. J Exp Med. 206 (7), 1589-1602 (2009).
  55. Link, H., Huang, Y. M., Xiao, B. G. Dendritic cells in experimental allergic encephalomyelitis and multiple sclerosis. J Neuroimmunol. 100 (1-2), 102-110 (1999).
  56. Leech, M. D., et al. Cutting edge: IL-6-dependent autoimmune disease: dendritic cells as a sufficient, but transient, source. J Immunol. 190 (3), 881-885 (2013).
  57. Saul, L., Besusso, D., Mellanby, R. J. LPS-matured CD11c+ bone marrow-derived dendritic cells can initiate autoimmune pathology with minimal injection site inflammation. Lab Anim. 51 (3), 292-300 (2017).
  58. Aghdami, N., Gharibdoost, F., Moazzeni, S. M. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) induced by antigen pulsed dendritic cells in the C57BL/6 mouse: influence of injection route. Exp Anim. 57 (1), 45-55 (2008).
  59. Wilson, H. L. Limitations with in vitro production of dendritic cells using cytokines. J Leukoc Biol. 75 (4), 600-603 (2004).
  60. Ni, K., O’Neill, H. C. Development of dendritic cells from GM-CSF-/- mice in vitro : GM-CSF enhances production and survival of cells. Dev Immunol. 8 (2), 133-146 (2001).

Play Video

Cite This Article
Wei, H., Letterio, J. J., Pareek, T. K. Development and Functional Characterization of Murine Tolerogenic Dendritic Cells. J. Vis. Exp. (135), e57637, doi:10.3791/57637 (2018).

View Video