Summary
이 연구에서 우리 복 부 비행기 모터 조정 마우스 모델 (예를 들어, endophilin 돌연변이 나이 진출 neurodegeneration의 진행에 미묘한 변화를 모니터링 하 이미징 기반 운동학 걸음 걸이 분석의 사용을 보여 줍니다. 마우스 라인)입니다.
Abstract
모터 동작 테스트는 일반적으로 설치류 모델의 기능적인 관련성을 결정 하는 데 사용 됩니다 고 새로 테스트를이 동물 치료를 개발 했다. 특히, 걸음 걸이 분석 탈환 질병 관련 고기 인간 환자에서 특히 파 킨 슨 병 (PD), Alzheimer의 질병 (광고), 루 모터 능력에 영향을 주는 신경 퇴행 성 질환에서에서 관찰 되는 수 옆 경화 증 (ALS), 그리고 다른 사람입니다. 초기 연구에서이 라인을 따라, 걸음 걸이 매개 변수 측정 힘들고 않는 제어 요소에 의존 했다 (예를 들어, 실행 속도, 연속 실행). 복 부 평면 영상 (VPI) 시스템의 개발이 했다 설치류에이 방법은 모터 동작의 평가 대 한 유용한 도구를 만드는 대규모에서 걸음 걸이 분석을 수행 가능. 여기, 선물이 운동학 걸음 걸이 분석을 사용 하 여 검사 neurodegeneration;의 마우스 모델에서 모터 적자의 연령에 따라 진행 하는 방법의 심층 프로토콜 예를 들어 마우스 라인 endophilin는 점차적으로 신경 손상이 나이, 증가의 감소 수준으로 사용 됩니다.
Introduction
신경 퇴행 성 질환 환자, 가족, 그리고 사회에 상당한 부담을 부과 하 고 평균 수명이 증가 함에 따라 더욱 우려 될 것 이다 세계 인구 나이 계속. 신경 퇴행 성 질환의 가장 흔한 증상 중 하나는 균형 및 이동성 문제입니다. 따라서, 노화 포유류 모터 동작 (예: 쥐)의 특성화 모델, 또는 신경 고기를 보여주는 모델 이다 vivo에서 관련성 특정 동물 모델, 또는 치료를 설명 하는 유용한 도구 치료 질병 증상을 개선 하는 것을 목표로입니다. 거의 모든 접근 신경 퇴행 성 질환을 치료 하는 궁극적으로 인 간에 있는 임상 시험의 개시 전에 동물 모델에서 테스트 필요 합니다. 따라서, 그것은 중요 한 생체 외에서 모델에 잠재적인 보였다, 후보 약물 수 있도록 일관 되 게 나이 진행에 따라 질병 관련 고기 척도를 사용할 수 있는 안정적이 고 재현 동작 테스트를 효과적으로 살아있는 동물에서 표현 형 개량.
운동학 적 보 행 분석, VPI (또한 불린된 복 부 비행기 videography)1,2에 의해 실행 될 수 있는 설치류에서 모터 동작 평가입니다. 이 설립된 메서드는 투명 하 고 자동화 된 디딜 방 아 벨트1,2,,34위에 걷는 설치류의 아래쪽의 연속 녹음에 대문자로 바꿉니다. 비디오 피드 데이터의 분석이 만듭니다 "디지털 발 인쇄" 동적으로 하 고 확실 하 게 정리 케 일 외 에 의해 원래 설명으로 설치류의 걷는 패턴, 모든 4 개의 사지의 2 , Amende 외. 3.
이미징 기반 걸음 걸이 분석의 원리는 각 개별 발에 대 한 시간 동안 디딜 방 아 벨트를 접촉 하 여 발 면적을 측정 이다. 모든 입장은 (브레이크 단계)에서 발 지역과 (추진 단계)에서 발 지역에서 감소의 증가 의해 표시 됩니다. 이것은 신호가 감지 되는 스윙 단계 옵니다. 스윙과 함께 자세는 보 폭을 형성합니다. 걸음 걸이 역학 매개 변수 외에 자세 매개 변수 또한 기록 된 비디오에서 추출할 수 있습니다. 모범적인 매개 변수 및 그들의 정의 표 1 에 나열 된 고 자세 폭 (남서, 주 둥이-꼬리 축 앞 또는 뒷 발에서 결합 된 거리)를 포함, 길이 (SL; 같은 발의 두 진보 사이의 평균 거리), 보 폭 또는 발 배치 각도 (주 둥이-꼬리 축 발의 각도). 자세와 걸음 걸이 역학 데이터 그리기 결론 (자세 매개 변수 및 여러 단계를 통해 그들의 변화)에 의해 동물 균형 및 조정 (걸음 걸이 역학 매개 변수)에 의해 허용. 증 계수 (SL 가변성 [(최대 계산 같은 다른 매개 변수 SL−min입니다. SL) / SL을 의미]), 뒷 다리 공유 입장 시간 (두 뒷 다리 사지는 벨트와 접촉 시간), 발 (전체 면적의 이륙에 발을 전체 입장에서 벨트에 발) 추출도 수 끌어서 다양 한 신경 디 변경 될 보고 되었습니다 또는 sease 모델5,6,,78 ( 표 1참조).
| 매개 변수 | 단위 | 정의 |
| 스윙 시간 | ms | 앞 발은 벨트 접촉 기간 |
| 입장 시간 | ms | 발 벨트 접촉 하는 기간 |
| % 브레이크 | 입장 시간 % | 입장 시간 발 브레이크 단계에서의 비율 |
| % 추진 | 입장 시간 % | 입장 시간 발 추진 단계에서의 비율 |
| 자세 폭 | cm | 주 둥이-꼬리 축 앞 또는 뒷 발에서 결합된 거리 |
| 보 폭 길이 | cm | 같은 발의 두 진보 사이의 평균 거리 |
| 보 폭 주파수 | 진보/s | 초당 완료 진보 수 |
| 발 배치 각도 | deg | 동물의 주 둥이-꼬리 축에 관하여 발의 각도 |
| 증 계수 | 거리 | [(Max SL-min SL)/평균 SL SL 변화 계산] |
| % 공유 자세 | 자세의 % | 뒷 다리 공유 입장 시간; 두 뒷 다리 사지 벨트 접촉 동시에 시간 |
| 드래그를 발 | m m2 | 이륙에 발을 전체 입장에서 벨트에 발의 총 면적 |
| 사지 로드 | cm2 | MAX dA/dT; 주요 단계에서 발 영역의 변화의 최대 속도 |
| 단계 각도 변화 | deg | SL 및 소프트웨어의 기능으로 표준 편차는 뒷 다리 사이의 각도의 발 |
표 1입니다. 복 부 비행기 상상에 의해 테스트할 수 있는 주요 보 행 매개 변수 정의입니다.
신경 퇴행 성 질환에 대 한 설치류 모델의 모터 동작 평가 주어진된 나이에 특정 모델의 표현 형의 심각도 따라 도전적 될 수 있다. 여러 질병, 가장 눈에 띄게 PD, 쇼 강한 모터 동작 (운동) 적자, 환자와 동물 모델 둘 다. PD에 4 개의 주요 증상 중 하나 bradykinesia 노화와 함께 진행 하 고 PD9의 초기 단계에서 이미 심한 보 행 장애에 명단입니다. 급성 PD 모델, 설치류 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridin (MPTP), 치료의 연구는 이미 VPI 걸음 걸이 분석10,,1112를 사용 했습니다. 그러나,이 모델의 심각한 성격을 감안할 때, 이러한 연구 할 다루지 모터 적자의 연령 관련 진행. 여러 최근 연구 예13,14,15, 나이 발전으로 질병의 진행을 이해의 관련성을 강조 신경 퇴행 성 변화, 세 쥐에서 걸음 걸이 분석 실시 .
모터 적자 뿐만 아니라 신경 퇴행 성 질환의 동물 모델 종종 어려움 시험 작업에 초점을 맞추고 있고 나이 진출 특히 저명한 인지 장애를 보여. 이러한 표현 형 모터 동작 테스트의 결과 영향을 미칠 수 있습니다. 즉, 모터 적자, rotarod 테스트16, 검사를 가장 널리 사용 되는 테스트 중 하나는 인식, 관심, 그리고 스트레스17,18에 의존 합니다. 자동화 된 디딜 방 아에 걸어 지는 또한 이러한 요인에 따라 달라 집니다, 그러나는 더 표준화 된 기능으로 기록된 읽어 실행 하 고 훨씬 덜 변경된 인식에 의해 영향을. 스트레스와 관심의 효과 전반적인 실행 능력에만 스트레스, 그리고 관심19,20, SL에 대 한 스윙/입장 시간 같은 특정 매개 변수를 볼 수 있습니다.
운동학 걸음 걸이 분석 접근 더 설치류 모델에 대 한 도전을 조정 하는 옵션의 이점을 제공 합니다. 가변 각도와 속도 디딜 방 아 0.1-99.9 cm에서에서 속도 걸어 수 있습니다/s, 그렇게 심한 걷는 장애가 있는 설치류 느린 속도로 실행할 수 있습니다 (~ 10 cm/s). 비 장애인 동물 빠른 실행 속도에서 측정 될 수 있다 (30-40 cm/s). 시험된 동물 특정 속도에서 실행할 수 여부의 관찰 자체 결과를 제공 합니다. 또한, 설치류 경사, 또는 감소, 아래로 기우는 각도의 도움으로 원하는 각도에 디딜 방 아 또는 마우스 또는 쥐 뒷 다리 사지를 가중치 썰매를 연결 하 여 실행 또한 도전 될 수 있습니다.
환자에 있는 변이 단일 단백질의 다 수의 연구, 이외에 결함이 endocytosis 과정과 neurodegeneration13,,2122, 사이 연결의 최근 증가 인식 23,,2425,26,27,28. Endophilin-A의 감소 된 수준의 모델 마우스 (이제부터 endophilin), 두 clathrin 중재 된 endocytosis13,,2129,30,31 에서 키 플레이어 , 32 , 33 , 45 와 clathrin 독립적인 endocytosis34, neurodegeneration 및 연령에 따라 장애 운동 활동13,21보여을 발견 했다. 3 유전자 인코딩 endophilin 단백질의 가족: 1, endophilin 2, endophilin 및 endophilin 3. 특히, endophilin 단백질의 고갈에서 유래 하는 형 수에 따라 크게 차이가 없는 endophilin 유전자13,21의. 테스트에 대 한 3 endophilins에 대 한 단일 코 아무 명백한 표현 형을 보여줍니다 동안 트리플 녹아웃 (KO) 모든 endophilin 유전자의 치명적인 출생, 그리고 모두 endophilin 1, 2 번 창 하 고 출생 후 3 주 이내에 죽을 실패 없이 마우스 후 불과 몇 시간, 조건21. 다른 endophilin 돌연변이 genotypes 수명 감소를 표시 하 고 나이13증가 함께 모터 장애를 개발. Endophilin 1KO-2HT-3KO 쥐 디스플레이 걷는 변경 및 모터 조정 문제 (운동학 걸음 걸이 분석 및 rotarod에 의해 테스트)으로 3 개월, 그들의 littermates, 동안에 이미 endophilin 1KO 2WT 3KO 동물, 중요 한 표시 나이13의 15 개월만에 모터 조정의 감소. 로 인해 이러한 모델에 고기의 광대 한 다양성, 그것은 식별 하 고 다양 한 과제에 해당 하는 나이 뿐만 아니라 동물의 모터 및 인지 능력, 통합할 수 있는 테스트를 적용 하는 데 필요한. 여기, 우리 선발 실험 절차 개시 및 신경 퇴행 성 변화 (즉, endophilin 돌연변이)를 표시 하는 마우스 모델에서 모터 손상의 진행을 평가 하기 위해 운동학 걸음 걸이 분석에 활용. 이 다양 한 연령과 운동 장애의 다른 심각도에 걸음 걸이 파라미터를 측정을 포함 됩니다.
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Protocol
여기에서 보고 된 모든 동물 실험 동물 복지에 대 한 유럽 지침에 따라 실시 하 고 있습니다 (2010/63/EU) Niedersächsisches Landesamt 위한 Verbraucherschutz und Lebensmittelsicherheit (LAVES), 등록 번호 14에 의해 승인 / 1701입니다.
1. 연구 설계
- 동물 행동 작업 필요로 신중 하 게 계획, 실험을 디자인 하는 동안 다음 매개 변수를 고려 하십시오.
- 그룹 당 필요한 동물의 수입니다.
- 사용 통계 소프트웨어 (예를 들어, 패스, EDA, 또는 GPower) 필수 그룹 크기를 계산 합니다.
참고: 그룹 크기 동물 사이의 표현 형의 변화에 따라 달라 집니다. 운동학 걸음 걸이 분석을 위해 쥐의 수는 보통 10-20 그룹 당.
- 사용 통계 소프트웨어 (예를 들어, 패스, EDA, 또는 GPower) 필수 그룹 크기를 계산 합니다.
- 실험 동물의 섹스입니다.
- 동물 스트레인에 따라 실험에 스 트로 겐 레벨의 효과를 고려 하십시오.
참고: 많은 행동 연구 실험에 스 트로 겐 레벨의 영향을 피하기 위해 남성에 초점. 이러한 영향은 동물 배경 스트레인에 따라 다소 강하다. - 남녀 모두 사용 될 경우 섹스 영향에 대 한 테스트 하 고 필요한 때에 독립적으로 두 남녀를 평가.
- 동물 스트레인에 따라 실험에 스 트로 겐 레벨의 효과를 고려 하십시오.
- 실험 동물의 나 이입니다.
- 성인 동물 (2 개월, 이상)를 사용 하 여 경우에 1 회 포인트 필요 하다.
- 나이 진출 모터 동작에서 변화 공부 하는 때 몇 시간 포인트를 선택 합니다. 가장 이른 가능한 시간 포인트는 1 개월, 마우스는 그들의 어머니에서 투약를 중단 시킨 후. 예를 들어, 1, 2, 또는 3 개월 마다 정기적으로에 동물을 테스트 합니다.
- 그룹 당 필요한 동물의 수입니다.
- 동물 행동 테스트를 수행 하는 지방 자치 단체에서 허가 신청.
- 시험 동물 조달에 대 한 계획을 확인 합니다.
- 번 식 계획 하거나 충분 한 실험 동물 실험 시작할 때 하루에 사용할 수 있습니다 적시에 동물 배포자를 문의 하십시오.
- 그들은 실험 동안에 새로운 방/설정 유지 하는 경우 1 주일에 대 한 길 들을 동물 허용.
2. 비디오 녹화
참고: 운동학 걸음 걸이 분석의 사용을 설명 하기 위해 여기와 함께 이미징 분석 소프트웨어 ( 테이블의 자료를 참조) 상용 이미징 시스템 사용 됩니다.
- 컴퓨터와 영상 소프트웨어를 시작 합니다.
- 새 장에 그것의 가정, 그것을 관찰 하 고 균형에서 무게 각 동물의 복지와 건강 상태를 결정 합니다.
- 필요할 때, 부드럽게 브러시와 동물의 발에 붉은 손가락 페인트를 적용. 여분의 깨끗 한 장에 ~ 5 분 건조 페인트를 수 있습니다.
참고: 페인트 발 및 몸 사이 대조를 강화 하는 데 사용은 동물의 복 부를 그림을 피하십시오. 검은 손가락 페인트 편리 하 게 수정 하는 것이 유용 합니다. 이 단계는 갈색 모피와 동물에 필요한 또는 경우에는 발 식별을 위해 문신이 되었습니다. 한 동물의 발을 페인트를 선택 하면 같은 그룹과 컨트롤 그룹에 있는 모든 동물도 그려질 필요가 있다. - 장치;의 상단 오른쪽 패널에는 디딜 방 아의 속도 설정 하나 이상의 실행 속도 적용할 경우 먼저 느린 속도로 시작 합니다.
- 동물 테스트 챔버에 배치 (챔버를 닫을 때 꼬리 또는 발을 클램핑 하지 마십시오). 어두운 천으로 챔버를 커버 하 고 1-2 분에 대 한 조정 각 동물 허용.
- 디딜 방 아 빛 로터리 스위치 "on" 위치로 설정 하 여 테스트 상공에 빛을 켜십시오. "앞 으로" 디딜 방 아, 시작을 디딜 방 아 회전 스위치 다음 영상 소프트웨어에서 "녹음" 버튼을 클릭 합니다.
참고: 디딜 방 아 실행 되는 동안 그것은 신중 하 게 그리고 끊임없이 동물 성과 관찰 하는 것이 중요: 동물 디딜 방 아 속도를 따라갈 수 없습니다 경우 디딜 방 아를 즉시 중지 또는 보조 증상 비-관련 운동 (예: 간 질 발작). 테스트 조건 재조정 될 필요가 있습니다. - 동물을 안정적으로 실행 될 때 (측면, 정면, 또는 다시 아니 빠른 탈출), 적어도 5 기록 s 디딜 방 아를 중지 하기 전에. 영상 소프트웨어 "중지"를 클릭 하 여 녹음을 중지 하 고 디딜 방 아 회전 스위치를 "off" 위치로 다시 설정 합니다.
참고: 동물의 불안정 한 실행을 피하기 위해 그것은 도움이 될 수 또는 몇 초 동안 실행 그들 (여 디딜 방 아 로터리 스위치 "반대로" 대신에 "앞 으로") 다른 방향에서 실행 하도록 허용. - 영상 소프트웨어를 시작 하 고 (분석에 사용할 수)를 비디오 섹션의 설정할 수 있습니다 메뉴를 열려면 "처리" 버튼을 클릭 합니다. 이렇게 하려면 화면 하단의 슬라이더를 사용 하 여 비디오를 탐색할 수 있습니다.
- 시작 또는 끝점으로 현재 시간 포인트를 선택, 클릭 "에서 # 프레임" 및 "," 각각. 섹션 포함 최소 7 단계/발 (총에서 14 단계) 일정 한 속도로 안정적으로 실행 하는 동물의 다는 것을 확인 하십시오.
- 동물 식별, 출생 날짜, 무게, 그리고 섹스를 입력 합니다. 컴퓨터 또는 서버에 원하는 위치에 데이터를 저장. "카메라" 녹음 인터페이스 돌아가려면 클릭 합니다.
- 여러 실행 속도 기록 될 필요가 있다, 원하는 실행 속도 2.6-2.10 단계를 반복 합니다. 다음 비디오를 기록 하기 전에 빨간 페인트가 발, 그렇지 않으면 반복 단계 2.3에 여전히 존재 하는지 확인 합니다.
- 녹음 후 집 그것의 감 금에 동물을 놓습니다. 동물을 제거한 후 다음 실험 동물에 대 한 준비에 살 균 제 뒤 비눗물으로 디딜 방 아 벨트를 철저 하 게 청소.
3. 비디오 처리
- 분석 소프트웨어를 시작 하 고 "선택 연구 폴더" 클릭 저장 된 비디오가 있는 폴더를 선택 하.
- 하나의 비디오, 또는 여러 동영상을 연속적으로 처리 될 수 있습니다 클릭 "이동 합니다." 선택
- "다시 그리기" 기능을 사용 하 여 선택; 마우스 실행 되 고 있는 지역 이 섹션 마우스 및 흰색 배경 포함 한다.
- "반대" 디딜 방 아 기능 사용 이전 된 경우 선택 "의 코 오른쪽에 확인 >>>"만 왼쪽으로 실행 하는 동물을 분석 하는 소프트웨어는 설계 이후 비디오 미러링. 계속 진행 하려면 "동의"를 클릭 합니다.
- "새로 고침" 기능을 사용 하 여 기본 마스크를 볼 및 발 인쇄는 소프트웨어.
참고: 원래 비디오는 왼쪽에 표시 되 고 제안 된 발 인쇄의 흑백 이미지는 오른쪽에. - 분석; 대 한 동물의 주 둥이 주위 빨간 영역을 제외 하는 마스크를 변경 하려면 "길이"와 "너비" 상자에 값을 입력 색상은 발 비슷합니다, 그 영역을 마스킹 하지 실수로 발으로 주 둥이 영역을 분류 하는 소프트웨어 발생할 수 있습니다.
- 조정 슬라이더 "필터 잡음"과 "모피와 어두운 패치 필터링" 흑인과 백인 발 인쇄 최적화. ~ 800-950 검은 동물 하 고 동물의 정확한 모피 색상에 따라 갈색 또는 흰색 동물 ~ 700-800 "잡음 필터" 슬라이더를 설정 합니다. 설정이 만족 하는 경우 "확인"을 선택 합니다.
참고: "모피와 어두운 패치 필터링" 슬라이더 따라 어떻게 "빨간" 발에. 그려진된 발에 대 한 값은 일반적으로 약 100-120, 그린 비 발에 대 한 최고의 가치 이며 주위 50-100. 이러한 설정은 모피 및 발의 색상 명암에 따라 하 고 모든 동물에 대 한 최적화 될 필요가 있다. 흑인과 백인 발 인쇄 가능한 작은 배경 잡음으로와 발의 명확한 표현을 해야 합니다. - 첫 번째 조정 통과 하나 또는 여러 개의 동영상을 선택 합니다 (표시 "@ @" 비디오 이름 앞) 이러한 동영상 분석 시작 "이동" 기능을 선택 하 고.
참고: 분석 비디오 당 2-5 분 걸립니다. 이 단계는 실험에서 입력 필요 하룻밤 여러 동영상 분석 실행 가능 하다. - 분석 된 비디오를 선택 합니다 (표시 "@ @ @") 클릭 "이동 합니다." 참고 각 별도 발에 대 한 시간별 (걸음 걸이 역학) 벨트 접촉 (cm2)에서 발 지역 지금 볼 수 있습니다. 원본 비디오 및 계산 된 발 인쇄 선택된 영역에 대 한 비교, "동영상 재생" 함수를 사용 합니다.
- 다음 (3) 도구를 사용 하 여 소프트웨어에 의해 만들어진 작은 실수를 수정.
- 예를 들어, 소프트웨어를 신호 기록 하더라도 해당 발 벨트와 접촉 하는 경우 잘못 된 신호를 삭제 하려면 "올바른" 옵션을 사용 합니다. 해당 지역으로 확대를 한 번 클릭 하 고 두 번째 클릭으로 제거 하는 개체의 왼쪽된 테두리와 세 번째 클릭으로 오른쪽 테두리를 표시 합니다.
- "연결" 옵션을 사용 하 여 두 신호, 예를 들면, 신호가 발 벨트 접촉 하더라도 몇 프레임에 대 한 기록 이다. 해당 지역으로 확대 하 고 중간에 결합 하 여 두 개체를 두 번 클릭을 한 번 클릭 합니다.
- 분석에서 시간 포인트를 완전히 제거 하려면 "삭제" 옵션을 사용 합니다. 실수 "올바른" 또는 "연결" 기능, 예를 들어, 왼쪽된 forelimb 발에서 신호는 실수로 왼쪽된 뒷 다리 발에 대 한 기록 된 때와 수정할 수 없는 경우에이 옵션을 사용 합니다. 해당 지역으로 확대를 한 번 클릭 하 고 두 번째 클릭으로 제거 영역의 왼쪽된 테두리와 세 번째 클릭으로 오른쪽 테두리를 표시 합니다.
참고: 도구; 작은 실수를 해결 하기 위해 사용할 수 있습니다만 체계적인 실패 (예를 들어, 한 발에서 신호는 매우 약한 경우)를 해결할 수 없는: 비디오 분석에서 제외 되어야 하 고 각 동물의 기록 반복, 가능 하면. 참고는 "동영상 재생" 옵션은 더 이상 사용할 수 "올바른" 후, "연결" 또는 "삭제" 옵션 사용 되었습니다, 그리고 "실행 취소" 버튼을 클릭 하면 모든 3 편집 도구 재설정 됩니다.
- "다음 사지" 선택 4 사지; 통해 진행 마지막 발 후 "다음 사지"를 클릭 하면 소프트웨어 분석을 완료 하 고 4 스크린에이 동물에 대 한 결과 보여 줍니다.
4. 걸음 걸이 분석
- 한 실험에서 모든 동영상을 분석할 때 모든 비디오를 선택 하 고 "다시 결과 구성" 클릭 결과 (스프레드시트 파일에서 매개 변수 목록)을 내보내려면.
- 끝 "reorganized_stride_info"으로 파일을 열고 정보를이 스프레드시트에 포함 되지 않은 추가: 그룹 정보 (예: 유전자, 치료), 나이, 및 저장 되는 다른 동물 길이 너비의 측정 스프레드시트 파일 끝 "SFI_TFI_PFI_reorganized_stride_info."
- 필요한 경우, 동물 너비 또는 길이를 걸음 걸이 매개 변수를 표준화 예를 들어, SL 동물 길이 및 남서 동물 폭.
- 결과 그룹, 나이, 및 실행 속도 의하여 정렬: 이러한 모든 조건을 독립적으로 분석.
참고: 다른 연령대 또는 실행 속도 같은 그룹 내에서 결합할 수 없습니다. - 모든 실험 조건에 대 한 각 매개 변수에 대 한 의미의 표준 오차, 표준 편차, 평균 (평균) 값을 계산 합니다.
- 실험 설계에 따라 통계 분석을 수행, 예를 들어, 2 꼬리 t를 사용 하 여-돌연변이/치료 동물 야생-타입 (WT)을 비교 하는 테스트 / 제어, 또는 몇몇 독립적인 그룹을 비교 하는 ANOVA.
- 보기에서 모든 매개 변수 측정: 더 나은 결과 시각화 하기 위해 각 매개 변수를 도움이 됩니다. 지정 된 매개 변수에서 통계적 차이가 있다면 다른 종속 매개 변수 대응 하 게 변경 하는 경우 확인 합니다.
참고: 예를 들어 SL은 크게 특정 테스트 그룹에 있는 경우,이 또한 하면 높은 보 폭 주파수 (이후 실행 속도 동일) (자세 안정성 유지) 주문 증가 소프트웨어에서 발생할 수 있습니다. - 있는 가장 중요 한 모델에 대 한 인간의 질병에서 관찰에 버금가 매개 변수를 선택 합니다. 한 프레 젠 테이 션에 대 한 각 그룹에 대 한 대표적인 동영상 만들고 이후 미묘한 걸음 걸이 변경 종종 분명 동영상에서 관련 매개 변수에 대 한 판독을 보여주는 그래프에 의해 그들을 보완 합니다.
5. 문제 해결
참고: 일부 동물, 불안 형, 특히 마우스 모델도 디딜 방 아에서 실행 같은 간단한 작업을 수행 하는 어려움을 할 수 있습니다. 다음은 단계를 낮은 불안 수준에 반입할 수 있습니다 및 실행 장려입니다.
- 습관 들 임 그리고 긍정적인 집행입니다.
- 첫 번째 테스트 하기 전에 2-3 일, 마우스 테스트 챔버에 배치 하 고 어두운 천으로 커버 해제 되어 빛을 두고. 마우스는 긍정적인 협회를 형성 수 있습니다 ~ 5 분 추가 차 우에 대 한 새로운 환경 또는 테스트 챔버를 (예를 들어, Nutella) 초콜릿/너트 버터를 조정 하자.
- 에 어 퍼프/후방 경계에 의해 부정적인 적용입니다.
- 마우스에 어 퍼프 또는 그들 뒤에 운동 싫어 하 고 소요에서 실행 됩니다. 실행에 동기를 부여, 가벼운에 어 퍼프, 또는 테스트 챔버의 앞 부분으로 실행 하려면 마우스를 장려 하는 테스트 챔버의 후방 경계를 형성 하는 유연한 막대의 리듬 움직임을 사용 합니다.
- 천천히 시작 합니다.
- 빠른 실행 속도 테스트할 때는 낮은 속도에 디딜 방 아를 시작 하 고 천천히 원하는 테스트 조건으로 디딜 방 아 속도 증가.
- 자유로운 움직임을 최소화 합니다.
- 테스트 챔버 길이 앞면과 뒷면에 두 개의 조절 막대에 의해 제한 됩니다. 시험 동물 실행 속도 유지 하지만 꾸준히 실행 되지 않습니다, 경우 챔버의 길이 더 꾸준한 실행을 제한 합니다.
- 위에서 언급 한 측정 성공 하지 않는 경우 다음 날 실행을 기록 합니다. 동물 여전히 거부 하 고 3 일에 테스트 후 실행, 찾기로 이것을 기록 하 고 동물 추가 테스트에서 제외.
참고: 걸음 걸이 분석의 결과 좋은 품질 비디오 녹화에 따라 달라 집니다. 동영상 신중 하 게 기록 된 경우 분석 중 비디오를 제외 하는 이유 있다. 비디오 품질이 충분 하지 않으면, 그것은 될 것입니다 분명 3.6 단계 디지털 발 인쇄의 창조에 대 한 매개 변수 설정 되는 경우. 앞 발과 주 둥이 제외한 다른 신체 부분 빨간색 나타납니다 (예를 들어, 성 기 또는 복 부에 손가락 페인트 sprinklings 누락 된 모피 때문), 품질이 크게 떨어진다. 단계 3.6에서에서 조정 허용만 작은 문제를 수정 하 고이 허용 신호/잡음 비율을 비디오를 가져올 수 없습니다, 경우 비디오는 분석에서 제외 하 고 녹화 반복 해야. 따라서, 수행 되는 녹음 후에 곧 동영상을 분석 하는 것이 좋습니다.
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Representative Results
운동학 걸음 걸이 분석의 사용을 설명 하기 위해 우리가 수행한 걸음 걸이 분석 WT C57BL/6J 쥐 나이, 뿐만 아니라 여러 endophilin 돌연변이 라인, 진출에 상용 계측 및 소프트웨어를 사용 하 여 ( 표를 참조 하십시오의 재료). 이 설정에서 투명 한 디딜 방 아에서 고속 카메라 마우스 (그림 1A)의 실행을 기록합니다. 소프트웨어는 다음 붉은 색된 발와 흰색 또는 검은색 모피를 인식합니다. 이후 우리의 실험 동물 했다 어두운 갈색 모피 색상, 모든 과목의 발 붉은 손가락 페인트 페인트는 우리. 우리는 다른 실행 속도에서 실험 동물 테스트: 걷기 (10 cm/s) (cm/s), 실행 하 고, 빠른 실행 (30 cm/s). 연락처 영역 및 시간 발 디딜 방 아에 그리고 공기에서 측정 되었다. 이 정보에서 매개 변수를 (예를 들어, 스윙/입장 시간, 브레이크/추진) 걸음 걸이 리듬 또는 자세 (예: 발 각도, SW) 정리 했다 (그림 1B)을 계산.
우리는 여러 모터 동작 테스트의 배터리의 일환으로 걸음 걸이 분석을 수행. 우리 평가 그립 강도 (GS), 뒷 다리 (HLC) clasping 걸음 걸이, 및 가속된 rotarod 성능 (ARR). 모터 동작 되지 않습니다으로 실험 테스트 및 이전 경험에 의해 영향을, 반면 예를 들어 인식, 그것은 여전히 중요 한 모든 동물의 테스트 순서에서와 같은 나이에 같은 배터리를 받 다. 순서는 현재 테스트에 이전 실험에서 영향을 최소화 하기 위해 동물에 대 한 높은 낮은 난이도에서 야 한다.
우리는 3의 얼마나 많은 endophilin 대립 유전자는 누락에 따라 이후,이 연구에 대 한 endophilin 돌연변이 선택, 결과 표현 형 젊은 endophilin 1KO-2HT-3KO에 가벼운 신경 표현 형을 단일 코스에 없는 표현 형에서 변화 한다 노화와 함께 진행 하는 쥐 이러한 이유로, 이러한 동물 라인 동물 나이로 개발 하는 미묘한 변화를 공부 하는 적절 한 모델을 제시. 우리 (18 개월 시간 포인트도 강한 표시 하는 endophilin 1KO-2HT-3KO 줄에 쥐부터 선정 되었다 18 개월의 과정을 통해 endophilin 돌연변이의 모터 동작을 대부분 endophilin 돌연변이 감소 된 수명 표시, 검사 표현 형, 마비를 필요가 없습니다). 걸음 걸이 분석 (그림 1C) 18 개월 동안 8 시간 지점에서 수행 되었다. 나이의 18 달에서 동물 안락사, 되었고 생화학 / 조직학 분석에 대 한 유지.
마우스 식민지 유지 보수:
Heterozygous 및 homozygous 마우스 endophilin 1, 2, 및 3 대립 유전자에 대 한 밀로 셰 비치 외에 원래 보고 되었다. 21 C57BL/6J 마우스 컨트롤을 통해 littermate 마우스 이외에 사용 되었다. 마우스는 12 h 명암 주기에 음식과 물을 5 동물의 최대의 그룹에서에 대 한 광고 libitum 액세스와 오픈 장에 보관 되어 있었다. 남성 쥐만 여성에서 주기 의존적인 유사의 효과 제외 하려면이 연구에 사용 되었다.
Endophilin A1, A2, A3 마우스 모델의 유전형:
Endophilin 돌연변이 생쥐의 유전형 꼬리 또는 귀 펀치에서 추출 하는 genomic DNA를 사용 하 여 중 합 효소 연쇄 반응 (PCR) 증폭에 의해 수행 되었다. PCRs 3 endophilin-A 유전자에 대 한 각각 한 뇌관으로 수행 되었다: endophilin A1: 뇌관 5' CCACGAACGAACGACTCCCAC3 앞으로 ' 반전 뇌관 5'-CGCACCTGCACGCGCCCTACC-3' WT에 대 한 5'-TCATAGCCGAATAGCCTCTCC-3' 코;에 대 한 endophilin-A2: 뇌관 5'-CTTCTTGCCTTGCTGCCTTCCTTA-3 앞으로 ' WT;에 대 한 5'-CCTAGGGGCTTGGGTTG-TGATGAGT-3' 코와 역방향 뇌관 5'-GCCCCACAACCTTCTCGCTGAC-3에 대 한 ' WT에 대 한 5'-CGTATGCAGCCGCCGCATTGCATC-3' 코;에 대 한 endophilin A3: 뇌관 5'-CTCCCCATGGTGGAAAGGTCCATTC-3 앞으로 ' 반전 뇌관 5'-TGTGACAGTGGTGACCACAG-3' WT, 5-'CAACGGACAGACGAGAG-ATTC-3에 대 한 ' 코에 대 한. 결과 PCR 제품 WT와 KO 대립 유전자에 대 한 독특한 밴드 크기 저조한 1 %agarose 젤에서 실행 했다: endophilin A1 WT ~ 384 bps, 코 ~ 950 bps; WT endophilin-A2 ~ 1280 bps, 코 ~ 1000 bps; endophilin A3 WT ~ 325 bps, 코 ~ 465 bps. PCR 제품 WT와 코 밴드 heterozygous (HT) 동물을 나타냅니다.
결과:
걸음 걸이 및 자세 나이 진출 WT 쥐에 특성, 우리이 동물 (그림 2;에 운동학 걸음 걸이 분석을 수행 했습니다. 영화 1)입니다. 몇 가지 매개 변수, 예를 들어 소프트웨어를 동안 (평균 앞 사이의 거리 또는 뒷 다리 사지 동물 폭으로 정규화; 표 1참고), 나이 진출 WT 동물에서 변함, 다른 매개 변수가 점진적으로 변경 (그림 2A- C). 예를 들어, 뒷 다리 이중 지원 (두 뒷 다리 사지 지상 접촉에 있는 동시 입장 지속 시간에 상대적인 시간) 1 개월에서 18 개월 (그림 2B)에 55%에서 38% 증가. 이 매개 변수는 종종 자세 불안정35와 연결. 또한, 다리 로드 (최대 변동률 발 영역의 주요 단계에서) 38cm2/s에서 59 cm2/s 1 개월에서 18 개월 (그림 2C) 증가합니다. 빠른 감속 감소 근육 강도 대 한 지표로 해석할 수 있다. 전반적인 실행 능력 WT 동물 (94 %18 개월, 그림 3A에서 30 cm/s에서 실행할 수 있습니다)에 영향을 하지 않습니다. 걸음 걸이 및 자세 매개 변수를 영향을 받지 않는, 또는 WT 쥐 나이 진출 점진적으로 변경 특성화, 뿐만 아니라 우리는 문서화 VPI를 사용 하 여 운동학 걸음 걸이 분석에서 나이 관련 된 가벼운 변경 공부를 적합 한 방법입니다. 걸음 걸이 및 자세
전반적인 실행 능력 WT 동물에 영향을 받지 않습니다 여러 endophilin 돌연변이 라인 표시 (그림 3A), 자동화 된 디딜 방 아에서 실행 또는 변경 된 기능 머독 외 에 보고 작은 데이터 세트에서 13 . 특히, 1 개월의 나이에 모든 endophilin 1KO-2HT-3KO 마우스는 모두 30 c m/s에서 실행할 수, 18 개월에서 같은 동물의 81% 수 없습니다 실행 (그림 3A, 주 13에 이전에 보고 된 것 보다 더 큰 동료 분석 되었다). 흥미롭게도, 적은 endophilin 대립 유전자 (즉, endophilin 1KO-2HT-3WT) 부족 endophilin 돌연변이 또한 영향을, 하지만 낮은 정도 (그림 3A).
비록 endophilin 1KO-2HT-3KO 돌연변이 쇼 나이13진출 심한 모터 장애, 걸음 걸이 대 한 매개 변수를 여러 변경 되지 않습니다 WT 제어에 비해도 18 개월의 나이에. 예를 들어, 단계 각도 가변성 (표준 편차 단계 각도의) 변경 되지 않습니다 (그림 3B) 남아 있습니다. 특히, 다른 많은 매개 변수 예 추진에 대 한 시간 (입장 시간 발 추진 단계에 있는 비율), 다른 나이의 1 달에는 하지만 점진적으로 노화와 악화 될 (그림 3C; 영화 2참고). 이것은 연령에 따라 매개 변수 뿐만 아니라 신경 돌연변이 특정 변수 운동학 걸음 걸이 분석 방식으로 공부 될 수 있다 보여줍니다.
그림 1입니다. 복 부 평면 영상 설치 및 원리. (A) 사진 하 고 걸음 걸이 분석 설치의 그리기 회로도. (B) 분석 소프트웨어 원리: 투명 한 디딜 방 아에서 실행 되는 마우스의 기록된 밑면에서 소프트웨어 디지털 발 인쇄 계산. 실행 하는 동안 그들의 역학으로 시간이 지남에, 영역 크기를 발 측정 되 고이 걸음 걸이 리듬을 계산 하 고 자세를 매개 변수를 기준으로 사용 됩니다. (C) endophilin 돌연변이에 걸음 걸이 분석 실험의 시간 과정 수행. 운동 및 보 행 1, 2, 3, 6, 9, 12, 15, 및 18 개월에 평가 했다. 이미지 2, 12, 18 개월에 endophilin 1KO-2HT-3KO 마우스를 표시합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2입니다. 야생-타입 쥐 나이 진출 분석 걸음 걸이. 운동 및 WT (C57BL/6J) 쥐에 있는 걸음 걸이 1, 2, 3, 6, 9, 12, 15, 및 18 개월에서 평가 됐다. (A) 자세 폭 WT 동물의 동물 폭으로 정규화 전진 나이 변경 되지 않습니다. (B) 뒷 다리 이중 지원 WT 동물 나이로 증가 한다. 그래프 두 뒷 다리 사지 동시에 지상에는 입장 시간 비율을 보여 줍니다. 이 매개 변수에서 증가 걸음 걸이 불안정을 반영 한다. (C) (최대 변동률 발 영역의 주요 단계에서) 로드 사지 WT 동물 나이로 증가 한다. 더 빠른 감속 감소 근육 강도 대 한 지표 될 수도 있습니다. 모든 그래프 대표 평균값이 ± SEM; p 값 2 꼬리 t에서 계산 된-1 개월 된 WT 대 테스트 하 고로 표시 됩니다 * p < 0.05, * * p < 0.01, * * * p < 0.001 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 3입니다. 나이 진출 endophilin 돌연변이 분석을 걸음 걸이. (A) 1, 12, 및 18 endophilin 돌연변이의 실행 속도 개월, 머독 외 에 비해 확장 된 데이터 집합에서 계산 동물 30 (진한 파란색), (파란색), 20 또는 10 cm/s (밝은 파란색) 자동화 된 디딜 방 아에 실행 하거나 (회색) 설치에서 실행 거부 수의 비율을 반영 하는 데 소요 13 색 바. 모든 시험된 동물 1 개월에서 30 m/s에서 실행할 수 있습니다, 하는 동안 endophilin 돌연변이 개발 적자를 실행 합니다. (CB-) 단계 변화를 각도 시간 WT (블랙), endophilin 1KO 2WT 3WT (turquois), endophilin 1KO-2HT-3WT (진한 파란색), 및 endophilin 1KO-2HT-3KO (갈색) 마우스를 추진. WT 동물 노화 또는 WT와 endophilin 돌연변이 사이 단계 각도 변화 차이가 표시 됩니다. (입장의 백분율로) 추진에 크게 endophilin 돌연변이 WT 사이 1 달에서 변경 되지 않습니다 하지만 쥐 나이 endophilin 돌연변이에 감소. 모든 그래프 대표 평균값이 ± SEM; p 값 2 꼬리 t에서 계산 했다-나이 일치 WT 대 테스트 하 고로 표시 됩니다 * p < 0.05, * * p < 0.01, * * * p < 0.001 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
영화 1입니다. 야생-타입 (C57BL/6J) 마우스 3 (왼쪽) 및 18 개월 (오른쪽)에 분석을 걸음 걸이. 원래 비디오 (위)는 "디지털 발 인쇄" 비디오 (아래)으로 변환 됩니다. 비디오 속도 세부 사항 더 잘 평가 될 수 있다 그래야 5 번 다운 둔화 되었습니다 했다. 18 개월 시간 시점에서 ~ 2 오른쪽 뒷 발 (인쇄 디지털 발에 레드)의 주저를 참고 s, 그리고 ~ 4에서 오른쪽 앞 발 (인쇄 디지털 발에서 파란색)의 s. 비디오 속도 10의 요인에 의해 둔화 했다. 이 비디오를 보려면 여기 클릭 하십시오 (다운로드 오른쪽 클릭.)
영화 2입니다. 나이의 18 달에서 endophilin 1KO-2WT-3WT (제어; 왼쪽) endophilin 1KO-2HT-3KO (오른쪽) 마우스 대 분석 걸음 걸이. 비디오 속도 되었습니다 느려 5의 요인에 의해 그래서 세부 사항을 더 잘 평가 될 수 있다. Endophilin 1KO-2HT-3KO 마우스 표시 걸음 걸이 변경 덜으로 볼 수 있는 동물의 실행 안정. 이 비디오를 보려면 여기 클릭 하십시오 (다운로드 오른쪽 클릭.)
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Discussion
모터 조정 공부 하는 것은 신경 퇴행 성 질환, 특히 PD는 모터 조정 심각 하 게 영향을 같은 질병에 대 한 모델의 특성에 유용한 접근 이다. 운동학 걸음 걸이 분석 기능 분석 결과의 도움으로, 우리 약한 neurodegeneration와 따라서 상대적으로 겸손 한 표현 형의 운동 문제, 발병에 동물의 걸음 걸이 또는 모델에 미묘한 변화를 식별할 수 있습니다. 작은 걸음 걸이 이상이 고 심한 운동 장애를 포함 하는 신경 퇴행 성 질환의 다양 한 모델에는 다양 한 고기를 감안할 때,이 방식은 동물의 나이 및 이동 하는 기능에 따라 걸음 걸이 매개 변수를 평가 하는 데 적합 합니다. 심각 하 게 손상된 동물 비행기 디딜 방 아, 덜 손상된 모델 오르막 실행 기록 될 수 하는 동안 또는 빠른 속도로 내리막에 낮은 속도로 걷는 기록할 수 있습니다. 이 동물을 overexerting 없이 걸음 걸이 신경 모델과 littermate 컨트롤의 차이점을 밝힐 수 있다.
이 프로토콜, 생쥐에서 노화와 모터 장애의 개발 모니터링 VPI 메서드의 adequateness 보여 줍니다. 여러 시간 점에서 테스트 WT 쥐 그들의 나이 발전으로 수 있다 연령에 따라 걸음 걸이 이상 식별 하 고 특성을 어떻게 그들은 노화와 함께 진행. 또한, neurodegeneration 마우스 모델을 처리할 때 자주 선물 하는 문제는 모터 동작 (예를 들어, 불안, 무관심, 학습에 어려움)와 관련 되지 않은 증상으로 인해 심지어 간단한 수행 하는 동물의의 지 실행 등의 작업을 모터, 감소 된다. 여기, 메서드 수정 및 동기 부여 도구를 성공적으로 마우스 라인 신경 퇴행 성 변화 노화에 운동학 걸음 걸이 분석을 적용 하는 데 도움이 될 수 있는 조명된 자동화 된 디딜 방 아에서 실행 하는 격려 하는 것이 좋습니다. 또한, 우리는 동물의 발 및 그것 크게 기록 된 데이터 품질을 향상 시킬 수 있는 표시에 손가락 페인트 적용의 간단한 트릭을 사용 합니다. 좋은 비디오 녹화를 얻는 것은 걸음 걸이 분석의 가장 중요 한 단계: 분석의 성공에 따라 달라 집니다, 이미지 또는 동영상의 모든 자동 또는 반자동 분석 같은 원시 데이터의 품질. 낮은 품질의 비디오 분석, 나중 단계에서 개선 될 수 없는 그리고 보통 분석 프로세스에서 제외 해야 합니다.
체계적으로 공부 하는 동안 걸음 걸이 및 자세 WT와 여러 endophilin 돌연변이 라인의 18 개월의 기간 동안, 우리는 심지어 WT 마우스와 마우스 (즉, endophilin 1KO-WT-WT), 확실 한 운동/실행 문제 없이 표시 변경 발견 했습니다. 몇 걸음 걸이 및 자세 매개 변수 (그림 2 및 그림 3A) 진보적인 방식 나이 진출. 흥미롭게도, 우리 또한 그 동안 여러 걸음 걸이 및 자세 매개 변수 endophilin 돌연변이 노화에서 관찰에서 이상이 같은 방향으로 개발 하 고 WT/제어 동물에서 사면, 다른 하지 않습니다 발견 했습니다 (그림 3). 마지막으로, 그것은 그 세 WT 쥐와 젊은 endophilin 돌연변이 어떤 명백한 운동, 걸음 걸이, 자세 결함 눈으로 관찰 하는 경우 표시 되지 않습니다, 경우에 선택적 걸음 걸이 및 자세 매개 변수에 변화 검출 될 수 있다이 방법을 주의 하는 것이 중요.
마우스 모터 동작 테스트는 마우스 모델 명단 인간 조건의 주요 측면을 설명 하는 가장 포괄적인 방법 중 하나입니다. 그 결과, 테스트의 숫자 모터 동작의 다양 한 측면을 평가 하기 위해 개발 되었습니다. 이러한 테스트 오픈 필드 테스트 (일반 운동 활동), rotarod (모터 조정, 운동 실 조), 힘 (근 력), 휠 (활동), 와이어 테스트 (내구성), 사다리 빔 작업 (정밀한 모터 조화, 걷는 거 실행 그립 sensorimotor 기술), 걸음 걸이 분석 (운동, 사지 조정), 등 (Wahlstein36에서 요약). 다른 테스트 특정 장점 고 단점 및 그들의 지요 주소로 설계 되었습니다 그들은 모터 동작의 측면 (또는 측면)에 일반적으로 제한 됩니다. 그 이유로, 그것은 배터리의이 분야의 주요 측면을 충당 하기 위해 모터 동작 테스트를 수행 하는 일반적인 연습 되고있다.
걸음 걸이 분석은 종종 여에 포함 되지 이러한 배터리 부분에서 보고서 때문 Guillot에서 여러분에 37, 그 걸음 걸이 분석 동물 모델 PD와 ALS의 부분에서 힘 드는 방법 및 제한 된 출력에에서 모터 적자를 검색 하지 않습니다 발견. 그러나, Guillot 외. 보고서는 연구 디자인38에서 여러 한계를 해결 하는 연구에 의해 도전을 받고 있다. 최근 출판물10,11,,1239,40의 숫자에 의해 입증 되었습니다 neurodegeneration와 마우스 모델에 걸음 걸이의 분석에서이 방법의 유용성 ,41,,4243, 또한 우리의 작품13를 포함 하 여.
VPI 녹음 잉크로 발 그림을44종이 흰 시트에 실행 하는 마우스의 종래의 방법에 몇몇 이점을 갖추고 있습니다. 가장 눈에 띄는 몇 걸음 매개 변수1에 강한 영향을이 자동화 된 디딜 방 아와 동물의 실행 속도 제어, 사실 이다. 또한, 몇 가지 걸음 걸이 이상이 동물에서 까다로운 고속 / 한 경사/거절, 자발적인 실행에서 볼 수 없는 것이 실행 될 때만 감지 된다. 또한, 손으로 정교한 분석 반자동, 높은 처리량 분석에 의해 대체 됩니다. 그 이유로, 각 그룹에서 테스트 하는 동물의 수 높일 수 있습니다, 어떤 차례로 생체에 불가피 하다 다양성으로 인 한 효과 감소. 요약 하자면, VPI 걸음 걸이 분석의 수정된 버전 neurodegeneration 노화의 설치류 모델에 모터 장애의 분석을 보완 하기 위해 표준 모터 테스트 배터리에 포함 하는 것이 좋습니다.
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Disclosures
저자 아무 경쟁 금융 관심사를 선언합니다.
Acknowledgments
우리는 오른쪽의 동물에 대 한 사육, 도움말 시설과 박사 누누 Raimundo에 대 한 유용한 의견 원고에서 동물 관리를 감사합니다. 인스턴트 메신저 SFB-889 (프로젝트 A8) 공동 연구 센터를 통해 독일 연구 재단 (DFG) 및 SFB-1190 (프로젝트 P02)에 미 뇌터 영 조사 상에서 교부 금에 의해 지원 됩니다 (1702/1). C.M.R. 신경 과학, 물리학, 및 분자 생명과학 (GGNB) 괴팅겐 대학원에서 친교에 의해 지원 됩니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DigiGait | Mouse Specifics, Inc., Framingham, Massachusetts, USA | DigiGait Imager and Analysis Software are included with the hardware | |
| non-transparent blanket or dark cloth | cover the test chamber to reduce the animal's feeling of exposure/stress | ||
| balance | e.g. Satorius | balance with 0.1 g accuracy and a maximum load of at least 100 g | |
| red finger paint | e.g. Kreul or Staedtler | for increasing the contrast between paws and animal’s body | |
| small paint brush | soft brush to apply finger paint to the animal paws | ||
| diluted detergent | for cleaning | ||
| disinfectant, e.g. Meliseptol or 70% ethanol | e.g. B.Braun | for desinfection |
References
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