Summary
Эта статья подробно описывает метод, основанный на наночастицы серебра для улучшения Билиарной атрезией синдром в экспериментальной Билиарной атрезией мыши модели. Четкое понимание процесса подготовки реагента и технику инъекций неонатальной мышь поможет ознакомить исследователей с метод, используемый в неонатальной мыши модель исследования.
Abstract
Билиарной атрезией (BA) — это серьезный тип холангит с высокой смертности детей, которые до сих пор не полностью понимается этиологии. Вирусные инфекции могут быть одной из возможных причин. Типичная модель животных, используются для изучения Ба устанавливается путем прививки новорожденным мышь с ротавирусом резус. Было показано, что наночастицы серебра оказывают антибактериальное и противовирусное эффекты; в этом исследовании оценивается их функции в модели мыши ба. В настоящее время в ба экспериментов на животных, методы, используемые для улучшения симптомов Ба мышей, обычно симптоматическое лечение через продовольствия или других наркотиков. Целью данного исследования является продемонстрировать новый метод для улучшения Ба синдром у мышей, внутрибрюшинного введения наночастиц серебра и предоставить подробные методы для подготовки формулировка гель серебряных наночастиц. Этот метод прост и широко применимые и может использоваться для исследования механизма Ба, а также клиническое лечение. На основе Ба мыши модели, когда мышей выставки желтухи, подготовленный серебряных наночастиц Гель вводится внутрибрюшинно на поверхность Нижняя печени. Наблюдается состояние выживания, и изучаются биохимических показателей и гистопатология печени. Этот метод позволяет более интуитивное понимание создание модели Ба и Роман лечения ба.
Introduction
Ба является формой холестаза, характеризуется стойким желтухи и обладает высокой смертности в отсутствие трансплантации печени. Вирусные инфекции тесно связаны с патогенеза ба. Ротавирусной инфекции цитомегаловирус и реовирус предлагались как патогены в ба1,2,3. В неонатальный период ответ незрелой иммунной системы к вирусной инфекции приводит к иммунной регуляции против дополнительных - и внутрипеченочных желчных протоков, ведущих к апоптозу желчных эпителиальных клеток, воспалительных клеток инфильтрата в портале Площадь, внутрипеченочных и внепеченочных желчных протоков препятствие и, наконец, фиброз печени4,5,6.
Часто используемых животных модель BA исследований включает прививки новорожденным мышь с резус Ротавирусная (RRV). Мышь обычно развивается желтуха после 5-6 дней, показывая низкой массой тела и acholic стул. Роль иммунной реакции в процессе заболевания имеет решающее значение, особенно для естественных убийца клеток (НК); истощение этих клеток с антитела анти NKG2D значительно снижает Ба индуцированного повреждения7. Кроме того, другие клетки, включая CD4+ T-клеток, CD8+ T клетки, дендритные клетки и регулирования Т-клеток, все было показано играть роль в болезни8,9,10,11. Все данные свидетельствуют о незаменимый характер иммунной системы в ходе ба.
Наночастиц серебра (AgNPs) были продемонстрированы иметь благотворное влияние против некоторых инфекционных заболеваний, в том числе12 бактериальных инфекций и вирусных инфекций13,14,15. Однако кроме дерматологических использования, несколько исследований использовали AgNPs в клинического лечения, главным образом из-за их потенциальной токсичности. В экспериментов на животных исследователи изучили обычно эффективность AgNPs осуществляется через устные16 или17внутривенные методы. Однако другие исследователи изучили эффективность AgNPs осуществляется через инъекцию внутрибрюшинного (и.п.) у новорожденных мышей экспериментов, что простой и быстрый метод приводит к более прямое воздействие на печени и желчных протоков при снижение токсичности для других систем, таких как иммунной системы. AgNPs было показано, влияют на активность клеток NK18; Таким образом мы протестировали терапевтического эффекта AgNPs осуществляется через и.п. инъекции в мышиной модели ба.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Все животные экспериментальные протоколы были одобрены институциональный уход животных и использование Комитета Sun Yat-Sen университета лабораторных животных центр (#IACUC-DB-16-0602).
1. Создание модели мыши Билиарной атрезией
- Поддерживать беременных мышей BALB/c в определенной среде свободной от возбудителя в темноте/свет цикла 12 ч при 25 ° C, с доступом к газобетона Чоу ad libitum.
- Подготовить RRV штамм MMU 18006, усиливают вируса в клетках MA104 и измерить вирусного титры налета пробирного19.
Примечание: MA104 клетки являются культивировали в среде Дульбекко изменение орла (DMEM) с 10% плода бычьим сывороточным (ФБС) в инкубаторе с атмосферой увлажненные, содержащих 5% CO2. Усиление действия кратко изложены ниже.- Заразить клетки MA104 (1,5 х 107) в колбе культуры2 150 см с активированной трипсина RRV [1,5 х 106 металлическ формируя единиц (ОРП)] в 30 мл сыворотки свободной среды. Инкубируйте 3 дней в увлажненные инкубатора при 37 ° C с 5% CO2инфицированных клеток.
- Лизировать инфицированных клеток в культуре колбу на трех циклов замораживания оттаивания, с 20 минут в морозильник-80 ° C для каждого заморозить фазы и, затем, отогрева клетки обратно до комнатной температуры; клетки связанных вирус частиц выпустит в надосадке. Затем собирать и передавать lysate клетки и культуры супернатант в коническую пробирку 15 мл.
- Удалите большие сотовой мусора от lysate центрифугированием низкой скорости (300 x g при 4 ° C на 3 мин). Затем перевести супернатанта, содержащий вирус (примерно 6 мл) на новой 15 мл Конические трубки для экспериментов на животных.
Примечание: RRV готов быть titered, aliquoted и храниться или использоваться для дополнительных раундов амплификации. Долгосрочное воздействие комнатной температуры сократит возможности вирусной инфекции; вирус следует поместить на льду и хранятся при температуре-80 ° C или в жидком азоте.
- Нагрузки, RRV в малообъемной (1 мл) инсулин шприц с иглой для инъекций неонатальной мыши 29 G.
Примечание: Толстые иглы объемные шприцы легко привести к утечки наркотиков. - В течение 24 часов рождения применять для каждого новорожденного 20 мкл 1.2 x 105 RRV ОРП/мл через и.п. маршрут; Используйте такой же объем физиологического раствора в качестве элемента управления.
Примечание: Шприц, используемые в этом эксперименте является шприц 1мл инсулин. Зараженных мышей, которые не получали их матерей умерли в течение первых 2 дней по другим причинам не были включены в анализ. - Наблюдать все новорожденных мышей и взвесить их ежедневно. Как правило на шестой день после прививки RRV, желтуха появляется на уши и голой кожи, стул становится глинистого цвета, и мех становится жирной, предлагая создание модели Ба; Проверьте эти симптомы.
Примечание: Ба может быть подтверждена раздел экспертиза ткани печени с H & E и иммуногистохимическое заявив. Мышей ба затем готовы для лечения ССПС.
Предупреждение: Представил протокол предназначен для использования с современными животных и человека RV штаммов, которые должны быть обработаны в условиях 2-го уровня биобезопасности (BSL-2).
2. Серебряный синтеза наночастиц
- Подготовить и характеризуют AgNPs как описано в12,20.
Примечание: Сведения о подготовке и характеризующих AgNPs были описаны в публикациях C. м. Че команда кафедры химии, Университет Гонконга12,20. Конечная концентрация раствора составила 1 мм. Средний диаметр AgNPs было 10 Нм (диапазоне 5-15 Нм) и подтверждена электронной микроскопии.
3. Подготовка смеси серебряных наночастиц коллагена
Примечание: ССПС коллаген смесь подготавливается и характеризуется как описано ранее21 и хранить при 4 ° C. Все процедуры должны выполняться на льду.
- Во-первых, для подготовки коллагена, добавить 490 мкл типа коллагена (4 мг/мл) в 1,5 мл трубку и поместите его на льду.
- Добавить 100 мкл фосфат амортизированное saline (PBS, 10 x) коллагена и смешайте его с пипеткой.
- Для приготовления 1 Л 10 x PBS буфера, объедините 80 г NaCl, 2 г KCl и 35.8 g Na2HPO4. 12H2O 2.4 g KH2PO4 и store буфера при комнатной температуре.
- Затем добавьте 10 мкл NaOH (0,2 М) выше решение.
- Подготовить 0,2 М NaOH, добавьте 8 г NaOH порошка в 1 Л дистиллированной воды.
- Наконец 400 мкл AgNPs (1 мм) для коллагена и смешайте их с пипеткой.
Примечание: Добавьте AgNPs последний даже смешивания. ССПС коллаген смесь следует хранить при 4 ° C; в противном случае он легко затвердевает при комнатной температуре.
4. мыши инъекционный метод
- Администрировать инфицированных новорожденных мышей в обработанных RRV группе и.п. инъекции 50 мкл смеси коллагена ССПС после появления желтухи; выполните второй инъекции 3 d позднее.
Примечание: Мышей в контрольной группе RRV (зараженных управления) даны же объем физиологического раствора, и мышей в обычной контрольной группе не имеют какого-либо лечения. - В начале инъекции, косо пресс мыши ногу с безымянным пальцем над правое бедро и ввести иглу медленно под углом 15° (рис. 1). По достижении поверхности нижнего края печени (рис. 2), около 0,5 см, придать ССПС коллаген смесь; затем медленно снять иглу.
Примечание: Будьте осторожны, чтобы не ввести любой воздух в шприц как, а затем, неонатальной мыши могут быть убиты. Новорожденных мышей желудка и селезенки, в левой части живота, в желудок полон молока. Если инъекции администрируется с этой стороны, игла может легко ввести либо желудка, вызывая молоко поступать в брюшной полости, или селезенки, вызывая кровотечение.
ВНИМАНИЕ: Обратите внимание на иглы, чтобы предотвратить любой палец травмы и не забудьте заменить колпачок иглы, удалите иглу и поместите его в Шарпс контейнер. - После инъекции Держите мышей из их клетки для 10 минут позволить ССПС коллаген смесь гель и предотвратить мать лизать укола. Затем вернуть их клетки мышей.
- Наблюдать и записывать физическое выступлений всех мышей ежедневно, включая желтухи и вес тела, а также выживаемости.
5. кровь образец коллекции
Примечание: Крови приблизительно 120 мкл образцов, вставляя иглу в сердце. После центрифугирования сыворотка является сбор (около 70 мкл) для тестирования функции печени. Метод сбора крови является следующим.
- Анестезировать мышей на девятой и 12 день после прививки RRV (который через 3 дня после лечения ССПС) с помощью 0,5-2,5% севофлюран.
- Иммобилизации конечности мыши и стерилизовать верхний и нижний живот с 75% алкоголя.
- Разоблачить диафрагмы путем разрезания мыши кожи, мышц и брюшины вдоль средней линии мечевидный ножницами; для удаления желудочно-кишечного тракта подвергать полностью Мышца диафрагмы используйте стерильным ватным тампоном.
- Вставьте иглу (с 1 мл шприц выгружен инсулина) левого желудочка сердца и медленно потяните поршень шприца, чтобы получить объем максимальной крови. Затем перенесите 1,5 мл крови.
- Разрешить трубки стоять 30 мин при комнатной температуре и центрифуги для 5 мин на 400 x g. Затем с помощью пипетки передачи, собрать и сохранить сыворотки для дальнейшего использования.
Примечание: Во избежание повреждения диафрагмы, как диафрагма, что дефекты легко привести к пневмоторакса, смерти и свертываемость крови, тем самым предотвращая проб крови.
6. биохимических параметров обнаружения
- Использование сыворотки, собранных в шаге 5.5 для обнаружения биохимических параметров.
- Используйте автоматизированный биохимический анализатор для обнаружения следующих биохимических параметров: аланинаминотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (АСТ), щелочной фосфатазы (ALP), общего белка (ТП), альбумин (ALB), глобулина (GLO), билирубин (TBIL), прямой билирубин (DBIL), косвенные билирубина (ИБИЛЬ) и общая желчных кислот (TBA).
7. внепеченочных холангиографии соблюдать проходимость внепеченочных желчных протоков
Примечание: Выполните весь процесс под микроскопом рассечение.
- Полностью разоблачить, печени, желчного пузыря и внепеченочных желчных протоков с ватным тампоном.
- Наблюдать и фотографировать внешний вид печени и желчных путей под микроскопом рассечение.
- Использование офтальмологический щипцами осторожно провести дно желчного пузыря.
- Загрузите 1 мл шприц с раствором метиленового синего (0,05 wt.% в H2O). Медленно Вставьте иглу шприца в полости желчного пузыря; Затем возьмите иглы офтальмологический пинцетом и медленно влить 10 – 20 мкл рабочего раствора метиленового синего.
- Наблюдать под микроскопом ли синий цвет проходит через гепатикохоледоха тощей кишки и сфотографировать.
8. сбор образцов свежей печени для гематоксилином и эозином
- Исправьте свежие мыши печени тканей на ночь в формалина 10%.
- Затем внедрить фиксированных тканей печени в парафин и раздел их.
- DEWAX разделы, увлажняет их с серии этанола (например, 100%, 95%, 80% и 70% этанола в дистиллированной воде, каждый на 5 мин), выведение разделов ткани с применением окрасок гематоксилин, подвергать их дифференциации алкоголя соляной кислоты 1% и наконец, пятно разделы с эозином.
- Наконец наблюдать гистопатология печени под микроскопом 40 X.
9. иммуногистохимическое окрашивание гематоксилином и эозином окрашенных тканей секций
- После депарафинизации и станавливающим разделы, выполните извлечение антигена, погружаясь в разделах в буфер Tris-ЭДТА (Tris база 10 мм, 1 мм ЭДТА решение; рН 9,0) и Отопление их в микроволновую печь на 10 мин при 95 ° C.
- Удаление эндогенной пероксидазы, подвергая разделов ткани за 10 мин до 3% раствором перекиси водорода.
- Лечить разделы с 5% козьего сыворотки, чтобы блокировать неспецифического связывания.
- Добавление первичного антитела кролика мышь NKG2D (1: 100) в разделы и инкубировать их на ночь при 4 ° C.
- Инкубируйте секции с соответствующим вторичные антитела (HRP-меченых полимерный анти кролик системы) за 30 мин при комнатной температуре.
- Визуализируйте иммуногистохимическое окрашивание с помощью 3, 3'-диаминобензидин (DAB) как хромогена.
- Соблюдать разделы под микроскопом 40 X, получить изображения и приступить к анализировать их при необходимости.
10. анализ гранулярных
- Аккуратно фарш ткани печени, передать его через стрейнер ячейки 70 мкм и центрифуги это 2 x 270 x g при 4 ° C на 4 мин.
- Ресуспензируйте Пелле клеток в среде RPMI 1640 и проанализировать его на два цвета иммунофлюоресценции с помощью моноклональных антител.
- Выполнять сотовой фенотипа, с использованием определенных маркеров клетк поверхности, в том числе флуоресцеин проспряганное Изотиоцианаты и фикоэритрин анти NKp46 (лимфоцитов НК; 1:1, 000) и анти CD4 (Т-клеток подтип; 1:1, 000), с проточный цитометр и анализ данных с программное обеспечение анализа данных потока цитометрии.
- Выберите клеточных популяций согласно вперед/сторона разброс, ворота согласно изотипа контроля для учета флуоресценции любой фон и данных, подлежащих вторичный анализ, основанный на флуоресценции сигналы от отдельных антител.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
На основе установленных Ба мыши модели, инфицированных новорожденных мышей вводили инъекции и.п. подготовленные смеси коллагена ССПС 2 x после экспонирования желтухи. Мыши выживания был проверен на ежедневно, и были проведены испытания функции печени, патологии печени и проточной цитометрии. По сравнению с необработанными контроля БА мышей, мышей ССПС лечение показали снижение желтухи и поддерживал их нормального веса тела (рис. 3). Уровень метаболизма билирубина и печеночных трансаминаз упала до значения нормального управления, предполагая, что AgNPs значительно улучшить функцию печени (Таблица 1). Внепеченочных холангиография (рис. 4) с метиленового синего окрашивания подтвердил проходимость желчных протоков после лечения ССПС. H & E окрашивание (рис. 5) показали значительно уменьшение воспалительных клеток инфильтрата в области печени портала мышей, получавших с AgNPs, по сравнению с контролем мышей. Результаты цитометрии потока показали значительно меньше НК-клеток в печени после ССПС лечения (оба на дни 9 и 12) чем в RRV мышей (рис. 6). Иммуногистохимическое окрашивание выявили существенно сократить проявление маркер клеток NK NKG2D (рис. 7) в портал Триада ССПС лечение мышей, по сравнению с RRV мышей.
Рисунок 1: первоначальный шприц проникновения позиции. Красная пунктирная линия показывает линии, параллельной живота P6 неонатальной мыши; Желтая стрелка указывает точку иглой; Красная стрелка указывает угол иглы. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 2: иглы, достигающая поверхности нижнего края печени. Желтая пунктирная линия указывает нижний край печени мыши; Красная стрелка указывает положение иглы во время инъекции. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 3: влияние AgNPs на синдром Ба в экспериментальной модели мыши ба. (A) Эта группа показывает внешний вид новорожденных мышей на 9 и 12 дни после инъекции с RRV самостоятельно и 3 дня и 6 дней после инъекции с AgNPs (RRV + AgNPs). (B) Эта группа показывает вес мышей в каждой группе в разное время точках; x-ось указывает количество дней, после того, как мышь родился и y-ось указывает фолд изменения веса тела. P < 0.01 с студента t-тест сравнения RRV + ССПС группы к группе элементов управления RRV; n = 16 в контрольной группе, n = 18 RRV группы, и n = 17 в RRV + ССПС группы. (C) Эта группа показывает выживаемости мышей в каждой группе. Этот показатель был изменен с Чжан и др. 18. пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 4: внепеченочных холангиографии. Контрастное вещество было использовано для обнаружения проходимость гепатикохоледоха и для захвата изображения. Синяя пунктирная линия указывает направление внепеченочных желчных протоков; Красная стрелка указывает на сокращение общего желчного протока; черная стрелка показывает Ба. Шкалы бар = 1 мм. пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 5: H & E пятнать. Тканей печени мышей в каждой группе на 9 и 12 дни были собраны, фиксированной, секционного и витражи с H & E. аббревиатуры: PV = воротной вены, BD = желчных протоков. Шкалы бар = 50 мкм. Этот показатель был изменен с Чжан и др. 18. пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 6: доля НК-клеток в ткани печени. (A) печень мышей были обработаны в клеточных суспензий на дни 9 и 12, и доля НК-клеток было обнаружено проточной цитометрии. (B) Эта группа показывает процент НК-клеток (NKp46+CD4+) в каждой группе в разное время точках после инъекции ССПС. Y-ось указывает фолд изменение доли НК-клеток, который был рассчитан на 9 день и день 12.* *P < 0.01 относительно доли в контрольной группе и *P < 0,05, с студента t-тест сравнения RRV + ССПС группы к группе элементов управления RRV, n = 10 в каждой группе. Этот показатель был изменен с Чжан и др. 18. пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 7: иммуногистохимическое окрашивание для маркера клеток NK NKG2D в области портала мышей в каждой группе лечения. Выражение маркер клеток NK NKG2D в области портала мышей в каждой группе лечения был обнаружен иммуногистохимическое окрашивание. Длинные стрелки указывают желчных путей; короткие стрелки указывают НК-клеток. Сокращения: PV: воротной вены, BD: желчных протоков. Sscale бар = 50 мкм. Этот показатель был изменен с Чжан и др. 18. пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Таблица 1: изучение клинических лабораторных печени функция связанные молекулы в сыворотке. Периферической крови был использован для измерения функцию печени в мышах в каждой группе. ALT: аланинаминотрансфераза, АСТ: аспартатаминотрансфераза, ALP: щелочной фосфатазы, ТП: общий белок, ALB: альбумин, GLO: глобулина, TBIL: билирубин, DBIL: прямого билирубина, ИБИЛ: косвенные билирубина и та = общая желчных кислот. P < 0,05 и **P < 0.01, с студента t-тест для каждой группы, по сравнению с RRV только группа, n = 10 в каждой группе. Все данные биохимических показателей отображаются как среднее ± SD. Все мыши в трех группах были 12 дней старых. Эта таблица была изменена от Чжан и др. 18. пожалуйста, нажмите здесь, чтобы загрузить этот файл.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
AgNPs обладают мощными антибактериальными свойствами широкого спектра и сильный проницаемость22; Кроме того они используются для производства целого ряда антибактериальных лекарственных препаратов23. Однако AgNPs может занять много времени, чтобы очистить после того, как они накапливаются в органах, и эта настойчивость может привести к токсические эффекты24,25. Предыдущие исследования изучили острой токсичности и генотоксичности AgNPs после одного и.в. инъекции в эксперименте крыса, и результаты показали, что AgNPs могут вызвать острый печени и повреждение почек. AgNPs накопленных в основной иммунной системы органов, в том числе вилочковой железы и селезенки17. В этой модели мыши Ба лечение с AgNPs смягчены Ба синдром, который наши данные позволяют предположить, частично опосредовано NK клеток ингибирование. Однако долгосрочные последствия AgNPs требуют дальнейшего расследования, для оценки потенциальной токсичности мыши развития и иммунной регулирования.
С точки зрения метода, некоторые дополнительные примечания для успешной операции являются следующие: (i) в процессе подготовки ССПС коллаген смесь должна осуществляться на льду потому, что, при комнатной температуре, ССПС коллаген смесь быстро станет полутвердый гель, который не может использоваться для инъекций. После подготовки ССПС коллаген смесь следует хранить при 4 ° C. (ii) только 1 мл инсулиновые шприцы должны использоваться из-за малого диаметра, который уменьшает утечку введенного препарата. (iii) предыдущие исследования обычно изучили влияние AgNPs перорально16 или через внутривенные инъекции17. В наших экспериментов на животных экспериментальный субъектами являются новорожденных мышей; Таким образом внутривенные инъекции практически невозможно, и мы использовали и.п. инъекции. Инъекции AgNPs улучшить симптомы Ба у мышей. (iv) в начале инъекции, нижних конечностей мыши фиксируются вручную, чтобы предотвратить перемещение мыши. Этот метод гарантирует, что нужное количество препарата вводят в брюшную полость без какой-либо утечки и дополнительно гарантирует эффективность эксперимента. (v) новорожденных мышей, желудка и селезенки, в левой части живота, в желудок полон молока. Чтобы придать ССПС смесь на поверхность нижнего края печени, игла вводится сверху правое бедро мыши. Если игла вводится с левой стороны, он может легко проколоть либо желудка, вызывая молоко поступать в брюшной полости, или селезенки, вызывая кровотечение. (vi) потому что брюшной стенки в новорожденных мышей тонкие, утечки наркотиков могут быть предотвращены путем по диагонали продвижения иглы недалеко от брюшной стенки до нижнего края печени под углом 15°.
Мы наблюдаем обнадеживающие эффект AgNPs в этой мыши RRV-индуцированной модели ба. Вместе с предыдущих исследований, которые используются AgNPs в лечении различных вирусных инфекций и заболеваний эти ССПС данные указывают на возможность применения в естественных условиях в борьбе с вирусными инфекциями. Ограничение этих экспериментов является, что фармакокинетика AgNPs не полностью ясно, как из-за отсутствия методов измерения для AgNPs, что затрудняет контроль ССПС дозировки. Дальнейшего изучения также необходима для внутриклеточного целевого объекта AgNPs, который поможет нам понять механизм и уменьшить побочные эффекты в будущем болезнь лечение.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы не имеют ничего сообщать.
Acknowledgments
AgNPs, здесь были подарок от C. м. Че в Отдел химии, Университет Гонконга. Эта работа финансировалась Фонд национального естественных наук Китая (№ 81600399) и науки и технологии проект Гуанчжоу (No.201707010014).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| BALB/c mouse | Guangdong Medical Experimental Animal Center | SYXK2017-0174 | Animal experiment |
| Rhesus rotavirus (RRV) | ATCC | ATCC VR-1739 | Establish biliary atresia mouse model |
| MA104 cells | ATCC | ATCC CRL-2378.1 | For laboratory use only |
| DMEM | Thermo Fisher | 10569010 | Mammalian Cell Culture |
| Fetal Bovine Serum | Thermo Fisher | 10099141 | Mammalian Cell Culture |
| collagen Type I | CORNING | 354236 | For research use only |
| PBS buffer | OXOID | BR0014G | For washing |
| NaOH | Sigma | 1310-73-2 | Adjust the PH value |
| AgNP | Antibacterial Note: The AgNps was a gift from Prof CM Che. in the Department of Chemistry, the University of Hong Kong. |
||
| Insulin syringe with integrated needle | BD | 9161635S | For medical use |
| 15 mL Centrifuge Tube | Corning | 430791 | For laboratory use only |
| 1.5 mL Microcentrifuge Tube | GEB | CT0200-B-N | For laboratory use only |
| Microscope | Nikon | ECLIPSE-Ci | For laboratory use |
| Dissecting/Intravital microscope | Nikon | SMZ 1000 | For laboratory use |
| anti-Mouse NKp46 FITC | eBioscience | 11-3351 | For research use only |
| anti-Mouse CD4 PE-Cyanine5 | eBioscience | 15-0041 | For research use only |
| Monoclonal Mouse Anti-Human CD4 | DAKO | 20001673 | For research use only |
| anti-NKG2D | RD | MAB1547 | For research use only |
| BD FACSCanto Flow Cytometer | BD Biosciences | FACS Canto Plus | For laboratory use only |
References
- Szavay, P. O., Leonhardt, J., Czechschmidt, G., Petersen, C. The role of reovirus type 3 infection in an established murine model for biliary atresia. European Journal of Pediatric Surgery. 12 (04), 248-250 (2002).
- Coots, A., et al. Rotavirus infection of human cholangiocytes parallels the murine model of biliary atresia. Journal of Surgical Research. 177 (2), 275-281 (2012).
- Shanmugam, N. P., Jayanthi, V. Biliary atresia with cytomegalovirus. Indian Pediatrics. 49 (2), 157 (2012).
- Mack, C. L., Feldman, A. G., Sokol, R. J. Clues to the Etiology of Bile Duct Injuryin Biliary Atresia. Seminars in Liver Disease. 32, 307-316 (2012).
- Muraji, T., Suskind, D. L., Irie, N. Biliary atresia: a new immunological insight into etiopathogenesis. Expert Review of Gastroenterology & Hepatology. 3 (6), 599-606 (2009).
- Sokol, R. J., Mack, C. Etiopathogenesis of Biliary Artesia. Seminars in Liver Disease. 21, 517-524 (2001).
- Shivakumar, P., Sabla, G. E., Whitington, P., Chougnet, C. A., Bezerra, J. A. Neonatal NK cells target the mouse duct epithelium via Nkg2d and drive tissue-specific injury in experimental biliary atresia. Journal of Clinical Investigation. 119 (8), 2281-2290 (2009).
- Mack, C. L., et al. Oligoclonal expansions of CD4+ and CD8+ T-cells in the target organ of patients with biliary atresia. Gastroenterology. 133 (1), 278-287 (2007).
- Shivakumar, P., et al. Effector Role of Neonatal Hepatic CD8 + Lymphocytes in Epithelial Injury and Autoimmunity in Experimental Biliary Atresia. Gastroenterology. 133 (1), 268-277 (2007).
- Saxena, V., et al. Dendritic Cells Regulate Natural Killer Cell Activation and Epithelial Injury in Experimental Biliary Atresia. Science Translational Medicine. 3 (102), 102ra194 (2011).
- Miethke, A. G., et al. Post-natal paucity of regulatory T cells and control of NK cell activation in experimental biliary atresia. Journal of Hepatology. 52 (5), 718-726 (2010).
- Tian, J., et al. Topical delivery of silver nanoparticles promotes wound healing. ChemMedChem. 2 (1), 129-136 (2010).
- Lu, L., et al. Silver nanoparticles inhibit hepatitis B virus replication. Antiviral Therapy. 13 (2), 253-262 (2008).
- Xiang, D., et al. Inhibition of A/Human/Hubei/3/2005 (H3N2) influenza virus infection by silver nanoparticles in vitro and in vivo. International Journal of Nanomedicine. 8 (Issue 1), 4103-4114 (2013).
- Elechiguerra, J. L., et al. Interaction of silver nanoparticles with HIV-1. Journal of Nanobiotechnology. 3 (1), 1-10 (2005).
- Nallanthighal, S., et al. Differential effects of silver nanoparticles on DNA damage and DNA repair gene expression in Ogg1-deficient and wild type mice. Nanotoxicology. 11 (8), 1-16 (2017).
- Wen, H., et al. Acute toxicity and genotoxicity of silver nanoparticle in rats. PLoS One. 12 (9), e0185554 (2017).
- Zhang, R., et al. Silver nanoparticle treatment ameliorates biliary atresia syndrome in rhesus rotavirus inoculated mice. Nanomedicine. 13 (3), 1041-1050 (2017).
- Arnold, M., Patton, J. T., McDonald, S. M. Culturing, Storage, and Quantification of Rotaviruses. Current Protocols in Microbiology. , Chapter 15 Unit 15C.13 (2009).
- Liu, X., et al. Silver nanoparticles mediate differential responses in keratinocytes and fibroblasts during skin wound healing. ChemMedChem. 5 (3), 468-475 (2010).
- Zhang, R., et al. Silver nanoparticles promote osteogenesis of mesenchymal stem cells and improve bone fracture healing in osteogenesis mechanism mouse model. Nanomedicine. 11 (8), 1949-1959 (2015).
- Wu, J., Hou, S., Ren, D., Mather, P. T. Antimicrobial properties of nanostructured hydrogel webs containing silver. Biomacromolecules. 10 (9), 2686-2693 (2009).
- Xu, L. Genotoxicity and molecular response of silver nanoparticle (NP)-based hydrogel. Journal of Nanobiotechnology. 10 (1), 16 (2012).
- Dobrzyńska, M. M., et al. Genotoxicity of silver and titanium dioxide nanoparticles in bone marrow cells of rats in vivo. Toxicology. 315 (1), 86-91 (2014).
- Mohamed, H. R. H. Estimation of TiO 2 nanoparticle-induced genotoxicity persistence and possible chronic gastritis-induction in mice. Food & Chemical Toxicology. 83 (9), 76-83 (2015).
