Summary
यहाँ प्रस्तुत फेफड़ों के निर्धारण के लिए एक उपयोगी प्रोटोकॉल है कि वातस्फीति के एक माउस मॉडल से फेफड़ों के नमूनों के हिस्टोलॉजिकल मूल्यांकन के लिए एक स्थिर स्थिति बनाता है. इस मॉडल का मुख्य लाभ यह है कि यह फेफड़ों के पतन या संकुचन के बिना एक ही निरंतर दबाव के साथ कई फेफड़ों को ठीक कर सकते हैं.
Abstract
वातस्फीति क्रोनिक ऑब्सट्रक्टिव पल्मोनरी डिजीज (सीओपीडी) की एक महत्वपूर्ण विशेषता है। एक वातस्फीति माउस मॉडल से जुड़े अध्ययनों के लिए फेफड़ों के विश्वसनीय हिस्टोलॉजिकल नमूनों का उत्पादन करने के लिए इष्टतम फेफड़ों के निर्धारण की आवश्यकता होती है। फेफड़ों की संरचनात्मक संरचना की प्रकृति के कारण, जिसमें काफी हद तक हवा और ऊतक होते हैं, एक जोखिम है कि यह निर्धारण प्रक्रिया के दौरान गिर जाता है या deflates होता है। विभिन्न फेफड़ों निर्धारण विधियों मौजूद हैं, जिनमें से प्रत्येक के अपने फायदे और नुकसान हैं। फेफड़ों के निर्धारण विधि यहाँ प्रस्तुत एक वातस्फीति माउस फेफड़ों के मॉडल का उपयोग कर अध्ययन के लिए इष्टतम ऊतक मूल्यांकन सक्षम करने के लिए लगातार दबाव का इस्तेमाल करता है. मुख्य लाभ यह है कि यह एक ही समय में एक ही शर्त के साथ कई फेफड़ों को ठीक कर सकते हैं. फेफड़ों के नमूने पुरानी सिगरेट के धुएं से उजागर चूहों से प्राप्त कर रहे हैं. फेफड़ों निर्धारण विशेष उपकरण है कि लगातार दबाव के उत्पादन में सक्षम बनाता है का उपयोग किया जाता है। यह लगातार दबाव एक काफी फुलाया राज्य में फेफड़ों को बनाए रखता है. इस प्रकार, इस विधि फेफड़ों कि सिगरेट के धुएं प्रेरित हल्के वातस्फीति का मूल्यांकन करने के लिए उपयुक्त है की एक हिस्टोलॉजिकल नमूना उत्पन्न करता है.
Introduction
सीओपीडी मौत1के प्रमुख दुनिया भर में कारणों में से एक है। सिगरेट का धुआं सीओपीडी का सबसे महत्वपूर्ण कारण है, लेकिन रोगजनन के तंत्र अपूर्ण रूप से परिभाषित रहते हैं। सीओपीडी दो मुख्य विशेषताओं को दर्शाता है, airflow के प्रगतिशील सीमा और फेफड़ों की एक असामान्य भड़काऊ प्रतिक्रिया सहित. वातस्फीति विकार प्राय : सीओपीडी रोगियों के फेफड़ों में होता है2. वातस्फीति के रोगात्मक निष्कर्षों में कूपिका-दीवार विनाश3की विशेषता है . कई पशु प्रजातियों विवो में सीओपीडी मॉडल उत्पन्न करने के लिए इस्तेमाल किया गया है (यानी, कुत्तों, गिनी सूअरों, बंदरों, और कृन्तकों)4. हालांकि, माउस सबसे अधिक सीओपीडी मॉडल के निर्माण में इस्तेमाल किया बन गया है. यह अपनी कम लागत सहित कई फायदे हैं, आनुवंशिक रूप से संशोधित करने की क्षमता, व्यापक जीनोमिक जानकारी उपलब्धता, एंटीबॉडी की उपलब्धता, और माउस उपभेदों की एक किस्म का उपयोग करने की क्षमता5. वर्तमान में, वहाँ कोई माउस मॉडल है कि मानव सीओपीडी की पूरी सुविधाओं की नकल कर सकते है; इस प्रकार, व्यक्तिगत शोधकर्ताओं का चयन करना होगा जो मॉडल विशिष्ट सीओपीडीअनुसंधान6 के लिए सबसे उपयुक्त है. वातस्फीति माउस मॉडल वर्तमान में उपलब्ध हैं कि कई सीओपीडी माउस मॉडल में से एक है. अतिरिक्त मॉडल exacerbation माउस मॉडल, प्रणालीगत सह-morbidities मॉडल, और सीओपीडी संवेदनशीलता मॉडल7शामिल हैं.
वातस्फीति माउस मॉडल कई प्रकार के exogenous एजेंटों द्वारा उत्पन्न किया जा सकता है, रासायनिक एजेंटों और सिगरेट के धुएं जोखिम4सहित. रासायनिक जोखिम (जैसे, इलैस्टेस के लिए) वातस्फीति का एक गंभीर प्रकार का उत्पादन करता है, जबकि सिगरेट के धुएं का परिणाम हल्के वातस्फीति8,9 में होताहै। सिगरेट का धुआं सीओपीडी के रोगजनन का मुख्य कारण माना जाता है; इसलिए, एक सीओपीडी माउस मॉडल बनाने के लिए एक साधन के रूप में सिगरेट के धुएं का चुनाव उचित10है। कई अध्ययनों से सिगरेट के धुएं का इस्तेमाल किया है माउस में वातस्फीति बनाने के लिए. उदाहरण के लिए, Nikula एट अल सफलतापूर्वक B6C3F1 महिला चूहों से एक वातस्फीति माउस मॉडल बनाया उन्हें 7 या 13 महीने11के लिए सिगरेट के धुएं को उजागर द्वारा . हमने सेनेसी मार्कर प्रोटीन/एसएमपी-30 KO चूहों12के माध्यम से एक वातस्फीति माउस मॉडल भी स्थापित किया है। यह ठीक से सिगरेट के धुएं के प्रदर्शन से इस हल्के वातस्फीति मॉडल कल्पना कर सकते हैं कि एक फेफड़ों के निर्धारण विधि प्रदर्शन करने के लिए महत्वपूर्ण है।
फेफड़ों के निर्धारण के लिए विभिन्न तरीकों की स्थापना की गई है13. तथापि, वातस्फीति14के मूल्यांकन के लिए फेफड़ों के ऊतक निर्धारण की कोई स्वर्ण मानक विधि नहीं है। इस प्रयोगशाला के अनेक अध्ययनों से पता चला है कि यहां प्रस्तुत स्थिरप्रणाली वातस्फीति12,15,16,17,18के मूल्यांकन के लिए एक स्थिर स्थिति बनाकर उपयोगी है . वर्तमान प्रणाली का मुख्य लाभ यह है कि यह फेफड़ों के पतन या संकुचन के बिना एक ही शर्त के साथ कई फेफड़ों को ठीक कर सकते हैं. वर्तमान फेफड़ों निर्धारण प्रणाली कुछ विशेष उपकरण है कि फेफड़ों के नमूनों को एक दिया अवधि के लिए एक उचित निरंतर दबाव में फुलाया जा करने की अनुमति देता है का उपयोग करता है. इस विशेष उपकरण एक कम कंटेनर, ऊपरी कंटेनर, और पंप सहित तीन भागों के होते हैं. फेफड़ों के नमूनों को निचले पात्र में रखा जाता है जो दाबित फिक्सिंग एजेंटों से जुड़ा होता है, जिसके परिणामस्वरूप ऊपरी और निचले कंटेनर19के बीच एजेंटों के स्तर में 25 बउचह2हे दाब अंतर होता है।
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Protocol
निम्नलिखित तरीकों को जूनेंडो विश्वविद्यालय स्कूल ऑफ मेडिसिन के पशु देखभाल और उपयोग समितियों द्वारा अनुमोदित किया गया है। पशु प्रयोगों के उचित आचरण के लिए दिशानिर्देशों का पालन किया गया, जापान की विज्ञान परिषद, 1 जून, 2006. इस विधि में तीन मुख्य कदम हैं: 1) माउस विच्छेदन, 2) फेफड़ों के बहि:संस्कार, और 3) विशेष उपकरणों द्वारा सहायता प्रदान फेफड़ों के ऊतकों का निर्धारण। आमतौर पर , फेफड़ों के नमूनों को 48 एच निर्धारण12,15,16,17,18 केबाद एम्बेड करने के लिए संसाधित किया जाता है .
1. माउस विच्छेदन
- माउस के शरीर के वजन को मापने, तो प्रशासन के लिए pentobarbital की मात्रा निर्धारित करते हैं.
- शरीर के वजन के 70 मिलीग्राम/किलोग्राम की खुराक पर पेंटोबार्बिटल इंट्रापेरिटोनली इंजेक्शन और टो चुटकी की प्रतिक्रिया के अभाव में संज्ञाहरण की पुष्टि करें।
- यह त्वचा और मांसपेशियों में प्रवेश जब तक एक 45 डिग्री कोण पर सुई इंजेक्शन. प्लंजर ड्रा करें और एक हवा वैक्यूम की पुष्टि करें, फिर पेंटोबार्बिटल इंजेक्ट करें।
- पलटा गति के अभाव में संज्ञाहरण की पुष्टि करें।
नोट: एक ethanized माउस के लिए विरोध के रूप में एनेस्थेटाइज़्ड माउस का उपयोग पूरी तरह से फेफड़ों exsanguination के लिए सिफारिश की है. - मस्तिष्क रेखा पर माउस त्वचा और पेट की मांसपेशियों को काटें, मस्तिष्क क्षेत्र के लिए लक्ष्य.
- बाद में कट एक व्यापक काम करने की जगह प्रदान करने के लिए।
2. फेफड़ों exsanguination
- डायाफ्राम परत को उजागर और forceps के साथ पंचर.
- वक्षीय स्थान खोलें और स्टर्नल क्षेत्र में कटौती करें, जिससे फेफड़ों और दिल को स्पष्ट रूप से देखा जा सकता है।
- बाएं एट्रियम और दाएं वेंट्रिकल में दिल को काटें।
- एक कैनुला (24 जी) को दाएं वेंट्रिकल क्षेत्र में डालें और इसे तब तक शिरस्य क्षेत्र में ले जाती हैं जब तक कि यह फुफ्फुसीय धमनी तक न पहुंच जाए, जैसा कि चित्र 1में दिखाया गया है।
- पंप पर बारी और 1x फॉस्फेट-बफर नमकीन (पीबीएस) प्रसारित करने के लिए अनुमति देते हैं (लगभग 200 एमएल/
3. फेफड़ों के ऊतकों का निर्धारण
- श्वासनली, फेफड़े, और दिल निकालें.
- आसपास के संयोजी ऊतकों को काट कर सभी तीन अंगों को मुक्त करें।
- एक सीवन धागे के साथ सही मुख्य ब्रोंकस टाई और सही फेफड़ों के सभी lobes काट दिया।
- (वैकल्पिक): दाहिने फेफड़े के खण्डों में चार भाग होते हैं। सही मुख्य ब्रोंकस से इन भागों में कटौती और जमे हुए ऊतक के नमूने के रूप में प्रसंस्करण के लिए भागों को विभाजित.
- एक 10 एमएल सिरिंज के अंदर स्थित एजेंटों फिक्सिंग में दिल और बाएं फेफड़ों के lobes डालें।
चेतावनी: फिक्सिंग एजेंट खतरनाक हैं. उचित सुरक्षात्मक उपकरण पहनें (उदा., लंबे रबर दस्ताने) और एक अच्छी तरह से हवादार कमरे में काम करते हैं। - फेफड़ों को फुलाने के लिए 10 एमएल सिरिंज का उपयोग करके वैक्यूम स्थिति बनाएं, जैसा कि चित्र 2में दिखाया गया है।
- श्वासनली में एक कैनुला (20 जी) डालें और एक गाँठ बांधें।
- लीक के लिए के साथ की जाँच करने के लिए फिक्सिंग एजेंटों के साथ फेफड़ों फुलाना, एक 1 एमएल सिरिंज का उपयोग कर.
- फेफड़ों के निर्धारण दबाव उपकरण के लिए स्थानांतरण, जैसा कि चित्र 3में सचित्र है।
- अवधि तय करने के बाद, फेफड़ों के नमूने को एक गाँठ के साथ श्वासनली बंद बांधने को हटा दें।
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Representative Results
जैसा कि पहले बताया गया है, विशेष उपकरण, जो विस्तारित निरंतर दबाव उत्पन्न करता है, को तीन भागों में विभाजित किया जा सकता है (चित्र 3ए)। निम्न भाग वह बिंदु होता है जिस पर फेफड़ों का नमूना सम्मिलित किया जाता है (चित्र 4क) फेफड़े एक cannula (20 जी) के माध्यम से एक तीन तरह से रोक मुर्गा का उपयोग कर formalin प्रवाह की नोक से जुड़ा हुआ है (चित्र 4बी). निम्न एवं ऊपरी कंटेनरों के बीच फिक्सिंग एजेंटों के विभिन्न पृष्ठ स्तरों से दाब उत्पन्न होता है (चित्र 5)। दाब अंतर 25 cmH2O है; तथापि, ऊँचाई समायोजन घुंडी का उपयोग करके दाब को 25-30बउ2 हे(चित्र 5)की श्रेणी में समायोजित किया जा सकता है। एक पंप ट्यूब के माध्यम से निचले और ऊपरी कंटेनरों को जोड़ता है (चित्र 3ए),एजेंट सतह ऊंचाई फिक्सिंग में एक 25 सेमी अंतर के संरक्षण. एजेंट प्रवाह की दिशा चित्र 3ठमें वर्णित है।
अगले प्रस्तुत फेफड़ों में हिस्टोलॉजिकल निष्कर्षों का एक प्रतिनिधि परिणाम है, निर्धारण के 48 एच के बाद. छह महीने के पुरुष SMP30-KO चूहों सिगरेट के धुएं या ताजा हवा (नियंत्रण के रूप में) के लिए 8 सप्ताह के लिए उजागर किया गया. दोनों ऊतक नमूनों hematoxylin और eosin के साथ दाग थे. चित्र 6 एक से पता चलता है हवा उजागर चूहों से हिस्टोलॉजिकल निष्कर्ष, जो चिह्नित हवाई क्षेत्र वृद्धि का प्रदर्शन नहीं किया. इसके विपरीत, चित्रा 6बी चूहों कि पुरानी सिगरेट के धुएं के संपर्क में थे में महत्वपूर्ण हवाई क्षेत्र वृद्धि और कूपिका दीवार विनाश का पता चलता है.
माध्य रैखिक अवरोधन (एमएलआई) Thurlbeck एट अल द्वारा वर्णित विधि के अनुसार निर्धारित किया गयाथा। 20 हवाई क्षेत्र के आकार का उपयोग करने के लिए। विनाशकारी सूचकांक (डीआई) सएटा एट अल द्वारा वर्णित विधि के अनुसार कूपिका दीवार के विनाश का मूल्यांकन करने के लिए निर्धारित किया गयाथा। 21.फेफड़ों के नमूने की इन मॉर्फोमीट्रिक परीक्षाओं से पता चला कि डीआई और एमएलआई हवा से उजागर चूहों की तुलना में धुएं से उजागर एसएमपी 30-के चूहों में काफी अधिक थे (चित्र 6सी, डी) .
चित्र 1: फेफड़ों exsanguination. एक कैनुला सही निलय के स्थान पर डाला गया था और फुफ्फुसीय धमनी के लिए निर्देशित किया गया था। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्र 2: वैक्यूम सिरिंज फेफड़ों मुद्रास्फीति. फेफड़ों को फुलाने के लिए फिक्सिंग एजेंटों युक्त 10 एमएल सिरिंज के अंदर वैक्यूम स्थिति। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्र 3: फेफड़ों निर्धारण उपकरण. (ए) एक्रिलिक उपकरण एक पंप मशीन का उपयोग करते हुए, 48 एच के लिए लगातार फेफड़ों को फुलाने के लिए एक 25 cmH2हे दबाव अंतर की अनुमति दी। (ख) कारक प्रवाह को ठीक करने की दिशा तीरों द्वारा दर्शायी जाती है। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्र 4: लोअर कंटेनर. (क) माउस फेफड़े का नमूना निचले कंटेनर में फिक्सिंग एजेंटों के अंदर तैनात किया गया था। (बी) कम कंटेनर के अंदर, एक नमूना प्लेसमेंट बॉक्स है, जिसके शीर्ष पर फॉर्मेलिन तीन तरह स्टॉपकॉक और कैनुला के माध्यम से बहती है। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्र ााााः उपसा और ऊँचाई समायोजन घुंडी. ऊपरी कंटेनर ने 25 cmH2हे का दाब उत्पन्न किया। ऊपरी कंटेनर की ऊंचाई को समायोजित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है जो ऊंचाई समायोजन knobs के दो जोड़े हैं; परिणामस्वरूप, उत्पन्न होने वाले दबाव को 25-30 cmH2O की श्रेणी में सेट किया जा सकता है, कृपया इस आकृति का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्र 6: माउस फेफड़े हिस्टोलॉजिक और रूपमितीय निष्कर्ष. 8 सप्ताह सिगरेट धूम्रपान उजागर या हवा उजागर SMP30-KO चूहों (6 महीने पुराने, पुरुष), hematoxylin-eosin के साथ दाग से फेफड़ों वर्गों के प्रतिनिधि histologic छवियों. स्केल बार ] 100 डिग्री मी. (क) वायु-प्रकट समूह ने महत्वपूर्ण वृद्धि या अन्य निष्कर्ष नहीं दिखाया। (बी) सिगरेट के धुएं से ढके समूह में चिह्नित वायु क्षेत्र वृद्धि और कूपिका दीवार विनाश दिखाया गया। (ग) माध्य रैखिक अवरोधन (एमएलआई)। सिगरेट के धुएं से भरे चूहों के फेफड़ों में, एमएलआई हवा से उजागर चूहों (* पी और एलटी; 0.001) से काफी अधिक था। (डी) विनाशकारी सूचकांक (डीआई)। सिगरेट के धुएं से भरे चूहों के फेफड़ों में, डीआई को हवा से उजागर चूहों के फेफड़ों की तुलना में काफी वृद्धि हुई थी (*p और 0.001)। मान ों को माध्य के रूप में प्रस्तुत किया जाता है - SD (n ] 6 प्रत्येक समूह के लिए). कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
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Discussion
कृंतक फेफड़ों के लिए निर्धारण प्रक्रिया यहाँ प्रस्तुत उपन्यास नहीं है; हालांकि, इस प्रणाली के कई फायदे हैं। सबसे पहले, यह एक ही स्थिति के साथ कई फेफड़ों (अधिकतम 20) को ठीक कर सकते हैं। विष विज्ञान की सोसायटी में कहा गया है कि गुरुत्व के लिए दबाव22-25 बउ2 हे22से भिन्न होता है। उल्लेखनीय है कि कई अध्ययनों से 25 cmH2O13,19,23,24,25, 26,27के दबाव पर फेफड़ों का निर्धारण किया है जिसे वर्तमान प्रणाली12,15 ,16,17,18का प्रयोग करते हुए हमारी प्रयोगशाला में अपनाया गया है .
दूसरे, यह समय की विभिन्न अवधियों के लिए एक निरंतर दबाव पर फेफड़ों के ऊतकों को ठीक कर सकते हैं. हमारी प्रयोगशाला में, फेफड़ों के नमूने आमतौर पर 48 एच के लिए तय कर रहे हैं. कई अन्वेषक अपेक्षाकृत कम समय (उदा., 5-20 मिनट)13,28,29,30 ,31,32का उपयोग करते हैं , फिर फुलाए हुए फेफड़ों को बांधते हैं और विसर्जित कर देते हैं वांछित के रूप में विस्तारित अवधि के लिए formalin. कोई डेटा या अनुसंधान फेफड़ों के निर्धारण के लिए अवधि की अवधि के लिए एक सोने के मानक का संकेत है. हालांकि, अमेरिकन थोरैसिक सोसायटी (एटीएस)/यूरोपीय श्वसन सोसायटी (ईईएस) के बयान "सिल्वर मानक" का वर्णन करते हैं, जिसमें एयरवे मुद्रास्फीति के दबाव को कम से कम 24 एच14के लिए बनाए रखा जाना चाहिए। पैथोलॉजी के जापानी सोसायटी ने भी लगातार इम्यूनोहिस्टोकेमिकल स्लाइड का उत्पादन करने के लिए 1 सप्ताह से अधिक समय के निर्धारण समय की सिफारिश की; हालांकि, उनकी सिफारिश मानव नमूनों33का उपयोग कर विश्लेषण पर आधारित है। अपेक्षाकृत कम फिक्सिंग समय अवधि वर्तमान प्रणाली के लिए लागू नहीं हो सकता है, क्योंकि प्रत्येक नमूना व्यक्तिगत रूप से कम कंटेनर में रखा जा करने के लिए माना जाता है. यह वर्तमान प्रणाली की एक सीमा है। अंत में, माउस फेफड़ों के निर्धारण के लिए समय की उचित लंबाई अज्ञात रहता है.
इस विधि में महत्वपूर्ण कदम औपचारिक निर्धारण प्रक्रिया के दौरान फेफड़ों के औपचारिक रिसाव के जोखिम से संबंधित हैं। फेफड़ों के औपचारिक रिसाव फेफड़ों के आकार संकुचन पैदा कर सकता है। इस जोखिम को दो भागों में विभाजित किया जा सकता है। पहले भाग बलिदान कदम के दौरान होता है. वक्ष ीय पिंजरे को खोलते समय, फेफड़ों की सतह पर चोट का कारण नहीं होना महत्वपूर्ण है। रोकथाम के लिए महत्वपूर्ण डायाफ्राम से इस दृष्टिकोण और फेफड़ों के बाद छाती रिब पिंजरे में कटौती करने के लिए जारी रखने के लिए है पार्श्व pleura से अलग है. इस विधि शल्य चिकित्सा उपकरणों की वजह से फेफड़ों की चोट से बचा जाता है. एक और महत्वपूर्ण कदम तब होता है जब सही मुख्य ब्रोंकस बांधने. यह पहचान करने के लिए महत्वपूर्ण है जो माउस के सही lobes हैं. फेफड़ों को एक स्थिति में रखकर जहां वे एक पृष्ठीय दृश्य से देखा जा सकता है फेफड़ों के स्थान की आसान पहचान में सक्षम बनाता है.
दूसरा भाग विशेष उपकरणों का उपयोग कर फेफड़ों निर्धारण प्रक्रिया के दौरान है। कम कंटेनर के फॉर्मेलिन बंदरगाह में फेफड़ों के नमूने को डालने के दौरान एक महत्वपूर्ण कदम होता है। यह पुष्टि की जानी चाहिए कि प्रविष्टि कसकर लगातार दबाव प्रक्रिया के दौरान औपचारिक बंदरगाह से फेफड़ों के नमूना टुकड़ी को रोकने के लिए सुरक्षित है. एक और पहलू को उजागर करने के लिए विशेष उपकरणों के तीन भागों (कम कंटेनर, ऊपरी कंटेनर, और पंप) के बीच टयूबिंग कनेक्शन है. सभी ट्यूब कनेक्शन कसकर जुड़ा होना चाहिए. यदि रिसाव होता है, ऊपरी कंटेनर में औपचारिक मात्रा कम हो जाएगी, जिससे लगातार दबाव कम हो जाएगा।
सोसाइटी ऑफ टॉक्सिकोलॉजिक पैथोलॉजी की सिफारिशों के अनुसार, फॉर्मेलिन के इंट्राट्रेकल इन्स्टिटेशन के पास कृंतक फेफड़ों के मॉडल के फायदे हैं, जो इसके नुकसान से अधिक प्रचलितहैं। उन्होंने कूपिका फेफड़ों के मोरहोमट्री के मात्रात्मक अध्ययन करते समय इंट्राट्रेकल फॉर्मेलिन निर्धारण विधि के उपयोग का सुझाव दिया है। इंट्राट्रेकल फेफड़ों के आस-पास के दो फायदे हैं, जिनमें वायुमार्ग और कूपिका दीवार के संरक्षण के साथ-साथ फेफड़ों की पैरेन्काइमा22के दृश्य शामिल हैं। ब्रेबर एट अल द्वारा किए गए एक अध्ययन से पता चला है कि निर्वात मुद्रास्फीति और पूरे शरीर के परफ्यूजन तरीकों13की तुलना में फेफड़ों की संरचना को संरक्षित करने के मामले में इंट्राट्रेकल फॉर्मेलिन इन्टिलेशन विधि बेहतर है। वर्तमान विधि कूपिका क्षेत्र के दृश्य को अनुकूलित करने के लिए माउस मॉडल में इंट्राट्रेकल स्टिवन का उपयोग करती है।
एजेंटों फिक्सिंग के बारे में, 10% formalin, जो formaldehyde शामिल है, पारंपरिक रूप से प्रयोग किया जाता है. Formaldehyde व्यापक रूप से इम्यूनोपैथोलॉजिकल जांच के लिए एक फिक्सिंग एजेंट के रूप में प्रयोग किया जाता है क्योंकि यह पूरी तरह से प्रोटीन इम्यूनोजेनिकिटी को नष्ट नहीं करता है। हालांकि, एटीएस/ईईएस विवरण औपचारिकता निर्धारण की सिफारिश नहीं करता है, क्योंकि यह ऊतक संरचना14को पर्याप्त रूप से स्थिर नहीं करता है। Glutaraldehyde के बजाय airway डालने के लिए सिफारिश की है; हालांकि, यह प्रोटीन इम्यूनोजेनिकिटी को नष्ट करने के अधीन है, जिसके परिणामस्वरूप इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री के लिए अनुपयुक्त फिक्सिंग एजेंट होता है। सबूत के कई टुकड़े की सूचना दी है कि निश्चित फेफड़ों morphometric मूल्यांकन के लिए प्रदान किया जा सकता है (उदाहरण के लिए, मतलब रैखिक अवरोधन, आंतरिक सतह क्षेत्र, और विनाशकारी सूचकांक) वर्तमान निर्धारण प्रणाली12 का उपयोग कर औपचारिकता निर्धारण के बाद , 15 , 16 , 17 , 18. निश्चित रूप से, glutaraldehyde वर्तमान प्रणाली के लिए अपनाया जा सकता है; इस प्रकार, शोधकर्ताओं प्रयोगात्मक जरूरतों के अनुसार वर्तमान प्रणाली में दोनों एजेंटों का चयन कर सकते हैं.
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Disclosures
लेखकों की घोषणा करने के लिए कोई प्रतिस्पर्धी हित नहीं है।
Acknowledgments
इस काम के भाग में जेएसपीएस KAKENHI अनुदान संख्या 26461199 (टी Sato) और पर्यावरण और लिंग विशेष चिकित्सा के लिए संस्थान, Juntendo विश्वविद्यालय चिकित्सा के स्नातक स्कूल, अनुदान संख्या E2920 (टी Sato) द्वारा समर्थित किया गया था. वर्तमान विधियों के डिजाइन में और पांडुलिपि लिखने में funder की कोई भूमिका नहीं थी।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 10% formalin (formalin neutral buffer solution) | Wako | 060-01667 | |
| Bent forceps | Hammacher | HSC187-11 | |
| Cannula, size 20G | Terumo | SR-FS2032 | |
| Cannula, size 22G | Terumo | SR-OT2225C | Cannula to exsanguinate lung |
| Forceps | Hammacher | HSC184-10 | |
| Kimtowel | Nippon Paper Crecia (Kimberly Clark) | 61000 | |
| Kimwipe | Nippon Paper Crecia (Kimberly Clark) | 62011 | |
| Lower container (acrylic glass material) | Tokyo Science | Custom-made | Pressure equipment component |
| Roller pump | Nissin Scientific Corp | NRP-75 | Pump machine to exsanguinate lung |
| Roller pump RP-2000 | Eyela (Tokyo Rikakikai Co. Ltd) | 160200 | Pressure equipment pump |
| Silicone tube Ø 9 mm | Sansyo | 94-0479 | Pressure equipment component |
| Somnopentyl (64.8 mg/mL) | Kyoritsu Seiyaku | SOM02-YA1312 | Pentobarbital Sodium |
| Surgical scissor | Hammacher | HSB014-11 | |
| Suture thread, size 0 | Nescosuture | GA01SW | |
| Syringe, 1 mL | Terumo | SS-01T | |
| Syringe, 1 ml with needle | Terumo | SS-01T2613S | |
| Syringe, 10 mL | Terumo | SS-10ESZ | |
| Three-way stopcock | Terumo | TS-TR1K01 | |
| Upper container (acrylic glass material) | Tokyo Science | Custom-made | Pressure equipment component |
References
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