Summary
许多治疗和基因突变影响性成熟和生育的时间。本议定书描述了一种非侵入性的方法来评估小鼠和大鼠青春期发作之前, 建立一个生育研究在有性成熟的动物。
Abstract
对生殖能力的评估对于理解治疗或基因操作对生殖轴的影响至关重要, 也称为下丘脑-垂体-性腺轴。生殖轴是环境和内部输入的关键集成商, 适应生育条件, 有利于繁殖。在开始对小鼠和大鼠的生育研究之前, 性成熟度被评估为排除了观察到的生殖表型是由延迟或缺席青春期发作引起的可能性。本议定书描述了一种非侵入性的方法来评估男性青春期发作通过确定包皮分离, 并在女性通过阴道开放和第一次发情。在确认青春期完成和性成熟的成就后, 可以开始生育研究。该程序描述了小鼠和大鼠的最佳育种条件, 如何建立生育研究, 以及评估和确定治疗或基因删除是否影响生育能力的参数。
Introduction
通过青春期的过渡需要达到性成熟和生殖能力。成年期的青春期过渡和生育能力的维持由生殖轴调节, 也称为下丘脑-垂体-性腺轴 (图 1)。青春期开始和维持生育的时间是严格的内部和环境因素, 以增加后代和父母的生存几率1,2。该议定书提供了一种非侵入性的方法来确定小鼠和大鼠的青春期发作, 以确认在建立生育研究以评估生殖能力之前的性行为成熟度。
生育研究是在性成熟的动物进行的, 可以在动物经历青春期后开始。在青春期开始之前, 生殖轴是静止的, 并且性成熟的关键驱动因素, 促性腺激素释放激素 (促性腺素), 释放到垂体不足以启动青春期 (图 1)。青春期发作是一个复杂的过程, 导致增加促性腺激素释放在中位隆起。促性腺激素促进促黄体素 (LH) 和卵泡刺激激素 (FSH) 分泌从垂体, 两种激素对性腺成熟和生殖功能至关重要 (图 1)3,4,5.
对生殖轴的侮辱导致生育能力下降, 也可以促进或延缓青春期发作。已知影响青春期发作时间和生殖能力的条件包括接触内分泌干扰化学品6,7, 增加/减少体重1,8, 变化日长2,9和遗传突变10,11,12,13,14,15。
性成熟的开始是一个关键步骤, 需要在建立生育试验之前完成。通过包皮分离、阴道开放和第一次发情确定青春期发作的好处是这些程序的非侵入性特征, 因为它们不需要收集或牺牲动物16,17。
在青春期发作确定后, 正确地建立生育研究将提供有关生殖轴完整性的重要信息, 并且通常有生成实验动物的第二个优势进一步研究 (细化)18. 本议定书所述的生育率研究设置可以检测男性和女性生殖能力方面的次要和重大缺陷。评估的关键参数包括 1) 时间到第一个垃圾, 2) 在给定的时间段内生成的凋落物的数量和 3) 垃圾大小。最后, 还包括为确定生育障碍原因而进行的后续研究类型的建议。
所述的协议是指小鼠, 代表数据反映了转基因小鼠所做的工作。但是, 所有包含的协议在大鼠中同样有效。
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Protocol
此处描述的所有方法均已通过密歇根州立大学的机构动物护理和使用委员会批准, 并按照实验室动物的护理和使用指南进行。
1. 确定青春期发作
- 遵循服装的制度准则, 至少, 有必要穿干净的实验室大衣和干净的手套。总是用干净的手套来处理老鼠。
- 通过在桌子上放置一个垫子来准备工作区域。
- 将干净的鼠标保持架顶部与网格朝向上朝上。
- 在工作区中设置比例。将清洁的 500-1000 毫升烧杯放在刻度和皮重上。
- 在工作区旁边放置一张纸, 记录体重和包皮分离、阴道张开或第一次发情。
- 确定研究的老鼠。对青春期发作进行每日检查, 直到达到青春期。在整个研究过程中, 每天的同一时间进行检查。青春期发作可能发生早在出生日 11-1219, 然而, 在大多数实验设置, 青春期发作监测开始在 ~ 22 天。
- 将鼠标保持架置于工作区域 (步骤 1.2)。打开笼子, 将盖子、水瓶和食物夹放在桌子上。
- 测定雄性小鼠包皮的分离。
- 按住鼠标的尾巴, 把它放在干净的鼠标笼顶部从步骤1.2.1。轻轻握住尾巴, 让鼠标探索笼顶的网格, 为5秒。
- 向后轻轻拉尾巴;这通常导致动物向前移动, 而持有的网格与它的前腿。另一只手靠近颈部和耳朵的皮肤。
- 用拇指和食指抓住肩膀和颈部之间松弛的皮肤。重要的是要得到良好的皮肤保持, 因为它会防止鼠标转动它的头周围咬。
- 用剩下的手指抓住背部的皮肤, 按住它的手。保持牢固, 不妨碍呼吸, 血液流动, 或破坏骨骼, 肌肉或皮肤。转动手, 露出鼠标的腹部, 同时支持鼠标的背部在手掌内。
- 用自由的手, 轻轻地推回周围的鸡皮不强迫。在包皮分离时, 包皮皮肤向后滑动露出阴蒂的小弟弟(图 2A, 箭头显示包皮分离)。记录包皮分离的存在或缺失。
- 通过轻柔地将鼠标放在步骤1.2.2 的500-1000 毫升烧杯中, 并记录体重, 对老鼠进行称量。
- 在笼子的地板上按住烧杯0-2 厘米, 慢慢地在烧杯上, 让鼠标自行退出, 在外壳笼中重新引入鼠标。用清水和温和的洗涤剂清洁烧杯, 然后将其晾干, 然后再将其恢复到秤上并配衡。
- 雌性小鼠阴道张开的测定。
- 在工作区放置一个棉球、烧杯和一瓶无菌水 (步骤 1.2)。把水倒进烧杯里。加湿棉球与无菌水, 并把它放在笼子顶部从步骤1.2.1。
- 将鼠标保持架放置在工作区域 (步骤 1.2) 中, 并将鼠标从其主笼中转移到保持架顶部 (步骤 1.2.1), 方法是将其固定在尾部的底部。轻轻拉回尾巴, 鼓励鼠标向前移动。
- 抬起尾巴, 同时用自由的手指支撑臀部。允许后肢与保持架顶部保持接触。如果鼠标移动太多, 请按步骤 1.5. 1-1. 5.4 中所述握住它的手。
- 轻轻地清洁外阴与水加湿棉球从步骤1.6.1。为每只老鼠使用干净的加湿棉球。要确定阴道开放, 检查外阴和确定阴道是否完全打开 (图 2A, 女性阴道开放)。
- 记录是否发生阴道开孔。按步骤 1.5. 6-1. 5.7 中所述, 称量鼠标并将其返回到主笼。
- 第一次发情是第一次排卵的指标。
- 将无菌水、带标签的玻璃滑块和200µL 移液器放在工作区域 (步骤 1.2) 中的清洁尖端。
- 按步骤 1.6. 2-1. 6.3 中所述按住雌性。在阴道开口处放置含有约50µL 无菌水的移液器的尖端。
- 通过引入和再吸收约50µL 的水, 轻轻地从阴道壁上冲洗细胞2-4 次。将移液器尖端的内容涂抹到标记的玻璃显微镜幻灯片上。
- 使用10X 或20X 物镜仔细观察明场显微镜上的细胞形态学, 或让涂抹风干约 1 h, 然后复0.1% 亚甲基蓝溶液 (溶解于 ddH2O) (图 2B)。复, 将干滑片浸入0.1% 亚甲基蓝溶液中, 用于三十年代。让滑动空气干燥1小时。
- 在10X 或20X 的明亮场显微镜上观察步骤1.7.4 的幻灯片。通过观察能够区分发情周期四个不同阶段 (图 2B) 的细胞形态学, 建立发情周期 (图 2B)20的阶段。
注意: 后期的特点是角质层鳞状上皮细胞和白细胞的混合物, diestrus 由白细胞, 发情前期由白细胞和有核上皮细胞的混合物, 和由角质层上皮细胞的发情 (图 2B)20。 - 按照步骤 1.5. 6-1. 5.7 中所述, 记录体重并将鼠标返回其主笼。阴道涂片在老鼠第一次发情的当天终止 (图 2B)。
2. 理想的繁殖室条件
- 确保饲养室的温度约为20-24 摄氏度, 55 ±10% 湿度, 和均匀的房间光的强度约1米以上楼层21。这种光强度允许 25-80 lux 的理想中笼光强度。要测试光照强度, 请使用测光表。
- 使用自动化系统控制育苗室内的照明, 确保整个实验中的照明时间适当。最佳的昼长条件, 以评估啮齿类动物的肥力范围从12小时 (12 小时光和12小时黑暗, LD12:12), 到 "夏天的" 条件与14小时的光和 10 h 黑暗 (LD14:10)21。
- 准备饲养笼。
- 准备一个干净的鼠笼与盖子, 水, 食物, 床上用品和巢每繁殖对。
- 填写所有必需信息的笼卡, 包括性别、出生日期、鼠标应变和交配的日期。
3. 生育研究
- 确定用于生育研究的动物。确保动物性成熟 (步骤 1)。在小鼠中建立生育研究的一个典型的年龄范围是10-16 周的年龄, 在大多数实验条件下已经完成性成熟的年龄。
- 在干净的桌子上, 放置在步骤2.3 中准备的饲养笼。
- 抓住并按住鼠标。
- 慢慢地把戴手套的手放进老鼠笼里。把手放在笼子里很短一段时间 (约5-30 秒), 让老鼠适应手套和手的气味。避免忙碌和颠簸的动作。
- 将一只巨手放在笼子底部, 慢慢接近老鼠。他们会逃走的当它们在手上奔跑时, 将一只老鼠的尾巴夹在拇指和食指之间。
- 用尾巴抬起鼠标2-3 秒。如果鼠标需要保持更长的时间, 抓住尾巴, 把鼠标放在一只手上, 保持尾巴的保持。
- 将1名男性和此后1名女性通过握住尾巴 (步骤 3.3), 进入育种笼中。确保雌性在建立生育力测定时处于相同的发情阶段。通过执行步骤1.7 中所述的阴道涂片来确定雌性的发情阶段。
- 关闭笼子, 确保老鼠有食物、水和筑巢材料。将笼卡固定器连接到固定架上。
- 将饲养笼放在外壳架上。保持繁殖笼尽可能不受干扰, 在整个生育期的研究。进行30天的生育研究。对于每种育种对, 保留详细记录和注 1) 交配的日期设置, 2) 出生的日期和 3) 出生的幼崽的数量, 包括死亡和活的幼崽。在整个研究过程中每天进行垃圾检查。
- 如果在步骤3.6 中建立了对生育能力的不或弱影响, 则延长生育研究30-60 天。
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Representative Results
所提供的结果来自两个不同的转基因小鼠模型, 其中转录因子腹前同源盒 1 (Vax1) 已被删除在整个身体上的一个等位基因, 这里称为杂合子小鼠 (13), 或Vax1已有条件地删除在促性腺激素的神经元22, 这里称为条件 KO (cKO)。在建立生育研究之前, 确认所有小鼠青春期发作是很重要的。
首先, 建立了阴道开放和包皮分离的日和体重。在小鼠, 阴道开放和包皮分离发生在相同的年龄和体重与控制小鼠 (图 3A和F, 分别)。相比之下, 阴道开放和包皮分离在 cKO 女性和男性中显著延迟, 与体重增加有关 (图 3B和G, 分别)。青春期发作是在某种程度上与体重相关, 这在女性23尤其如此。为了确定阴道开放和包皮分离的延迟是否与体重增加的延迟有关, 在对照组 (4.5 周龄) 的阴道开放和包皮分离的平均年龄与男性 cKO 的体重比较和女性在4.5 周的年龄。在4.5 周, 女性控制和 cKO 有相当的体重 (图 3C), 而 cKO 男性比对照组稍重 (图 3H)。这表明 cKO 中阴道开放和包皮分离的延迟与体重增加的延迟无关。
阴道张开是性成熟的早期标志, 第一次发情是第一次排卵的指标, 是青春期17完成的标志。为了确定是否有 cKO 雌性与对照组相同年龄和体重达到第一次发情, 阴道涂片每天从阴道开放日开始, 直到第一次发情 (图 3E和3D)。在小鼠, 第一次发情和第一次发情的重量是可比的控制和 HETs (图 3D)。相比之下, cKO 没有在发情周期中取得进展, 在80天的年龄没有第一次发情 (图 3E)。此延迟不是由于体重减轻 (图 3E)。
采用经证实的青春期发作的小鼠, 建立了生育研究。在 C57BL/6J 遗传背景下, 在转基因小鼠中建立了 12 h 光和 12 h 暗条件 (LD12:12) 的肥力测定方法。实验开始时, 小鼠的年龄为10-16 周。对四组小鼠进行了研究: 控制交配 (WTxWT), 控制男性与女性 (WTxHET), 男性与 WT 女性 (HETxWT), 和过度的男性与女性 (HETxHET)。首先, 确定了3月内产生的凋落物数量。控制交配 (WTxWT) 在3月内平均产生2.8 个凋落物, 这是与对照雌性 (HETxWT 交配,图 4A) 配对的男性。女性, 无论是与 WT 男性 (控制), 或一个过度男性, 在3月的生育研究中产生了显著减少的凋落物, 揭示了 subfertile13的女性。为了说明在建立生育试验之前确认青春期发病的重要性, cKO 小鼠对生殖能力进行了评估, 其中雄性延迟了包皮分离 (图 3G), 雌性没有第一个发情80天的年龄 (图 3E)。生育研究是建立 > 1 周后, 男性有包皮分离, 并在女性在 > 80 天的年龄。在70天的生育研究中, 控制交配产生平均2.2 个凋落物, 而没有凋落物产生从 cKO 雌性与 WT 男性配对, 或 cKO 男性配对与对照 (WT) 女性 (图 4B), 显示这些小鼠是不孕5,22。
为了更好地表征女性的生育表型, 我们记录了生成第一个垃圾所花的天数。WTxWT 交配在平均22天内产生了他们的第一个垃圾 (图 4C), 这是可以媲美的男性与 WT 女性配对。与 WT 男性配对的女性平均需要58天的时间来生产第一个垃圾, 这与 HETxHET 交配相似 (图 4C)。然而, 延迟产生的 HETxHET 的女性的第一个垃圾是非常异构的, 并延迟更多的交配, 建议半外显率的表型, 并对育观察到 HETxHET 交配13的贡献.
评估凋落物的大小可以提供有关排卵/植入和精子生产的重要信息。确定了前3个凋落物的平均大小。有趣的是, 所有交配组合 (WTxHET, HETxWT, HETxHET) 产生明显较小的凋落物与对照 (WTxWT,图 4D), 显示男性和女性的老鼠都是 subfertile。
图 1: 下丘脑-垂体-性腺轴控制性成熟和繁殖.在生殖轴的顶点是下丘脑 kisspeptin 神经元 (黄色圆圈) 和促性腺激素释放荷尔蒙 (性腺激素) 神经元 (绿色圆圈)。在少年时期 (青春期前), kisspeptin 神经元释放小 kisspeptin 到促性腺激素的神经元。青春期发作后, kisspeptin 释放促性腺激素的神经元是增强 (后青春期)。晚期幼年期促性腺激素释放显著增加促黄体激素 (LH) 和卵泡刺激激素 (FSH) 释放垂体, 导致性腺成熟和生殖功能在成年。请点击这里查看这个数字的更大版本.
图 2: 测定小鼠青春期发病情况.在小鼠青春期发作的外部标记是(A)包皮分离在雄性和阴道开放在女性。刻度条 = 1 厘米. (B)用于确定第一次发情的阴道灌洗的示例图像。幻灯片是复染三十年代与0.1% 亚甲基蓝, airdried 和观察在20X 放大倍率。黑色箭头表示有核上皮细胞, 黄色箭头与黑色轮廓表示白细胞和白色箭头表示角质层上皮细胞。第一次发情发生在10天后阴道开放。请点击这里查看这个数字的更大版本.
图 3: 可从青春期发病研究中产生的代表性数据。(a、B)在转基因小鼠模型的阴道开放和体重。(C)体重在4.5 周控制和 cKO 女性。(D、E)第一次发情时的年龄和体重。(F、G)年龄和体重在包皮分离。(H)体重在4.5 周控制和 cKO 男性。数据表示平均值±5-10 每组, 统计分析学生 t 测试。**p< 0.01;p< 0.001。这些数字已从上一出版物13、22修改。请点击这里查看这个数字的更大版本.
图 4: 转基因小鼠生育力研究的代表性分析.对(A) Vax1 的小鼠和(B) cKO 的生育能力评估是在处女10至16周的小鼠身上进行的, 在指定的时限内记录的凋落物数量。数据代表的是± SEM. 通过单向方差分析进行了邓尼特的多重比较试验。*p< 0.05;p< 0.001。(C)确定首次凋落物的天数 (n = 5-12) 和(D)前三个凋落物 (n = 10-13) 的平均垃圾量。数据表示的意思是±扫描电镜. 通过学生 t 检验进行统计分析, 并与 wt x 含量 (p< 0.05) 进行比较;**p< 0.01。这些数字已从上一出版物13、22修改。请点击这里查看这个数字的更大版本.
图 5: 建立生育试验。(a)育种方案的例子和生育率测定所需的动物数量。一项研究所需的动物总数2个条件, 如控制与 KO 或控制饮食相比高脂肪饮食, 在男性和女性的生育率评估是: 2 小鼠每交配 (1 男性 x 1 女性) x 8 动物每组 x 2 条件 x 2 性别s (评估男性和女性的生育能力) = 每项研究总共64只动物。如果男性和女性的生育能力研究是并行完成的, 那么一套控制 x 控制交配通常可以用来比较对男性和女性生殖的影响。(B)在建立生育试验时, 所用的小鼠需要达到性成熟。不同品系的小鼠生殖特性不同,24岁时达到性成熟。有关大鼠的信息, 请参阅上一出版物25。请点击这里查看这个数字的更大版本.
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Discussion
小鼠的整体健康对于成功的生育力测定21至关重要。在进行生育试验时, 不每天对老鼠进行身体检查是很重要的, 因为这会引起压力。进一步避免频繁的笼型变化, 因为这些也有压力。理想的笼型改变每周不超过1-2 次。暗相照射对夜间啮齿动物的繁殖有负面影响。在黑暗的时间里, 不要在繁殖室开灯。如果在天黑时需要进入房间, 请使用昏暗的红光照明。另一个压力源是在谢切诺夫中存在过量的气味、振动或噪音, 用于研究的全部或部分。为了帮助减轻压力和改善小鼠的健康和育种, 给小鼠筑巢材料或其他类型的浓缩。巢式建筑是小鼠的重要行为, 将提高育种的成功率。鸟巢还允许老鼠藏身和玩耍。健康和营养良好的动物繁殖良好, 因此提供广告随意获得高质量的食物和水是很重要的。如果育种对开始表现出疾病的症状, 如皮炎 (经常在 C57BL/6J), 牙错或其他, 排除这些小鼠从研究。此外, 如果研究是在免疫缺陷小鼠做的, 这是关键, 老鼠室保持清洁, 以保持生育能力。
为了适当地建立生育研究, 重要的是要决定是否在处女小鼠或成熟育种者中进行研究, 以及仔细选择用于控制交配的小鼠。控制交配应与实验育种者并行运行。这是当务之急, 因为未知的或意想不到的压力和环境的变化可能导致繁殖率的变化。控制交配优先于实验小鼠的凋落物配合 (图 5A)。这是特别重要的, 当生育率研究是在混合遗传背景的小鼠进行的, 由于小鼠株的育种特性有很大的差异 (图 5B)。
识别育表型可能是具有挑战性的由于研究的长时间, 和需要分析额外的参数, 以揭示其原因。在代表性数据中的小鼠是一个很好的例子, 一个适度的育表型 (图 4) 和扩展分析需要识别男性育。如代表性结果(图 3和4) 所示, 青春期正常起始 (图 3A、 D和F) 可与男性和女性育相关联 (图 4A、 C、 D).在这种情况下, 小鼠只有亚生育能力, 因此研究的长度延长到120天。这是重要的, 作为一个较短的生育研究 (60 天) 将无法揭示表型。男性的育是谦虚的, 第一次发现时, 男性与女性, 这也是 subfertile (图 4A) 配对。事实上, 在评估凋落物的平均大小时, 育的雄性播种 (图 4D) 得到确认。随访研究证实雄性育, 并揭示了男性精子质量不佳, 运动性精子减少了 80%,13。
当在青春期发作 (> 5 天) 的主要延迟的小鼠进行生育和青春期发病研究时, 考虑调节青春期起始26的不同因素是很重要的。虽然阴道开放和第一次发情最经常发生在大鼠, 第一次发情在小鼠通常发生10天后阴道开放25,27。因此, 建议确保阴道开放和第一次发情在两大鼠和小鼠18,28的工作时建立。青春期发病与女性的新陈代谢状态和体重有关, 男性在1、7、9、29等小的程度上与此相关, 治疗或基因突变减慢动物生长将在某些情况下导致青春期延迟发作。要确定青春期发作的延迟/进展是否可能与快速/缓慢增长相关联, 在评估青春期发作时每天对小鼠进行称量是很重要的。如图 3B和C所示, 以及G和H, 青春期发作的延迟与减轻体重无关, 但是青春期发病的真正延迟, 如性腺组织学和循环激素证实级别22。使用包皮分离和阴道开放作为青春期发作的标志物的一个主要限制是, 两个通常会发生随着时间的推移, 由于其他机制以外的繁殖轴18的活动增加,30,31 (图 1)。其中一个例子是 cKO 女性延迟阴道开放 (图 3B)。由于缺乏排卵22 (图 3E), cKO 雌性永远不会变得肥沃。事实上, 进一步的研究评估激素水平和 cKO 小鼠的性腺组织学证明, 这些小鼠从未完成青春期和不孕22 (图 4B)。这显示了使用外部标记来确定青春期发作的限制。青春期的完成和达到性成熟需要增加促性腺激素释放和激活的生殖轴 (图 1), 并充分确认性成熟的性腺形态学和循环激素水平需要评估22,31. 在男性, 测量睾丸激素, 并评估精囊大小和睾丸形态和大小除了精子质量将确认青春期达到16,22,32。在雌性, 测量孕酮和雌激素水平结合子宫和卵巢重量和形态学将确认青春期的完成17,19,22,33。
凋落物大小可能会影响怀孕长度和年龄在青春期发作。大多数小鼠菌株的妊娠期为18-22 天。然而, 如果母亲预计有大量的垃圾, 妊娠期往往减少34,35。另一方面, 如果母亲是哺乳以前的垃圾, 这可能导致妊娠期延长5。大凋落物中的幼崽也往往延迟青春期发作。这是由于他们的增长略有延迟1,9,34,35。如果进行了生育研究, 其中一个鼠标组 (控制或实验) 产生非常大的凋落物, 建议将凋落物的大小均匀化, 也称为剔除, 允许研究的凋落物具有可比的大小。
复制只能在体内进行评估, 因为繁殖所涉及的多个器官 (图 1) 和调节生殖轴3的广泛反馈机制。生殖能力的某些方面可以通过阴道堵塞检测快速评估, 其中男性的能力安装女性和离开一个物理塞在阴道是观察13,36。虽然这是一个有用的方法来评估男性性行为, 这种类型的研究不允许检测生殖中的小问题, 也不评估长期保持生育能力或造成的垃圾大小和父母的行为。这里所述的议定书在堵塞试验方面具有许多优势, 主要是查明男女生殖能力的次要和重大影响的能力 (图 4)。
生育率随着年龄的增长而减少, 另外女性发情周期在衰老5、28期间变得更长和不规则。因此, 建议在年轻和性成熟的动物中开始生育研究。一个典型的使用年龄范围建立生育研究是10-16 周的年龄。然而, 了解研究中使用的小鼠菌株的特定生殖特性是很重要的, 因为不同的小鼠或大鼠株之间存在生殖和性成熟的主要差异 (图 5B)。有关生殖特性的其他信息, 可在 jax-rpc 鼠标包括数据库 https://phenome.jax.org/中找到。执行更长的 (> 4 月) 生育研究的优势在于能够检测早期的生殖衰退, 在这种情况下, 小鼠可能在生育试验的前1-2 月内正常繁殖, 但在生殖前的早期繁殖开始下降。6月的年龄。
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Disclosures
作者没有什么可透露的。
Acknowledgments
我感谢提交人为本出版物的基础而作出的初步工作。多亏了 Aitor 老板, 珍娜. 瑞安和艾瑞卡 l. 舍勒帮助准备手稿。多亏了杰西卡. 苍利和奥斯汀下巴的技术援助手稿。H.M.H. 是由尤尼斯肯尼迪国家儿童健康 & 人类发展研究所的国家卫生研究院的奖励编号 R00HD084759 支持。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sterile Cotton Balls | Fisher | 22456885 | |
| Surface protector | Fisher | 1420637 | |
| Light meter | VWR | 21800-014 | |
| Methylene blue | Sigma-Aldrich | M9140 | |
| Microscope Slides | Genesee Scientific | 29-101 | |
| Optimouse rack with cages | AnimalCare systems | C89100 | |
| Water Bottle Basket | AnimalCare systems | C61011 | |
| Filtered Cage Tops | AnimalCare systems | C78210 | |
| Optimice Standard Feeder | AnimalCare systems | C40100SG | |
| Cage Card Holder | AnimalCare systems | C43251 | |
| Cage Cards | AnimalCare systems | M52010 | |
| Bottle Assambley | AnimalCare systems | C79122P | |
| Bed R'Nest Nesting | The Andersons | BRN4WSR | |
| 1/8" Corn Cob bedding | The Andersons | 8B | |
| Standard mouse chow | Teklad | 7904 (7004) | |
| Scale | VWR | 10205-004 | |
| Polypropylene Beaker | Fisher | 14-955-111F |
References
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