Summary
이 프로토콜에서 근 친 십자가 실시 하 고 그 십자가의 성공을 평가 하기 위한 메서드가 개미 Vollenhovia emeryi에 대 한 설명 합니다. 이러한 프로토콜은 실험 Hymenoptera에 섹스 결정 시스템의 유전 기초를 이해 하기 위한 중요 합니다.
Abstract
성 결심 캐스케이드의 유전 및 분자 구성 요소는 꿀벌, Apis mellifera, hymenopteran 모델 생물에에서 광범위 하 게 연구 되었습니다. 그러나, 작은 다른 비 모델 hymenopteran taxa, 개미 같은 성 결정 메커니즘에 대 한 알려져 있다. Hymenopteran 종에서 진화 하는 라이프 사이클의 복잡 한 특성, 유지 하 고 실험실에서이 유기 체 사이 실험적인 십자가 실시 하기가 어렵습니다. 여기, 우리가 근 친 십자가 수행 하 고 개미 Vollenhovia emeryi에 그 십자가의 성공을 평가 하기 위한 방법을 설명 합니다. Emeryi 대를 사용 하 여 실험실에서 근 친을 유도 하는 것은 종족의 유일한 생물학 때문에 상대적으로 간단 합니다. 특히,이 종 생산 androgenetic 남성, 그리고 여성 reproductives 전시 날개 다형성, 유전 십자가에 고기의 식별을 단순화. 또한, 근 친 결혼의 성공 평가 간단 남성 제작 하실 수 있습니다 지속적으로 정상적인 남성만 잘 정의 된 생식 기간 동안 필드에 표시 하는 동안, 십자가 inbreeding로 합니다. 우리의 프로토콜을 사용 하 여 emeryi 대 모델로 개미 종에서 성 결심 체계의 유전과 분자 기초 조사를 허용 합니다.
Introduction
개미와 꿀벌, Eusocial Hymenopteran taxa heterozygous 하나 이상의 무료 섹스 결정에 어떤 개인 (CSD) loci 될 여성, 그는 호모-또는 hemizygous haplodiploid 성 결심 체계 진화 남성 (그림 1A)1되.
섹스 결정 캐스케이드에 관련 된 유전자 및 분자 구성 요소는 꿀벌, Apis mellifera, hymenopteran 모델 생물2,,34에 잘 연구 되었습니다. 최근 비교 유전체학 조사 개미와 꿀벌 섹스 결정 통로 초기 성 결정 유전자를 csd5등에서 많은 상 상속 homologs 공유 것이 좋습니다. 그러나,이 homologs의 기능 보존에 대 한 증거는 아직 개미 부족.
이 문제를 해결 하기 위해 근 친 라인 들은 유전 매핑 및 분자 연구에 필수적으로 개발 될 필요가 있다. 그러나, 유지 하 고 진화 하는 라이프 사이클의 복잡 한 특성 때문에 실험실에서이 유기 체 사이 실험적인 십자가 실시 하기가 어렵습니다.
여기, 우리가 개미6,7성 결심 체계의 유전과 분자 기초 조사 모델 Vollenhovia emeryi 사용 합니다. 이 종의 근 친 라인 이전 개미6에 처음으로 섹스 결정에 관련 된 특성에 대 한 양적 특성 loci (QTL)의 연계 매핑을 위해 개발 되었다. 또한, 분자 성 결정 캐스케이드 조사7되었습니다. 이 종 특이 한 복제 시스템을 gynogenesis와 androgenesis (그림 1B)8,9를 사용 하 여 진화 하고있다. 대부분의 새로운 퀸 즈와 남성 clonally 생산 됩니다 산 모와 아버지의 유전자에서 각각. 또한, 근로자와 일부 퀸 즈 생산 성적으로8. 이 복제 시스템은 성적으로 사용 하 여 생산 하는 근 친 십자가 퀸 즈 생산과 남성 클래식 backcross에 유전으로 동일 하기 때문에 유전자 연구에 특히 적합 합니다. 성적으로 생산된 퀸 즈 다 모성 유전자10 (그림 1B)에서 생산 하는 퀸 즈에서 형태학 상으로, 이후 실시 하 고 평가 하는 근 친 십자가 크게 단순화이 메서드를 사용 하 여.
이 문서에서는, 교차 시험, 실험실 식민지의 설립을 위한 방법 근 친 결혼의 응용 십자가 전체 sib 쌍을 사용 하 고 식민지 일원의 유전형과 남성 자손의 절 개를 사용 하 여 그 십자가의 성공 평가 생식 기는 emeryi 대에 설명 되어 있습니다.
복제 시스템 고용에 inbreeding 십자가의 응용 프로그램은 종종 어떤 조사는 Hymenoptera에 섹스 결정 시스템의 필수적인 첫 번째 단계. 예를 들어 Cardiocondyla obscurior, 2 중 남성 전체-sib 실험실에서 짝짓기의 10 세대 후의 거의 완전 한 부재 부재 CSD 로커 스11의 보여 줍니다. 그것은 남성 근 친 십자가6,,1213에서 생산의 비율에서 CSD loci의 수를 예측할 수 있습니다.
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Protocol
1. 필드 컬렉션 및 실험실에서 V. Emeryi 식민지의 유지 보수
참고: emeryi 대 의 둥지 썩 로그 및 일본 타락 한 부패 나무 branchesin 보조 숲에서 발견 된다. 이 종 식민지, 식민지 (1) 즉, 긴 날개 퀸 즈와 (2) 식민지 주로 짧은 날개 퀸 즈 퀸 즈 롱 날개8,14의 작은 숫자 뿐만 아니라 생산의 두 가지 유형을 보여 줍니다. 이 프로토콜에서 이시카와 현, 일본에에서 식민지의 후자의 유형을 수집 했습니다.
- 이른 여름 동안 emeryi 대 식민지를 수집 합니다.
참고: 생식 시즌 동안 성적 개인의 충분 한 번호를 얻을, 식민지 포함 하는 300 개 이상의 개인 선호 됩니다. - 흡 인기 (그림 2, 왼쪽)를 사용 하 여 유리 커버와 함께 수집 된 지점에서 인공 석고 둥지 개미 견본을 전송.
- 16:8 h 명암 주기에서 25 ° C에서 인공 둥지에 있는 식민지를 유지 합니다. 젖은 석고 세척 병으로 수돗물을 제공 합니다.
- 새로운 reproductives (F1 날개-퀸 즈와 F1 남성) 나타날 때까지 매일 갈색 설탕 물 채워진 팁 (20 µ L 팁) 및 알루미늄 호 일에 싸여 건조 귀뚜라미 분말의 약 100 mg을 추가 합니다.
2. 실험 실험실 십자가
참고: 새로운 reproductives (그림 3)가을에 늦 여름에서 등장 하기 시작 합니다. 긴 날개 퀸 즈는 성적으로, 생산 그리고 짧은 날개 퀸 즈 clonally 생산 모성 게놈 (그림 1). 사용 하 여 긴 날개 왕비와 남성 inbreeding 십자가 대 한.
- 이동에서 개인을 중지, 방에 지속적인 환경 4 ° C에서 15 분 동안 식민지를 배치 합니다.
- 입체 현미경 집게를 사용 하 여 30 노동자의 중간 다리를 제거 하 고 새로운 작은 석고 둥지로 (그림 2, 오른쪽) inbreeding 십자가 대 한 그들을 전송.
참고: 이후 근 친 십자가 의해 생산 됩니다 노동자에서 현재 근로자를 구별 하는 다리 제거 됩니다. - 노동자를 포함 하는 석고 둥지로 3-4 유 충 이나 번데기를 추가 합니다.
참고: 노동자 F0 퀸 즈 덜 식민지에서 탐구 활동을 표시. 유 충 이나 번데기에 게는 효과적으로 이러한 노동자와 식민지의 중심에 새로운 reproductives을 횡단 테스트 동안 끌 수 있다. 그 결과, 정상적인 식민지에 가까운 실험 식민지의 계속. - 긴 날개 왕과 남성 십자가 inbreeding 2.3 단계에서 준비 석고 둥지로 전송.
- 음식과 물 제공 여왕 그녀의 날개를 잃게 하 고 알을 낳 기 때까지 1.3에 설명 된 대로 16:8 h 명암 주기에서 25 ° C에서 식민지를 유지.
참고:이 한 달에 1 주일 걸립니다. - 입체 현미경 실험 식민지 매일을 확인 합니다. F1 자손 사이 십자가 근 친을 수행 후 계란 입체 현미경으로 관찰할 수 있습니다.
- F1 여왕 시작 되 면 알을 낳고, F1 남성 및 애벌레 또는 pupae 둥지에서 단계 2.3에서에서 추가 된 F1 세대 (남성 및 여성 근 친 십자가에 사용) 및 F2 세대 (자손의 혼합 방지 제거 근 친 십자가에서 생산).
참고: 식민지에 몇 남성 경우 가능 하다 근 친 십자가 같은 실험적인 식민지의 한 남성과 1 ~ 3 퀸 즈를 사용 하 여 유도 하. - F2 자손 등장 때까지 1.3에 설명 된 동일한 conditionsas에서 식민지를 유지.
참고: 전송 F1 여왕 및 새로운 더 큰 석고 둥지로 (그림 2, 왼쪽) 장기 식민지 유지에 대 한 F2 자손.
3입니다. 근 친 성공의 평가
- DNA 추출 및 유전형 부모의 세대 (F0)의
- 한 다리의 집게를 사용 하 여 F0 여왕을 제거 하 고 1.5 mL microtube chelation 에이전트의 100 µ L를 포함 하는 다리를 전송.
- 입체 현미경, 유리 접시 집게를 사용 하 여 초순 수의 300 µ L로 가득에 여성 복 부 해 부 고 격리 spermatheca 성관계 남성에서 정자를 포함 하.
- 껍질 멀리는 spermatheca의 조직 그리고 곤충 핀을 사용 하 여 여자의 조직에서 정자를 분리.
참고:는 spermatheca에서 정자 추출 촉진, 여성의 표본에에서 저장 100 %EtOH 이상 하루 전에 해 부에 대 한. - 1.5 mL microtube chelation 에이전트의 100 µ L를 포함 하는 정자 전송할는 micropipette를 사용 하 여.
- F0 왕과 3.1.1와 3.1.3, 단계에서 각각 준비 하는 정액 샘플을 품 어, 20 분 플래시 95 ° C에서 원심은 microtube 및 4 ° c.에 저장
- 모든 샘플링 방법을 사용 하 여 유전자 형 설명 다른 곳4.
- 개미 근 친 십자가 (F1)에 대 한 사용의 쌍에서 DNA 추출
- Sib는 계란 생산 확인 F1 여왕 성관계, 후의 여왕 그녀의 창 고 날개 또는 한 중간 다리와 3.1 위의 섹션에 설명 된 동일한 메서드를 사용 하 여 유전자 형을 사용 하 여 DNA를 추출 합니다.
- DNA의 F1 남자를 사용 하 여 한 다리와 유전자 동일을 사용 하 여 추출 방법 3.1 위의 섹션에 설명 된.
참고: 샘플은 DNA 추출, 전에 EtOH 및 DNA chelation 에이전트에서 4 ° c.에 두 달 동안 저장할 수 있습니다. 100%에 저장할 수 있습니다.
- 남성 불 임 남성에서의 평가 inbreeding 십자가에서 생산
참고: 근 친 십자가에서 생산 하는 2 중 남성 불 임 많습니다.- 집게를 사용 하 여 PBS 솔루션의 400 µ L 유리 접시에 내부 생식 기관 해 부.
- PBS를 제거 하 고 4 %paraformaldehyde (PFA)는 micropipette를 사용 하 여 추가 합니다.
- 실 온 (15-25 ° C)에서 30 분 동안 PFA에 배양 하 여 조직 수정.
- 워시는 micropipette를 사용 하 여 PBS의 400 µ L로 5 회 조직.
- 4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) 솔루션 1 µ g/ml PBS에 희석.
- PBS를 제거 하 고 조직에이 희석 DAPI 얼룩 솔루션의 약 300 µ L를 추가 합니다.
- 실 온 (15-25 ° C)에서 어두운 조건 하에서 15 분을 품 어.
- 5 번과 400 µ L의 PBS, 조직 세척 하 고 티슈 포 셉을 사용 하 여 슬라이드 유리의 센터에 전송.
- 중간 포함 Tetramethylrhodamine TRITC 활용 된 phalloidin 장착에 티슈를 탑재 합니다.
- Confocal 레이저 스캐닝 현미경 20 X 63 X 렌즈를 사용 하 여 샘플을 관찰 합니다.
- DAPI 검색 410-530 nm 405 nm 여기 레이저와 하이브리드 검출기를 사용 합니다.
- TRITC 검색 565-650 nm에서 561 nm 여기 레이저와 하이브리드 검출기를 사용 합니다.
- 400 Hz의 검사 속도 사용 하 여 (400 라인/s) 1024 × 1024 픽셀 해상도.
- 소프트웨어 플랫폼을 사용 하 여 이미지를 캡처하십시오.
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Representative Results
F0 , F1 세대를 사용 하 여 microsatellite 분석의 결과 근 친 십자가 성공적으로 생산 되었다 보여주었다 (그림 4)6. 결과적으로 inbreeding 십자가의 성관계 퀸 즈 실험 건너 식민지 설립의 한 달 이내에 획득 했다. 나머지는 여성 (노동자와 여왕)6근 친 십자가에서 모든 자손 (F2)의 분기 (27.1 ± 8.91 %SD) 남성, 이었다. QTL 매핑 inbreeding 십자가에서 자손을 사용 하 여 보여 남성 십자가 inbreeding 제작한 했다 2 중 2에서 homozygous CSD loci (CSD1 및 그림 5에 CSD2), 여성 (노동자) 동안 inbreeding 십자가에서 생성 했다 2 중 고 heterozygous 한 CSD 로커 스6에서 적어도.
단일 남성의 해 부 고환과 정자, 예상된 (그림 6A-6 C)로 밝혔다. 그러나, 2 중 남성에 sperms 결코 관찰 되었다, 제안 하는 남성 십자가 inbreeding에서 생산은 emeryi 대6. 에 살 균 또한, 2 중 남성의 고환 (그림 6D-6E)을 개발 하지 못했습니다.
그림 1 . (A) Hymenoptera와 비정형 생식 시스템 androgenesis 및 gynogenesis emeryi 대(B)에 관련 된 일반적인 생식. 일반적으로, 여성 (노동자와 퀸 즈), 수정 된 2 중 계란에서 개발 하 고 남성 모성 게놈 (A)의 절반을 포함 하는 unfertilized 단일 계란에서 개발. Emeryi 대, 메 마른 노동자와 몇 긴 날개 퀸 즈 (LWQ) 개발, 수정 된 2 중 계란에서 짧은 날개 퀸 즈 (SWQ) 2 중 unfertilized 계란 (gynogenesis)에서 거의 완전 한 모성 유전자와 함께 개발 하는 동안. 남성 적 모성 유전자를 상속 하지만 그들의 아버지 (androgenesis) (B)의 클론. 이 그림은 [Miyakawa 외. 2018]7에서 수정 되었습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2 . Emeryi 대 식민지의 실험 설정. 필드 컬렉션 후 식민지 인공 석고 둥지로 전송 하 고 실험실에 보관. 대형 석고 둥지 (왼쪽) 대비 하는 반면 작은 석고 둥지 (오른쪽) 실험 근 친 십자가 대 한 준비가 되어 수집 된 식민지를 유지. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 3 . 새로운 emeryi V. reproductives 생식 시즌 동안 등장. 성숙 하 고 잘-fedcolonies 짧은 날개 퀸 즈 (SWQ) 곰만 모성 게놈 (그림 1B) 뿐만 아니라 부모의 게놈으로 긴 날개 퀸 즈 (LWQ)를 생산 하는 경향이. 씨 타 쿠 시 마다의 사진입니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 4 . 근 친 십자가와 F0 , F1 세대의 microsatellite genotypes 디자인. 11 microsatellite 마커를 사용 하 여 개발 이전 연구6,8,의9, 여성 및 남성 (F0) 부모 세대의 다른 genotypes을 보여주었다. 여성 및 남성 실험적인 십자가 (F1)에 대 한 사용의 genotypes 상속 각각, 여자는 여성 절반 공유 하는 그들의 형제와 함께 성공적으로 교차 했다 나타내는 부모와 아버지 genotypes 그들의 게놈입니다. 숫자는 microsatellite 소재 시 L-5, 유전형6,8,,910에 사용 하는 표식 중 하나인에 PCR 제품의 길이 나타냅니다. 이 그림은 [Miyakawa과 Mikheyev 2015]6에서 데이터 설명 되었습니다 했습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 5 . 자손의 두 CSD loci (CSD1 및 CSD2)의 대립 유전자 패턴 십자가 inbreeding 제작한. 2 중 남성 (약 25%)와 퀸 즈 sib 성관계에 의해 생산 하는 자손을 사용 하 여 QTL 매핑 비율 emeryi 대에서 두 CSD loci의 존재를 건의 한다. 여성은 반면 남성은 모든 loci에서 homozygous heterozygous 두 CSD loci의 하나. Genotypes는 알파벳의 편지에 의해 표시 됩니다. 이 그림은 [Miyakawa 외. 2018]7에서 수정 되었습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 6 . Androgenetic 단일과 2 중 남성 emeryi 대의 남자 내부 생식 기관. 고환 및 기타 내부 생식 장기의 형태학 androgenetic 단일 남성 (A)에서 밖으로 해 부. (B와 C) 단일 남성의 고환에서 정자 (섬유 조직)을 볼 수 있었다. 파란색 표시 핵 DAPI, 의해 스테인드 하 고 붉은 색 마크 F 걸 스테인드 B, C 및 E. phalloidin Tetramethylrhodamine TRITC 활용 하 여 (a) 부속 샘; (t) 고환; (v) vas deferens; (g) 외부 생식 기입니다. 내부 생식 장기의 형태학 (D) 2 중 남성에서 밖으로 해 부. 고환과 2 중 남성의 정자 적 관찰 되었다 (D와 E, N >> 30). 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
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Discussion
이 문서에서는 근 친 십자가 유도 하 고 emeryi 대개미에 근 친 결혼의 발생을 평가 하는 데 사용할 수 있는 프로토콜을 보여 줍니다. 실험, 십자가 대 한 사용 하는 개인의 유전형은 근 친 십자가 성공한 되도록 필요 합니다. 그러나, 이러한 교차 테스트의 효율성 2 중 남성은 단일 남성만 생산할 수가 있는 필드와 실험실6동안 연중 생산 수 명확 하 게 명백한 것입니다. Sib 성관계 퀸 즈 교차점 직후 남성 자손을 생산 하기 시작 합니다. Emeryi 대6,7. 에 2 중 및 단일 남성 사이 형태학 phenotypic 차이가 관찰 되었다 그러나, 2 중 남성 emeryi 대 거의 변함없이 실패 하지 testes를 개발 합니다. 테스트를 교차 사용 하는 쌍의 유전 relatedness를 테스트 하기 위한 유전자 표시의 부재, 남성 자손의 생식 잠재력 근 친 발생 했는지 유추할 수 사용할 수 있습니다. 그러나, 남성 십자가 inbreeding에서 생산 하지 않는 항상 다른 hymenopteran 종15,,1617살 균 주목 한다.
프로토콜의 성공에 있는 중요 한 첫걸음은 후 필드 컬렉션 십자가 대 한 reproductives의 충분 한 숫자를 얻기의 가능성을 증가할 것 이다 그들을 먹이로 잘 먹인 식민지의 유지 보수. Emeryi 대,에 긍정적인 상관 관계는 영양과 근 친 십자가10에 사용 하는 퀸 즈는 긴 날개 퀸 즈의 생산 사이 보고 되었다. 사회적인 곤충, 작은 식민지, 또는 가난한 사람의 건강에 있는 식민지, 하지 새로운 reproductives18를 생산 하는 경향이 있다. 그것은 그러므로 분야에서 성숙한 식민지를 수집 하 고 적절 한 양의 새로운 reproductives를 사용 하 여 실험에 대 한 영양가 있는 음식 그들을 제공 하는 것이 중요.
두 번째 중요 한 단계는 건너 테스트 동안 노동자, 생식 및 몇 유 충 이나 번데기를 함께 유지 하 횡단 (한 달에 1 주일) 동안 완료 될 때까지 정상적인 식민지의 동일한 상태에서 실험 건너 식민지를 유지 합니다. 그것은 남성 스스로 먹이 수 있고 근로자는 먹이 해야 합니다 때문에 3 일 이상 노동자 없이 테스트를 넘어 사용 되는 식민지를 유지 하기 어렵다. 같은 부자연 스러운 조건 하에서 근 친 십자가 매우 낮은6이었다.
다른 개미 종에 이러한 프로토콜의 응용 프로그램에 대 한 두 가지 제한이 있습니다. 첫째, 십자가 유도 대 한 단서는 특정 종입니다. 자연에서 발생 하는 비행 하지 않고 내부 식민지 짝짓기 이후 emeryi 대 에서 실험실 십자가 유도 하는 것이 비교적 쉽습니다. 그러나, 많은 개미 종 동안 이나 비행19는 새 퀸과 남성 친구 동안 결혼식 항공편을 포함 하는 짝짓기 의식 진화 했다. 그러므로 각 종 실험실에 있는 교차점 유도 트리거를 명료 하 게 중요 하다. 예를 들어 Acromyrmex ameliae기생 개미 결혼식 항공편 트리거링을 위한 주요 자극 빛20를 것 처럼 보인다. 두 번째 한계는, 어떤 경우에, 그들은 가능한 2 중 남성 십자가 inbreeding 제작한 수집 수 없습니다 또는 때문에 그들은 작동 하지 않습니다 또는 노동자에 의해 살해 또는 낮은 생식 잠재력, 그리고 따라서 식민지의 주요 비용에 객관적인 종21,,2223. 다행히도, 2 중 emeryi 대 남성 노동자에 의해 살해 하지는, 그들은 살고 그들은 건의 하는 그들은 자주 자연에서 발생 하지 않는 자연스럽 게, 죽을 때까지 식민지에서 2 중 남성을 제외 하는 전략은이 종에서 진화 하지.
Arrhenotokous 단성 재현그림 1(A)를 사용 하는 다른 개미 종에 비해, 우리는 실험 근 친 십자가로 androgenesis emeryi 대 여 생산에 특정 이점이 있다는 추정할 수 있는 근 친 십자가 유전자 고전 backcross. 실제로, 시스템은 우리 성 결정 유전자, 분자 메커니즘을 조사 하 고이 종6,7기능 연구를 수행 하는 실험 설계를 수 있게 되었습니다.
요약, 근 친을 수행 하는 방법 교차 하 고 평가 결과의 성공에 십자가 emeryi 대에서 설명 되었습니다. 이러한 프로토콜 실험 유전과 분자 기초는 Hymenoptera에 섹스 결정 시스템의 이해에 필수적입니다.
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Disclosures
저자는 공개 없다.
Acknowledgments
우리 감사 씨 타 쿠 시 마다, AntRoom, 도쿄, 일본의 대리인 emeryi V. reproductives의 그의 사진 제공. 이 프로젝트 젊은 과학자 (16J00011), 그리고 젊은 과학자 (B)(16K18626)에 대 한 원조에 부여에 대 한 과학 진흥 (JSP) 연구 협력에 대 한 일본 사회에 의해 투자 되었다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Plaster powder | N/A | N/A | Any brand can be used |
| Charcoal, Activated, Powder | Wako | 033-02117,037-02115 | |
| Slide glass | N/A | N/A | Any brand can be used |
| Dry Cricket diet | N/A | N/A | Any brand can be used |
| Brown shuger | N/A | N/A | Any brand can be used |
| Styrene Square-Shaped Case | AS ONE | Any size | Size varies by number of ants |
| Incbator | Any brand can be used | ||
| Aluminum block bath Dry thermo unit DTU-1B | TAITEC | 0014035-000 | |
| 1.5mL Hyper Microtube,Clear, Round bottom | WATSON | 131-715CS | |
| Ethanol (99.5) | Wako | 054-07225 | |
| Stereoscopic microscope | N/A | N/A | Any brand can be used |
| Forseps | DUMONT | 0108-5-PO | |
| Chelex 100 sodium form | SIGMA | 11139-85-8 | |
| Phosphate Buffer Saline (PBS) Tablets, pH7.4 | TaKaRa | T9181 | |
| Paraformaldehyde | Wako | 162-16065 | |
| -Cellstain- DAPI solution | Dojindo Molecular Technologies | D523 | |
| ABI 3100xl Genetic Analyzer | Applied Biosystems | Directly contact the constructor formore informations. | |
| Confocal laser scanning microscope Leica TCS SP8 | Leica | Directly contact the constructor formore informations. | |
| HC PL APO CS2 20x/0.75 IMM | Leica | Directly contact the constructor formore informations. | |
| HC PL APO CS2 63x/1.20 WATER | Leica | Directly contact the constructor formore informations. | |
| Leica HyDTM | Leica | Directly contact the constructor formore informations. | |
| Leica Application Suite X (LAS X) | Leica | Directly contact the constructor formore informations. |
References
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