Mammalin hücrelerinde hücre Içi çinko havuzlarını ölçmek için atomik absorbance spektroskopisi
Summary
Kültürlü primer veya kurulan hücre hatları yaygın hayvan modelleri kullanmadan önce bir ilk yaklaşım olarak temel biyolojik ve mekanik soruları ele almak için kullanılır. Bu protokol, çinko (Zn) ve Atom emici spektroskopisi ile diğer iz elemanlarının çalışmaları için tüm hücre özler ve hücre altı fraksiyonları hazırlamak açıklamaktadır.
Abstract
Geçiş metaller organizmalar için temel mikroutrients ancak proteinlerde fizyolojik metaller ile rekabet ve redoks stres üreten yüksek konsantrasyonlarda hücrelere toksik olabilir. Metal tükenmesi veya birikimine yol açabilen patolojik koşullar farklı insan hastalıklarının nedensel ajanlarıdır. Anemi, akrodermatit Enteropathica ve Wilson ve Menkes hastalıklarına örnekler dahildir. Bu nedenle, bu öğelerin normal fizyolojik işlevlere nasıl katkı sağlayacağını araştırmayı kolaylaştırmak için yüksek hassasiyet ve doğruluk ile biyolojik örneklerde geçiş metallerinin düzeylerini ve taşınması ölçmek mümkün olması önemlidir ve Toksisite. Çinko (Zn), örneğin, birçok memelinin proteinleri bir kofaktör, sinyalizasyon olaylara katılır ve hücrelerde ikincil bir haberci olduğunu. Fazlalığında, Zn toksik ve diğer metallerin emilimini inhibe edebilir, açık iken, potansiyel olarak ölümcül koşullara çeşitli yol açabilir.
Grafit fırını atomik emilim spektroskopisi (GF-AAS), çeşitli biyolojik örneklerde Zn ve diğer geçiş metal konsantrasyonlarını belirlemek için son derece hassas ve etkili bir yöntem sağlar. GF-AAS aracılığıyla elektrotermal atomizasyon, ilgi unsurunun uyarılma dalga boyu kullanarak sonraki seçici emme analizi için numunelerin küçük hacimleri parçalamalı ile metaller nicelik. Beer-Lambert Kanunu doğrusallık sınırları içinde, metal tarafından ışık emici doğrudan analit konsantrasyonu ile orantılıdır. Zn içeriğinin belirlenmesi diğer yöntemlerle karşılaştırıldığında, GF-AAS hem ücretsiz hem de kompleks Zn proteinlerinde ve muhtemelen küçük numune hacimlerinde yüksek hassasiyetle küçük hücre içi moleküllerde algılanır. Ayrıca GF-AAS, İndüktif olarak bağlı plazma kitle spektrometresi (ıCP-MS) veya Synchrotron tabanlı X-ışını floresans ile daha kolay erişilebilir durumdadır. Bu yöntemle, GF-AAS ‘ l a analiz için farklı kültürlü hücre hatlarının sistematik numune hazırlanması açıklanmıştır. Bu iz elemanının varyasyonları, hem tam hücre endoglikozidazları hem de Proliferasyona ve farklılaşan hücrelerin alt hücreli fraksiyonları ilkesinin kanıtı olarak karşılaştırıldı.
Introduction
Zn, cu, MN ve Fe gibi geçiş ve ağır metaller, gıda ve kirleticilerin her iki besinindeki ortamda doğal olarak bulunur. Tüm yaşayan organizmalar bu mikroutrients farklı miktarlarda gerektirir; Ancak, yüksek seviyelere maruz organizmalar için zararlı. Metal edinme ağırlıklı olarak diyet yoluyla, ancak metaller de solunabilir veya cilt üzerinden absorbe edilebilir1,2,3,4,5. Atmosferik partiküllerde metaller varlığının arttığını ve sağlık riskleriyle büyük ölçüde ilişkili olduğunu dikkate almak önemlidir. Antropojenik faaliyetler nedeniyle, AG, as, CD, CR, HG, ni, Fe ve PB gibi ağır metaller seviyeleri atmosferik partikül madde, yağmur suyu ve toprak6,7‘ de tespit edilmiştir. Bu metaller, özellikle Zn ve Fe, temel fizyolojik iz elemanları ile rekabet potansiyeline sahip ve Biyolojik süreçler için temel enzimleri devre dışı bırakarak toksik etkileri teşvik.
İz öğesi Zn redoks Neutral ve biyolojik reaksiyonlar bir Lewis asit olarak davranır, bu da protein katlama ve katalitik aktivite için gerekli olan temel bir kofaktör meme proteinlerinin% 10 ‘ dan fazla8,9, 10; Sonuç olarak, çeşitli fizyolojik fonksiyonlar için esastır8,11. Ancak, birçok iz elemanları gibi, bu metaller normal fizyolojik fonksiyon kolaylaştırarak ve toksisite neden arasında hassas bir denge vardır. Memelilerde, Zn eksiklikleri anemiye yol açar, büyüme geriliği, hipogonadizm, cilt anomalileri, ishal, alopesi, tat bozuklukları, kronik inflamasyon, ve bağışıklık ve nörolojik fonksiyonları özürlü11,12, 13,14,15,16,17,18. Aşırı olarak, Zn sitotoksisdir ve bakır gibi diğer temel metallerin emilimini bozar19,20,21.
Ayrıca, cu ve Fe gibi bazı metaller zararlı reaksiyonlara katılma potansiyeline sahiptir. Fenton kimya ile reaktif oksijen türlerinin (ROS) üretimi, demir sülfür kümesi proteinlerinin montajına müdahale edebilir ve lipid metabolizmasını değiştirebilir22,23,24. Bu hasarı önlemek için, hücreler toksik etkileri önlemek için metal bağlayıcı şaperonlar ve taşıyıcılar kullanır. Kuşkusuz, metal homeostaz sıkıca belirli hücre türlerinin metaller uygun düzeylerde korumak sağlamak için kontrol edilmelidir. Bu nedenle, biyolojik numunelerde iz metallerin doğru ölçümü için teknikleri ilerletmek için önemli bir ihtiyaç vardır. Gelişmekte olan ve olgun organizmalarda, hücresel düzeyde, farklı gelişimsel aşamalarda ve normal ve patolojik koşullarda iz elemanları için diferansiyel biyolojik ihtiyaç var. Bu nedenle, organizmal metal homeostazisini anlamak için doku ve sistemik metal düzeylerinin kesin belirlenmesi gereklidir.
Grafit fırını atomik emilim spektrometresi (GF-AAS), küçük numune hacimleri için kullanılan, biyolojik ve çevresel örneklerde mevcut geçiş ve ağır metaller ölçmek için ideal hale getirmek için son derece hassas bir tekniktir25,26 , 27 , 28. dahası, tekniğin yüksek hassasiyetinden dolayı, Xenopus kullanarak na+/k+-ATPase ve gastrik H+/y+-ATPase ‘ i n ince taşıma özelliklerini incelemek için uygun olduğu gösterilmiştir. bir model sistemi olarak oosit29. GF-AAS, bir örnek içinde atomized elemanlar bir ışık kaynağı ile ilgi metal içeren yayılan radyasyon dalga boyu absorbe, elemanın konsantrasyonuna orantılı absorbe radyasyon ile. Elemental elektronik uyarma her kimyasal eleman için benzersiz bir quantized sürecinde ultraviyole veya görünür radyasyon emilimi üzerine gerçekleşir. Tek bir elektron sürecinde, bir foton emilimi atom içinde daha yüksek seviyeye daha düşük bir enerji seviyesinde hareket eden bir elektron içerir ve GF-AAS radyasyon emici sayısı ile orantılı örnek tarafından emilen fotonların miktarını belirler elementleri grafit tüpünde atomize edilir.
Bu tekniğin seçicilik atomların elektronik yapısına dayanır, hangi her eleman belirli bir emilim/emisyon spektral hattı vardır. Zn durumunda, emici dalga boyu 213,9 Nm ve tam olarak diğer metallerden ayırt edilebilir. Genel olarak, GF-AAS, Zn ‘ı yeterli tespit sınırı (LOD) ve yüksek hassasiyet ve seçicilik25ile ölçmek için kullanılabilir. Emilen dalga boyu değişiklikler entegre ve belirli ve izole dalga boylarında enerji emme doruklarına olarak sunulmaktadır. Belirli bir örnekteki Zn konsantrasyonu genellikle, emici, numunenin Zn konsantrasyonu ile doğrudan orantılı olduğu Beer-Lambert kanununa göre bilinen konsantrasyonların standart bir eğrisinden hesaplanır. Ancak, GF-AAS analizlerine Beer-Lambert denklemi uygulanması da bazı komplikasyonlar sunar. Örneğin, numunelerin atomizasyon ve/veya homojen olmayan konsantrasyonlarındaki varyasyonlar metal ölçümlerini etkileyebilmektedir.
GF AAS iz Elemental analizi için gerekli metal atomizasyon üç temel adımlardan oluşur. İlk adım, sıvı çözücünün buharlaşma olduğu desolvasyon; Fırından sonra kuru bileşikler bırakarak yaklaşık 100 °C sıcaklığa ulaşır. Sonra, bileşikler 800 den 1.400 °C (analiz edilecek öğeye bağlı olarak) onları ısıtarak buharlaştırılmış ve bir gaz haline gelir. Son olarak, gaz durumundaki bileşikler 1.500 ila 2.500 °C arasında bulunan sıcaklıklarda atomize edilir. Yukarıda da anlatıldığı gibi, bir metal konsantrasyonunun artması GF-AAS tarafından algılanan emilim üzerinde orantılı artışlar oluşturacaktır, ancak fırın, mümkün olan konsantrasyonların çalışma aralığı olan dinamik analiz aralığını azaltır cihaz tarafından belirlenir. Böylece, teknik düşük konsantrasyonları ve LOD ve bira-Lambert Kanununun doğrusallık (LOL) sınırını belirleyerek yöntemin dinamik aralığının dikkatli bir şekilde belirlenmesi gerektirir. LOD, bir maddenin tespit edilmesi için gereken asgari miktardır, matrisin Zn standart sapması üç kez tanımlanır. LOL Beer-Lambert Kanunu kullanılarak tespit edilebilir maksimum konsantrasyon.
Bu çalışmanın içinde, tüm hücre özleri, sitoplazmik ve nükleer fraksiyonlar içinde Zn seviyelerini analiz etmek ve kültürlü hücrelerde proliferasyon ve ayrım yapmak için standart bir yöntem açıklanmaktadır (Şekil 1). Numune hazırlama sırasında metal kaybını önlemek için farklı hücresel sistemlere çekirdekler protokolünün hızlı izolasyonu uyarlanmıştır. Kullanılan hücresel modeller, fare uydu hücrelerinden elde edilen primer myoblastlar, murine Nöroblastom hücreleri (N2A veya Neuro2A), murine 3T3 L1 adipocytes, insan olmayan-tumorigenic meme epitelyal hücre hattı (MCF10A) ve epitelyal madin-Darby köpek böbrek ( MDCK) hücreleri. Bu hücreler farklı sırlardan kurulmuştur ve in vitrometal düzeylerinin erit spesifik varyasyonlarını araştırmak için iyi modellerdir.
Fare uydu hücrelerinden elde edilen primer myoblastlar, iskelet kası farklılaşmasını araştırmak için iyi uygun bir in vitro modeli oluşturmaktadır. Yüksek serum koşullarında kültürlü olduğunda bu hücrelerin proliferasyonu hızlıdır. Kas Kemine farklılaşma daha sonra düşük serum koşulları tarafından indüklenir30. Murine Nöroblastom (N2A) kurulan hücre hattı fare nöral arması türetilmiştir. Bu hücreler nöronal ve Kökbacaklılar kök hücre morfolojisi mevcut. Farklılaşma uyarıcı üzerine, N2A hücreleri neurons gibi nöronların çeşitli özellikleri mevcut, neurofilaments. N2A hücreler Alzheimer hastalığı araştırmak için kullanılır, nörit büyüme, ve nörotoksisite31,32,33. 3T3-L1 murine ön adipocytes kurulan hücre hattı genellikle Adipogenesis ile ilişkili metabolik ve fizyolojik değişiklikleri araştırmak için kullanılır. Bu hücreler fibroblast benzeri bir morfoloji sunar, ancak bir kez farklılaşma için uyarılır, onlar lipid sentezi ve trigliserid birikimi ile ilişkili enzimatik aktivasyon mevcut. Bu sitoplazmik lipid damlacıkları34,35üretmek için morfolojik değişiklikler olarak gözlemlenebilir. MCF10A, meme fibrokistik hastalığı36olan premenopozal bir kadından elde edilen tümör olmayan bir meme epitelyal hücre çizgisinin. Proliferasyon, hücre göçü ve istilası gibi meme Karsinogenezi ile ilgili biyokimyasal, moleküler ve hücresel çalışmalar için yaygın olarak kullanılmaktadır. Madin-Darby köpek böbreği (MDCK) epitelyal hücre hattı, epitelyal fenotipin kurulması ile ilgili özellikleri ve moleküler olayları araştırmak için yaygın olarak kullanılmıştır. Konfluence ulaştıktan sonra, bu hücreler polarize olur ve hücre-hücre yapışmaları, mammalin epitelyal dokularının özellikleri37.
Memeli hücrelerinde Zn seviyelerini ölçmek için AAS yeteneğini test etmek için, bu beş hücre hatlarının tüm ve hücre altı fraksiyonları (sitersol ve çekirdeği) analiz ettik. AAS ölçümleri bu hücre tiplerinde Zn farklı konsantrasyonları gösterdi. Konsantrasyonlarda primer myoblastlar proliferasyon ve farklılaşıyor (4 ila 7 nmol/mg protein) ve dört kurulan hücre hatları (20 ile 40 nmol/mg protein arasında değişen) daha yüksek. Primer myoblastlar ve nörblastoma hücrelerinde proliferasyon hücreleriyle karşılaştırıldığında, Zn düzeylerinde önemli olmayan küçük bir artış tespit edildi. Farklılaşmış adipanositlerde zıt etki tespit edildi. Ancak, proliferasyon 3T3-L1 hücreleri farklılaşmış hücrelere kıyasla metal yüksek konsantrasyonları sergiledi. Daha da önemlisi, bu üç hücreli çizgide, hücre içi fraksiyonlama, Zn ‘ın bu hücrelerin metabolik durumuna göre sitersol ve çekirdeğin farklılaşması olduğunu göstermiştir. Örneğin, proliferasyon myoblastlar, N2A hücreler ve 3T3-L1 öncesi adipocytes, metal çoğunluğu çekirdeğe lokalizedir. Belirli hücre tedavileri kullanılarak farklılaşma indüksiyon üzerine, Zn bu üç hücre türlerinde sitüsol lokalize. İlginçtir ki, her iki epitelyal hücre hatları, bir karakteristik sıkı Tek tabakalı oluşmuş olan konfluence ulaştığında karşılaştırıldığında proliferasyon sırasında Zn daha yüksek düzeylerde gösterdi. Proliferasyon epitelyal hücrelerde, meme hücre hattı MCF10A Siton ve çekirdek arasında eşit Zn dağılımı vardı, böbrek kaynaklı hücre hattında iken, metal çoğu çekirdeğinde yer aldı. Bu iki hücre tipinde, hücreler konfluence ulaşıldığında, Zn ağırlıklı olarak siterona yer verildi. Bu sonuçlar GF-AAS düşük verim örneklerinde Elemental analiz yapmak için son derece hassas ve doğru bir teknik olduğunu göstermektedir. GF-AAS hücre altı fraksiyonlama ile birleştiğinde ve farklı hücre hatları ve dokularda iz metal öğelerin düzeylerini araştırmak için adapte edilebilir.
Protocol
Representative Results
Discussion
Atomik emilme spektroskopisi, küçük hacimli/kütle biyolojik örneklerinde Zn ölçümü için son derece hassas bir yöntemdir. Zn ölçümünün tanımlanan optimizasyonu bu yöntemin uygulanması basit hale getirir ve ideal analitik koşulları garanti eder. Burada, GF-AAS ‘ ı kullanarak, tüm hücrelerde Zn konsantrasyonunu, farklı hücre hatlarından siterik ve nükleer fraksiyonları tespit ettik. Sonuçlar, bu tekniğin floresan problar ve ıCP-MS ile elde edilenlere karşılaştırılabilir olduğunu göster…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma Massachusetts Tıp Fakültesi Üniversitesi ‘nden öğrenci çeşitliliği akademisyenler Ödülü ‘nden tuvalet-B ‘ d e k i desteklenmektedir. TAN. SEP-CONACYT, Grant 279879 tarafından desteklenmektedir. J. G. N, National Science Foundation Grant DBı 0959476 tarafından desteklenmektedir. Yazarlar onun teknik destek için N2A hücre hattı ve Daniella Cangussu sağlamak için Dr Daryl A. Bosco minnettar.
Materials
| 3-isobutyl-1-methylxanthine | Sigma Aldrich | I5879 | |
| Acetic Acid | Sigma Aldrich | 1005706 | |
| Anti Brg1-antibody (G7) | Santa Cruz biotechnologies | sc-17796 | |
| Anti b-tubulin-antibody (BT7R) | Thermo Scientific | MA5-16308 | |
| Bradford | Biorad | 5000205 | |
| Dexamethasone | Sigma Aldrich | D4902 | |
| Dulbecco's Modified Eagle's Media (DMEM) | ThermoFischer-Gibco | 11965092 | |
| Dulbecco's Modified Eagle's Media/Nutrient Mix (DMEM/F12) | ThermoFischer-Gibco | 11320033 | |
| Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (DPBS) | ThermoFischer-Gibco | 14190144 | |
| Epidemal Growth Factor (EGF) | Sigma Aldrich | E9644 | |
| Fetal Bovine Serum (FBS) | ThermoFischer-Gibco | 16000044 | |
| Fibroblastic Growth Factor-Basic (FGF) (AA 10-155) | ThermoFischer-Gibco | PHG0024 | |
| Horse serum | ThermoFischer-Gibco | 16050122 | |
| Hydrocortisone | Sigma Aldrich | H0888 | |
| Hydrogen Peroxide (H2O2) | Sigma Aldrich | 95321 | |
| Insulin | Sigma Aldrich | 91077C | |
| Insulin-Transferrin-Selenium-A | ThermoFischer | 51300044 | |
| Nitric Acid (HNO3) | Sigma Aldrich | 438073 | |
| Nonidet P-40 (NP-40) | Thermo Scientific | 85125 | |
| OptiMEM (Reduced Serum Media) | ThermoFischer-Gibco | 31985070 | |
| Penicillin-Streptomycin | ThermoFischer-Gibco | 15140148 | |
| PureCol (Collagen) | Advanced BioMatrix | 5005 | |
| Retionic Acid | Sigma Aldrich | PHR1187 | |
| Troglitazone | Sigma Aldrich | 648469-M | |
| Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red | ThermoFischer-Gibco | 25200056 | |
| Zinc (Zn) Pure Single-Element Standard, 1,000 µg/mL, 2% HNO3 | Perkin Elmer | N9300168 | |
| Established Cell Lines | |||
| 3T3-L1 | American Type Culture Collection | CL-173 | |
| MCDK | American Type Culture Collection | CCL-34 | |
| MCF10A | American Type Culture Collection | CRL-10317 | |
| N2A | American Type Culture Collection | CCL-131 | |
| Equipment | |||
| Atomic Absortion spectrophotometer | PerkinElmer | Aanalyst 800 | |
| Bioruptor | Diagnode | UCD-200 |
References
- Sharma, B., Singh, S., Siddiqi, N. J. Biomedical implications of heavy metals induced imbalances in redox systems. Biomed Research International. 640754, (2014).
- Jaishankar, M., Tseten, T., Anbalagan, N., Mathew, B. B., Beeregowda, K. N. Toxicity, mechanism and health effects of some heavy metals. Interdisciplinary Toxicology. 7 (2), 60-72 (2014).
- Jan, A. T., et al. Heavy Metals and Human Health: Mechanistic Insight into Toxicity and Counter Defense System of Antioxidants. International Journal of Molecular Science. 16 (12), 29592-29630 (2015).
- Manutsewee, N., Aeungmaitrepirom, W., Varanusupakul, P., Imyim, A. Determination of Cd, Cu, and Zn in fish and mussel by AAS after ultrasound-assisted acid leaching extraction. Food Chemistry. 101 (2), 817-824 (2007).
- Pereira, C. C., de Souza, A. O., Oreste, E. Q., Vieira, M. A., Ribeiro, A. S. Evaluation of the use of a reflux system for sample preparation of processed fruit juices and subsequent determination of Cr, Cu, K, Mg, Na, Pb, and Zn by atomic spectrometry techniques. Food Chemistry. 240, 959-964 (2018).
- McComb, J. Q., Rogers, C., Han, F. X., Tchounwou, P. B. Rapid screening of heavy metals and trace elements in environmental samples using portable X-ray fluorescence spectrometer, A comparative study. Water, Air, & Soil Pollution. 225 (12), (2014).
- Borgatta, J. P., Paskavitz, A., Kim, D., Navea, J. G. Comparative evaluation of iron leach from different sources of fly ash under atmospherically relevant conditions. Environmental Chemistry. 13, 902-912 (2016).
- Dufner-Beattie, J., Langmade, S. J., Wang, F., Eide, D., Andrews, G. K. Structure, function, and regulation of a subfamily of mouse zinc transporter genes. Journal of Biological Chemistry. 278 (50), 50142-50150 (2003).
- Sekler, I., Sensi, S. L., Hershfinkel, M., Silverman, W. F. Mechanism and regulation of cellular zinc transport. Molecular Medicine. 13 (7-8), 337-343 (2007).
- Berg, J. M., Shi, Y. The galvanization of biology: a growing appreciation for the roles of zinc. Science. 271 (5252), 1081-1085 (1996).
- Kambe, T., Tsuji, T., Hashimoto, A., Itsumura, N. The Physiological, Biochemical, and Molecular Roles of Zinc Transporters in Zinc Homeostasis and Metabolism. Physiology Reviews. 95 (3), 749-784 (2015).
- Fukada, T., Kambe, T. Molecular and genetic features of zinc transporters in physiology and pathogenesis. Metallomics. 3 (7), 662-674 (2011).
- Prasad, A. S., Halsted, J. A., Nadimi, M. Syndrome of iron deficiency anemia, hepatosplenomegaly, hypogonadism, dwarfism and geophagia. American Journal of Medicine. 31, 532-546 (1961).
- Jinno, N., Nagata, M., Takahashi, T. Marginal zinc deficiency negatively affects recovery from muscle injury in mice. Biological Trace Element Research. 158 (1), 65-72 (2014).
- Gaither, L. A., Eide, D. J. Eukaryotic zinc transporters and their regulation. Biometals. 14 (3-4), 251-270 (2001).
- Fukada, T., Yamasaki, S., Nishida, K., Murakami, M., Hirano, T. Zinc homeostasis and signaling in health and diseases: Zinc signaling. Journal of Biological Inorganic Chemistry. 16 (7), 1123-1134 (2011).
- Kambe, T., Hashimoto, A., Fujimoto, S. Current understanding of ZIP and ZnT zinc transporters in human health and diseases. Cellular and Molecular Life Sciences. 71 (17), 3281-3295 (2014).
- Plum, L. M., Rink, L., Haase, H. The essential toxin: impact of zinc on human health. International Journal of Environmental Research and Public Health. 7 (4), 1342-1365 (2010).
- Broun, E. R., Greist, A., Tricot, G., Hoffman, R. Excessive zinc ingestion. A reversible cause of sideroblastic anemia and bone marrow depression. Journal of the American Medical Association. 264 (11), 1441-1443 (1990).
- Fischer, P. W., Giroux, A., L’Abbe, M. R. The effect of dietary zinc on intestinal copper absorption. American Journal of Clinical Nutrition. 34 (9), 1670-1675 (1981).
- Ogiso, T., Ogawa, N., Miura, T. Inhibitory effect of high dietary zinc on copper absorption in rats. II. Binding of copper and zinc to cytosol proteins. in the intestinal mucosa. Chemical and Pharmaceutical Bulletin (Tokyo. 27 (2), 515-521 (1979).
- Gaetke, L. M., Chow, C. K. Copper toxicity, oxidative stress, and antioxidant nutrients. Toxicology. 189 (1-2), 147-163 (2003).
- Macomber, L., Imlay, J. A. The iron-sulfur clusters of dehydratases are primary intracellular targets of copper toxicity. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (20), 8344-8349 (2009).
- Robotham, J. L., Lietman, P. S. Acute iron poisoning. A review. American Journal of Diseases of Children. 134 (9), 875-879 (1980).
- Yang, W., Ni, Z., Guang, P., Xue, Y., Guang, P., Fen, X. . Recent advances in absolute analysis by graphite furnace atomic absorption spectrometry. 17 (2), 104-110 (1997).
- Gomez-Nieto, B., Gismera, M. J., Sevilla, M. T., Satrustegui, J., Procopio, J. R. Micro-sampling method based on high-resolution continuum source graphite furnace atomic absorption spectrometry for calcium determination in blood and mitochondrial suspensions. Talanta. 170, 15-21 (2017).
- Shaw, J. C., Bury, A. J., Barber, A., Mann, L., Taylor, A. A micromethod for the analysis of zinc in plasma or serum by atomic absorption spectrophotometry using graphite furnace. Clin Chim Acta. 118 (2-3), 229-239 (1982).
- Stevens, B. J., Hare, D. J., Volitakis, I., Cherny, R. A., Roberts, B. R. Direct determination of zinc in plasma by graphite furnace atomic absorption spectrometry using palladium/magnesium and EDTA matrix modification with high temperature pyrolysis. Journal of Analytical Atomic Spectrometry. 32 (4), 843-847 (2017).
- Durr, K. L., Tavraz, N. N., Spiller, S., Friedrich, T. Measuring cation transport by Na,K- and H,K-ATPase in Xenopus oocytes by atomic absorption spectrophotometry: an alternative to radioisotope assays. Journal of Visualized Experiments. (72), e50201 (2013).
- Conejo, R., Valverde, A. M., Benito, M., Lorenzo, M. Insulin produces myogenesis in C2C12 myoblasts by induction of NF-kappaB and downregulation of AP-1 activities. Journal of Cellular Physiology. 186 (1), 82-94 (2001).
- Salto, R., et al. beta-Hydroxy-beta-Methylbutyrate (HMB) Promotes Neurite Outgrowth in Neuro2a Cells. PLoS One. 10 (8), e0135614 (2015).
- LePage, K. T., Dickey, R. W., Gerwick, W. H., Jester, E. L., Murray, T. F. On the use of neuro-2a neuroblastoma cells versus intact neurons in primary culture for neurotoxicity studies. Critical Reviews in Neurobiology. 17 (1), 27-50 (2005).
- Provost, P. Interpretation and applicability of microRNA data to the context of Alzheimer’s and age-related diseases. Aging (Albany NY). 2 (3), 166-169 (2010).
- Green, H., Kehinde, O. An established preadipose cell line and its differentiation in culture. II. Factors affecting the adipose conversion. Cell. 5 (1), 19-27 (1975).
- Padilla-Benavides, T., Velez-delValle, C., Marsch-Moreno, M., Castro-Munozledo, F., Kuri-Harcuch, W. Lipogenic Enzymes Complexes and Cytoplasmic Lipid Droplet Formation During Adipogenesis. Journal of Cellular Biochemistry. 117 (10), 2315-2326 (2016).
- Soule, H. D., et al. Isolation and characterization of a spontaneously immortalized human breast epithelial cell line, MCF-10. Cancer Research. 50 (18), 6075-6086 (1990).
- Leighton, J., Estes, L. W., Mansukhani, S., Brada, Z. A cell line derived from normal dog kidney (MDCK) exhibiting qualities of papillary adenocarcinoma and of renal tubular epithelium. Cancer. 26 (5), 1022-1028 (1970).
- Cote, R. J. Aseptic technique for cell culture. Current Protocols in Cell Biology. , (2001).
- Suzuki, K., Bose, P., Leong-Quong, R. Y., Fujita, D. J., Riabowol, K. R. E. A. P. A two minute cell fractionation method. BMC Research Notes. 3, 294 (2010).
- Nabbi, A., Riabowol, K. Rapid Isolation of Nuclei from Cells In Vitro. Cold Spring Harbor Protocols. 2015 (8), 769-772 (2015).
- Bradford, M. M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Analytical Biochemistry. 72, 248-254 (1976).
- Carpenter, M. C., Lo, M. N., Palmer, A. E. Techniques for measuring cellular zinc. Archive of Biochemistry and Biophysics. 611, 20-29 (2016).
- Paskavitz, A. L., et al. Differential expression of zinc transporters accompanies the differentiation of C2C12 myoblasts. Journal of Trace Elements in Medical Biology. 49, 27-34 (2018).
- Chandler, P., et al. Subtype-specific accumulation of intracellular zinc pools is associated with the malignant phenotype in breast cancer. Molecular Cancer. 15 (2), (2016).
- Gordon, S. J. V., Fenker, D. E., Vest, K. E., Padilla-Benavides, T. Manganese influx and expression of ZIP8 is essential in primary myoblasts and contributes to activation of SOD2. bioRxiv. , 494542 (2018).
- Jansen, S., Arning, J., Beyersmann, D. Zinc homeostasis in C6 glioma cells: phospholipase C activity regulates cellular zinc export. Biological Trace Element Research. 108 (1-3), 87-104 (2005).
- Fahrni, C. J. Biological applications of X-ray fluorescence microscopy: exploring the subcellular topography and speciation of transition metals. Current Opinion in Chemical Biology. 11 (2), 121-127 (2007).
- Huang, Z., Lippard, S. J. Illuminating mobile zinc with fluorescence from cuvettes to live cells and tissues. Methods in Enzymology. 505, 445-468 (2012).
- Qiao, W., Mooney, M., Bird, A. J., Winge, D. R., Eide, D. J. Zinc binding to a regulatory zinc-sensing domain monitored in vivo by using FRET. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (23), 8674-8679 (2006).
- Tomat, E., Lippard, S. J. Imaging mobile zinc in biology. Current Opinion in Chemical Biology. 14 (2), 225-230 (2010).
- Jajda, H. M., et al. Comparative efficacy of two standard methods for determination of iron and zinc in fruits, pulses and cereals. Journal of Food Science and Technology. 52 (2), 1096-1102 (2015).
- Padilla-Benavides, T., Long, J. E., Raimunda, D., Sassetti, C. M., Argüello, J. M. A novel P1B-type Mn2+-transporting ATPase is required for secreted protein metallation in mycobacteria. Journal of Biological Chemistry. 288 (16), 11334-11347 (2013).
