Un saggio di taglio uniforme per piastrine umane e recettori superficiali delle cellule tramite viscometria conica

M. Edward Quach; Anum  K. Syed; Renhao Li

doi:10.3791/59704

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Articolo metodologico

Un saggio di taglio uniforme per piastrine umane e recettori superficiali delle cellule tramite viscometria conica

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DOI:

10.3791/59704

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5 giugno 2019

M. Edward Quach¹^,² , Anum K. Syed¹^,² , Renhao Li¹^,²

¹Aflac Cancer and Blood Disorders Center, Children's Healthcare of Atlanta, ²Department of Pediatrics, Emory University School of Medicine

In questo articolo

Sommario

Descriviamo un metodo in-Solution per applicare un taglio uniforme ai recettori della superficie piastrinica utilizzando la viscometria a piastra conica. Questo metodo può anche essere utilizzato in modo più ampio per applicare il taglio ad altri tipi di cellule e frammenti di cellule e non è necessario indirizzare una coppia specifica del recettore ligare.

Abstract

Molte cellule/tessuti biologici percepiscono le proprietà meccaniche dei loro ambienti locali tramite meccanorecettori, proteine che possono rispondere alle forze come la pressione o le perturbazioni meccaniche. I meccanorecettori rilevano i loro stimoli e trasmettono segnali attraverso una grande varietà di meccanismi. Alcuni dei ruoli più comuni per i meccanorecettori sono nelle risposte neuronali, come il tatto e il dolore, o le cellule dei capelli che funzionano in equilibrio e udito. La meccanosensazione è anche importante per i tipi di cellule che sono regolarmente esposti a stress da taglio come le cellule endoteliali, che linea vasi sanguigni, o cellule del sangue che sperimentano il taglio in circolazione normale. I viscosimetri sono dispositivi che rilevano la viscosità dei fluidi. I viscosimetri rotazionali possono essere utilizzati anche per applicare una forza di taglio nota ai fluidi. La capacità di questi strumenti di introdurre un taglio uniforme ai fluidi è stata sfruttata per studiare molti fluidi biologici, tra cui sangue e plasma. La viscometria può anche essere utilizzata per applicare il taglio alle cellule in una soluzione e per testare gli effetti del taglio su specifiche coppie del recettore del Ligano. Qui, usiamo la viscometria cono-piastra per testare gli effetti dei livelli endogeni di stress da taglio sulle piastrine trattate con anticorpi contro il complesso recettore meccanosensoriale piastrinica GPIb-IX.

Introduzione

I meccanorecettori sono proteine che rispondono agli stimoli meccanici, come la pressione o la perturbazione meccanica/deformazione. Per alcuni meccanorecettori, il rilevamento di queste perturbazioni meccaniche è esplicito alla funzione dei tipi di cellule in cui sono espressi. Prendete, per esempio, i recettori elasticizzati nei neuroni barorecettori; questi canali ionici meccanosensibili regolano la pressione sanguigna rilevando il "tratto" vascolare¹^,². Nell'orecchio interno, i canali ionici sulle cellule dei capelli rilevano deformazioni meccaniche causate da onde sonore³e i meccan....