제시된 프로토콜은 염증성 장 질환 관련 대장암의 유도에 이어 마우스에서 부록(caecal patch)의 막강 외과적 제거를 기술한다. 이 뮤린 충수 절제술 모델은 인간 위장 병기의 병인에서 부록의 생물학적 역할을 조사 할 수 있습니다.
인간 부록은 최근에 대장암, 염증성 장 질환 및 파킨슨 병과 같은 다양한 복합 질병의 발병기전에서 중요한 생물학적 역할을 하는 것으로 연루되어 있다. 부록의 기능을 연구하기 위해, 장 질환 관련 뮤린 충수 모델이 설립되었으며 단계별 프로토콜이 여기에 설명되어 있습니다. 이 보고서는 dextran 황산나트륨 (DSS)와 아조시메탄 (AOM)의 조합을 사용하여 만성 대장염 관련 대장암의 화학 유도에 이어 마우스에서 케이칼 패치 제거를위한 막강 프로토콜을 소개합니다. IgA 특이적 세포 및 IgA 농도는 샴 그룹에서 그들에 비해 남성 C57BL/6 마우스에서 케이칼 패치의 제거시 유의하게 감소되었다. 동시에 관리 2% DSS와 AOM 거의 결과 80% 상당한 체중 감소 없이 sham 및 충 수 군모두에서 마우스 생존. 조직학적 결과는 대장 염증과 다른 정도의 선암을 확인했습니다. 이 모델은 장내 미생물 항상성 및 장내 대장염 및 악성 종양의 병인을 유지하는 부록의 기능적 역할에 대한 연구뿐만 아니라 약물 표적 치료의 잠재적 개발에 사용될 수 있습니다.
임상 충수 절제술은 주로 염증 (예를 들어, 맹장염)으로 인해 맹장의 제거를 포함하는 표준외과 적 수술입니다 1,2,3. 그러나, vermiform 인간의 부록의 생물학적 기능은논란의 여지가 남아 4,5,6. 부록은 큰 창자에 있는 장에서 장에서 투영하는 흔적 남은 으로 여겨졌습니다. 최근까지, 진화, 면역학, 형태학 및 미생물 학적 연구는 부록이 뚜렷한 기능을 가질 수 있음을 제안했다. 이러한 역할은 면역 글로빈의 생산을 포함 (예를 들어, IgA와 IgG), 다양한 B 세포와 T 세포는 창자 관련 림프 조직 내에서 적응 면역 반응에 대한 중요한 (GALTs), 및 공생 미생물과 큰 장의 보충 6개 , 7명 , 8개 , 9개 , 10개 , 11세 , 12.
이전 충수 절제술 또는 급성 충수염 환자의 임상 역학 연구는 염증성 장 질환 (IBD), 대장암 및 비 위장관과 같은 인간 질병의 발병기전에 잠재적 인 역할을 밝혀냈습니다. 장애 (예를 들어, 파킨슨 병 및 심혈관 질환)13,14,15,16,17,18. 예를 들면, 75,979명의 충수 절제술 환자를 가진 큰 아시아 인구 코호트 연구 결과는 최근에 대장암의 충수 및 후속 발달 사이 중요한 협회를 보여주었습니다, 높은 부각을 가진 일반적인 악성의 한개및 필멸의 삶14,19. 따라서, 인간과 유사한 적합한 동물 충수 절제술 모델을 확립하는 것은 질병 병인에서 부록의 생물학적 기능 및 분자 기전을 조사하는 데 도움이 될 것이다.
많은 포유동물은 영장류, 라고모프(예를 들어, 토끼), 일부 설치류 및 marsupials20을포함하는 부록 또는 부록 과 같은 기관을 가지고 있다. 작고 일반적으로 사용되는 실험실 동물의 경우, 토끼는 인간21,22를닮은 형태학적으로 버미폼 부록을 가지고 있지만 토끼의 GALT는 인간에 비해 매우 크지 않습니다. 림프성 조직은 또한 작은 창자 및 대장21에있는 Peyer의 패치에서 있습니다. 부가적으로, 토끼는 인간으로부터상이다른 림프성 여포 구조, T 세포 분포 및 면역글로불린 밀도를 나타내며, 이는 그들의 부록의 연구를 부적절한21로만든다.
마우스는 인간 병리생리학을 연구하고 다양한 기존 및 신규 신개념 신생물을 시험하기 위해 가장 일반적으로 사용되는 동물 모델(23,24,25)이다. 케칼 패치로 알려진 마우스에서 의 케쿰의 정점에 있는 단일 백색 대형 림프군은 인간 부록26,27,28과유사한 기능을 수행하는 것으로 생각된다. 그러나, 마우스에서 케이쿰으로부터 케이칼 패치를 분리하는 것은 실질적으로 어렵다. 지금까지, 마우스 모델에서 장수염을 유도하기위한 일반적인 외과 적 수술은 전체 계개에 대한 액세스를 얻기 위해 복벽을 통해 상대적으로 큰 절개 (예를 들어, 1-2cm)를 포함한다 (보충표1)29, 30,31,32,33,34,35,36.
본 명세서에서, 위장관 질환과 관련된 충수 절제술 모델을 생성하기 위해, 본 보고서는 마우스에서 케이칼 패치 제거를 위한 막다른 수술 프로토콜을 제시한다. 이것은 인간에서 보인 것과 유사한 대장염 관련 대장암의 유도를 위한 genotoxic 에이전트 AOM 및 pro-inflammatory agent DSS의 결합한 관리에 선행됩니다. IBD는 장암 37,38의위험인자인 것으로 나타났다. AOM/DSS-유도 된 만성 대장염 관련 대장암의 조합은 잘 확립되었으며, 독자는 상세한 절차에 대한 Neufert et al., 및 Thaker 등을 참조 할 수 있습니다39,40. 이 재현 가능하고 빠른 뮤린 충수 절제술 모델은 특히 IBD 및 대장암의 발달과 진행에서 부록 변조 된 대장 염증 및 결장 미생물을 연구하는 데 사용할 수 있습니다.
대장염 관련 대장암의 뮤린 충수 절제술 모델은 마우스에서 높은 생존율을 가진 수술 단계를 사용하여 수득되었다. 대부분의 경우, 케이쿰이 복벽 아래에 위치했기때문에(보충표 1, 보충표 2및 도2), 개복술 없이 그 위치를 미리 판단하는 것이 어려웠다. 이러한 외과 적 프로토콜에서는, 범프를 만지기 쉬운 단계가 도입되었고, 소양 위치의 정량적 평가는 또한 소…
The authors have nothing to disclose.
이 작품은 중앙대학 기초연구기금(G2018KY0302), 대학 기초연구개발기금(KT00062), 중국국립자연과학재단(81870380), 임상연구상(81870380) 등에서 부분적으로 지원되고 있다. 중국 시안 자오퉁 대학 의 첫 번째 제휴 병원 (NO. XJTU1AF-CRF-2015-029). 저자는 뮤린 충수 모델의 초기 탐사 단계에서 그의 기술적 제안에 대한 Chengxin Shi 박사뿐만 아니라 대장염과 대장 종양의 H&E 염색 결과의 평가에 대한 병리학자 Xi Liu 박사에게 감사드립니다. Y.L.은 수술 데모를 수행하고, 데이터 분석을 수행하고, 원고 초안을 작성했습니다. J.L., G.L., Z.P., 및 Y.M.은 외과 준비, 조직 수집 및 비디오 제작에 참여했습니다. M.Z.는 유세포분석 및 ELISA를 수행; Q.W. 및 H.X.는 임상적으로 관련된 뮤린 모델을 생성하는 기술 지원을 제공했습니다. R.X.Z.는 연구를 설계하고 연구를 감독하며 원고를 작성하고 증명했습니다. J.S.는 원고를 검토했습니다.
Azoxymethane(AOM | Sigma-Aldrich,Inc. | A5486 | |
Dextran Sulfate Sodium Salt(DSS | MP Biomedicals,Inc. | 160110 | |
Entoiodine | Shanghai likon high technology disinfection co. LTD | 310102 | |
digital caliper | Ningbo yuanneng trading co. LTD | 4859263 | |
4-0 Silk Sutures | Yuanlikang co. LTD | 20172650032 | |
8-0 Prolene Sutures | Yuanlikang co. LTD | 20172650032 | |
Electric coagulation pen | Chuang mei medical equipment co. LTD | 28221777292 | |
disposable syringe 1ml | Shengguang medical products co. LTD | 3262-2014 | |
disposable syringe 10ml | Shengguang medical products co. LTD | 3262-2014 | |
75% Medicinal alcohol | Shandong anjie high-tech disinfection technology co. LTD | 371402AAJ008 | |
Pentobarbital sodium salt | Sigma-Aldrich,Inc. | 57-33-0 | |
Physiological Saline | Shandong qidu pharmaceutical co. LTD | H37020766 | |
Absorbent Cotton Swab | Henan ruike medical co., LTD | RK051 | |
Surgical Instruments-Ophthalmic | Jinzhong Shanghai co.LTD | WA3050 |