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Medicine

क्रोनिक कोलाइटिस एसोसिएटेड कोलोरेक्टल कैंसर के Murine Appendectomy मॉडल केल पैच के सटीक स्थानीयकरण द्वारा

Published: August 24, 2019
doi:
10.3791/59921
, , , , , , , , ,
1Department of General Surgery, The First Affiliated Hospital,Xi’an Jiaotong University, 2Institute of Medical Research,Northwestern Polytechnical University, 3School of Life Sciences,Northwestern Polytechnical University, 4Department of Medicine,Xi’an Jiaotong University, 5Princess Margaret Cancer Center,University of Health Network, 6Department of Pathology,Nanjing Medical University

Summary

प्रस्तुत प्रोटोकॉल सूजन आंत्र रोग संबद्ध कोलोरेक्टल कैंसर के प्रेरण के बाद एक माउस में परिशिष्ट (कैकल पैच) के एक सुगम शल्य चिकित्सा हटाने का वर्णन करता है। इस murine appendectomy मॉडल मानव जठरांत्र रोग के रोगजनन में परिशिष्ट की जैविक भूमिका की जांच में सक्षम बनाता है.

Abstract

मानव परिशिष्ट हाल ही में कोलोरेक्टल कैंसर, सूजन आंत्र रोग, और पार्किंसंस रोग के रूप में विभिन्न जटिल रोगों के रोगजनन में महत्वपूर्ण जैविक भूमिका निभाने के लिए फंसाया गया है। परिशिष्ट के समारोह का अध्ययन करने के लिए, एक आंत रोग संबद्ध murine appendectomy मॉडल स्थापित किया गया है और इसके कदम दर कदम प्रोटोकॉल यहाँ वर्णित है. इस रिपोर्ट में चूहों में सीक पैच हटाने के लिए एक सुगम प्रोटोकॉल का परिचय दिया गया है जिसके बाद पुरानी कोलाइटिस-संबद्ध कोलोरेक्टल कैंसर के रासायनिक प्रेरण के बाद डेक्सट्रन सल्फेट सोडियम (डीएसएस) और एजोक्सीमेथेथेन (एओएम) का संयोजन किया गया था। IgA विशिष्ट कोशिकाओं और IgA एकाग्रता काफी पुरुष C57BL/6 चूहों में सीक पैच को हटाने पर शर्म समूह में उन लोगों की तुलना में कम कर रहे थे. इसके साथ ही प्रशासन 2% डीएसएस और AOM महत्वपूर्ण शरीर के वजन घटाने के बिना दोनों शर्म और appendectomy समूहों में लगभग 80% चूहों अस्तित्व में हुई. हिस्टोलॉजिकल परिणाम ों ने कॉलिनिक सूजन और एडेनोकार्सीनोमा के विभिन्न डिग्री की पुष्टि की। इस मॉडल आंत microbiota homeostasis और आंत कोलाइटिस और द्रोह के रोगजनन को बनाए रखने में परिशिष्ट की कार्यात्मक भूमिका के अध्ययन के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, साथ ही दवा लक्ष्यीकरण उपचार के संभावित विकास के लिए.

Introduction

नैदानिक एपेंडेक्टॉमी एक मानक शल्य चिकित्सा प्रक्रिया है जिसमें परिशिष्ट को हटाने की प्रक्रिया होती है जिसमें अधिकतर सूजन (उदा., पथरी)1,2,3 के कारण परिशिष्टकोहटाना शामिल है . तथापि, वर्मीफॉर्म मानव परिशिष्ट का जैविक कार्य विवादास्पद4,5,6रहता है। परिशिष्ट एक अवशेष बड़ी आंत में सीकम से पेश के रूप में माना गया है. हाल ही में जब तक, विकासवादी, प्रतिरक्षा, रूपात्मक, और सूक्ष्मजीवी अध्ययनों ने सुझाव दिया है कि परिशिष्ट में अलग-अलग कार्य हो सकते हैं। इन भूमिकाओं में इम्यूनोग्लोबिन (जैसे, आईजीए और आईजीजी), आंत से जुड़े लिम्फोइड ऊतकों (GALTs) के भीतर अनुकूली प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं के लिए महत्वपूर्ण बी कोशिकाओं और टी कोशिकाओं की एक किस्म, और कॉमेन्सल माइक्रोबायोटास के साथ बड़ी आंत्र की पुनःपूर्ति शामिल हैं। 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12.

पूर्व appendectomy या तीव्र पथरी के साथ रोगियों के नैदानिक महामारी विज्ञान के अध्ययन भी इस तरह के सूजन आंत्र रोग (आईबीडी), कोलोरेक्टल कैंसर, और गैर गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल के रूप में मानव रोगों के रोगजनन में अपनी संभावित भूमिकाओं से पता चला है विकार (उदा., पार्किंसंस रोग और हृदय रोग)13,14,15,16,17,18. उदाहरण के लिए, 75,979 appendectomy रोगियों के साथ एक बड़े एशियाई जनसंख्या सहगण अध्ययन हाल ही में appendectomy और कोलोरेक्टल कैंसर के बाद के विकास के बीच एक महत्वपूर्ण संबंध दिखाया, एक उच्च घटना के साथ सबसे आम द्रोह में से एक और मृत्यु14,19. तदनुसार, एक उपयुक्त पशु appendectomy मॉडल है कि एक मानव जैसा दिखता है की स्थापना जैविक कार्यों और रोग रोगजनन में परिशिष्ट के आणविक तंत्र की जांच करने में सहायक हो जाएगा.

कई स्तनधारियों के पास एक परिशिष्ट या परिशिष्ट जैसे अंग होते हैं, जिनमें प्राइमेट, लागोमॉर्स (जैसे, खरगोश), कुछ कृन्तक, और मार्सूपियल20शामिल हैं। छोटे और आमतौर पर इस्तेमाल किया प्रयोगशाला जानवरों के लिए, खरगोश के पास वर्मीफॉर्म परिशिष्ट रूपात्मक रूप से मानव21,22के समान है, लेकिन खरगोश में GALT मनुष्यों की तुलना में बहुत बड़ा है, के बाद से अधिकांश के बाद से लसीकाभ ऊतक भी छोटे और बड़े आंतों21दोनों में स्थित Peyer के पैच में पाए जाते हैं। इसके अतिरिक्त, खरगोश मानव से एक अलग लसीकाभ कूपिक संरचना, टी सेल वितरण, और इम्यूनोग्लोबुलिन घनत्व दिखाता है, जो उनके परिशिष्टों का अध्ययन अनुचित21बनाता है।

चूहे मानव रोग विज्ञान का अध्ययन करने और विभिन्न मौजूदा और उपन्यास therapuetics23,24,25का परीक्षण करने के लिए सबसे अधिक इस्तेमाल किया पशु मॉडल हैं . चूहों में सीकम के शीर्ष पर एकल सफेद बड़े लसीकाभ क्लस्टर, जिसे सीक पैच के रूप में जाना जाता है, मानव परिशिष्ट26,27,28के समान कार्य करने के लिए माना जाता है। फिर भी, चूहों में सीक पैच को सीकम से अलग करना व्यावहारिक रूप से मुश्किल है। अब तक, एक माउस मॉडल में पथरी को प्रेरित करने के लिए आम शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं पूरे caecum तक पहुँच प्राप्त करने के लिए पेट की दीवार के माध्यम से एक अपेक्षाकृत बड़े चीरा (उदाहरण के लिए, 1-2 सेमी) शामिल है पूरे caecum (पूरक तालिका 1)29, 30,31,32,33,34,35,36.

यहाँ, जठरांत्र रोग के साथ जुड़े एक appendectomy मॉडल उत्पन्न करने के लिए, इस रिपोर्ट चूहों में caecal पैच हटाने के लिए एक सुगम शल्य प्रोटोकॉल प्रस्तुत करता है. यह genotoxic एजेंट AOM और समर्थक भड़काऊ एजेंट डीएसएस के संयुक्त प्रशासन द्वारा कोलाइटिस से जुड़े कोलोरेक्टल कैंसर के शामिल होने के लिए है कि मनुष्यों में देखा के समान है के बाद है. आईबीडी को आंतों के कैंसर37,38का जोखिम कारक दिखाया गया है . AOM/DSS प्रेरित पुरानी कोलाइटिस संबद्ध कोलोरेक्टल कैंसर का संयोजन अच्छी तरह से स्थापित किया गया है, और पाठकों Neufert एट अल का उल्लेख कर सकते हैं, और Thaker एट अल विस्तृत प्रक्रियाओं के लिए39,40. इस reproduible और तेजी से murine appendectomy मॉडल परिशिष्ट modulated आंत्र सूजन और बृहदान्त्र microbiota का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, विशेष रूप से विकास और IBD और कोलोरेक्टल कैंसर की प्रगति में.

Protocol

सभी पशु प्रक्रियाओं Xi’an Jiaotong विश्वविद्यालय के संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया (नहीं. XJTULAC2019-1023). 1. चूहे appendectomy घर 8-10-सप्ताह पुराने C57BL/6 पुरुष चूहों एक प्रमाणित विशिष्ट र?…

Representative Results

मौरीन एपेंडेक्टॉमी मॉडल की स्थापना क्रोनिक कोलाइटिस से जुड़े कोलोरेक्टल कैंसर के इस मौरीन एपेंडेक्टॉमी मॉडल को अनुक्रमिक शल्य चिकित्सा और प्रेरण चरणों का पालन करके उत्पन्न किया जा…

Discussion

चूहों में एक उच्च जीवित रहने की दर के साथ शल्य चिकित्सा चरणों का उपयोग कर कोलाइटिस संबद्ध कोलोरेक्टल कैंसर के एक murine appendectomy मॉडल प्राप्त किया गया था। अधिकांश मामलों में, चूंकि केकम को उदर की दीवार (पूरक?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

यह काम आंशिक रूप से केंद्रीय विश्वविद्यालय के लिए मौलिक अनुसंधान कोष द्वारा समर्थित है (G2018KY0302), विश्वविद्यालय मौलिक अनुसंधान विकास कोष (KT00062), चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (81870380), और नैदानिक अनुसंधान पुरस्कार के चीन में Xi’an Jiaotong विश्वविद्यालय के पहले संबद्ध अस्पताल (नहीं. XJTU1AF-CRF-2015-029). लेखकों murine appendectomy मॉडल के प्रारंभिक अन्वेषण चरण के दौरान अपने तकनीकी सुझावों के लिए डॉ Chengxin शि धन्यवाद, साथ ही रोग विशेषज्ञ डॉ Xi Liu कोलाइटिस और कोलोरेक्टल ट्यूमर के एच एंड ई धुंधला परिणाम के मूल्यांकन के लिए. वाई.एल. सर्जरी प्रदर्शन किया, डेटा विश्लेषण किया, और पांडुलिपि का मसौदा लिखा था; J.L., G.L., $.P., और Y.M. शल्य चिकित्सा तैयारी, ऊतक संग्रह, और वीडियो उत्पादन में भाग लिया; एम.जेड. प्रवाह साइटोमेट्री और एलिसा प्रदर्शन किया; Q.W. और H.X. एक चिकित्सकीय प्रासंगिक murine मॉडल पैदा करने के तकनीकी समर्थन प्रदान की; आर.एक्स.जेड. ने अध्ययन तैयार किया, अनुसंधान का निरीक्षण किया, और पांडुलिपि को लिखा और प्रूफ किया; जे.एस. ने पांडुलिपि की समीक्षा की।

Materials

Azoxymethane（AOM Sigma-Aldrich,Inc. A5486
Dextran Sulfate Sodium Salt（DSS MP Biomedicals,Inc. 160110
Entoiodine Shanghai likon high technology disinfection co. LTD 310102
digital caliper Ningbo yuanneng trading co. LTD 4859263
4-0 Silk Sutures Yuanlikang co. LTD 20172650032
8-0 Prolene Sutures Yuanlikang co. LTD 20172650032
Electric coagulation pen Chuang mei medical equipment co. LTD 28221777292
disposable syringe 1ml Shengguang medical products co. LTD 3262-2014
disposable syringe 10ml Shengguang medical products co. LTD 3262-2014
75% Medicinal alcohol Shandong anjie high-tech disinfection technology co. LTD 371402AAJ008
Pentobarbital sodium salt Sigma-Aldrich,Inc. 57-33-0
Physiological Saline Shandong qidu pharmaceutical co. LTD H37020766
Absorbent Cotton Swab Henan ruike medical co., LTD RK051
Surgical Instruments-Ophthalmic Jinzhong Shanghai co.LTD WA3050
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Li, Y., Liu, J., Liu, G., Pan, Z., Zhang, M., Ma, Y., Wei, Q., Xia, H., Zhang, R. X., She, J. Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch. J. Vis. Exp. (150), e59921, doi:10.3791/59921 (2019).
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