Summary
I den här artikeln beskrivs hur du utför sexuella beteendetester hos hanmöss.
Abstract
Sexuellt beteende är mycket artspecifikt. Även gnagare har något olika sexuella beteenden, möss och råttor har en liknande sexuell beteendemönster. Syftet med denna artikel är att beskriva hormon-inducerad estrus ovariectomized kvinnliga modellen och det experimentella förfarandet för bedömning av sexuellt beteende av manliga möss. De viktigaste sexuella beteendeelementen demonstreras i videon och illustrationerna. De kritiska stegen, fördelarna och begränsningarna i testet för sexuellt beteende förklaras också. Slutligen presenteras beteendeparametrarna, och monterings-, intromission- och utlösningsprocesser i parning är framstående. Beteendemässiga parametrar bedöms i termer av den inträffade varaktigheten och räknas under testperioden.
Introduction
Sexuellt beteende hos mogna hanmöss beror på samspelet mellan en serie relaterade och ömsesidigt beroende hormonella system och neurala system i olika hjärnkretsar1. Det kräver också utvecklingsupplevelser, lärande, sammanhang och en lämplig partner. Beteendeanalys är en viktig reflektion över neural a eller neurokrin funktion. Därför har sexuellt beteende studie på djurmodeller använts i stor utsträckning i beteendemässiga neurovetenskap och annan relaterad forskning2. Etogrammet av sexuella beteenden hos gnagare har förklarats i många artiklar och böcker1,3,4. Till exempel, Scahs och Barfield beskrivning av sexuellt beteende i råtta5 har hjälpt till att förstå ett liknande beteendemönster hos möss5. Musen är en av de vanligaste ämnena för beteendestudier. Hull et al.6 gav en detaljerad introduktion av manliga mus sexuella beteenden: När en manlig mus möter en kvinna, börjar det att undersöka den anogenitala regionen av kvinnan. Sedan pressar hanen sina framtassar mot honans flanker för att montera honan bakifrån. Honan uppvisar en karakteristisk sexuellt mottaglig hållning, böjer ryggraden ner i en båge och flyttar svansen till ena sidan av kroppen, utsätta en inledande introitus för sexuell penetration av hanen (dvs. lordos). Efter monteringen gör hanen snabba, grunda bäckenstötar, följt av långsamma och djupa vaginala stötar. Efter många intromissioner, en långvarig dragkraft resulterar i utlösning av sperma, under vilken den manliga musen kan frysa i ca 25 s innan demontering eller faller av från honan6. Vid utlösning av de manliga mustillbehörkörtlarna kan producera en blandning som innehåller sperma som härdar för att bilda copulatory plugg. Slutligen, efter utlösning, börjar hanen genital grooming och visar en brist på intresse för honan. I korthet består den grundläggande sekvensen av manligt sexuellt beteende av sniffning, följande, montering, intromission, utlösning, och post-utlösning grooming. Mus sexuellt beteende uppvisar stam skillnader. Till exempel, utlösning latens varierar från 594 till 6943 s, och antalet intromissions varierar från 5 till mer än 100. Efter utlösning svarstider varierar från 17 till 60 min. Men införandet av en ny kvinna kan minska detta tidsintervall. I vissa fall ejakulerar hanen på den första intromissionen med den nya kvinnliga7.
De viktigaste händelserna för utvärdering av sexuellt beteende är montering, intromission och utlösning. Beteendevetare har rekommenderat mätning av inte bara frekvensen av varje åtgärd, men också dess latens och tidsintervall5,8. Några viktiga mätindikatorer i tidigare studier inkluderar: antal fästen, antal intromissioner, monteringsfördröjning, intromission latens, utlösning latens, post-utlösning montera latens (eller post-utlösning intervall), post-utlösning intromission latens, antal copulatory serien, och varaktighet copulatory serien. Park et al.8 och Sachs et al.5 beskrev hur man identifierar varje åtgärd av montering, intromission och utlösning av gnagare. Montering definieras som den manliga montering en hona bakifrån, palpering hennes flanker med frambenen, och stötande hans penis snabbt och upprepade gånger utan penis insättning. Intromission, även känd som penis insättning, identifieras av en eller flera av följande handlingar: en lång, djup dragkraft efter snabba grunda stötar, en snabb spark med en bakben, och en markant lateraltillbakadragande av hanen från honan. Utlösning identifieras av en terminal bäckendragkraft som är långsammare och djupare än en intromission och en minskning av höjden av bakbenet. En copulatory serie identifieras av varje sekvens från montering till utlösning. Definitionerna av beteendemässiga parametrar som används i den aktuella studien anges på följande sätt: 1) Monteringslatens: tiden från införandet av honan till den första monteringen av hanen; 2) Intromission latens: tiden från införandet av honan till första intromission; 3) Utlösning latens: tiden från den första intromissionen till första utlösning (i allmänhet efter den sista bäckenstöten); 4) Efter utlösning montera latens: tiden från utlösning till nästa montering; 5) Efter utlösning intromission latens: tiden från utlösning och nästa intromission; 6) Antal fästen: antalet monteringstider före första utlösning; 7) Antal introsmissioner: antalet introsmissioner före den första utlösning; 8) Antal copulatory serier: antalet copulatory serien under observationsperioden; 9) Varaktighet en copulatory serie: tiden för alla copulatory serien under observationsperioden.
Sexuellt beteende och relaterat beteende kan utföras i antingen mannens hem bur eller i en sluten arena, bland vilka en apparat som kallas Rissman's "No Secrets" speglad låda införs för att observera parning beteende3. En videokamera placeras framför lådan för att samtidigt spela in verkan av mössfrån en lateral vy och genom en lutande spegel från en ventral vy. Denna metod kräver dock starkt ljus, vilket oundvikligen leder till längre tillvänjning för att eliminera miljöstress hos möss. När det gäller mätmetoden rekommenderas videobaserad beteendeanalys att registrera och kvantifiera beteende4. En videobandspelare som har en ram-för-bildruta video förväg alternativ med rekommenderade slutartider större än 1 /1000 s kan användas för att spela in snabba musrörelser. Den högupplösta infraröda kameran är nödvändig när du spelar in i en mörk miljö. För att analysera filmen behövs en dator med en ramgripare så att de enskilda beteenderamarna kan fångas för datormanipulering. Möss är extremt mångsidiga och kan visa kompensatoriskt beteende efter nästan alla behandlingar. Tvetydighet kan finnas om varje rörlig kroppsdel4. Därför kan analysen av vissa beteenden kräva ännu större upplösning och högre hastighetskameror.
Manliga sexuella beteenden hos möss påverkas av många faktorer, inklusive stamskillnader, hormonförändringar och genmutantioner1,3,9,10. McGill och Blight11 illustrerade stamskillnaderna i musparningbeteenden. Till exempel, C57BL/6 män får vanligtvis intromission snabbt och ejakulera i ca 20 min11. DBA/2 hanar är långsamma med att få intromission men ejakulera snabbt. BALB / c män är långsamma för att uppnå utlösning (genomsnittlig latens på 1 h) på grund av en lång period av uppvaktning11. Testosteron underlättar och upprätthåller manligt sexuellt beteende2, och förändringar i testosteronnivåer kan förändra sexuellt beteende prestanda12. Både kirurgisk kastrering och antiandrogen behandling kan minska nivån av testosteron och resultera i en snabb nedgång av sexuella beteenden och även sexuell motivation och sexuell upphetsning13. Administreras testosteron kan återställa precopulatory och copulatory beteenden i kastrerade möss. Slutligen visar knockout och knockdown möss skillnader i fasetter av sexuella beteenden jämfört med vilda möss. Till exempel uppvisar manliga möss med riktade mutationer av Adcy3, Cnga2 och Gnao en minskad förmåga att upptäcka feromoner, medan Trpc2 knockout möss visar förändrad partner preferens14,15,16. Andra effekter av transgens och knockouts på sexuellt beteende av möss förklaras av Crawley3.
Här beskrivs en av de vanligaste procedurerna för att bedöma sexuellt beteende i parningen av en manlig mus med en ovariektomiserad kvinna som har varit hormonellt primade att vara mottaglig. Ett experimentellt protokoll presenteras för att utföra experiment med sexuellt beteende hos möss. Dessutom visas ett exempel på förändrade beteendemönster för sexuellt beteende till följd av social isolering hos CD-1-möss.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alla försök utfördes i enlighet med riktlinjerna för laboratoriedjursvårdsprinciperna (NIH:s publikation nr 80-23, reviderad 1996) och under godkännande och övervakning av Institutet för försöksdjur vid Institutet för läkemedel Växtutveckling (Kina).
1. Djurhållning
- Hus hona och hanmöss vid 25 °C för 12 h ljus/12 h mörka cykler.
- Ge fri tillgång till vatten och en standardpelletsdiet.
- Låt möss acklimatisera sig till sin omgivning i 7 dagar före operationen om de transporteras från en annan anläggning.
2. Ovariectomy hos möss hos kvinnor
- Anestesi hona (8 veckor postnatal, inte mindre än 6 veckor gammal) med isoflurane (~ 4−5% för induktion, ~ 1−2% för underhåll) i 100% syre via en ansiktskon mask.
- Kontrollera att det lämpliga djupet av anestesi har uppnåtts genom att se till att det inte finns några frivilliga rörelser i över 30 s, i kombination med en lämplig andningsfrekvens (t.ex. 1 andetag per 2 s eller längre). Alternativt, testa musens svar på skonsamt tryck på tårna på baktassarna.
OBS: Den normala andningsfrekvensen är ~180/min. En räntesänkning på 50% är acceptabel under anestesi17.- Använd oftalmisk salva för att förhindra torkning av hornhinnans torkning och ögontrauma under anestesi.
- Håll musens kroppstemperatur vid eller över 36 °C. Ge extra värmestöd under anestesiperioden vid behov.
- Sterilisera och desinficera alla kirurgiska instrument och hårda ytor på operationsbordet med 75% etanol före användning.
- Placera djuret på en steril drapering.
- Raka päls bilateralt över ländryggen på baksidan av musen för att exponera huden.
- Sterilisera den exponerade huden med 75% etanol.
- Gör ett enda mittlinesnitt (ca 0,5 cm i längd) på baksidan från mitten av de två lårrötterna mot huvudet på ~1 cm avstånd (position visas i figur 1).
- Använd små saxar för att penetrera huden för att försiktigt fri subkutan vävnad från den underliggande muskeln för att exponera muskellagret.
- Lokalisera äggstocken under det tunna muskellagret och gör ett litet snitt (ca 5 mm i längd) för att få tillträde till bukhinnan.
- Använd små pincett för att dra vävnaden något på vänster sida av bukhålan för att visa den vänstra äggstocken omslag runt den vita fettvävnaden (en genomskinlig, oregelbunden massa som ses av blotta ögat, se figur 1).
- Dra tillbaka äggstocksfettdynan som omger äggstocken med trubbiga pincett för att exponera ovidudukten.
- Utför en enda ligatur runt ovidudukten för att förhindra blödning.
- Använd små saxar för att bryta ovidudukten försiktigt och ta bort äggstocken.
- Kontrollera ovidudukten noggrant för att bekräfta att alla äggstocksvävnader avlägsnas. Äggstocken är ca 5 mm × 4 mm × 3 mm med oregelbundna knölar på ytan.
- Placera den återstående delen av ovidukten tillbaka in i bukhålan.
- Suturera muskellagret med absorberbara suturer.
- Dra huden åt höger sida för att exponera muskellagret på höger sida och ta bort den högra äggstocken genom att upprepa steg 2,9–2,16.
- Stäng hudsnittet med hjälp av absorbabla suturer.
- Injicera varje mus intraperitoneally med penicillin natrium (10.000 enheter/10 g per mus) för att förhindra infektion.
- Injicera lidokain (4 mg/kg, 0,4 ml/kg av en lösning på 1 %) under huden längs snittets plats. Också ge ibuprofen (50-60 mg/kg/dag; 10 ml barn motrin i 500 ml vatten) kontinuerligt i dricksvattnet i 3 dagar för smärtbehandling.
- Placera varje mus i en steriliserad bur individuellt.
- Håll under noggrann observation i ca 1–2 h tills de är helt återställda från anestesi.
- Återvinn djur på pappershanddukar i en ren bur utan sängkläder. Detta steg minimerar risken för trakeal obstruktion eller lunginflammation. Ge extra värmestöd under bedövningsmedel återhämtning. Övervaka operationsstället för att förhindra bristning av såret.
- Efter återhämtningsperioden (ca 24 h efter operationen) placerar mössen tillbaka till hemmaburen.
- Utför inte experimentet i minst 2 veckor efter operationen.
3. Hormoninducerad estrus hos kvinnor
- Bestäm de estrous stadiet av honorna genom att utföra en vaginal smutskastning som beskrivs i McLean et al.18. Ingen estrus cykel förändring tyder på att ovariectomy av honan var framgångsrik.
- Injicera estradiol benzoate (20 μg per mus, upplöst i 0,1 ml steriliserad olivolja, intraperitoneally) 48 h före testet för sexuellt beteende.
- Injicera progesteron (500 μg per mus, upplöst i 0,1 ml olja, intraperitoneally) 4 h före testet för sexuellt beteende.
OBS: Behörigheten för en estrus hona bestäms av kvinnan acceptera genital asonde införande av en manlig mus 3 eller fler gånger, när de sambor med en sexuellt aktiv och erfaren hane i en bur.
4. Förberedelse för testet av sexuellt beteende
- Utför sexuellt beteende test av manliga möss i en rektangulär och öppen fältlåda (40 cm x 40 cm x 40 cm) med svarta plexiglasväggar, med undantag för en transparent främre vägg som möjliggör observation av musrörelse.
- Ställ in den allmänna rumsbelysningen på 650 lux.
OBS: Mössen bör inte belysas direkt för att undvika onormala beteendemönster. - Använd en digitalkamera kopplad till en dator för att videofilma mössens rörelse och beteende.
- Utför beteendetestet på de manliga mössen under de första timmarna av den mörka cykeln.
5. Tillvänjning
- Håll experimentrummet tyst.
- Placera mössen som ska testas i mitten av den öppna fältlådan, så att de kan utforska miljön fritt i 30 min.
- Habituate möss för 2 dagar i följd före testdagen i apparaten för att förhindra stress från den nya miljön.
OBS: Möss ska röra sig och utforska fritt utan att känna stress. Både han- och honmöss måste vara vana vid testmiljön.
6. Beteendemässiga analyser
- Slå på kameran innan testet börjar.
- Placera musen som ska testas i mitten av det öppna fältet i testboxen, vilket möjliggör gratis utforskning i 5 min för att acklimatisera sig till miljön.
- Placera en hona i estrus i testboxen.
- Registrera de sociala och parningbeteenden och samspelet mellan han- och honmössen i 30 min.
- Stäng av kameran och bekräfta att videon sparas.
- Ta ut honan ur testlådan och spela in bildandet av en vaginal plugg.
OBS: En kvinnlig mus som accepterade parning kan inte användas i ett annat sexuellt beteende test på en dag. - Placera kvinnan tillbaka till sin hemmabur.
- Återlämna hanen till sin hemmabur.
- Rengör urin, avföring och stoppning i apparaten.
- Ta bort lukten av de testade mössen med 75% etanol.
- Starta testet av nästa manliga mus genom att upprepa steg 6,1–6,10.
7. Beteendedatautvinning
- Spela upp videoinspelningen och extrahera beteendeparametrarna (se bild 2).
- Registrera antalet fästen i 30 min.
- Registrera antalet intromissioner i 30 min. Räkna en bäckenstöt som en intromission.
- Registrera tiden från införandet av honan till den första monteringen som monteringslatens.
- Spela in tiden från införandet av honan till den första intromissionen som intromission latens.
- Spela in tiden från första intromissionen till den första utlösning som utlösning latens.
- Registrera tiden från utlösning till nästa montering som post-utlösning montera latens.
- Rekordmånga copulatory serier i 30 min. En copulatory serie är varje sekvens från montering till utlösning.
- Spela in tiden för alla copulatory serien i 30 min som varaktigheten av copulatory serien.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
En jämförelse av sexuellt beteende mellan CD-1 möss föds upp i isolering och grupp-inrymt CD-1 möss visas. Manliga CD-1 möss tilldelades slumpmässigt i en isolering-uppfödda grupp (IS, en mus per bur, n = 30) och en grupp-inrymt grupp (GH, fem möss per bur, n = 15). Mössen genomgick isoleringuppfödning från postnatal dag 23 till dag 93. Sedan bedömdes båda grupperna av möss för sexuellt beteende. Vår studie fann att framgången för copulation tenderade att vara lägre i IS-gruppen än i GH-gruppen (IS: 80,0%, GH: 86,7%), även om ingen statistiskt signifikant skillnad mellan grupperna observerades (p = 0,458). Monteringsfördröjningen var längre i IS-gruppen än i GH-gruppen (p = 0,002, figur 3A), vilket indikerar att den förstnämnda krävde mer tid för att initiera sexuellt beteende. Intromission latens var längre i IS-gruppen än i GH-gruppen (p = 0,015, figur 3B), vilket tyder på att den förra krävde en längre tid för att utföra införandet av penis i kvinnans vagina. Ingen statistiskt signifikant skillnad mellan de två grupperna observerades i termer av utlösning latens och post-utlösning montera latens. Varaktigheten för copulatory-serien var kortare i IS-gruppen än i GH-gruppen (p = 0,002, figur 3C). Inga statistiskt signifikanta skillnader mellan de två grupperna observerades i fråga om antalet fästen, antalet introsmissioner och antal copulatory serie19 (se tabell 1).
| Isoleringsuppfödda | Gruppinhysta | t/t" | P | |
| N | 30 | 15 | ||
| Monteringsfördröjning a | 788,70 ± 262,77 | 365,03 ± 288,65 | -3.87 | 0.002 |
| Intromission latens | 937,30 ± 369,87 | 542,94 ± 352,40 | -2.75 | 0.015 |
| Ejaculationsfördröjning | 16.58 ± 9.78 | 17.37 ± 13.03 | -0.2 | 0.845 |
| Fördröjning av montering efter utlösning | 173,00 ± 89,84 | 192,87 ± 106,91 | 0.58 | 0.565 |
| Varaktighet en copulatory serie | 88,27 ± 52,40 | 151,65 ± 40,87 | 3.44 | 0.002 |
| Antal fästen b | 2,4±2,0 | 3.3±3.3 | 1.09 | 0.282 |
| Antal introsmissioner | 20.1±12.9 | 22.6±12.3 | 0.58 | 0.564 |
| Antal copulatory-serier | 7.0±4.3 | 9.3±4.6 | 1.55 | 0.131 |
| Medelvärdet ± SD. en enhet är tvåa (s). b enheten räknas. | ||||
Tabell 1: Sexuella beteendeparametrar för isoleringsuppfödda och gruppinhysta möss.
Figur 1: Ovariectomy av kvinnliga möss. Positionen för vertikal snitt och den högra äggstocken visas. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2: Process för sexuellt beteende hos möss. Den röda pilen anger honan och den gula pilen anger hanen. (A) Hanens sniffning av anal-genitala områden i början av sexuellt beteende. ( B)Hanen monterar honan. (C)Den manliga intromissionhållningen. (D)Utlösning av hanen. (E)Den manliga grooming könsorganen efter utlösning. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3: Resultat av sexuellt beteendetest. (A)Box-tomt av is- och GH-mössens monteringslatens. (B)Box-tomt av IS och GH-mössens intromissionlatens. (C)Den totala parningstiden för IS- och GH-möss. *p < 0,05, **p < 0,01. Denna siffra har ändrats från Liu et al.19. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Det finns några kritiska steg i det presenterade protokollet. När det gäller ovariectomy av kvinnor, kirurgi snittet öppning från baksidan är mindre skadligt än från buken. Med tanke på att äggstockens position är djup, dra andra organ när snittet skärs upp från buken leder ofta till blödning och resulterar i otydlig kirurgisk syn20. Vi utförde snittet på baksidan för att nå äggstocken enkelt och förkorta operationstiden, samt för att säkerställa säkerheten för operationen.
Underhåll av sterila tillstånd under operationen är viktigt för överlevnad. Fyra huvudvariabler anses under ett kirurgiskt ingrepp: det kirurgiska utrymmet, instrumenten, kirurgen och djuret. För det kirurgiska utrymmet, inklusive arbetsytor och operationsrum, rengörs och desinficeras alla nödvändiga ytor med lämpliga desinfektionsmedel (t.ex. utspätt blekmedel, väteperoxidprodukter) före operationen. Dessutom rekommenderas trycksatt ånga med autoklav. Under ett kirurgiskt ingrepp är trafikflödet begränsat i operationsrummet. Vid ett kirurgiskt ingrepp bör nyligen steriliserade instrument och material användas för varje djur. När instrument faller utanför det sterila fältet eller blir förorenade bör de omedelbart bytas ut. Under tiden, efter tvätt / skrubba händer och armar noggrant, kirurger måste ta på sig alla sterila klädsel, inklusive en steril klänning och sterila operationshandskar. Om något material är förorenat måste den drabbade artikeln ändras omedelbart före operationen (t.ex. ny klänning eller kirurgisk handske). Slutligen bör hår från operationsområdet och det omgivande området tas bort för att förebygga kontaminering. Huden måste skrubbas med 75% etanol efter hårborttagning. Elektriska klippare eller hårborttagningskräm kan användas för att ta bort håret. Före operationen placeras en steril drapering över djuret som ger tillgång till operationsstället för att förebygga kontaminering.
Tre aspekter av postkirurgisk behandling av djuren kräver uppmärksamhet: bedövningsmedel återhämtning, analgesi och kirurgiska plats övervakning, och sutur avlägsnande. När det kirurgiska ingreppet har avslutats skall djuren övervakas under återvinningen från anestesin. Djuret bör inte lämnas utan uppsikt förrän det har återfått tillräckligt med medvetande för att upprätthålla sternal recumbency och bör inte återlämnas till sällskap av andra djur tills det har återhämtat sig helt. Dessutom måste lämpliga återhämtningsvillkor tillhandahållas, inklusive en varm miljö som är fri från föremål som kan orsaka skada. Till exempel används pappershanddukar istället för majskolvströ i återvinningen av mössen och stora leksaker eller vattenskålar avlägsnas från stora djurpennor. Enligt riktlinjerna från University of Minnesota, ovariectomy av kvinnliga orsaker måttlig till svår smärta. Analgesi måste således administreras direkt postoperativt genom parenteral injektion eller oral sondmatning21. I denna studie utfördes en lidokaininjektion under huden efter operation och vatten som innehöll ibuprofen administrerades i minst 1–2 dagar för smärtbehandling. En veterinär måste dock konsulteras i utvecklingen av den smärtstillande planen. Slutligen måste djurets postkirurgiska hälsa och operationsstället observeras och registreras i minst 3 dagar. En manöverlinje eller sårklämmor används för att suturera snittet, som bör tas bort från huden 7–14 dagar efter operation21. I denna studie användes en absorberbar linje för att suturera snittet för att undvika sutureborttagning.
Den estrus av honan kontrollerades artificiellt med ovariectomy och hormonanvändning, istället för att använda en kvinna med naturlig estrus. Detta steg togs för att säkerställa konsekvensen av kvinnans sexuella mottaglighet i testet och garantera renlighetens tillförlitlighet vid övervakning av manligt parningsbeteende. Dessutom kan den hormoninducerade estruskvinnan återanvändas i en uppsättning experiment, och graviditetens påverkan förhindras. Estrus hos honan framkallas genom att injicera estradiol benzoate och progesteron före experimentet. Denna metod är lätt att hantera, har en hög framgång, och flera estrus honor kan erhållas samtidigt, vilket avsevärt förbättra effektiviteten i testet.
Sexuellt naiva och erfarna möss visar olika beteendemönster. Uppmärksamhet måste ägnas åt testet-retest tillförlitlighet experimentet i olika stadier av möss utveckling. Den dynamiska förändringen i sexuellt beteende måste beaktas innan testet och i det experimentella designstadiet. I denna studie användes sexuellt naiva män för sexuellt beteende test och endast den första förekomsten av sexuellt beteende mättes utan någon utbildning före testet. Copulation är det slutliga resultatet av en serie feromon upptäckt, montering, intromission och utlösning. Det finns en begränsning i det nuvarande experimentella protokollet när det tillämpas på muterade möss. Till exempel, manliga möss med riktade mutationer av Adcy3, Cnga2 och Gnao uppvisar minskad förmåga att upptäcka feromoner14,15,16, medan Trpc2 knockout möss visar förändrad partner preferens22. Det nuvarande protokollet kanske inte kan uppvisa det sexuella beteendet hos mutanta möss på grund av dess minskade förmåga att upptäcka feromoner.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har inget att avslöja.
Acknowledgments
Vi tackar Lu Cong, Zhang Hongxia, Zhang Beiyue och Hu Mi för deras förslag till experimenten.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Choral hydrate | Sinopharm Chenmical Reagent Co., Ltd. | 20160225 | |
| Coated VICRYL Plus Sutures | Ethicon, Inc. | missing | |
| Estradiol benzoate | J&K Scientific, Ltd. | L930Q170 | |
| Ethanol absolute | Beijing Chemical Works Co., Ltd. | 20160715 | |
| Ibuprofen (Children's Motrin) | Shanghai Johnson & Johnson Co., Ltd. | 160629478 | |
| Isoflurane | RWD Life Science Co., Ltd. | 217180501 | |
| Lidocaine | HebeI Tiancheng Pharmacreutical Co., Ltd. | 1170506107 | |
| Male and female CD-1 mice | Vital River Beijing | SCXK( )2013-0023 |
|
| Olive oil | |||
| Penicillin sodium | North China Pharmaceutical Co., Ltd. | F5126420 | |
| Progesterone | J&K Scientific, Ltd. | LR50Q07 | |
| Sony digital camera | Sony Corporation | HDR-CX290E | |
| Test box | DIY | ||
| ThinkStation Computer | Lenovo | S/N PCOGLQKG | |
| Vaporizer for Isoflurane | RWD Life Science Co., Ltd. | E05904-009M |
References
- The staff of the Jackson laboratory. Biology of the Laboratory Mouse. , Second Edition, Dover publications, inc. New York. Chapter 11 (2007).
- Burns-Cusato, M., Scordalakes, E. M., Rissman, E. F. Of mice and missing data: what we know (and need to learn) about male sexual behavior. Physiology & Behavior. 83 (2), 217-232 (2004).
- Crawley, J. N. What's Wrong With My Mouse?. , Second Edition, John Wiley & Sons, Inc. (2006).
- Whishaw, I. Q., Haun, F., Kolb, B. Analysis of Behavior in Laboratory Rodents. Modern Techniques in Neuroscience Research. Windhorst, U., Johansson, H. , Springer. Berlin, Heidelberg. (1999).
- Sachs, B., Barfield, R. Functional Analysis of Masculine Copulatory Behavior in the Rat. 7, (1976).
- Hull, E. M., Dominguez, J. M.
- Mosig, D. W., Dewsbury, D. A. Studies of the copulatory behavior of house mice (Mus musculus). Behavioral Biology. 16 (4), 463-473 (1976).
- Park, J. H. Assessment of Male Sexual Behavior in Mice. Mood and Anxiety Related Phenotypes in Mice. Gould, T. 63, Humana Press. (2011).
- Bonthuis, P. J., et al. Of mice and rats: key species variations in the sexual differentiation of brain and behavior. Frontiers in Neuroendocrinology. 31 (3), 341-358 (2010).
- Levine, L., Barsel, G. E., Diakow, C. A. Mating behaviour of two inbred strains of mice. Animal Behavior. 14 (1), 1-6 (1966).
- McGill, T. E. Sexual Behavior in Three Inbred Strains of Mice. Behaviour. 19 (4), 341 (1962).
- James, P. J., Nyby, J. G. Testosterone rapidly affects the expression of copulatory behavior in house mice (Mus musculus). Physiology & Behavior. 75 (3), 287-294 (2002).
- Arteaga-Silva, M., Rodriguez-Dorantes, M., Baig, S., Morales-Montor, J. Effects of castration and hormone replacement on male sexual behavior and pattern of expression in the brain of sex-steroid receptors in BALB/c AnN mice. Comparative Biochemistry and Physiology - Part A: Molecular & Integrative Physiology. 147 (3), 607-615 (2007).
- Zhang, Z., et al. Deletion of Type 3 Adenylyl Cyclase Perturbs the Postnatal Maturation of Olfactory Sensory Neurons and Olfactory Cilium Ultrastructure in Mice. Frontiers in Cellular Neuroscience. 11, 1 (2017).
- Mandiyan, V. S., Coats, J. K., Shah, N. M. Deficits in sexual and aggressive behaviors in Cnga2 mutant mice. Nature Neurosciemce. 8 (12), 1660-1662 (2005).
- Choi, C. I., et al. Simultaneous deletion of floxed genes mediated by CaMKIIalpha-Cre in the brain and in male germ cells: application to conditional and conventional disruption of Goalpha. Experimental & Molecular Medicine. 46, 93 (2014).
- Pelch, K. E., Sharpe-Timms, K. L., Nagel, S. C. Mouse model of surgically-induced endometriosis by auto-transplantation of uterine tissue. Journal of Visualized Experiments. (59), e3396 (2012).
- McLean, A. C., Valenzuela, N., Fai, S., Bennett, S. A. Performing vaginal lavage, crystal violet staining, and vaginal cytological evaluation for mouse estrous cycle staging identification. Journal of Visualized Experiments. (67), e4389 (2012).
- Liu, Z. W., et al. Postweaning Isolation Rearing Alters the Adult Social, Sexual Preference and Mating Behaviors of Male CD-1 Mice. Frontiers in Behavioral Neuroscience. 13, 21 (2019).
- TIan, E. P., Long, T., Qin, D. N. Establishment and applications of mating model in male rat. Chinese Journal of Andrology. 22 (1), 7-10 (2008).
- University of Minnesota Academic Health Center Research Service. Anesthesia Guidelines: Mice. , Available from: https://www.researchservices.umn.edu/services-name/research-animal-resources/research-support/guidelines/anesthesia-mice (2019).
- Leypold, B. G., et al. Altered sexual and social behaviors in trp2 mutant mice. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99 (9), 6376-6381 (2002).
