Summary
Эта статья описывает как выполнить сексуальные испытания поведения в мышах мышей мышей.
Abstract
Сексуальное поведение в полнейось специфическим для видов. Хотя грызуны имеют несколько иное сексуальное поведение, мыши и крысы имеют сходную сексуальную поведенческую модель. Целью данной статьи является описание индуцированной гормонами эструса ovarieactomized женской модели и экспериментальной процедуры для оценки сексуального поведения мышей мужского пола. Наиболее важные элементы сексуального поведения показаны в видео и иллюстрациях. Также объясняются критические шаги, преимущества и ограничения теста на сексуальное поведение. Наконец, представлены параметры поведения, и различаются процессы монтажа, интромиссии и эякуляции при спаривании. Поведенческие параметры оцениваются с точки зрения происшения и количества в течение испытательного периода.
Introduction
Сексуальное поведение у зрелых мышей мужского пола является результатом взаимодействия ряда связанных и взаимозависимых гормональных систем и нейронных систем в различных схемах мозга1. Она также требует опыта развития, обучения, контекста и соответствующего партнера. Поведенческий анализ является важным отражением на нервной или нейрокриной функции. Таким образом, сексуальное поведение исследование на животных моделей широко используется в поведенческой неврологии и других связанных исследований2. Этаграмма сексуального поведения у грызунов была объяснена во многих статьях и книгах1,3,4. Например, описание Scahs и Barfield сексуального поведения в крысе5 помогло понять подобную поведенческую картину в мышах5. Мышь является одним из наиболее часто используемых предметов для поведенческих исследований. Hull et al.6 дали детальное введение мыжской мыши сексуального поведения: Когда мыжская мышь встречает женщину, она начинает исследовать аногенитную область женщины. Затем самец прижимает передние лапы к женским флангам, чтобы смонтировать самку с тыла. Самка проявляет характерную сексуально восприимчивую осанку, сгибая позвоночник вниз в лук и перемещая хвост в одну сторону тела, подвергая открытие интроита для сексуального проникновения самца (т.е. лордоза). После монтажа самец делает быстрые, мелкие тазовые тяги, а затем медленные и глубокие вагинальные тяги. После многочисленных интрумиссий, длительная тяга приводит к эякуляции спермы, во время которой мышь мужского пола может замерзнуть около 25 с до демонтажа или падения с самки6. При эякуляции мужской мыши аксессуар желез ы может производить смесь, содержащую сперму, которая затвердевает, чтобы сформировать совокупляющуюшти. Наконец, после эякуляции, мужчина начинает генитальный уход и проявляет отсутствие интереса к женщине. Короче говоря, основная последовательность мужского сексуального поведения состоит из нюхать, после, монтаж, введение, эякуляция, и после эякуляции ухода. Мышь сексуального поведения экспонатов деформации различия. Например, семяизвержение колеблется от 594 до 6943 с, а число интромиссий колеблется от 5 до более чем 100. После эякуляции в диапазоне от 17 до 60 мин. Тем не менее, введение романа женщина может уменьшить этот промежуток времени. В некоторых случаях самец эякулирует на первом интромиссии с новой женщиной7.
Основными событиями для оценки сексуального поведения являются монтаж, введение и эякуляция. Поведенческие ученые рекомендовали измерять не только частоту каждого действия, но и его задержку и временной интервал5,8. Некоторые основные показатели измерения в прошлых исследованиях включают в себя: количество креплений, количество интромиссий, задержку крепления, задержку эякуляции, задержку после эякуляции (или постэякуляционные интервалы), задержку после эякуляции, количество серий копуляций и продолжительность копуляторных серий. Park et al.8 и Sachs et al.5 описали, как определить каждое действие монтажа, интромиссии и эякуляции грызунов. Монтаж определяется как самец монтажа самки с тыла, пальпирования ее фланги с его передних конечностей, и толкая его пенис быстро и неоднократно без полового члена вставки. Введение, также известный как полового члена вставки, определяется одним или более из следующих актов: длинная, глубокая тяга после быстрого мелкого толчки, быстрый удар с одной задней стороны, и отмеченный боковой вывод самца от женщины. Эякуляция определяется терминальной тягой таза, которая медленнее и глубже, чем у интромиссии и снижение высоты задней ноги. Совокупляемые серии определяется каждой последовательности от монтажа до эякуляции. Определения поведенческих параметров, используемые в настоящем исследовании, перечислены следующим образом: 1) Монтаж задержки: время от введения женщины до первого монтажа мужчины; 2) Задержка ввода: время от введения женщины до первой интромиссии; 3) задержка эякуляции: время от первого интромиссии до первой эякуляции (как правило, после последней тазовой тяги); 4) Постэякуляционная задержка крепления: время от эякуляции до следующего монтажа; 5) Постэякуляционная задержка вступительной миссии: время от эякуляции и следующего интромиссии; 6) Количество креплений: количество времени монтажа до первой эякуляции; 7) Количество интромиссий: количество интромиссий до первой эякуляции; 8) Количество копулирующих серий: количество серий копулаторов в период наблюдения; 9) Продолжительность копуляторных серий: время всех копуляторных серий в период наблюдения.
Сексуальное поведение и связанное с ним поведение может быть проведено либо в домашней клетке мужчины или в закрытой арене, среди которых аппарат под названием Rissman в "Нет секретов" зеркальное поле вводится для наблюдения брачного поведения3. Перед окном находится видеокамера, чтобы одновременно записывать действие мышей с бокового зрения и через наклонное зеркало с брюшного вида. Однако этот метод требует ярких огней, что неизбежно приводит к более длительному уживанию, чтобы устранить стресс окружающей среды у мышей. Что касается метода измерения, видео-поведенческий анализ рекомендуется для записи и количественной оценки поведения4. Видеомагнитофон, который имеет кадр за кадром видео заранее вариант с рекомендуемой скоростью затвора больше, чем 1/1000 s может быть использован для записи быстрых движений мыши. Инфракрасная камера высокого разрешения необходима при записи в темной среде. Для анализа фильма необходим компьютер с захватом кадров, позволяющий фиксировать отдельные кадры поведения для компьютерных манипуляций. Мыши чрезвычайно универсальны и могут отображать компенсационное поведение после почти любого лечения. Неоднозначность может существовать о каждой движущейся части тела4. Таким образом, анализ некоторых моделей поведения может потребовать еще большего разрешения и более высокой скорости камер.
Мужское сексуальное поведение у мышей зависит от многих факторов, в том числе деформации, гормональные изменения, и генные мутантионы1,3,9,10. McGill и Blight11 иллюстрировали различия напряжения в поведении спаривания мыши. Например, C57BL/6 мужчины обычно получают интромиссии быстро и эякулята примерно в 20 мин11. DBA/2 мужчины медленно, чтобы получить введение, но эякулята быстро. BALB/c мужчины медленно достичь эякуляции (средняя задержка 1 ч) из-за длительного периода ухаживания11. Тестостерон облегчает и поддерживает мужское сексуальное поведение2, и изменения в уровнях тестостерона может изменить сексуальное поведение производительности12. Как хирургическая кастрация и антиандрогенное лечение может снизить уровень тестостерона и привести к быстрому снижению сексуального поведения и даже сексуальной мотивации и сексуального возбуждения13. Управляемый тестостерон может восстановить прекопуляторное и совокупляющее поведение у кастрированных мышей. Наконец, нокаут и нокдаун мышей отображать различия в аспектах сексуального поведения по сравнению с дикими мышами типа. Например, мышей мужского пола с целевыми мутациями Adcy3, Cnga2 и Gnao демонстрируют пониженную способность обнаруживать феромоны, в то время как мыши trpc2 нокаутом показывают измененные предпочтения партнеров14,15,16. Другие эффекты трансгении и нокаутов на сексуальное поведение мышей объясняются Кроули3.
Здесь описывается одна из наиболее распространенных процедур для оценки сексуального поведения в спаривании мужской мыши с овариэктомизированной самкой, которая была гормонально загрунтована для восприимчивости. Представлен экспериментальный протокол для проведения экспериментов на мышах в сексуальном поведении. Кроме того, показан пример изменения моделей сексуального поведения в результате социальной изоляции у мышей CD-1.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Все эксперименты проводились в соответствии с принципами "Принципов лабораторного ухода за животными" (публикация No 80-23, пересмотренный 1996 год) и под руководством Академии экспериментального центра для животных Института медицины Развитие завода (Китай).
1. Животноводство
- Дом самок и мышей-мужчин при 25 градусах по Цельсию при 12 ч свет/12 ч темных циклов.
- Обеспечить свободный доступ к воде и стандартную пеллетную диету.
- Разрешить мышам акклиматизироваться к окружающей среде в течение 7 дней до операции, если транспортируется из другого объекта.
2. Обариэктомия у самок мышей
- Анестезия женщин (8 недель послеродового, не менее 6-недельного) с изофлураном (4-5% для индукции, 1-2% для поддержания) в 100% кислорода через маску конуса лица.
- Убедитесь, что соответствующая глубина атезии была достигнута путем обеспечения того, чтобы не было добровольных движений в течение более 30 с, в сочетании с соответствующей частотой дыхания (например, 1 дыхание на 2 с или более). Кроме того, проверьте реакцию мыши на мягкое давление на носы задних лап.
ПРИМЕЧАНИЕ: Нормальная частота дыхания составляет 180 евро/мин. Снижение ставки на 50% допустимо при анестезии17.- Используйте офтальмологическую мазь для предотвращения высыхания роговицы и травмы глаз в состоянии наркоза.
- Держите температуру тела мыши на уровне или выше 36 градусов по Цельсию. Обеспечить дополнительную тепловую поддержку в период анестезии, когда это необходимо.
- Стерилизовать и дезинфицировать все хирургические инструменты и твердые поверхности операционного стола с 75% этанола до использования.
- Поместите животное на стерильную драпировку.
- Бритьмеха двусторонней над поясничного отдела позвоночника на задней части мыши, чтобы разоблачить кожу.
- Стерилизовать обнажённую кожу с помощью 75% этанола.
- Сделайте один разрез средней линии (длина около 0,5 см) на спине от центра двух корней бедра к голове 1 см расстояния (позиция показана на рисунке 1).
- Используйте небольшие ножницы, чтобы проникнуть в кожу, чтобы мягко освободить подкожную ткань от основной мышцы, чтобы разоблачить мышечный слой.
- Найдите яичников под тонким мышечным слоем и сделайте небольшой разрез (около 5 мм в длину), чтобы получить вход в полость перитонеальной полосты.
- Используйте небольшие пинцеты, чтобы вытащить ткани немного на левой стороне брюшной полости, чтобы показать левую овчарку обертывания вокруг белой жировой ткани (полупрозрачный, нерегулярные массы, как видно невооруженным глазом, см. Рисунок 1).
- Утяните яичников жира площадку окружающих яичников с тупыми щипцы подвергать яйц.
- Выполните одну лигатуру вокруг яйцты, чтобы предотвратить кровотечение.
- Используйте небольшие ножницы, чтобы разорвать яйцдля мягко и удалить яичник.
- Тщательно проверьте яйцук, чтобы подтвердить, что все ткани яичников удаляются. Яичник составляет около 5 мм и 4 мм и 3 мм с нерегулярными узелками на поверхности.
- Поместите оставшуюся часть яйты обратно в брюшную полость.
- Шов мышечного слоя с усваиваемыми швами.
- Потяните кожу на правую сторону, чтобы разоблачить мышечный слой на правой стороне и удалить правый яичников, повторяя шаги 2.9-2.16.
- Закройте разрез кожи с помощью усваиваемых швов.
- Впрысните каждую мышь интраперитонеально с пенициллин натрия (10000 единиц / 10 г на мышь), чтобы предотвратить инфекцию.
- Вводят лидокаин (4 мг/кг, 0,4 мл/кг раствора 1%) под кожу вдоль участка разреза. Также обеспечить ибупрофен (50-60 мг/кг/день; 10 мл детского мотрина в 500 мл воды) непрерывно в питьевой воде в течение 3 дней для обезболивания.
- Поместите каждую мышь в стерилизованные клетки по отдельности.
- Держите под пристальным наблюдением в течение примерно 1-2 ч до полного восстановления после анестезии.
- Восстановление животных на бумажных полотенцах в чистой клетке без постельных принадлежностей. Этот шаг сводит к минимуму риск трахеи обструкции или пневмонии. Обеспечить дополнительную тепловую поддержку во время обезвреживания. Мониторинг хирургического участка, чтобы предотвратить разрыв раны.
- После периода восстановления (примерно 24 ч после операции), место мышей обратно в свою домашнюю клетку.
- Не выполняйте эксперимент в течение по крайней мере 2 недель после операции.
3. Гормон-индуцированный эструс у женщин
- Определите эструсидную стадию самок, выполняя мазок влагалища, как описано в McLean et al.18. Никакие изменения цикла estrus не указывают на то, что овариэктомия самки была успешной.
- Вводят эстрадиол бензоат (20 мкг на мышь, растворенный в 0,1 мл стерилизованного оливкового масла, интраперитоненалически) 48 ч до теста на сексуальное поведение.
- Вводят прогестерон (500 мкг на мышь, растворенный в 0,1 мл масла, интраперитонетически) 4 ч до теста на сексуальное поведение.
ПРИМЕЧАНИЕ: Право на эструс аструс женщины определяется женщины принятия половых вставки мужской мыши 3 или более раз, когда они сожительствуют с сексуально активным и опытным мужчиной в одной клетке.
4. Подготовка к тесту на сексуальное поведение
- Проведите тест на сексуальное поведение мышей в прямоугольной и открытой поле (40 см х 40 см х 40 см) с черными стенками плексигласа, за исключением прозрачной передней стенки, позволяющей наблюдать за движением мыши.
- Установите общее освещение комнаты до 650 люкс.
ПРИМЕЧАНИЕ: Мыши не должны быть освещены непосредственно, чтобы избежать ненормальных моделей поведения. - Используйте цифровую камеру, связанную с компьютером, чтобы заснять движение и поведение мышей.
- Выполните поведенческий тест на мышах мужского пола в первые часы темного цикла.
5. Привычка
- Держите комнату эксперимента тихой.
- Поместите мышей для тестирования в центре открытого поля поле, что позволяет им исследовать окружающую среду свободно в течение 30 минут.
- Привычка мышей в течение 2 дней подряд до дня тестирования в аппарате, чтобы предотвратить стресс от новой среды.
ПРИМЕЧАНИЕ: Мыши должны двигаться и исследовать свободно, не чувствуя стресса. И мышам-мужчинам, и самке мышей необходимо привыкать к тестированию.
6. Поведенческие анализы
- Включите камеру до начала теста.
- Поместите мышь для тестирования в центре открытого поля в испытательном поле, что позволяет бесплатно разведки в течение 5 минут, чтобы акклиматизироваться к окружающей среде.
- Поместите самку в эструс в испытательный ящик.
- Запись социального и спаривания поведения и взаимодействия между мужчинами и женщинами мышей в течение 30 минут.
- Выключите камеру и подтвердите, что видео сохранено.
- Возьмите самку из испытательного ящика и запишите образование вагинальной вилки.
ПРИМЕЧАНИЕ: самка мыши, которая приняла спаривания не может быть использована в другой тест сексуального поведения в один день. - Поместите самку обратно в домашнюю клетку.
- Верните самца в родную клетку.
- Очистите мочу, кал и обивку внутри аппарата.
- Удалить запах проверенных мышей с 75% этанола.
- Начните тест следующей мужской мыши, повторяя шаги 6.1-6.10.
7. Экспоненция данных
- Воспроизведение видеозаписи и извлечь поведенческие параметры (см. рисунок 2).
- Запишите количество креплений за 30 мин.
- Запись количества интромиссий в 30 мин. Считайте тазовой тяги, как интромиссии.
- Запись времени от введения женщины до первого монтажа, как монтаж задержки.
- Запишите время от введения самки до первой интромиссии как задержки ввходе.
- Запишите время от первого интромиссии до первой эякуляции как задержка эякуляции.
- Запишите время от эякуляции до следующего монтажа, как пост-эякуляция задержки крепления.
- Рекордное количество копулирующих серий за 30 мин. Совокупляющий ряд каждой последовательности от монтажа до эякуляции.
- Запишите время всех копулирующих серий за 30 минут, как продолжительность копуляторной серии.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Показано сравнение сексуального поведения между мышами CD-1, выращенными в изоляции, и групповыми мышами CD-1. Мыши-мужчины CD-1 были случайным образом отнесены в изоляционистую группу (IS, одна мышь на клетку, n - 30) и группу (GH, пять мышей на клетку, n no 15). Мыши прошли изоляцию воспитания от послеродового дня 23 до дня 93. Затем обе группы мышей были оценены на сексуальное поведение. Наше исследование показало, что показатель успеха совокупления, как правило, ниже в группе ИГ, чем в группе GH (IS: 80,0%, GH: 86,7%), хотя статистически значимой разницы между группами не наблюдалось (стр. 0,458). Задержка монтажа была больше в группе IS, чем в группе GH (стр. 0.002, рисунок 3A), что указывает на то, что первому требовалось больше времени для инициирования сексуального поведения. Задержка ввходе была длиннее в группе IS, чем в группе GH (стр. 0.015, рисунок 3B), что указывает на то, что первому требовалось больше времени для выполнения вставки пениса во влагалище женщины. Статистически значимой разницы между этими двумя группами не наблюдалось с точки зрения задержки эякуляции и задержки после эякуляции. Продолжительность копуляторной серии была короче в группе ИС, чем в группе GH (стр. 0,002, рисунок 3C). Статистически значимых различий между этими двумя группами не наблюдалось с точки зрения количества креплений, количества интромиссий и количества копулирующих рядов19 (см. таблицу 1).
| Изоляционные воспитанные | Групповые дома | t/t' | P | |
| N | 30 | 15 | ||
| Задержка монтажа | 788.70 и 262.77 | 365.03 и 288.65 | -3.87 | 0.002 |
| Задержка внештатных начинов | 937.30 - 369.87 | 542.94 и 352.40 | -2.75 | 0.015 |
| Задержка эякуляции | 16.58 и 9.78 | 17.37 и 13.03 | -0.2 | 0.845 |
| Задержка после эякуляционного крепления | 173,00 и 89,84 | 192.87 и 106.91 | 0.58 | 0.565 |
| Продолжительность копуляторной серии | 88.27 и 52.40 | 151,65 и 40,87 | 3.44 | 0.002 |
| Количество креплений b | 2,4х2,0 | 3,3 х 3,3 | 1.09 | 0.282 |
| Количество интрумиссий | 20,1 х 12,9 | 22,6х12,3 | 0.58 | 0.564 |
| Количество копулирующих серий | 7,0х4,3 | 9,3 х 4,6 | 1.55 | 0.131 |
| Среднее sD; единица является второй (ы). b единица подсчитывает. | ||||
Таблица 1: Сексуальные поведенческие параметры воспитанных и групповых мышей.
Рисунок 1: Обариэктомия самок мышей. Показано положение вертикального разреза и правого яичника. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.
Рисунок 2: Процесс сексуального поведения мышей. Красная стрелка указывает на самку, а желтая стрелка - на самца. (A) Мужской нюхают анально-генитальных областей в начале сексуального поведения. (B) Самец монтажа женщины. (C) Внушение позе мужчины. (D) Эякуляция мужчины. (E) мужской уход половых областях после эякуляции. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.
Рисунок 3: Результаты теста на сексуальное поведение. (A) Коробка сюжет монтажа задержки IS и GH мышей. (B) Box участок интромиссии задержки IS и GH мышей. (C) Общая продолжительность спаривания IS и GH мышей. -стр. 0,05,п. 0;; 0,01. Эта цифра была изменена с Лю и др.19. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
В представленном протоколе есть несколько важных шагов. Что касается овариэктомии самок, то отверстие разреза со спины менее вредно, чем от живота. Учитывая, что положение яичника глубокое, потянув других органов, когда разрез разрез разрезать из живота часто приводит к кровотечению и приводит к неясным хирургического зрения20. Мы выполнили разрез на спине, чтобы легко добраться до яичника и сократить хирургическое время, а также обеспечить безопасность операции.
Поддержание стерильных условий во время операции имеет важное значение для выживания. Во время хирургической процедуры рассматриваются четыре основные переменные: хирургическое пространство, инструменты, хирург и животное. Для хирургического пространства, включая рабочие места и хирургические кабинеты, все необходимые поверхности очищаются и дезинфицируются соответствующими дезинфицирующими средствами (например, разбавленным отбеливателем, продуктами перекиси водорода) до операции. Кроме того, рекомендуется пар под давлением с автоклавом. Во время хирургической процедуры, транспортный поток ограничен в хирургическом кабинете. В хирургической процедуре, вновь стерилизованные инструменты и материалы должны быть использованы для каждого животного. Когда приборы выпадают за пределы стерильного поля или загрязняются, их следует немедленно заменить. Между тем, после мытья / очистки рук и рук тщательно, хирурги должны надеть все стерильные наряды, в том числе стерильное платье и стерильные хирургические перчатки. Если какой-либо материал загрязнен, пораженный материал необходимо изменить непосредственно перед операцией (например, новое платье или хирургическая перчатка). Наконец, волосы из хирургического участка и прилегающей территории должны быть удалены для предотвращения загрязнения. Кожу необходимо очищать с помощью 75% этанола после удаления волос. Электрические клиперы или депиляционные крем ы могут быть использованы для удаления волос. Перед операцией над животным накладывается стерильная драпировка, позволяющая получить доступ к хирургическому месту для профилактики загрязнения.
Три аспекта послеоперационного лечения животных требуют внимания: обезболивание, обезболивание и хирургический мониторинг участка, а также удаление швов. По завершении хирургической процедуры, животные должны быть проверены во время восстановления после анестезии. Не следует оставлять животное без присмотра до тех пор, пока оно не обретет достаточное сознание для поддержания строгого затишья и не должно быть возвращено в компанию других животных до тех пор, пока оно полностью не восстановится. Кроме того, должны быть созданы надлежащие условия восстановления, включая теплую среду, свободную от объектов, которые могут причинить вред. Например, бумажные полотенца вместо постельных принадлежностей из кукурузных покроватных покроватных принадлежностей используются для восстановления мышей, а большие игрушки или чаши для воды удаляются из больших перьев животных. В соответствии с руководящими принципами Университета Миннесоты, овариэктомия женщин вызывает от умеренной до сильной боли. Таким образом, обезболивание должно вводиться непосредственно после операции парентеральной инъекцией или пероральным гаважом21. В этом исследовании, лидокаин инъекции под кожу была выполнена после операции и воды, содержащей ибупрофен был введен, по крайней мере 1-2 дней для лечения боли. Тем не менее, ветеринар должен быть проконсультирован в разработке анальгетика плана. Наконец, послеоперационное здоровье животного и хирургическое место должны соблюдаться и регистрироваться в течение как минимум 3 дней. Операционная линия или раны клипы используются для зашивания разреза, который должен быть удален из кожи 7-14 дней после операции21. В этом исследовании была использована абсорбируемая линия для шова разреза, чтобы избежать удаления швов.
Эструс самки искусственно контролировался с помощью овариэктомии и использования гормонов, вместо того, чтобы использовать самку с натуральным эструсом. Этот шаг был предпринят для обеспечения консистенции сексуальной восприимчивости самки в тесте и гарантии надежности измерений при мониторинге мужского брачного поведения. Кроме того, гормон индуцированной эструс аструс женщины могут быть повторно использованы в наборе экспериментов, и влияние беременности предотвращается. Эструс у самки индуцируется путем введения эстрадиола бензоата и прогестерона перед экспериментом. Этот метод прост в управлении, имеет высокий уровень успеха, и несколько эструс женщин могут быть получены в то же время, тем самым значительно повышая эффективность теста.
Сексуально наивные и опытные мыши проявляют различные модели поведения. Необходимо обратить внимание на тест-тест надежности эксперимента на различных стадиях развития мышей. Динамическое изменение в сексуальном поведении необходимо рассмотреть перед проведением теста и на стадии экспериментального проектирования. В этом исследовании, сексуально наивные мужчины были использованы для теста на сексуальное поведение, и только первое появление сексуального поведения было измерено без какой-либо подготовки до теста. Копирование является окончательным результатом серии обнаружения феромонов, монтаж, введение, и эякуляции. Существует ограничение в настоящее экспериментальное протокол при применении к мутанта мышей. Например, мышей мужского пола с целевыми мутациями Adcy3, Cnga2 и Gnao обладают пониженной способностью обнаруживать феромоны14,15,16, в то время как мыши trpc2 нокаутом показывают измененные предпочтения партнеров22. Настоящий протокол может быть не в состоянии проявлять сексуальное поведение мышей-мутантов из-за его снижение способности обнаруживать феромоны.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторам нечего раскрывать.
Acknowledgments
Мы благодарим Лу Конга, Чжан Хунся, Чжан Бейюэ и Ху Ми за их предложения по экспериментам.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Choral hydrate | Sinopharm Chenmical Reagent Co., Ltd. | 20160225 | |
| Coated VICRYL Plus Sutures | Ethicon, Inc. | missing | |
| Estradiol benzoate | J&K Scientific, Ltd. | L930Q170 | |
| Ethanol absolute | Beijing Chemical Works Co., Ltd. | 20160715 | |
| Ibuprofen (Children's Motrin) | Shanghai Johnson & Johnson Co., Ltd. | 160629478 | |
| Isoflurane | RWD Life Science Co., Ltd. | 217180501 | |
| Lidocaine | HebeI Tiancheng Pharmacreutical Co., Ltd. | 1170506107 | |
| Male and female CD-1 mice | Vital River Beijing | SCXK( )2013-0023 |
|
| Olive oil | |||
| Penicillin sodium | North China Pharmaceutical Co., Ltd. | F5126420 | |
| Progesterone | J&K Scientific, Ltd. | LR50Q07 | |
| Sony digital camera | Sony Corporation | HDR-CX290E | |
| Test box | DIY | ||
| ThinkStation Computer | Lenovo | S/N PCOGLQKG | |
| Vaporizer for Isoflurane | RWD Life Science Co., Ltd. | E05904-009M |
References
- The staff of the Jackson laboratory. Biology of the Laboratory Mouse. , Second Edition, Dover publications, inc. New York. Chapter 11 (2007).
- Burns-Cusato, M., Scordalakes, E. M., Rissman, E. F. Of mice and missing data: what we know (and need to learn) about male sexual behavior. Physiology & Behavior. 83 (2), 217-232 (2004).
- Crawley, J. N. What's Wrong With My Mouse?. , Second Edition, John Wiley & Sons, Inc. (2006).
- Whishaw, I. Q., Haun, F., Kolb, B. Analysis of Behavior in Laboratory Rodents. Modern Techniques in Neuroscience Research. Windhorst, U., Johansson, H. , Springer. Berlin, Heidelberg. (1999).
- Sachs, B., Barfield, R. Functional Analysis of Masculine Copulatory Behavior in the Rat. 7, (1976).
- Hull, E. M., Dominguez, J. M. Sexual behavior in male rodents. Hormones and Behavior. 52 (1), 45-55 (2007).
- Mosig, D. W., Dewsbury, D. A. Studies of the copulatory behavior of house mice (Mus musculus). Behavioral Biology. 16 (4), 463-473 (1976).
- Park, J. H. Assessment of Male Sexual Behavior in Mice. Mood and Anxiety Related Phenotypes in Mice. Gould, T. 63, Humana Press. (2011).
- Bonthuis, P. J., et al. Of mice and rats: key species variations in the sexual differentiation of brain and behavior. Frontiers in Neuroendocrinology. 31 (3), 341-358 (2010).
- Levine, L., Barsel, G. E., Diakow, C. A. Mating behaviour of two inbred strains of mice. Animal Behavior. 14 (1), 1-6 (1966).
- McGill, T. E. Sexual Behavior in Three Inbred Strains of Mice. Behaviour. 19 (4), 341 (1962).
- James, P. J., Nyby, J. G. Testosterone rapidly affects the expression of copulatory behavior in house mice (Mus musculus). Physiology & Behavior. 75 (3), 287-294 (2002).
- Arteaga-Silva, M., Rodriguez-Dorantes, M., Baig, S., Morales-Montor, J. Effects of castration and hormone replacement on male sexual behavior and pattern of expression in the brain of sex-steroid receptors in BALB/c AnN mice. Comparative Biochemistry and Physiology - Part A: Molecular & Integrative Physiology. 147 (3), 607-615 (2007).
- Zhang, Z., et al. Deletion of Type 3 Adenylyl Cyclase Perturbs the Postnatal Maturation of Olfactory Sensory Neurons and Olfactory Cilium Ultrastructure in Mice. Frontiers in Cellular Neuroscience. 11, 1 (2017).
- Mandiyan, V. S., Coats, J. K., Shah, N. M. Deficits in sexual and aggressive behaviors in Cnga2 mutant mice. Nature Neurosciemce. 8 (12), 1660-1662 (2005).
- Choi, C. I., et al. Simultaneous deletion of floxed genes mediated by CaMKIIalpha-Cre in the brain and in male germ cells: application to conditional and conventional disruption of Goalpha. Experimental & Molecular Medicine. 46, 93 (2014).
- Pelch, K. E., Sharpe-Timms, K. L., Nagel, S. C. Mouse model of surgically-induced endometriosis by auto-transplantation of uterine tissue. Journal of Visualized Experiments. (59), e3396 (2012).
- McLean, A. C., Valenzuela, N., Fai, S., Bennett, S. A. Performing vaginal lavage, crystal violet staining, and vaginal cytological evaluation for mouse estrous cycle staging identification. Journal of Visualized Experiments. (67), e4389 (2012).
- Liu, Z. W., et al. Postweaning Isolation Rearing Alters the Adult Social, Sexual Preference and Mating Behaviors of Male CD-1 Mice. Frontiers in Behavioral Neuroscience. 13, 21 (2019).
- TIan, E. P., Long, T., Qin, D. N. Establishment and applications of mating model in male rat. Chinese Journal of Andrology. 22 (1), 7-10 (2008).
- University of Minnesota Academic Health Center Research Service. Anesthesia Guidelines: Mice. , Available from: https://www.researchservices.umn.edu/services-name/research-animal-resources/research-support/guidelines/anesthesia-mice (2019).
- Leypold, B. G., et al. Altered sexual and social behaviors in trp2 mutant mice. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99 (9), 6376-6381 (2002).
