Summary
该协议的目标是通过微移液吸气可靠地测量巨型囊泡的膜机械性能。
Abstract
从磷脂和共聚物中获得的巨型囊泡可以在不同的应用中被利用：受控和靶向药物输送、用于诊断的生物传感器内的生物分子识别、人造细胞的功能膜以及生物启发微/纳米反应器的开发。在所有这些应用中，其膜特性的表征至关重要。在现有的表征技术中，由 E. Evans 开创的微移液器吸气允许测量膜的机械特性，如面积压缩模量、弯曲模量和解压应力和应变。在这里，我们介绍了从脂质或共聚物（或两者）的薄膜中获取巨型囊泡的所有方法和详细程序，微移液器的制造和表面处理，以及导致测量上述所有参数的吸气程序。
Introduction
从磷脂（脂质体）获得的巨型囊泡自20世纪70年代以来被广泛用作基本细胞膜模型1。在20世纪90年代后期，从共聚物的自组装中获得的晶型形态，根据其脂质类比2，3，被命名为聚合物体，迅速成为具有弱机械稳定性和模块化化学功能的脂质体的有趣替代品。然而，与脂质体相比，它们的细胞生物体性质相当有限，因为脂质体由磷脂组成，磷脂是细胞膜的主要成分。此外，在药物输送等应用中，其低膜渗透性可能是一个问题，需要控制物种通过膜的扩散。最近，磷脂与块共聚物的关联，设计混合聚合物脂质囊泡和膜已成为越来越多的研究课题4，5。其主要思想是设计实体，将每种成分（脂质双层的生物功能和渗透性）与聚合物膜的机械稳定性和化学多功能性协同结合，这些优势可在不同的应用中加以利用：受控和靶向药物输送、用于诊断的生物传感器内的生物分子识别、人造细胞的功能膜、生物启发微/纳米反应器的开发。
如今，不同的科学界（生物化学家、化学家、生物物理学家、物理化学家、生物学家）对开发更先进的细胞膜模型越来越感兴趣。在这里，我们的目标是尽可能详细地提出现有方法（电镀、微移液吸入）来获得和表征巨型囊泡的机械特性，以及最近"先进"的细胞膜模型，即混合聚合物脂质巨型囊泡4、5。
这些方法的目的是获得可靠的测量面积的可压缩性和弯曲膜膜，以及其解压应力和应变。测量巨型囊泡弯曲刚度的最常见的技术之一是基于直接视频显微镜观察的波动分析6，7;但这需要较大的可见膜波动，并且不会在厚膜（如聚合物体）上系统地获得。区域可压缩模量可以用兰缪尔·布洛杰特技术进行实验确定，但最常见的是单层8。微移液器吸气技术允许在一个实验中测量形成巨型单体囊泡 （GUV） 的双层体上的两种莫杜利。
以下方法适用于所有两栖分子或大分子，能够形成双层，因此，通过电形成体囊。这需要在电形成温度下的双层结构具有流体特性。
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Protocol
1. 制造微移液器
注：此处，内径为 6 至 12 μm 且直径长约 3-4 mm 的微移液器是必需的。下面介绍了制造微移液的详细方法。
- 将硼硅酸盐玻璃毛细管放在拉拔器的拉杆中，通过拧紧旋钮来固定其中一个端部。
- 小心地将玻璃滑过加热器室侧面的孔。
- 拧紧另一端的夹紧旋钮。
- 控制尖端的大小和片长，以达到所需的规格。为此，优化加热温度、拉力、速度、延迟和压力等技术参数。下面是使用的程序的示例：
热： 550 °C
拉力： 10 （机器范围： 0-255 任意单位）
速度： 30 （范围： 0-255 以任意单位）
延迟： 1 （范围： 0-255（任意单位）
压力： 500 （范围： 0-999 任意单位） - 单击PULL以执行程序定义的事件。然后，毛细管被分离成两个微移液器，其尺寸必须使用微锻造调整。
- 将微移液器插入微锻件的金属移液器支架中（参见图 1）。通过使用 10x 物镜，调整显微镜级和移液器操纵器（垂直和水平运动），直到移液器尖端靠近玻璃珠表面。
- 按下脚踏开关熔化玻璃珠。降低尖端并将其与熔融玻璃珠接触。熔融玻璃会通过毛细管作用流入移液器。等待几秒钟，直到熔融玻璃的水平达到一定高度，如图1的插入所示。
- 通过拆下脚踏开关上的压力来停止加热，并使用垂直移液器操纵器快速拉开尖端，导致急剧断裂。
- 重复步骤 1.7 和 1.8，直到获得所需的直径（6 至 12 μm）。
注：为了提高直径测量的精度，在最后一步中，使用装有神经线的 32x 物镜。
2. 用BSA（牛血清白蛋白）涂覆移液器尖端
- 在纯水中制备含有1%wt.BSA的0.1M葡萄糖溶液。
- 重180mg葡萄糖粉，放入15mL聚丙烯锥形管中，并配有10 mL的纯净水。
- 加入 0.1 克 BSA 粉末，使用试管旋转混合器轻轻摇动，直到完全溶解（约 4 小时）。
- 使用装有针头的 10 mL 一次性 Luer 注射器进行溶液。填充后，取出针头并安装 0.22 μm 醋酸纤维素过滤器。填充多个聚丙烯微离心管（1.5 mL），用于浸没尖端。
- 将毛细管垂直放入支架中。降低支架，将尖端浸入葡萄糖/BSA溶液中过夜。溶液应上升约1厘米高毛细管作用。
- 从葡萄糖/BSA 溶液中取出移液器尖端。制备5 mL的0.1M葡萄糖溶液（在5 mL纯净水中稀释90毫克葡萄糖粉），并通过0.22 μm醋酸纤维素过滤器过滤。
- 使用配备柔性熔融硅毛细管的 500 μL 玻璃注射器，将葡萄糖溶液填充移液器。然后，通过吸回并丢弃所有葡萄糖溶液（图2）。重复此步骤多次以删除未绑定的 BSA。
3. 通过电成形成GUV和GHUV
注：电镀是安吉洛瓦9开发的常用技术。获得电形成腔、沉积脂质或聚合物薄膜（或两者为高血脂（或两者为GHUV（巨人混合菌囊泡）和在替代电场下水合膜的程序如下所述。还介绍了收集获取的 GUV 的过程。
- 嗜血杆菌、蔗糖和葡萄糖溶液制剂
- 以1mg/mL的浓度制备两栖动物溶液。称量10毫克两栖动物，溶解在10毫克氯仿中。将溶液保存在密封小瓶中，以避免溶剂蒸发。
- 制备1，2-二氧化铝-sn-甘油-3-磷乙醇胺-N-（利沙明罗达明B磺胺）（DOPE-Rhod）的库存溶液，氯仿为1毫克/mL。
- 向两栖动物溶液中加入10μL荧光脂溶液。将溶液保存在密封小瓶中，以避免溶剂蒸发。
- 分别制备浓度为0.1 M.342mg和180mg蔗糖和葡萄糖的蔗糖和葡萄糖溶液，并将其溶解在10 mL的纯净水中。
- 电化室的准备
注：不同的导电材料可用于制造电形成装置（例如，铂线10，不锈钢针11）。电感室由两个 ITO 幻灯片组成，由 O 形橡胶垫片隔开，该垫片在一侧被切割以创建孔径。滑轨通过两根电线连接到电压发生器（图3和图4A）。- 使用有机溶剂（例如氯仿）清洁 ITO 幻灯片。使用欧姆计识别导电表面。
- 使用胶带将电线固定在导电侧。
- 嗜血液沉积
- 将毛细管浸入溶液中，直到液位通过毛细管作用增加，并收集溶液约5μL。
- 将毛细管与 ITO 玻璃板的中心接触，轻轻铺开溶液。等待 10 秒以确保完全的溶剂蒸发 （图 4A）。
- 每侧重复此过程 3 次。
- 在打开的 O 型环垫片的两侧添加一层无硅润滑脂。把它放在沉积区域周围。将第二个 ITO 玻璃板的导电面放在垫片顶部。
- 将电形成器置于真空下 3 小时，以去除任何有机溶剂的痕迹。
- 电镀程序
- 将电线插入发电机。
- 对生成器使用以下设置：
替代正弦张力
频率： 10 Hz
振幅：2 V峰峰值
注：必须为每个系统找到最佳电压频率和持续时间。 - 在将溶液注入造型室之前，确保施加电压。
- 使用带 0.8 mm 内径针的注射器注射 1 mL 溶液以填充腔室。移除最终的气泡。
- 让腔室在施加的电压/频率下工作75分钟（图4B）。
- GUV 收获
- 关闭发电机。
- 使用 1 mL 注射器和 0.8 mm 内径针头，吸吸溶液的一小部分，以便在腔室内产生气泡。稍微倾斜造型室，以使气泡在腔室内移动。这有助于 GUV 从 ITO 表面分离 （图 4C）。
- 吸吮所有溶液并将其转移到 1 mL 塑料管中。
- 拆下导线，用有机溶剂（甲苯然后氯仿）清洁 ITO 幻灯片。
4. 微操作设置
注：微移液吸气的原理是通过玻璃微管吸一个囊泡，通过应用抑郁症。移液器内的舌头长度作为吸入压力的函数进行测量。前面描述的带 BSA 的移液器涂层对于防止或减少囊泡膜和移液器之间的粘附至关重要。
该协议如下图所示。
- 移液器和注水的储液罐连接
注：装满水的水箱和千分尺固定在滑动板上。带微米头的数字计数器允许器件在 0 至 2.5 厘米范围内垂直位移，精度为 1 μm。 沿铝光学轨的位移可以长达 1 米。硅管连接储液罐和毛细管支架（图5A）。- 给水箱注上纯净水。通过硅胶管将一次性 5 mL 注射器连接到毛细管金属支架，然后吸气，形成从水箱到支架的水流。
- 轻轻触摸管子，消除气泡。同时，提高水箱以产生正压。5 mL 注射器仍连接到支架上。
- 在上文描述的涂层和清洁步骤后（参见步骤 2），用葡萄糖溶液填充毛细管，直到在末端形成掉落。从金属支架上拆下注射器管，使其末端有轻微的水流。
- 将毛细管倒置，将葡萄糖滴与从支架流出的水流连接。将毛细管和支架拧在一起，固定好毛细管和支架。
- 放置移液器
注：在此操作期间，水箱仍位于铝轨上以保持正压。- 以配有两个玻璃滑片（以前用乙醇清洗）的自制铝制舞台为例，并在每侧涂上真空润滑脂。将其安装在显微镜阶段，并使用含有0.1M葡萄糖的1mL注射器在两个幻灯片之间形成半月板，如图5B，C所示。
- 将移液器及其支架放在微操作器的马达单元上，并拧紧夹紧旋钮。
- 在粗模式下使用控制面板操纵杆降低血糖半月板附近的微移液器。使用精细模式将尖端的位置调整到半月板的中心。
- 将浸入葡萄糖的尖端保持几分钟，以清洁其外表面和内表面（当保持正压时，水流将冲洗移液器的内表面，以去除未涂布的 BSA）。
- 将尖端的位置存储在微操作器键盘上，并将其从半月板中取出。
- 取出葡萄糖半月板，用新鲜的半月板代替。使用20μL微管器在0.1M蔗糖中吸2μL的GUVs，并将其放入新鲜葡萄糖半管中。在DIC模式（差分干涉对比度）中观察位于底部的GUV，因为蔗糖（主要是在GUVs内部）和葡萄糖（主要是在GUV之外）之间的密度差异。
- 当囊泡稍微放气时，重新插入吸液器，并聚焦在尖端上。设置压力接近 0 的水箱的高度 H0。为此，利用溶液中自然存在的小囊泡或颗粒，调整水箱高度，直到停止这些颗粒的运动。
- 此时，用矿物油包围半月板以防止水蒸发，参见图5D。
注：使用空调应将室温控制在20-22°C之间。
- 微移液器吸入实验
- 降低移液器尖端（直径为 6-12 μm），并产生一个小吸力（-1 厘米），以吸出囊泡（直径为 15-30 μm）。所选囊泡的膜应轻微波动，且不得出现任何明显缺陷（无芽或细丝）（图6）。
- 使用微操作器将移液器提升到更高的水平，将吸气囊从其他囊泡中分离出来，并在整个实验过程中保持此位置。
- 通过将注水罐降至约 -10 厘米，预应力囊泡，然后降低压力以返回到其初始值（-1 厘米）。重复此步骤几次，以消除膜的过剩和小缺陷。
- 从水箱位置定义的 -0.5 厘米的高度开始，用千分尺缓慢降低吸力压力，以达到膜波动的调节状态。然后增加压力，以清晰地可视化具有显著投影长度（几微米）的尖端舌。
注： 允许吸吮最小膜投影长度 （L0） 的最低施加压力 （P0） 将定义参考点=0 （图 7A）。曲线的所有点都将根据此参考值进行测量 （μL = L-L0，+P = P-P0）。 - 以步进方式使用千分尺增加吸力压力，直到达到 0.5 -0.8 mN/m。在每个步骤中，等待 5 s 并拍摄舌头的快照。在低张力下，此过程能够确定弯曲模量。
- 通过调整轨上注水滑动的高度（范围从 -2 到 -50 厘米）（图 7B-D），继续将吸入压力从 0.5 mN/m 增加到破裂张力。通过高压试验，测量区域压缩模量、解压张力和解压应变。
- 拉伸约15-20囊泡，以获得重要的统计数据。每个微移液器吸入实验需要7到10分钟。使用 LASAF 软件执行图像分析，以测量舌头的投影长度、囊泡的直径和毛细管的半径。
- 测量弯曲模量、区域压缩模量、解压张力和解压应变
- 要访问这些参数，请使用 E. Evans12确立的形式主义。从公式 1 计算施加在膜上的吸入压力：
• P = == wg （h=h0） （1）
其中 g 是重力加速度 （9.8 m_s+2），μw是水的密度 （= 1 g =厘米+3），h 是水箱的位置， h0是压力等于零的初始位置. - 从拉普拉方程计算膜张力：
(2)
其中μP是微移液器上的吸入压力，Rp和Rv分别是微移液器和囊泡半径（微移液器外）。膜的表面面积应变 （+） 定义为：
(3)
在较低的吸入压力下，是囊泡的膜面积。 - 根据公式 412计算毛细管尖端内囊泡的投影长度 +L 增加的 α：
(4) - 在非常低的张力下，热弯曲波动的平滑主导了表面膨胀。图 ln（*） vs =在低 μ 值（通常为 0.001–0.5 mN.m = 113）时，这给出了一条直线，其斜率与弯曲模量相关，Kb（方程 5 的第一个术语）14：
(5)
注：在高张力下（>0.5 mN.m=1），膜波动被完全抑制，并且由于分子之间间距的增加，膜面积增加。在此机制中，等式 5 的第二个术语占主导地位，并授予访问区域压缩模量 Ka（图 8和图 9） 的访问。
- 要访问这些参数，请使用 E. Evans12确立的形式主义。从公式 1 计算施加在膜上的吸入压力：
(2)
(3)
在较低的吸入压力下，是囊泡的膜面积。
(4)
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Representative Results
根据上述协议， 我们研究了不同的合成巨型单片杆菌囊泡（GUV），从磷脂获得：2-oleoyl-1-palmitoyl-sn-甘油-3磷胆碱（POPC），三聚物共聚物：聚（环氧）-b-聚宝（二甲基硅氧烷）-b-聚氨酯（环氧乙烷）（PEO12-b-PDMS43-b-PEO12）在先前的研究13中合成，以及二聚基共聚Poly（二甲基硅氧烷）-b-Poly（二甲基硅氧烷）（二聚苯乙烯）环氧乙烷（PDMS27-b- PEO17）。我们小组先前已经表明，三块共聚PEO8-b-PDMS22-b-PEO8与磷脂POPC的关联导致产生的高氟化物（巨人混合Unilamellar囊泡）的膜韧性急剧下降15。本研究已重复进行测量，并扩展到从从该二块共聚物和POPC的关联中获得的二块共聚物和GHUV的GUVs。
结果如图10和表1所示。POPC的区域压缩模量和解压应变与文献16完全一致。在实验室中尚未对混合囊泡的弯曲调节剂进行测量。给出了获得聚合体的典型值。值得一提的是，从二聚块共聚物中获得的膜（Ec）的韧性远远超过三块共聚物的韧性。更有趣的是，使用二聚物共聚物，有可能获得与脂质体相比具有更高韧性的巨型杂交单片脂质/聚合物囊泡，这是这种关联的主要兴趣所在。
图1：用于抛光移液器尖端的微锻造。图片显示了设备的不同部分：金属移液器支架（a）、玻璃毛细管（b）、微操作器加热器区（c）、光源（d）、10x、32x、40x物镜（e）和显微镜眼（f）。在刀片中，浸入玻璃珠中的移液器尖端通过 32x 物镜与铁珠观察。冷却后，熔融玻璃进入尖端的液位已固定在中间高度 （H）。拉开尖端会导致剧烈的断裂。请点击此处查看此图的较大版本。
图2：用于涂布和填充移液器尖端的实验设置。（A） 安装一个装有柔性硅毛细管的 500 μL 玻璃注射器，用葡萄糖溶液填充微液。（B） 毛细管下部的放大。在隔夜浸泡期间，BSA 溶液水平通过毛细管作用上升，长度可达 1 厘米。然后，通过插入一个柔性毛细管来去除未吸附的BSA，移液器充满葡萄糖。请点击此处查看此图的较大版本。
图3：制造基于ITO的电形成装置的材料。该装置由两个玻璃滑梯组成，一侧涂有氧化锡（a） 的氧化钠。一侧切割了橡胶 O 型环，以便将溶液装载到腔室内，并收获了 GUV 悬架（b）。橡胶 O 型环用作分隔两个滑轨的垫片。滑轨通过电线（c）连接到电压发生器，并通过胶带（d）连接到表面。无硅润滑脂用于用滑轨密封垫片 （e）。欧姆计用于识别 ITO 涂层侧并检查电导率（f）。请点击此处查看此图的较大版本。
图4：电镀设置。（A） 两栖液溶液在玻璃板的 ITO 涂层侧面使用玻璃毛细管沉积。（B） 在组件和干燥步骤后，腔室连接到电压发生器（10 Hz，2 V），然后充满蔗糖溶液。（C） 电形成后，在腔室内产生气泡，帮助 GUV 从表面分离。请点击此处查看此图的较大版本。
图5：微移液器吸气设置。（A） 部件描述：荧光显微镜 （1）、注水罐和微米在铝光学轨上滑动 （2）、硅胶管将水从储液罐流向微管 （3）、微操作器控制面板 （4）、允许 X、Y 和 Z 位移 （5） 的微操作器电机单元、振动隔离台 （6）。（B） 放大显示自制的铝级，配有两个玻璃滑轨 （7）、移液器 （8） 和移液器支架 （9）安装在微操作器的马达单元上，并通过夹紧旋钮 （10） 固定。请注意，移液器尖端浸入葡萄糖半月板的中心.（C）玻璃滑动胶合与真空油脂在每侧允许形成葡萄糖半月板（侧视图）。（D） 用矿物油包围的葡萄糖半月板，以防止水蒸发（上图）。请点击此处查看此图的较大版本。
图6：使用微移液器吸入的张力下GUV的图像。从红胺标记脂质和传输通道 （DIC） 收集荧光的红色通道已合并。请点击此处查看此图的较大版本。
图7：不同吸力压力的GUV图像。（A） 诱导舌头形成的最低应用张力用作确定初始舌长度 （L0）和囊泡半径 （Rv） 的参考。（B） 中间应用张力值，具有相关的舌长度 （L）。（C） 非常高的应用张力.（D） 膜破裂后的图像，其中移液器半径被测量 （Rp）。请点击此处查看此图的较大版本。
图8：微移液吸入获得的GUV代表性应力应变图。相同的数据集已用于绘制 ln（+） = f（+） 和 + = f（α）。在低张力机制中，ln（*）随α（绿色线性拟合）线性变化，并可进入弯曲模态（Kc）;而在高张力机制中，α 随 α（红色线性拟合）线性变化，并可访问区域压缩模量 （Ka）。请点击此处查看此图的较大版本。
图9：在拉伸机制中通过微移液吸入获得的GUV代表性应力应变图。从实验曲线可以确定GUV的几个机械参数。面积可压缩模量 （Ka） 对应于初始斜率，并通过线性拟合曲线进行测量。最后一个测量点给出的Lysis应变（+L）和莱西应力（+L）值。最后，通过整合曲线下的区域（橙色区域），可以估计内聚密度能量 （Ec）。请点击此处查看此图的较大版本。
图10：为脂质体、聚合物体和混合聚合物/脂质囊泡获得的代表性应力应变图。由 POPC（红色三角形）、三块共聚物（绿色圆圈）、二块共聚物（蓝色方块）、基于三块的混合（浅绿色圆圈）和基于二块的混合（浅蓝色方块）组成的 GUV。曲线是通过对每个系统至少 15 个 GUV 的测量值求平均值获得的。请点击此处查看此图的较大版本。
| 嘉 | ≤L | •L | Ec c | K b | |
| （mN.m-1） | (%) | （mN.m-1） | （mN.m-1） | （kT） | |
| POPC | 194 × 15 | 4 × 1 | 8 × 2 | 0.17 × 0.09 | 21.1±0.4 |
| PDMS27-b- PEO17 | 121 × 8 | 16 × 4 | 15 × 3 | 1.37 ± 0.67 | 10.6 × 3.5 |
| PDMS27-b- PEO17 | 132 × 13 | 9 × 4 | 10 × 3 | 0.50 ± 0.38 | - |
| • 5 wt.% POPC | |||||
| PEO12-b- PDMS43-b- PEO12 | 84 × 13 | 7 × 1 | 6 × 2 | 0.50 ± 0.38 | - |
| PEO12-b- PDMS43-b- PEO12 | 91 × 11 | 3 × 1 | 2 × 1 | 0.03 ± 0.01 | - |
| • 5 wt.% POPC |
表 1：在由磷脂、共聚物或两者组成的GUV上使用微移液吸气技术测定的机械参数。
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Discussion
微移液器的涂层是获得可靠测量的关键点之一。必须防止囊泡粘附在微移液器上，在文献中通常使用涂层17、18、19、20、21与BSA、β-酪蛋白或西沙西尔。很少提及涂装程序的详细信息。
在搅拌下，BSA 的溶解应至少进行 4 小时，以实现良好的溶解。然而，过滤步骤仍然需要去除任何可能阻碍微移液器尖端的骨料。如果 BSA 没有很好地溶解，大部分将通过过滤去除，涂层将无效。理想的浓度和溶解时间分别为0.8-1 wt. % 和 4 h。
另一个关键点是在测量过程中确保囊泡内外的恒定渗透压力。实验期间水蒸发导致葡萄糖浓度增加，会导致囊泡的通缩，干扰测量（低估Ka等）。油层的沉积是强制性的，以防止这种现象（图3D）。为了检查油层的效率，可以在囊泡上施加几个 mN_m-1的恒定吸入压力 5 分钟，并且毛细管内的舌的长度 L 应保持不变。
最后一个关键点是预应力步骤（第 3.3 节），文献中很少提及。此步骤是必要的，以去除芽，管和多余的表面积的囊泡，并获得可重现的结果从囊泡到另一个。
微移液吸气方法可应用于所有 GUV，只要它们呈现流体膜（例如，T电感>Tm的脂质），并且具有低于 100 kT 的弯曲模量。在厚粘膜的情况下，即使在流体状态下，两个移液器也可用于测量膜22。微移液器吸气技术具有很大的优势，可以获取多个参数（弯曲和面积可压缩性，这是唯一可用于直接访问 GUV 膜区域可压缩模量的技术）。
虽然这项技术早已为人所知，但它仍然被许多科学界（生物物理学家、物理化学家、化学家等）普遍使用。微移液吸气方法将继续是未来的重要技术，特别是进一步研究先进合成细胞（例如混合聚合物/脂质囊泡和原细胞）的膜特性。
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Disclosures
作者没有什么可透露的。
Acknowledgments
作者感谢ANR的财政支持（ANR Sysa）。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Required equipment and materials for micropipette design | |||
| Borosilicate Glass Capillaries | World Precision Instruments | 1B100-4 | external and internal diameter of 1mm and 0.58 mm respectively. |
| Filament installed | Sutter Instrument Co. | FB255B | 2.5mm*2.5mm Box Filament |
| Flaming/Brown Micropipette Puller | Sutter Instrument Co. | Model P-97 | |
| Microforge | NARISHGE Co. | MF-900 | fitted with two objectives (10x and 32x) |
| Materials for coating pipette tips with BSA | |||
| Bovine Serum Albumin Fraction V (BSA) | Sigma-Aldrich | 10735078001 | |
| Disposable 1 ml syringe Luer Tip | Codan | 62.1612 | |
| Disposable 10 ml syringe Luer Tip | Codan | 626616 | |
| Disposable 5 ml syringe Luer Tip | Codan | 62.5607 | |
| Disposable acetate cellulose filter | Cluzeau Info Labo | L5003SPA | Pore size: 0.22µm, diameter: 25mm |
| Flexible Fused Silica Capillary Tubing | Polymicro Technologies. | TSP530660 | Inner Diameter 536µm, Outer Diameter 660µm, |
| Glucose | Sigma-Aldrich | G5767 | |
| Syringe 500 µL luer Lock GASTIGHT | Hamilton Syringe Company | 1750 | |
| Test tube rotatory mixer | Labinco | 28210109 | |
| Micromanipulation Set up | |||
| Aluminum Optical Rail, 1000 mm Length, M4 threads, X48 Series | Newport | ||
| Damped Optical Table | Newport | used as support of microscope to prevent external vibrations. | |
| Micromanipulator | Eppendorf | Patchman NP 2 | The module unit (motor unit for X, Y and Z movement) is mounted on the inverted microscope by the way of an adapter. |
| Micrometer | Mitutoyo Corporation | 350-354-10 | Digimatic LCD Micrometer Head 25,4 mm Range 0,001 mm |
| Plexiglass water reservoir (100 ml) | Home made | ||
| TCS SP5 inverted confocal microscope (DMI6000) equipped with a resonant scanner and a water immersion objective (HCX APO L 40x/0.80 WU-V-I). | Leica | ||
| X48 Rail Carrier 80 mm Length,with 1/4-20, 8-32 and 4-40 thread | Newport | ||
| Materials for sucrose and amphiphile solution preparation | |||
| 2-Oleoyl-1-palmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine | Sigma-Aldrich | ||
| Chloroform | VWR | 22711.244 | |
| L-α-Phosphatidylethanolamine-N-(lissamine rhodamine B sulfonyl) | Sigma-Aldrich | 810146C | Rhodamine tagged lipid |
| Sucrose | Sigma-Aldrich | S7903 | |
| Electroformation set up | |||
| 10 µL glass capillary ringcaps | Hirschmann | 9600110 | |
| Disposable 1 ml syringe Luer Tip | Codan | 62.1612 | |
| H Grease | Apiezon | Apiezon H Grease | Silicon-free grease |
| Indium tin oxide coated glass slides | Sigma-Aldrich | 703184 | |
| Needle | Terumo | AN2138R1 | 0.8 x 38 mm |
| Ohmmeter (Multimeter) | Voltcraft | VC140 | |
| Toluene | VWR | 28676.297 | |
| Voltage generator | Keysight | 33210A |
References
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