このプロトコルは、脳の寄付プログラムと脳の適切な特性を通じて個々の脳老化軌道を追跡する方法を記述する。脳のドナーは、連続多次元評価を含む長期的な縦断的研究に関与しています。プロトコルは、脳処理の詳細な説明と正確な診断方法論が含まれています。
絶え間なく高齢化が進む中で、神経変性疾患の罹患率は上昇すると予想される。病気のメカニズムを理解することは、予防的および治癒的な手段を見つけるための鍵です。これを達成するための最も効果的な方法は、病気と健康な脳組織の直接検査を通じて.著者らは、前死的な脳の寄付プログラムに登録された個人によって寄付された良質の脳組織を取得、処理、特徴付け、保存するためのプロトコルを提示する。寄付プログラムには、人々に対する対面共感的なアプローチ、補完的な臨床、生物学的、社会的、ライフスタイル情報のコレクション、および正常な老化と認知機能の低下の個々の軌道を追跡するための時間の経過とともに連続的な多次元評価が含まれています。多くの神経疾患は非対称であるため、私たちの脳バンクは新鮮な標本をスライスするためのユニークなプロトコルを提供しています。両半球の脳の部分は、交互に凍結される (-80 °C) またはホルマリンで固定;一方の半球の固定スライスは、もう一方の半球の凍結スライスに対応します。このアプローチにより、全ての凍結物質の完全な組織学的特徴を得ることができ、オミクス研究は両半球の組織学的に明確に定義された組織に対して行われ、神経変性疾患メカニズムのより完全な評価を提供する。これらの疾患の正しい、明確な診断は、臨床症候群と神経病理学的評価を組み合わせることによってのみ達成され、しばしば病因を解釈するために必要な重要な病因的手がかりを追加する。この方法は、限られた地理的領域のみをカバーするため、時間がかかり、コストがかかり、制限される可能性があります。その制限に関係なく、それが提供する高度な特性評価はやりがいがあります。私たちの究極の目標は、神経病理学的に検証された疫学研究の重要性を強調しながら、最初のイタリア脳銀行を設立することです。
WHOによると、現在約5,000万人が認知症に苦しんでいますが、2050年までに3倍に増加すると予測されています。アルツハイマー病は認知症の主な原因であり、続いて脳血管疾患および他の老化性疾患が続く。2017年、WHOは、認知症に対する意識を高め、それに対する世界的な行動計画を奨励するために、グローバル認知症観測所を開発しました。各個人は、独自の脳老化軌道を持っているので、治療の検索は、神経変性疾患の病因の複雑さのために困難な場合があります。おそらく、各人は、パーソナライズされたアプローチを必要とする脳組織に書かれた彼女または彼自身の病因を所有しています。このように、脳組織の研究は、神経変性のメカニズムを理解するための鍵となります。
神経科学の歴史を振り返ってみると、人間の脳を直接調べなければ、最も印象的で画期的な発見は決して起こりにくいというのが分かります。時間を通じて、研究される脳組織の源は、粗い切離、ランダムな「偶然の出会い」、そして場合によっては違法な取引から、組織化された脳コレクションと戦略的な現代の脳バンクに変わりました。多くの倫理的側面の検討は、現代の脳バンクと過去の脳コレクションを区別する主な要因の1つです。最初の本物の近代的なブレインバンク(B)は、20世紀後半に設立されました。ニコラス・コルセリスとウォレス・トゥルテロットは、現代のブレインバンキングのパイオニアと考えることができます。英国では、コルセリスは、様々な精神および神経疾患に影響を受けた1000以上の十分に文書化された脳を保持するコレクションを組み立てました2.さらに、コルセリスは生化学的検査のために氷の中に新鮮な脳組織を保存する必要性を明らかにするのに役立ちました3.一方、米国では、ウォレス・トゥルテロッテは、潜在的な脳ドナーの勧誘を容易にし、収集された脳が完全な医学的および神経学的歴史44、5を伴うことを確実にするために、前死的な脳の寄付プログラムを導入しました。脳コレクションと現代のBBの歴史的概要については、カルロスらを参照してください。6.
では、なぜ私たちはまだ人間の脳を必要としているのでしょうか?脳疾患は、神経病理学的検査の後に明確な診断を与えることができる。神経病理学は臨床診断に挑戦し、臨床症状の正しい解釈および新しいシンドロミック変異体の組織学的基盤の発見への鍵である。確かに、診断は病理学的な画像に基づいて再定義することができる。それにもかかわらず、最近の革新的な神経イメージング技術の開発により、検死率は過去数十年間で低下している。脳イメージングを通じて、脳内の形態学的、機能的および代謝的変化、ならびにタンパク質の誤折の程度を、in vivoで評価することができる。しかし、生体内の神経イメージングやその他のバイオマーカー研究は、微妙な細胞および分子変化を検出することができないため、病理学的画像の「推定値」しか与えることができない。分子イメージングの進歩と新しいバイオマーカー、標的分子、トレーサー7(アミロイド、TAU、ミクログリアトレーサー)の発見は、臨床評価およびバイオマーカー検査から得られたデータの解釈に人間の脳をさらに不可欠なものにします。また、オミクス技術(ゲノミクス、エピゲノム、および 転写学、メタボロミクス、プロテオミクス、リピドミクスなど)は、疾患メカニズムを理解し、リスク遺伝子を発見するための新たな可能性を開き、新しい診断および予後マーカー、および潜在的な薬物標的,,,,23,,,88、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、202、12,13,14,15,16,17,1821,2219,2091011
これらの目的のために、現代のBは、科学界33、2424のためにそれらを利用できるように、よく特徴付け、高品質の脳組織をアーカイブします。Bによって供給される脳は、完全な臨床歴を伴うべきである。BBの活動には、以下が含まれます: (1) 脳の寄付プログラムに病気や健康な個人の認識と募集;理想的な条件は、完全な臨床、ライフスタイル、社会史、およびバイオマーカープロファイルを得るために生涯を通じてドナーの多分野フォローアップを達成することです。実際、認知予備と脳の構造は、ライフスタイルと社会教育因子25、26に依存するので、26これらの情報は、手元の総データを豊かにします。(2) ドナーの終焉に続く脳(大脳、小脳および脳幹からなる)および関連組織(例えば、脊髄、脳神経および神経節など)の取得は、標準化された法的および倫理的規制を遵守しながらすべて。(3)脳の適切な処理(解剖、固定、凍結)は、標準化された手術プロトコルで定義されるように、高品質の組織を得て、将来の研究での使用を可能にする。(4) 詳細な神経病理学的特徴付けにより、最終的な確定診断を提供する。(5) 研究コミュニティへの組織材料の貯蔵と流通27,,28.
すべてのBは、凍結およびホルマリン固定パラフィン埋め込み組織の両方を保存します。各 BB には独自のプロトコルがあります。生物医学研究所(ニュージャージー州)29のビヘミスフェリック切断プロトコルやデラメクールの脳血管病理30の研究など、特定の研究を除いて、世界最大のBは、単に中間線(サジタル平面)に沿って大脳、小脳、脳幹を切断します。半分は新鮮に解剖され、生化学的研究のために凍結され、もう一方は組織病理学的評価のためにホルマリンに固定される。したがって、生化学的および病理的な解析は、各半球で別々に行われます。どちら側が固定または凍結(側面)に関する決定は、特異バンク31、32、33、34、35に依存します。31,32,33,34,35多くの神経疾患は非対称的であるように、私たちのBBは新鮮な脳をスライスするためのユニークなプロトコルを提供しています:脳幹と各半球の隣接するセクションは交互に固定され、凍結されています。一方の半球の固定スライスは、もう一方の半球の凍結スライスに対応します。この方法により、脳組織の使用が最適化され、すべての凍結物質の完全な組織学的特徴付けが両半球のすべての領域から組織学的および生化学的情報を得て比較する可能性を得ることができる。
私たちの脳銀行プロジェクトのフレームは、アッビアテグラッソの町です。アッビアテグラッソは、イタリア北部のミラノ市の南西約22kmの小さな町です。人口は約32,600人です。ゴルジ・チェンチ財団(GC)の本拠地です。GC財団は大規模なリハビリテーション老人病院(ASPゴルジ・レダエリ)の一部であり、高齢者の老化とケアに関する研究に焦点を当てた研究所です。特に、精神老化、それに影響を与える社会的および行動的要因、および年齢依存性神経認知障害(NCD)の基礎となる生物学および病理学を研究することに焦点を当てています。2009年、GC財団は1321人の参加者(対象科目1644人中:初期回答率80.3%)を含む新しい縦断研究を開始しました。1935年から1939年(70歳から75歳)の間に生まれ、白人民族の同じ地理的地域に住んでいます。この研究はInveCe.Ab(インベ・チアメント・セ・レブレルアブ・ビアテグラッソ;英語:脳老化アッビアテグラッソ、ClinicalTrials.gov、NCT01345110)と呼ばれ、現在進行中です。InveCe.Abは、行動、心理社会的、臨床的および生物学的変数36を含むその可能なリスクまたは保護要因とともに、認知症の発生率、有病率および自然史を評価するために、最大均質性および最も変動性の低いコホートを得ることを計画している。コホートの特性を図 1および表 1に示します。疫学的データは、欧州の人口37、38および38InveCe.Abの参加者の認知症傾向と一致しており、正常な老化から神経認知障害までの軌道を研究するための良好なモデルを表す均質な遺伝的および環境的特徴を有する。実際、均質な集団は、適切な統計的力に達するためにより少ない被験者を必要とする。InveCe.Abの方法論は、すでに他の36の他の場所で報告されていますが、血液サンプリング(代謝パネル、代謝パネル、)を含む同じ評価セットを使用して、定期的なチェック(2〜3年ごと)を通じて多次元アプローチに下線を引くことを重要です。 ホモシステインおよびビタミン、アポリポタンパク質E(APOE)および認知および老化に関連する他の遺伝的多型をプロファイリングするためのDNA抽出、人為的測定(体重、身長および腰)、ウォーキングテスト(デュアルタスクテスト)、ライフスタイルを評価するためのインタビュー(地中海ダイエット、身体活動および認知関与のレベル)および社会的要因(社会的関与、孤独)、神経学的評価および一般的な臨床検査このような縦方向のデータを死後の神経病理学的データと比較することは、研究にとって非常に重要であろう。そこで、私たちのチーム、特にミケラ・マンジェリ博士は、上記の神経病理学的アプローチを考え出しました。2014年以来、2回目のフォローアップの間に、InveCe.Ab参加者は彼らの脳を寄付するように求められたので、アッビアテグラッソ脳銀行(ABB)の誕生をもたらしました。ABBのコアドナーはInveCe.Ab参加者ですが、ABBは現在他のボランティアドナーに開放されています。彼らは、異なる神経疾患に苦しむ数人の患者やABBプロジェクトについて学び、同じ地理的領域(アッビアテグラッソとその周辺)に属する成人ボランティアが住むASPゴルジ・レダエリの患者です。すべてのドナーは同じ評価プロトコルを受ける。
著者らは、正常な老化の個々の軌跡とNCDへの進行の可能性を追跡し、そのようなドナーから得られた脳を正確に管理、処理、特徴付ける方法を提案する。また、脳の幸福に関する定期的な神経学的評価、セミナー、教育活動に参加し、研究目的で脳の寄付意識を高めることを目的としています。
プロトコルの重要なステップ
私たちの目的は、縦断観察から導き出された詳細な歴史を持つ被験者から来る良質の組織を取得し、特徴付け、保存することです。この目標を達成するためには、次の重要な側面に対処する必要があります。上記のように、プロトコルは、最初の重要なステップであるドナーの募集から始まります。その後、ドナーはフォローアッププログラムを継続し、脳の実際の寄付まで時間の経過とともにプロジェクトへの接着を維持することが必要です。死亡時には、ABBのスタッフが24時間以内に検死チームを招集するために速やかに通知を受ける必要があり、適切な組織品質にとって重要である。大脳半球の新鮮な切断は、安定した手と特定のトレーニングを必要とします.凍結が遅いことによる細胞の損傷を避け、クライオスタットとオミックスの良質のスライスを得るためには、すぐに凍結することが重要です。ホルマリン溶液の浸透速度(1mm/時間)を考慮すると、組織抗原性を保ち、単一スライスの浸漬時間は最小限に抑えられる。
メソッドのトラブルシューティング
上記の重要な手順に対処するために、以下のアプローチを提供します。ドナーの募集とフォローアップへの遵守:身体の体の体の体を傷つける恐れ、純粋さと完全性、または死後の痛みを感じる可能性を含む脳の寄付を妨げるいくつかの要因があります。彼らはまだ生きている間に解剖が行われるかもしれないことを心配する人もいます70,,71.葬儀の手配の中断や財政的負担に対する懸念も72です。さらに、医療従事者が死後の処置に関する知識の欠如と潜在的なドナーまたはそのNOKの懸念に対処できないことは、登録を妨げる可能性があります。これらすべての要因は、登録された参加者の数が少なく、時間の経過とともにドナーが失われる可能性が高いと、低レベルの意識を生み出す可能性があります。確かに、ドナー採用プログラムは、意識を広め、信頼を植え付け、人々に高いフォローアップ参加率を登録し、維持するよう説得するのに効率的であるべきです。私たちの経験では、これは潜在的なドナーの慎重な選択とBBの目的の徹底的な説明によって行われます。健康な人と神経変性疾患の影響を受ける人々とその家族の両方の恐怖とニーズに対処する教育活動と共感的なアプローチを提供しています。私たちは、潜在的なドナーが直接アプローチされたときに同意を与える可能性が高いことがわかります。対面アプローチは、脳の寄付とフォローアップ評価への登録の高い割合を達成するための基本である相互信頼と尊敬に基づいて関係を作成します。倫理観が強い高い訓練を受けたスタッフは、まず潜在的なドナーにアプローチし、死後に脳を寄付する可能性について議論し、人間の脳組織の価値を神経科学研究に説明し、死後の処置に関する疑念を明らかにする。好意的な口コミも同様に重要です。脳の収穫後、死体を再構成するために適切な注意と注意が与えられる。死体を優しく扱うことで、亡くなった人に敬意と感謝を示す必要があります。数ヶ月後、家族が要請するたびに神経病理学的分析の結果を伝える会議が予定されている。
死亡と脳の収穫の時間:人が受け入れると、彼らはドナーになり、24時間/日、7日/週(私たちに接続されているASPゴルジ・レダエリ老年病院の受け入れ番号)に連絡する番号の身分証明書が与えられます。また、入院時に使用する親族に粘着タグが付いています。この地域の葬儀機関は以前、検死チームが召喚されるABB施設に遺体を持ち込むという情報を得ていた。検死チームは、病理学者、神経生物学者および/または神経生物学者、および解剖室の技術者で構成され、毎日午前6時から午後11時まで呼び出されます。また、研修生の中には、助けや写真を撮るために頻繁に出席する人もいます。
新しい切断手順の精度と一貫性は、この方法を開発し、神経病理学の経験を持つ同じ2人のオペレータ(神経科医と病理学者)の関与によって保証されます。スライスを凍結すると、あらかじめ冷凍されたアルミニウムトレイに置き、連結されたアルミニウム板で覆われ、平らに保ちます。直後に、液体窒素を3分間、-80°Cで保存する前に入れます。 固定するスライスはガーゼで個別に包まれ、10%リン酸緩衝ホルマリン溶液に浸し、1日後に置換される。その後、彼らは5日以内にホルマリンに保管されます。しかし、ホルマリン溶液が1mm/日で浸透することを考えると、浸漬時間をさらに短縮したいと考えています。
メソッドの制限事項
ここで説明する研究方法は限られた地理的地域のみを対象としており、寄付プログラムに関わる個人は、一般の人々を完全に代表しない特性を持っています。許容以上に、死後の間隔は24時間まで、一部のタンパク質構造、酵素および脳組織のRNAに変化を生じる可能性がある。AFSとpHの決定は、組織の質73を決定するのに完全には十分ではない可能性があり、RNAの完全性に基づいて組織の品質を認証する他の方法を開発しています。
ミクロトーム切断手順に関しては、解剖学的関係を再構築するのに非常に有用であるが、マクロセクションの使用は単純ではなく、いくつかの技術的な困難を提示することに留意すべきである。私たちの方法は困難で時間がかかります。コストは非常に高く、資金は必ずしも容易ではありません。資金は主に公的(ASPゴルジ・レダエリ老年病院)と民間資源(ゴルジ・チェンチ財団)、民間寄付、非営利団体(「フェデラツィオーネ・アルツハイマー・イタリア」など)から行われ、参加を許可しています。
既存/代替方法に関するABB法の意義
当初、私たちの脳の寄付プログラムは、InveCe.Ab縦断研究に参加している個人を対象にしました。その結果、寄付された脳には、長年にわたって収集された詳細な臨床、生物学的、社会的情報が伴います。ABBの強さは、この特徴的な起源から正確に導き出されます。実際、生物学的特徴と環境暴露を共有する社会的、遺伝的関連者のグループを研究することは、統計的分析を強化する。さらに、この研究には、地域社会のニーズの世話と提供(「尋ねる前に与える」行為)が含まれます:人々は一般開業医に知らされる無料の定期検診を受け、秘書の電話番号が相談のために提供され、重度の障害者が自宅で訪問されます。2)参加者、定期的なセミナー(脳の健康、脳の寄付、一般的な健康に関連する)の組織を通じた教育活動における公的役割と一般開業医の関与、テーマ別コースの計画(例えば高齢者向けの情報技術機器の使用)。3)人と会い、対面アプローチを採用する。これらすべての要素は、ABBプロジェクトの強みを構成します。さらに、このプロジェクトは、前死後の評価と死後の神経病理学的評価の両方の経験を得るにつれて、関与する医療従事者の臨床能力を向上させます。この点について、「マイノリティ高齢化研究」の非常に独特の経験について言及したいと思います。この研究には、シカゴ地域に居住するアフリカ系アメリカ人の限られた選択された数(1,357人の対象者のうち784人:57%の回答率)が含まれました。参加者は毎年自宅を訪れ、脳の寄付プログラムに参加するよう求められました。この研究は、脳の寄付プログラムに対する肯定的な反応の高い割合を得る私たちといくつかの類似点を持つ異常なアプローチに基づいています(784人の参加者のうち352人のドナーが登録されました:44%)、解剖率は74非常に満足のいく(53%)74でした。「マイノリティ・エイジング研究」と同様に、教育活動と共感的アプローチを提供し、優れた成果を上げています。特に、回答率は93%、登録率は28.7%、現時点での検死率は67%です。これらの料金は、人々に直接関与するプロジェクトが寄付のよりかなりの割合を持っていることを示しています。他の脳の寄付プログラム, 潜在的なドナーとの関係を構築するあまり注意を払って, 一般的に低い登録率を持っています 10-15% 以下73,,75.
神経病理学的分析で終わる以前のコホート研究はほとんどありません。さらに、脳バンクやリポジトリの大半は病気中心であり、「病気の」脳の数と比較して、健康なドナーからの「制御」脳の不足があります。,限られた数のBは、老化軌道,,,73、74、76、77、78、79、80を研究するために、病気と正常な被験者の両方を含む集団研究に基づいています。73,74,7677787980アメリカ74の「少数派老化研究研究」やフィンランド76の「ヴァンター85+研究」などのいくつかの研究は、私たちと似ていますが、コホートの終了で不足する傾向があります。代わりに、ABBの寄付プログラムは、潜在的なドナーを参加させ、InveCe.Ab縦断研究の終了後もフォローアップをスケジュールし、将来的に長く継続することが想定されています。このアプローチは、退職コミュニティ73を対象とした「太陽健康研究所(SHRI)脳寄贈プログラム」と同様の採用方法を作ります。脳の寄付のためのSHRIプロトコルは、世界で最も短い平均死後の間隔(3.92時間)で非常に効率的です。世界最大のBBと同様に、SHRIプロトコルは単に正中線(矢状面)で大脳、小脳、脳幹を切断し、その半分は生化学的研究のために新鮮で凍結し、もう半分は組織病理学的評価のためにホルマリンで固定されています。しかし、SHRI解剖プロトコルの強みの1つは、半球全体ではなく個々のスライスの固定です。実際、半球全体を固定することは、サーフェスとコアの間の異なる固定勾配のため、最適ではありません。さらに、皮質タンパク質は、ホルマリン溶液への長期暴露によって影響を受ける可能性がある。したがって、我々は個々のスライスを修正することを決めた理由。
どちらの側が固定または凍結されているかの決定は、特異銀行(常に同じ、解剖の日が奇数であるか偶数であるかによって、ランダムに割り当てられた)31、32、33、34、35に依存する。31,32,33,34,35そこで、生化学的および病理的解析は、各半球で別々に行われます。多くの神経疾患は非対称的であるように、私たちのBBは新鮮な標本をスライスするためのユニークなプロトコルを提供しています:脳幹からの代替セクションと小脳と大脳の各半球からの代替セクションは、固定または凍結材料として保持されます。一方の半球の固定スライスは、もう一方の半球の凍結スライスに対応します。我々の方法は、すべての凍結材料の完全な組織学的特徴を得て、両側のすべての領域からの結果を比較する機会を与える。導入で述べたように、記載された方法は、脳組織からできるだけ多くの情報を得ることを可能にする。さらに、ABBの方法は、ほぼすべての既知の脳タンパク質症および血管病理を含む、基本的だが完全な神経病理学的特徴を生み出す。認知障害を決定する際の血管損傷の論争の役割のために、我々は、血管の負担30、53,53のための二重スコアリングを使用することにしました。
プロトコルで説明したように、我々は学際的なアプローチを使用します。これは時間と労力のかかる方法ですが、研究にはいくつかの利点があると考えています。例えば、前の研究では、APOE-ε4アレレに関連する高tHcy自体、またはAPOE-ε4アレーレに関連するMTHFR C677T TTが、記憶喪失81ではなくエグゼクティブ機能不全に関連している可能性があることを実証した。したがって、この特定の遺伝的プロフィールを有する被験者を神経病理学的レベルで評価することは興味深いかもしれない。これは、このような詳細なフォローアップが、当社の銀行で収集された生物学的材料の調査を通じて検証可能な新しい研究仮説を作成するのにどのように役立つかの一例です。私たちのアプローチの利点のもう一つのデモンストレーションは、その独創性と比較的使いやすさのために、私たちが日常的に行っている評価の中にQEEGを含めることです。実際、脳体は、皮質錐体ニューロン82に属する樹状突起の電位を記録することによって大脳皮質のシナプス活性を検出する。QEEGは、認知83に関連する皮質シナプス活性の推定のためのバイオマーカーと考えることができる。特に、低い周波数(シタとデルタリズム)の一般的な増加を伴う脳の後部のアルファリズムの減少は、皮質接続の破壊に関連している。診断相関研究のほとんどは、可能性が高,く、明確な診断84、85、86、87ではない臨床診断に84,85,86基づいていると考えるべきです。87QEEGとLTS変異体88,89の相関関係を調べる神経病理学的画像とQEEGデータを比較した対象研究はごくわずかであり、FTLD89とAD83の間の区別を調べた。神経病理学的診断の定義で研究を終わらせることによって、脳の電気的活動に関する観察を正しく解釈することが可能である。さらに、各被験者にシリアルQEEGを行うことで、個々の脳波軌跡と神経病理学的画像との相関を追跡することができます。時間の経過とともに皮質電気活性の個々の変更に続いて、創発性認知症のバイオマーカーとしての意味をよりよく理解することができます。
今後の応用と方法の方向性
組織分布の実装は、私たちの主な将来の目標の1つです。そのために、GC財団(老人)の理事、パヴィア大学の神経学の学者、GC財団と老年病院ASPゴルジ・レダエリの神経学者、病理学者を含む科学委員会を設立しました。脳組織、組織学的スライド、その他の生物学的サンプルを配布する際には、ドナーが研究のために寄付に同意したことを覚えておくことが重要です。したがって、BNE行動規範40に記載されているように、材料の配布は慎重に行われるべきです。材料の要求を提出する当事者は、必要なサンプルの種類と量を示し、研究プロジェクトの説明とサンプルの使用方法を提供し、可能な場合は、以前の出版物の証拠を提供する必要があります(譲渡契約については、 図9を参照してください)。脳の銀行は、金銭的な利益のために働かない.したがって、研究者が支払う手数料は、組織調達、加工、保管、流通の費用のみをカバーする必要があります。
プロテオミクスやトランスクリプトミクスなどのエキソメシーケンシングとオミックス技術でケースの分析を開始する計画が動いています。我々の代替サンプリング方法論は、オミクス研究が両方の半球から組織学的に明確に定義された組織に対して行われることを可能にする。このアプローチにより、同じ半球の異なる脳領域と他の半球の対応する領域における遺伝子活性化のパターンを比較し、遺伝子活性化を組織病理学と相関させることができる。この分野では、深層学習アプリケーションは、組織学的スライドのコンピュータ解析や臨床、組織学、近江のデータの最先端の相関関係を含む大きな関心を持つであろう。多くの異なる変数間の他の相関関係は、他の可能な技術的応用と同様に識別することができる。両方の半球から凍結された物質の入手可能性は、遺伝子の活性化とタンパク質分布の正確な地形を可能にする。これは、脳機能といくつかの疾患の両方が非対称であることを考えると、健康な被験者でも特に興味深いでしょう。
また、我々は、十分に特徴付けられる脳ドナーから細胞培養を得ることができる。実際、採取した脳のレプトメニンジからの細胞培養は、レプトメニンゲ細胞線維芽細胞を再プログラミングし、高度なモデル90で神経細胞に分化することを含む誘導多能性幹細胞(iPSC)技術を用いて、疾患または老化機構のさらなる調査に使用できる生きた細胞を供給する。
脳が老化するにつれて、変化の異なるプロファイルは、分子、細胞および組織レベルで起こり得る。すべての脳はユニークです。それぞれに、内部および外部ストルッサーに対応する独自の方法があります。抵抗する人もいれば、異なる病理を示す人もいます。臨床提示と神経病理学的画像の間に不一致が存在するのは、病変の地形が臨床的な提示を決定するものではなく、病変の地形によって決まり、しばしば存在する。正しく明確な診断は、臨床症候群と、しばしば病気の病因を解明するために必要な重要な病因的手がかりを追加する神経病理学的知見を組み合わせることによってのみ達成することができた。ヨーロッパでは、神経病理学的診断に対する標準的なアプローチを作成する取り組みがあります。私たちの診断プロトコルは、脳バンキング91のための神経病理学的診断に関する最近公表されたガイドラインにほぼ完全に従います。これにより、最初のイタリア脳銀行を設立するという将来の目標を持って、十分に文書化された脳組織を収集し、共有することができます。確かに、イタリアには脳リポジトリがありますが、コホート研究に基づく脳バンクはありません。私たちの目的は、イタリア全土で広く実装できる脳組織収穫の方法を開発し、共通のプロトコルを使用し、同等の材料を共有するネットワークを確立することです。そのためには、他の研究センターの関与や特定のウェブサイトの作成が、将来の主な目的の一つです。
神経変性疾患の分子性の解析やバイオマーカー同定に、革新的な技術が常に使用されています。この文脈では、縦手方向の研究を通じて得られる認知および老化軌道に関する情報を伴う脳の必要性が高まり、神経病理学的に検証された疫学的アプローチ92の重要性を強調する。
The authors have nothing to disclose.
この作品をミケラ・マンジェリ博士に捧げたいと思います。彼女は早死にする前に、彼女は考案し、アッビアテグラッソブレインバンクプロジェクトを開始しました。
私たちは、自分の体の最も高貴な器官を寄付する研究に寛大に貢献している私たちの脳のドナーに感謝しています。彼らがいなければ、この研究は不可能であろう。
ヴァレリア・マルザガリのABBプロジェクトでの貴重な仕事に感謝しています。
著者らは、ヨハネス・アッテムス教授、パオロ・フォシアニ博士、ジョルジオ・ジャッコーネ博士の貴重な指導と賢明な助言に感謝しています。
私たちは、プロジェクト全体を通して彼らの貴重な助けのために博士アリス・シリンシオーネとミスジュリア・ボルトンに感謝したいと思います。
テレ・カッサーニ夫人の支援と「フェデラツィオーン・アルツハイマー・イタリア」の協力に感謝します。
著者らは、パビア大学公衆衛生・実験・法医学科のマッテオ・モレッティ博士とアントニオ・マルコ・マリア・オスキュラティ教授に感謝しています。
50ml polypropilene conical tube 30x115mm | BD | 405253 | |
Anti-GFAP | Dako | Z0334 | policlonal primary antibody (anti-rabbit); dilution = 1:1000 |
Anti-NeuN (A60) | Chemicon | MAB377 | monoclonal primary antibody (anti-mouse); dilution = 1:1000 |
Anti-phospho TAU (AT8) | ThermoScientific | MN1020 | monoclonal primary antibody (anti-mouse); dilution = 1:200 |
Anti-phospho TDP-43 (pS409/410-2) | CosmoBio | TIP-PTD-P02 | policlonal primary antibody (anti-rabbit) ; dilution = 1:4000; pretreatment : Three step in microwave for 2 min-1 min-2 min with citrate buffer 0.01M pH 6 |
Anti-α-SYN (KM51) | Novocastra | NCL-L-ASYN | monoclonal primary antibody (anti-mouse); dilution = 1:500; pretreatment: 1) Three step in microwave for 2 min-1 min-2 min with citrate buffer 0.01M pH 6 ; 2) 70% formic acid in H2O for 10 min |
Anti-βamyloid (4G8) | BioLegend | 800703 | monoclonal primary antibody (anti-mouse); dilution = 1:1000; pretreatment : 70% formic acid in H2O for 10 min |
Cutting board | BD | 352070 | |
DMEM High Glucose | Carlo Erba | FA30WL0101500 | medium |
Electrical saw with 5d blade | CEA | 06.06.14/06.00.16 | |
Electrode pH measure surface 12mm | CEA | 70064.250 HHH | |
Electrode pH needle | Fisher Scientific | 11796338 | |
EnVision+System-HRP | Dako | K4001 | secondary antibody (anti-mouse); dilution 1:2 |
EnVision+System-HRP | Dako | K4003 | secondary antibody (anti-rabbit); dilution 1:2 |
Ethylether | SMI | 8401530 | |
Feather safety trimming knife blade 14cm | Fisher Scientific | 11749798 | |
Fetal Bovine Serum | Carlo Erba | FA30WS1810500 | medium supplement; dilution = 20% |
Forceps 15cm surgical or anatomical | Uvex | 500XG | |
Gloves | CEA | 01.28.14 | |
Glue | Arcobaleno | 2624000800002 | |
Head supporter | Lacor | 60456 | |
L-Glutamine (100X) | Carlo Erba | FA30WX0550100 | medium supplement; dilution = 1% |
Measuring tape | CEABIS | CEATA34 | |
Non adsorbable monofilament black polyamide | UHU Bostik | 8000053131470 | |
Non-Essential Amino Acids Solution (100X) | Life Technologies | 11140050 | medium supplement; dilution = 1% |
Pen/Strept Solution (100X) | Carlo Erba | FA30WL0022100 | medium supplement; dilution = 1% |
Spinal needle quincke tipe point 20GA 3.50IN 0.9x90mm | CEA | 03.06.16 | |
Sterile scalpel with n°21 blade | |||
Surgical basin | Olcelli Farmaceutica | A930857255 | |
Surgical mallet and surgical cisel | CEA | 79.68.88 | |
Surgical scissor | CEA | 27.08.45/79.68.64 | |
Feather | M130RC |