Presentert her er en protokoll for å utnytte en kortikale nyre ekstrakt forberedelse og total protein normalisering å demonstrere sammenhengen mellom vaskulær endothelial vekstfaktor og luteiniserende hormon i pattedyr nyre.
Vaskulær endothelial vekstfaktor (VEGF) bidrar til å kontrollere angiogenese og vaskulær permeabilitet i nyrene. Nyre sykdommer, som diabetisk nefropati, er forbundet med VEGF feilregulering i nyrene. Faktorene som regulerer VEGF under fysiologiske forhold i nyrene er ikke godt forstått. Luteiniserende hormon (LH), en Pro-angiogenic hormon, bidrar til å regulere fysiologiske VEGF uttrykk i reproduktive organer. Gitt at LH reseptorer er funnet i nyrene, vi, ved Zietchick Research Institute, hypotetisk gjennomsnitt her at LH også bidrar til å regulere VEGF uttrykk i nyre også. For å gi bevis, hadde vi som mål å vise at LH nivåene er i stand til å forutsi VEGF nivåer i pattedyr nyre. De fleste VEGF-relaterte undersøkelser som involverer nyrene har brukt lavere orden pattedyr som modeller (dvs. gnagere og kaniner). For å oversette dette arbeidet til menneskekroppen, ble det besluttet å undersøke forholdet mellom VEGF og LH i høyere orden pattedyr (dvs. storfe og svin modeller). Denne protokollen bruker den totale protein lysat fra nyre barken. Nøkler til denne metoden suksess inkluderer anskaffelse av nyrer fra slakteri dyr umiddelbart etter døden, samt normalisering av analytt nivåer (i nyre ekstrakt) av total protein. Denne studien demonstrerer vellykket en betydelig lineær sammenheng mellom LH og VEGF i både storfe og svin nyrer. Resultatene er reproduserbar i to forskjellige arter. Studien gir støtte bevis for at bruk av nyre ekstrakter fra kyr og griser er en utmerket, økonomisk og rikelig ressurs for studiet av nyre fysiologi, spesielt for å undersøke sammenhengen mellom VEGF og andre analytter.
Vaskulær endothelial vekstfaktor A (VEGF-a), bidrar til å regulere angiogenese og vaskulær permeabilitet i nyrene og andre organer1,2 (heretter, VEGF-a vil bli referert til som VEGF). VEGF nivåer i nyrene er under stram homøostatisk kontroll. Når nyre VEGF nivåer er forhøyet eller deprimert, nyre kan funksjonsfeil. For eksempel, innen 3 uker etter fødselen, mus med podocyte-spesifikke heterozygosity for VEGF utvikle endotheliosis og ublodig glomeruli (dvs. nyre lesjoner sett i Human preeclampsia), og slutt-stadium nyresvikt oppstår i disse heterozygotes av 3 måneders alder. Podocyte-spesifikke heterozygot Knockouts dø av hydrops og nyresvikt innen 1 dag etter fødselen3,4.
På den annen side, overuttrykte av nyre VEGF forårsaker proteinuri og glomerulær hypertrofi3,4. For eksempel, transgene kaniner som overekspresjon VEGF utstillingen progressive proteinuri med økt glomerulær filtrering priser i tidlige stadier av nefropati, etterfulgt av redusert glomerulær filtrering priser i senere stadier3. Diabetisk nefropati, en viktig årsak til sluttfasen nyresykdom hos diabetiker voksne, er sterkt assosiert med VEGF feilregulering2,5. Mye oppmerksomhet har blitt betalt til rollen som hypoksi i inducing VEGF uttrykk under patologisk forhold5. Men de faktorene som regulerer VEGF under fysiologiske forhold (både i nyre og andre organer) er ikke godt forstått2,6. Identifisere disse faktorene (med unntak av oksygen) som er involvert i fysiologiske og patologisk VEGF regulering er en viktig oppgave.
Luteiniserende hormon (LH), en Pro-angiogenic hormon, hjelper regulere fysiologiske VEGF uttrykk i reproduktive organer som eggstokken og testikkel7,8. Tidligere studier har gitt bevis for at LH også bidrar til å regulere VEGF i ikke-reproduktive organer, slik som øynene6,9,10. LH reseptorer finnes i forlengede og cortex av nyrene11,12. Av notatet, nyre rørformede epitelceller, så vel som LH reseptor, Express VEGF11,12,13,14. Ved å ta disse to observasjonene sammen, hypotetisk gjennomsnitt vi at LH også bidrar til å regulere VEGF uttrykk i nyrene13,14. For å gi bevis på dette LH/VEGF forholdet, har den presenterte protokollen som mål å vise at LH nivåer er i stand til å forutsi VEGF nivåer i nyrene. Mange tidligere VEGF-relaterte undersøkelser som involverer nyrene har brukt lavere orden pattedyr modeller (dvs. gnagere og kaniner)2. For å oversette dette arbeidet til menneskekroppen, undersøker studien forholdet mellom VEGF og LH i høyere orden pattedyr (her, storfe og svin modeller). For å gjennomføre dette målet, total protein lysat ble fremstilt fra cortex regionen av storfe og svin nyrer.
Anskaffelse nyrer fra for slakterier umiddelbart etter at dyret død er nøkkelen til suksess i denne metodikken. Dette er den største fordelen med å utnytte organer fra kyr og griser i stedet for menneskelig levningene. Det er vanligvis minst en 12-24 h forsinkelse fra tidspunktet for dødsfallet til menneskelige Cadaver organer er anskaffet. Fordi den kjemiske sammensetningen av kroppslige organer betydelig endringer innen 2 h etter obduksjon15,16, VEGF-studi…
The authors have nothing to disclose.
Forfatterne takker Scholl ‘ s slakteri (Blissfield, MI) for å gi storfe og svin nyrer. Ingen tilskuddsmidler ble benyttet for denne studien.
Bovine LH ELISA Kit | MyBiosource, San Diego, CA. | MBS700951 | |
Bovine VEGF-A ELISA Kit | MyBiosource, San Diego, CA. | MBS2887434 | |
Micro BCA Protein Assay Kit | ThermoFisher Scientific Inc, Columbus, OH. | 23235 | |
Porcine LH ELISA Kit | MyBiosource, San Diego, CA. | MBS009739 | |
Porcine VEGF-A ELISA | Ray Biotech, Norcross, GA. | ELP-VEGFA-1 | |
RIPA Lysis and Extraction Buffer | ThermoFisher Scientific Inc, Columbus, OH. | 89901 |