Summary
يهدف هذا البروتوكول إلى خلق تضخم تضخم التوعي الوريدي تجريبيًا عن طريق إخضاع الأوردة لضغط الدم الشرياني لتطوير استراتيجيات لتكبير تضخم التوعي الوريدي بعد جراحة إعادة الأوعية الدموية باستخدام طعوم الوريد.
Abstract
على الرغم من أن الطعوم الوريدية كانت شائعة الاستخدام كطعة ذاتية في جراحات إعادة الأوعية الدموية للأمراض الإقفارية ، فإن البزلة على المدى الطويل لا تزال ضعيفة بسبب تسارع تضخم تضخم الحجم بسبب التعرض لضغط الدم الشرياني. تم تصميم هذا البروتوكول لإنشاء تضخم الدمى الوبهي التجريبي عن طريق وضع عروق الوريد الوداجي للشرايين السباتية ipsilateral. البروتوكول لا يتطلب العمليات الجراحية في عمق جذع الجسم ومدى الشق محدود ، وهو أقل الغازية للحيوانات ، مما يسمح بالملاحظة على المدى الطويل بعد الزرع. هذا الإجراء البسيط يتيح للباحثين التحقيق في استراتيجيات للتخفيف من تطور تضخم تضخم الطعوم الإيحاء من الطعوم الوريد المزروعة. باستخدام هذا البروتوكول، أبلغنا عن تأثيرات نقل microRNA-145 (miR-145)، والتي من المعروف أنها تتحكم في النمط الظاهري لخلايا العضلات الملساء الوعائية (VSMCs) من الحالة التكاثرية إلى الحالة العقدية، إلى طعوم الأوردة المحصودة. أكدنا توهين تضخم تضخم الطعوم الأوردة عن طريق نقل miR-145 قبل جراحة الزرع من خلال تغيير النمط الظاهري لVSMCs. هنا نبلغ عن منصة تجريبية أقل الغازية للتحقيق في الاستراتيجيات التي يمكن استخدامها لتخفيف فرط التنسج الإيحاء من الطعوم الوريد في جراحات إعادة الأوعية الدموية.
Introduction
عدد المرضى الذين يعانون من أمراض نقص التروية بسبب تصلب الشرايين يتزايد في جميع أنحاء العالم1. على الرغم من التقدم الحالي في العلاجات الطبية والجراحية لأمراض القلب والأوعية الدموية ، لا تزال أمراض القلب الإقفارية ، مثل احتشاء عضلة القلب ، سببًا رئيسيًا للاعتلال والوفيات2. وعلاوة على ذلك، فإن أمراض الشرايين الطرفية التي تتميز بانخفاض تدفق الدم إلى الأطراف تحفز نقص التروية الحرجة في الأطراف، حيث يفقد ما يقرب من 40٪ من المرضى أرجلهم في غضون 6 أشهر من التشخيص، ومعدل الوفيات يصل إلى 20٪3.
تعتبر جراحات إعادة الأوعية الدموية، مثل تطعيم الشريان التاجي (CABG) وجراحة المجازة للشرايين الطرفية، خيارات علاجية رئيسية للأمراض الإقفارية. الغرض من هذه العمليات الجراحية هو توفير مسار دم جديد لتوفير تدفق دم كافٍ نحو الموقع المنقّف للآفات النسيّة أو المُسدّسة في الشرايين تصلب الشرايين. على الرغم من أن الطعوم الشريانية في الموقع ، مثل الشرايين الصدرية الداخلية لCABG ، مفضلة كترقيع اتجافي بسبب البزة الأطول المتوقعة ، فإن طعوم الأوردة ، مثل الأوردة الموسية الذاتية ، تستخدم عادة بسبب زيادة إمكانية الوصول والتوافر4. نقطة الضعف في الطعوم الوريد هو ضعف معدل البطي مقارنة مع الطعوم الشريان5 بسبب تسارع تضخم تضخم التعامي عند التعرض للضغط الشرياني، مما يؤدي إلى مرض الكسب غير المشروع الوريد6.
يتطور مرض الكسب غير المشروع في الوريد من خلال الخطوات الثلاث التالية: 1) تجلط الدم؛ 2) تضخم تضخم الضخامة؛ و 3) تصلب الشرايين7. من أجل معالجة مرض الكسب غير المشروع الوريد، وقد أجريت الكثير من البحوث الأساسية8. حتى الآن، لا ينصح استراتيجية الدوائية الأخرى من العلاجات المضادة للصفيحات والدهون خفض للوقاية الثانوية بعد جراحات إعادة الأوعية الدموية التاجية أو الطرفية في المبادئ التوجيهية الأخيرة9،10،11،12. وبالتالي ، للتغلب على مرض الكسب غير المشروع الوريد ، وخاصة تضخم تضخم الضخامة ، يلزم إنشاء منصة تجريبية ذات صلة لمزيد من الدراسات.
تضخم تضخم الضخامة هو ظاهرة التكيف التي تحدث استجابة للتغيير في المناطق المحيطة بها، حيث تتكاثر خلايا العضلات الملساء الوعائية (VSMCs) وتتراكم، وتولد مصفوفة خارج الخلية في intima. وبالتالي ، فإنه يقدم أساسا لطعم الروائح7. في intima فرط البلاستيك، VSMCs تحمل الانتشار، والإنتاج بدلا من الانكماش، ودعا "تغيير الفينوتيبيك"8. وهو هدف بحثي رئيسي للسيطرة على النمط الظاهري لVSMCs من الطعوم الوريد للوقاية من مرض الكسب غير المشروع الوريد، وقد أجريت العديد من الدراسات الأساسية حول هذا الموضوع8. ومع ذلك ، أظهرت دراسة سريرية معشاة ذات شواهد تهدف إلى تحقيق السيطرة الدوائية على النمط الظاهري VSMC نتائج محدودة13. وعلاوة على ذلك، لا توجد علاجات موحدة لمنع تضخم تضخم الضخامة. ومن الضروري إجراء المزيد من البحوث الأساسية، بما في ذلك دراسات النموذج الحيواني.
لتعزيز البحوث في هذا المجال، من الأهمية بمكان إنشاء نموذج الحيوان الذي يُحدّد الطعوم الأوردة تحت ضغط الدم الشرياني، مما يسمح بمراقبة طويلة الأمد بعد الجراحة. Carrel وآخرون أنشأت نموذج الكلاب لزرع الوريد الوداجي الخارجي في الشريان السباتي14. ثيراث، وقد استخدمت مجموعة متنوعة من الطعوم الوريد للتحقيق في الآثار الفسيولوجية والمرضية للتغيرات في ضغط الدم الشرياني، بما في ذلك الوريد الوريد السفلي المطعمة في الصدر أو الشريان الأورطا البطني، أو الوريد السفيني المطعمة في الشريان الفخذي15،16،17. تم بناء هذه النماذج في الحيوانات الكبيرة ، مثل الخنازير أو الكلاب ، التي هي مناسبة لمحاكاة مرض الكسب غير المشروع الوريد في حالة سريرية. ومع ذلك ، فإن إنشاء نموذج الحيوان الذي يمكن إعداده دون تقنيات جراحية خاصة وبتكلفة أقل سيكون مثاليًا للباحثين الذين يحاولون تطوير استراتيجية علاجية جديدة لتضخم تضخم التأيمن من خلال التحكم في النمط الظاهري VSMC في الجسم الحي. في البداية ، تم إدخال تداخل الوريد الوداجي في الشريان السباتي في أرنب في مجال جراحة الأعصاب18،19. بعد ذلك، تم تطبيقه على البحوث على فرط التنسج الذتيم20،21. النموذج الأولي يتكون من التشابك والوريد وحده، وبالتالي توفير الوقت. وعلاوة على ذلك، أظهرت دراسة لاحقة أن إعداد الكسب غير المشروع الوريد أثرت أيضا على فرط التنسج الإيحاء22. قام ديفيز وآخرون بتقييم تأثير إصابة القسطرة بالون على تضخم تضخم الضخامة في نموذج التطفل الوريدي للأرنب23,24. على الرغم من أن إصابة القسطرة بالون بالإضافة إلى تطفل الوريد كانت أكثر صلة بالإعداد السريري ، كان من المرغوب أيضًا نموذج أكثر قابلية للتكرار. وهكذا، درس جيانغ وآخرون تأثير بيئات التدفق التفاضلي على تضخم تضخم الضخامة وأسسوا إجراء ربط الفروع القاصي كنموذج قابل للاستنساخ25. ومع ذلك ، استخدموا تقنية الكفة في وقت الترقيع الوريد الكسب غير المشروع الذي يبدو مختلفا عن الأنف سالفي في الإعداد السريري. في هذا البروتوكول، نبلغ عن إجراء قابل للاستنساخ وذي صلة سريرية ومتاح على نطاق واسع لإعداد نموذج تداخل وبوعور ة أرنب لتقييم تضخم تضخم الضخامة تحت ضغط الدم الشرياني.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
ملاحظة: يجب إجراء جميع العمليات الجراحية على الحيوانات وفقًا لدليل رعاية واستخدام الحيوانات المختبرية (www.nap.edu/catalog/5140.html) أو غيرها من المبادئ التوجيهية الأخلاقية المناسبة. وينبغي أن توافق لجنة رعاية الحيوان في المؤسسة المختصة على البروتوكولات قبل الشروع فيها.
1. إعداد الحيوانات
- شراء الأرانب البيضاء اليابانية الذكور (أو الأرانب مع ما يعادل حجم الجسم) وزنها 2.7-3.0 كجم.
- تكييف الأرانب لمدة أسبوع واحد في دورة 12 ساعة ضوء والظلام وتغذية النظام الغذائي تشاو الأرانب العادية قبل الإجراء.
2. التخدير ووضع الحيوان
ملاحظة: يجب تنفيذ كافة الإجراءات اللاحقة في ظل ظروف التعقيم. يجب تطهير المجال الجراحي والأجهزة مع محلول اليود povidone 1٪ أو الكحول بنسبة 70٪ أو مركب الأمونيوم الرباعي قبل الاستخدام.
- التخدير أرنب مع إعطاء الوريد من الصوديوم pentobarbital (25 ملغ / كغ) عن طريق الوريد الأوري.
- بعد التأكد من أن الأرنب قد فقد قوته ، نقله إلى طاولة العمليات ، ووضعه في وضع السبين. تغطية الأنف والفم مع قناع مخدر. بدء إدارة التخدير العام مع استنشاق 0.7-1.0٪ مزيج الاكسجين الازهولوران.
ملاحظة: إذا بدأ الأرنب في التحرك، فإن الطفرة الزمنية في الإيسوفلوران تصل إلى 2٪ ستكون فعالة. - تقليم الفراء على الرقبة والكتف باستخدام مقص الشعر الكهربائية. بعد تطهير السطح عن طريق رش 70٪ الإيثانول أو محلول مطهر آخر ، قم بحلاقة بقية الشعر في منطقة عنق الرحم بشفرة حلاقة. تطهير المجال الجراحي مع 10٪ povidone-اليود وإدارة هيدروكلوريد الليدوكائين (3 ملغ / كغ) تحت الجلد كتخدير موضعي.
ملاحظة: فحص الحركة المتكررة للالقصبة الهوائية. لاحظ نبض الوريد الوداجي والشريان السباتي. عندما تنخفض معدلات الجهاز التنفسي والنبض، فكر في تقليل مؤقت في إدارة التخدير. مراقبة تشبع الأكسجين عن طريق الجلد ومعدل النبض مفيد أيضًا.
ملاحظة: يمكن إيقاف البروتوكول مؤقتًا هنا.
3. حصاد الوريد الوداجي
ملاحظة: يجب استخدام التخدير الموضعي (مثل الليدوكائين) قبل إجراء شق الجلد.
- قبل شق الجلد، وإدارة enrofloxacin الوقائية (5 ملغ / كغ) تحت الجلد. للمسكن، وإدارة 0.05 ملغ/ كجم من البوبرينورفين تحت الجلد مرتين في اليوم لمدة 3 أيام.
ملاحظة: لتجنب انخفاض في درجة حرارة الجسم، يمكن استخدام فرك الجراحية من موقع شق بدلا من رش جسم الحيوان مع الإيثانول 70٪. - Incise 50-60 ملم من منطقة عنق الرحم مع مشرط الجراحية طوليا. تشريح بصراحة الأنسجة تحت الجلد واللفافة لفضح شريحة 20-30 ملم من الوريد الوداجي. Ligate جميع فروع الوريد المكشوف مع 4-0 خيوط الحرير.
- ضع خياطة حريرية 2-0 حول الأوردة الوداجية الداخلية والخارجية لإجراء الربط مباشرة بعد شق الوريد الوداجي في الخطوة التالية.
- القوافي الجدار وينو (حوالي 1 مم) من الجانب القاصي من الوريد. أدخل قسطرة بالون 2-فرنسي من القطع نحو الجانب القريب من الوريد. Ligate خياطة الحرير 2-0 في المواقع القاصية من الأوردة الوداجية.
- تضخيم البالون مع 0.2 مل من الهواء. denude intima من الوريد باستخدام ثلاثة ممرات من القسطرة لتقشير البطانية.
ملاحظة: يعتبر هذا الإجراء يعادل تنكس الترقيع في جراحة إعادة الأوعية الدموية البشرية، مما يسبب تقشير الانهواثيل. - Ligate نهاية قريبة من الوريد. قطع الوريد للحصاد.
ملاحظة: تميز بعناية الطرف المنفّر والقريب من الوريد المحصود، لأن الأنستوموسيس إلى الشريان يجب أن يتم بطريقة مقلوبة (أي أن الطرف المنفّت من الوريد يجب أن يكون مُنهوداً إلى الطرف القريب من الشريان). على سبيل المثال، فإن إدخال قسطرة وريدية من جانب معين سيعمل كعلامة. - للتلاعب العلاجي للوريد الوداجي حصادها، وعلاج الوريد حصادها مع أساليب مصممة لكل سؤال البحث (على سبيل المثال، الكهربية26 أو الغمر المباشر مع حلول27 لنقل microRNAs في الأوردة).
ملاحظة: لهذا البروتوكول، تم نقع الطعوم الوريد في المالحة المخزنة مؤقتاالفوسفات، والتحكم الحمض النووي الريبي، وmicroRNA-145. يمكن إيقاف البروتوكول مؤقتًا هنا.
4. تداخل الشريان السباتي من الوريد الوداجي حصادها
- كشف شريحة 20-30 ملم من الشريان السباتي ipsilateral. فصل الشريان بعناية عن الوريد والعصب القريب. Ligate جميع فروع الوريد المكشوف مع 4-0 خياطة الحرير.
- إعطاء الصوديوم الهيبارين عن طريق الوريد (200 وحدة دولية / كجم). انتظر 3-4 دقيقة.
- المشبك نهايات قريبة والبعيدة من الشريان مع المشابك الجراحية. قطع الشريان في الوسط، بين المشابك. حقن المالحة العادية في الشريان السباتي المنقطع عن قرب وذهول لتشتيت الشريان.
ملاحظة: الشريان السباتي الأرنب يميل إلى الانكماش. اختر موقعًا رائعًا كموقع أنستوموسيس. - Anastomose الوريد حصادها إلى الشريان في عكس طريقة نهاية إلى نهاية.
- أدخل قسطرة وريدية 20 غ في الوريد المحصوص من القاصي إلى الاتجاه القريب للحفاظ على التجويف الوريدي مفتوحًا أثناء الأنستوموسيس المنفحي.
- Anastomose الطرف القريب من الوريد إلى نهاية distal من الشريان باستخدام 8-0 البولي بروبلين توقف الغرز. ضع اثنين من المرساة في الموقع والموقع المقابل. إضافة stiches الجانب العلوي من خط anastomosis بين المرساة stiches.
- قلب الشريان والوريد الكسب غير المشروع رأسا على عقب. إضافة stiches على الجزء المتبقي من خط الانستوموموسيس.
- إزالة القسطرة الوريدية من الوريد. المشبك الكسب غير المشروع الوريد عن قرب وإزالة المشبك الشريان السباتي بشكل ذهول. تأكد من أن الكسب غير المشروع الوريد يتوسع تدريجيا.
- Anastomose نهاية القاصي من الوريد إلى الطرف القريب من الشريان باستخدام 8-0 البولي بروبلين توقف الغرز. فك المشبك الشريان للتحقق من النزيف من مواقع anastomosis. إضافة الغرز لhemostasis، إذا لزم الأمر.
ملاحظة: قد يكون الضغط اللطيف لموقع النزيف مع الشاش والانتظار كافيًا لداء الهيموساسي. تحقق من التوسع الفوري والنبض القوي للطعم الوريد بعد الارتطاب القريب. إذا لم يتم ملاحظة ذلك، ففكر في تكرار الخطوات 4.4.2-4.4.3
- Ligate الشريان السباتي الداخلي مع خياطة الحرير 4-0 لمحاكاة حالة الجريان البور سيئة وتسهيل تضخم تضخم الضخامة.
- نظف الجرح بالمالحة أغلق الجرح باستخدام 3-0 polyglactin 910، طبقة بطبقة.
5- إجراءات ما بعد الجراحة
- إنهاء التخدير وإزالة قناع التخدير بعد التحقق من التنفس التلقائي للصورة. تحقق من ظروف الحيوان بشكل متكرر حتى يتعافى من التخدير.
- الحفاظ على الحيوان منفصلة عن الحيوانات الأخرى حتى يتم استعادة وظيفة الجهاز التنفسي تماما. دعم التنفس يدويا، إذا لزم الأمر. لا ترجع الحيوان إلى مجموعة أكبر حتى يتعافى تمامًا.
- تحقق من تناول الطعام والماء بعد التعافي من التخدير وتوفير الدعم الغذائي المناسب. إعطاء المسكنات (على سبيل المثال، البوبرينورفين 0.05-0.2 ملغ/كغ تحت الجلد 2x يوميا لمدة 3 أيام) والتحقق من علامات عدم الراحة أو الألم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
يوضح الشكل 1A صورة تمثيلية لتضخم تضخم الضخامة الناجح في أسبوعين بعد جراحة التطفل والوريد (اللوحة العلوية). تظهر اللوحة السفلية الآثار العلاجية للبولي المحملة بميكرورنا-145 (حمض الجليكوليك المشترك باللاكتيك) الجسيمات النانوية التي ألتوهِض تنقص فرط التنسج الإيحاء (اللوحة السفلية). ويبين الشكل 1باء مقارنة فرط التنسج الإيحاءي بين مجموعة التحكم باستخدام التحكم المالح المؤقت الفوسفات (PBS)، والتحكم في الحمض النووي الريبي (Cont-miR)، ومجموعات microRNA-145 (miR-145). تم تحميل MicroRNAs مع بولي (حمض الجليكوليك المشترك اللاكتيك) الجسيمات النانوية. العلاج مع microRNA-145 تخفيف كبير تضخم الضخامة. يُظهر الشكل 2 المناعة لـ Ki-67، وهي علامة تكاثرية للخلايا. ويلاحظ عدد أقل من الخلايا الإيجابية من طراز Ki-67 في مجموعة miR-145، مما يشير إلى تغير النمط الظاهري في VSMCs من حالة التكاثر غير الناضجة إلى حالة العقد الناضجة.
الشكل 1: تضخم البلجة الإيحاء ية الناجحة في الأوردة. (أ)النائب مرونة فان غزون تلطيخ للعينات المعالجة مع برنامج تلفزيوني (اللوحة العليا) ومع البولي microRNA-145 محملة (حمض الجليكوليك اللاكتيك co-co) الجسيمات النانوية (لوحة أقل). أشرطة مقياس = 500 ميكرومتر .(ب)منطقة intimal في مجموعة برنامج تلفزيوني التحكم، مجموعة التحكم microRNA (Cont-miR)، وmicroRNA-145 (miR-145) مجموعات. يتم تحميل MicroRNAs مع بولي (حمض الجليكوليك المشترك اللاكتيك) الجسيمات النانوية. وأجريت تحليلات إحصائية باستخدام تحليل التباين في اتجاه واحد. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: انتشار الخلايا. كي-67 تلطيخ (بني). أشرطة مقياس = 100 ميكرومتر. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3: المخطط الإجرائي. الحمض النووي = حمض ديوكسيريبونوكيك؛ PLGA = بولي (حمض الجليكوليك المشترك اللاكتيكي)؛ الحمض النووي الريبي = حمض الريبونوكليك. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
تم تصميم هذا البروتوكول لتوفير منصة تجريبية لاختبار مختلف التدخلات الجزيئية أو الوراثية لVSMCs للسيطرة على النمط الظاهري من الانتشار إلى الحالة العقدية وتاليا ً تخفيف تطور تضخم الدم الإيتيفي وواني في الجسم الحي. باستخدام هذا النموذج، قمنا بإعداد تضخم تضخم يتيمي بنجاح في 2 أسابيع بعد الجراحة(الشكل 1A)وأشار إلى الإمكانات العلاجية لmicroRNA-145 للسيطرة على النمط الظاهري VSMC26,27, التحقق من صحة البروتوكول الحالي كنموذج لمزيد من التحقيق في التوهين من تضخم تضخم الوريد الإيتيفي.
يتكون نموذج تضخم الزمرة الإيحاءي لدينا من الخطوات الرئيسية الثلاث التالية: 1) إصابة القسطرة. 2) تتشابك الأوردة الوداجية؛ و 3) ربط فرع القاصي(الشكل 3). وتبين أن الطعوم الوريدية المصابة بممر قسطرة بالون قد تم تحويلها إلى دينوثيليال، وثبت أن الإنتيما هي فرط البلاستيك23،28. في هذا البروتوكول، نعتبر ترقيع الأوردة المصاب بالقسطرة ترقيعات الأوردة السمحية التي غالباً ما يتم الضغط عليها يدوياً وتمددها في الإعدادات السريرية لإجراءات مثل تطعيم الشريان التاجي أو الشريان المحيطي الالتفافي. وعلاوة على ذلك، عززت ربط فرع الضخامة تضخم الضخامة بسبب انخفاض معدل التدفق25. في نموذج التدفق المنخفض المبلغ عنه، حيث تم ربط الشريان السباتي الداخلي وجميع الشرايين السباتية الخارجية باستثناء الفرع الأكثر أدنى، وكان النيوينتيما أكثر تعزيزا بالمقارنة مع ذلك في نموذج التدفق العالي مع عدم وجود ربط فرع المنفأ. وعلى النقيض من ذلك، لم يتضمن ربط الفرع المنفّذ في هذا البروتوكول ربط الشريان السباتي الخارجي لتبسيط الإجراءات وتقليلها، وقد يؤدي ربط الشريان السباتي الخارجي الإضافي في البروتوكول الحالي إلى زيادة التقدم النيوينتي.
وقد وضعت نماذج تضخم الزمرة الإيحاء القائمة لمتابعة إما الاستنساخ أو الصلاحية السريرية. النموذج الأولي تتألف فقط من الوريد الوداجي21. بعد ذلك تم إجراء بعض التعديلات ، بما في ذلك إصابة القسطرة أو ربط الفرع القاصي ، لزيادة مدى تضخم تضخم الضخامة23،25. في المقابل، كنا نستهدف إنشاء نموذج استنساخي يشبه حالة سريرية، حيث المرضى الذين يعانون من مرض السكري أو مرض الشريان المحيطي غالباً ما يقدمون التروية الضعيفة على الدورة الدموية التاجية أو السفلية. وعلاوة على ذلك، وغالبا ما يتم الطعوم الوريد السفيني يدويا من خلال الضغط29الهيدروستاتيكي الذي يسبب تقشير الانفوال29. وبالنظر إلى هذه العوامل المتعددة التي تؤدي إلى تضخم تضخم التميّز، اعتمدنا نموذج التطفل الوريدي المختلط إلى جانب الإجراءين الإضافيين، محاكيين جراحة إعادة الأوعية الدموية.
يتطلب هذا الإجراء تشريحًا جراحيًا على طبقات سطحية نسبيًا من الجسم ، ويقتصر الشق الجراحي على منطقة عنق الرحم ، مما يجعله أقل توغلًا للحيوانات ، مما يؤدي إلى ارتفاع معدل البقاء على قيد الحياة ، وتسهيل المراقبة على المدى الطويل. يتم إجراء الأناسموس الجراحي على مستوى سطح الجسم. وهذا يمكّن الباحثين المختلفين، وليس الجراحين فقط، من إجراء العملية. والخطوة الحاسمة الوحيدة هي إجراء الانستموسيس المذكور في الخطوة 4-4. قد يؤدي التضيق غير الدقيق إلى تضيق أو انسداد في موقع أنسيتوموسيس. عندما 8-0 يتم إنشاء خيوط البولي بروبلين، ويوصى باستخدام التلسكوبات الجراحية مع التكبير ما لا يقل عن 2.5x. كما هو موضح في تقرير آخر تناول نموذج تضخم الزاخرة الإيحاء الأرنب26, 10-0 الغرز مع المعونة من 10x مجاهر السلطة سيكون من المفيد أيضا. بعد اتقان نموذجنا، وكان معدل لدينا patency من الكسب غير المشروع الوريد المزروعة في 2 أسابيع بعد العملية الجراحية 90.9٪. ميزة أخرى لنموذجنا هو انخفاض تكلفة الإجراء نسبيا بالمقارنة مع تلك التي من التجارب الحيوانية الكبيرة. ويمكّن ذلك المحققين من زيادة الحجم التجريبي للقيام بعدد أكبر من التدخلات.
هذا النموذج التّرّفيهو أكثر صلة سريريّاً, سهل التعامل معه, و منخفض التكلفة. ويمكن تطبيقه على نماذج أكبر من الحيوانات واستخدامها للدراسات السريرية. على الرغم من أن نماذج الكابوين والكلاب قد تم تطويرها30،31،32، فهي تتطلب من الناحية الفنية. وقد تم إنشاء نموذج وريد الوداجي porcine التي تتكون من الانسياق الوداجي وحيد33. وبالتالي، فمن الممكن أن يتم تنفيذ الإجراءين من إصابة القسطرة والربط فرع القاصي بالإضافة إلى ذلك كونها أكثر صحة.
احتمال آخر هو تطبيق نموذجنا على نموذج تداخل الماوس وبوعورة. واعتمد نموذج تداخل الفئران وبوظة الماوس تقنية الكفة المطلوبة تقنيا للتحايل على anastomosis المباشر34. في مجال مرض الكسب غير المشروع الوريد، نماذج الماوس التجريبية، فضلا عن نماذج الحيوانات أكبر وقد استخدمت عادة35. وتشمل هذه نماذج تضخم تضخم الضخامة والوريد الكسب غير المشروع نماذج atheroma36. التقنيات التي تنطوي عليها التحضير لنماذج تضخم تضخم في الفئران تشمل ربط الشريان السباتي37, إصابة الأسلاك38, والوريد ، وإصابة طوق39. في نماذج الروائح الطعم الوريد، وتستخدم الفئران المعدلة وراثيا عادة في نماذج تجريبية الماوس، على النقيض من النماذج الحيوانية أكبر. نموذج تداخل وبونا مختلط مع ربط الشريان السباتي في الفئران المعدلة وراثيا سيكون أكثر ملاءمة سريريا.
تقييد الإجراء الحالي هو أن نمط التدفق في موقع الوريد المتوسط ليس هو نفسه نمط ترقيع الأوردة في العمليات الجراحية البشرية. على وجه الخصوص ، يتم توفير تدفق الدم من الطعوم الوريد على CABG في المرحلة الانبساطية ، حيث يختلف نمط التدفق عن ذلك في المرحلة الانقباضية. وثمة قيد آخر هو أن إنشاء نماذج الحيوانات التي تُلخص أصل التفريط في التزهي مُتوسطاً في تصلب الشرايين في البشر أمر صعب. استخدام الحيوانات المعدلة وراثيا مع ضعف التمثيل الغذائي للدهون أو على اتباع نظام غذائي عالي الدهون قد يساعد في التغلب على هذا القيد في المستقبل.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.
Acknowledgments
وقد دعم هذا العمل منح بحثية من وزارة التعليم والثقافة والرياضة والعلوم والتكنولوجيا في اليابان (25462136).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 10% Povidone-iodine solution | Nakakita | 872612 | Surgical expendables |
| 2-0 VICRYL Plus | Johnson and Johnson | VCP316H | Surgical expendables |
| 4-0 Silk suture | Alfresa pharma | GA04SB | Surgical expendables |
| 8-0 polypropylene suture | Ethicon | 8741H | Surgical expendables |
| Cefazorin sodium | Nichi-Iko Pharmaceutical | 6132401D3196 | Antibiotics |
| Fogarty Catheter (2Fr) | Edwards Lifesciences LLC | E-060-2F | Surgical expendables |
| Heparin | Nipro | 873334 | Anticoagulant |
| Intravenous catheter (20G) | Terumo | SR-OT2051C | Surgical expendables |
| Isoflurane | Fujifilm | 095-06573 | Anesthesia |
| Lidocaine hydrochloride | MP Biomedicals | 193917 | Anesthesia |
| Pentobarbital sodium | Tokyo Chemical Industry | P0776 | Anesthesia |
References
- Causes of death, 2000-2016, Global Health Estimates (GHE). World Health Organization (WHO). , Available from: https://www.who.int/healthinfo/global_burden_disease/estimates/en/ (2019).
- Benjamin, E. J., et al. Heart Disease and Stroke Statistics-2019 Update: A Report From the American Heart Association. Circulation. 139 (10), 56 (2019).
- Norgren, L., et al. Inter-Society Consensus for the Management of Peripheral Arterial Disease (TASC II). Journal of Vascular Surgery. 45, Suppl S 5-67 (2007).
- Caliskan, E., et al. Saphenous vein grafts in contemporary coronary artery bypass graft surgery. Nature Reviews: Cardiology. , (2020).
- Goldman, S., et al. Long-term patency of saphenous vein and left internal mammary artery grafts after coronary artery bypass surgery: results from a Department of Veterans Affairs Cooperative Study. Journal of the American College of Cardiology. 44 (11), 2149-2156 (2004).
- Muto, A., Model, L., Ziegler, K., Eghbalieh, S. D., Dardik, A. Mechanisms of vein graft adaptation to the arterial circulation: insights into the neointimal algorithm and management strategies. Circulation Journal. 74 (8), 1501-1512 (2010).
- Motwani, J. G., Topol, E. J. Aortocoronary saphenous vein graft disease: pathogenesis, predisposition, and prevention. Circulation. 97 (9), 916-931 (1998).
- Schachner, T. Pharmacologic inhibition of vein graft neointimal hyperplasia. Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 131 (5), 1065-1072 (2006).
- Kulik, A., et al. Secondary prevention after coronary artery graft surgery: a scientific statement from the American Heart Association. Circulation. 131 (10), 927-964 (2015).
- Gerhard-Herman, M. D., et al. 2016 AHA/ACC Guideline on the Management of Patients With Lower Extremity Peripheral Artery Disease: Executive Summary: A Report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Clinical Practice Guidelines. Circulation. 135 (12), 686-725 (2017).
- Aboyans, V., et al. 2017 ESC Guidelines on the Diagnosis and Treatment of Peripheral Arterial Diseases, in collaboration with the European Society for Vascular Surgery (ESVS): Document covering atherosclerotic disease of extracranial carotid and vertebral, mesenteric, renal, upper and lower extremity arteries Endorsed by: the European Stroke Organization (ESO) The Task Force for the Diagnosis and Treatment of Peripheral Arterial Diseases of the European Society of Cardiology (ESC) and of the European Society for Vascular Surgery (ESVS). European Heart Journal. 39 (9), 763-816 (2018).
- Neumann, F. J., et al. 2018 ESC/EACTS Guidelines on myocardial revascularization. European Heart Journal. 40 (2), 87-165 (2019).
- Alexander, J. H., et al. Efficacy and safety of edifoligide, an E2F transcription factor decoy, for prevention of vein graft failure following coronary artery bypass graft surgery: PREVENT IV: a randomized controlled trial. Journal of the American Medical Association. 294 (19), 2446-2454 (2005).
- Carrel, A., Guthrie, C. C. Uniterminal and biterminal venous transplantations. Surgery, Gynecology and Obstetrics. 2 (3), 266-286 (1906).
- Nabatoff, R. A., Touroff, A. S. The maximal-size vein graft feasible in the replacement of experimental aortic defects, long term observations concerning the function and ultimate fate of the graft. Bulletin of the New York Academy of Medicine. 28 (9), 616 (1952).
- Kanar, E. A., et al. Experimental vascular grafts. I. The effects of dicetyl phosphate on venous autografts implanted in the thoracic aorta of growing pigs: a preliminary report. Annals of Surgery. 138 (1), 73-81 (1953).
- Jones, T. I., Dale, W. A.
- Stehbens, W. E. Experimental production of aneurysms by microvascular surgery in rabbits. Vascular Surgery. 7 (3), 165-175 (1973).
- Bannister, C. M., Mundy, L. A., Mundy, J. E. Fate of small diameter cervical veins grafted into the common carotid arteries of growing rabbits. Journal of Neurosurgery. 46 (1), 72-77 (1977).
- Bergmann, M., Walther, N. Ultrastructural changes of venous autologous bypass grafts in rabbits: correlation of patency and development. Basic Research in Cardiology. 77 (6), 682-694 (1982).
- Murday, A. J., et al. Intimal hyperplasia in arterial autogenous vein grafts: a new animal model. Cardiovascular Research. 17 (8), 446-451 (1983).
- Quist, W. C., LoGerfo, F. W. Prevention of smooth muscle cell phenotypic modulation in vein grafts: a histomorphometric. Journal of Vascular Surgery. 16 (2), 225-231 (1992).
- Davies, M. G., Dalen, H., Svendsen, E., Hagan, P. O. Influence of perioperative catheter injury on the long-term vein graft function and morphology. Journal of Surgical Research. 66 (2), 109-114 (1996).
- Davies, M. G., Dalen, H., Svendsen, E., Hagan, P. O. Balloon catheter injury and vein graft morphology and function. Annals of Vascular Surgery. 10 (5), 429-442 (1996).
- Jiang, Z., et al. A novel vein grat model: adaptation to differential flow environments. American Journal of Physiology Heart and Circulatory Physiology. 286 (1), 240-245 (2004).
- Ohnaka, M., et al. Effect of microRNA-145 to prevent vein graft disease in rabbits by regulation of smooth muscle cell phenotype. Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 148 (2), 676-682 (2014).
- Nishio, H., et al. MicroRNA-145-loaded poly(lactic-co-glycolic acid) nanoparticles attenuate venous intimal hyperplasia in a rabbit model. Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 157 (6), 2242-2251 (2019).
- Ohno, N., et al. Accelerated reendothelialization with suppressed thrombogenic property and neointimal hyperplasia of rabbit jugular vein grafts by adenovirus-mediated gene transfer of C-type natriuretic peptide. Circulation. 105 (14), 1623-1626 (2002).
- Osgood, M. J., et al. Surgical vein graft preparation promotes cellular dysfunction, oxydative stress, and intimal hyperplasia in human saphenous vein. Journal of Vascular Surgery. 60 (1), 202-211 (2014).
- Shintani, T., et al. Intraoperative transfection of vein grafts with the NFkappaB decoy in a canine aortocoronary bypass model: a strategy to attenuate intimal hyperplasia. Annals of Thoracic Surgery. 74 (4), 1132-1137 (2002).
- Petrofski, J. A., et al. Gene delivery to aortocoronary saphenous vein grafts in a large animal model of intimal hyperplasia. Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 127 (1), 27-33 (2004).
- Steger, C. M., et al. Neointimal hyperplasia in a porcine model of vein graft disease: comparison between organ culture and coronary artery bypass grafting. European Surgery. 43 (3), 174-180 (2011).
- Thim, T., et al. Oversized vein grafts develop advanced atherosclerosis in hypercholesterolemic minipigs. BMC Cardiovascular Disorders. 12 (24), (2012).
- Zou, Y., et al. Mouse model of venous bypass graft arteriosclerosis. American Journal of Pathology. 153 (4), 1301-1310 (1998).
- de Vries, M. R., Simons, K. H., Jukema, J. W., Braun, J., Quax, P. H. Vein graft failure: from pathophysiology to clinical outcomes. Nature Reviews Cardiology. 13 (8), 451-470 (2016).
- Dietrich, H., et al. Rapid development of vein graft atheroma in ApoE-deficient mice. American Journal of Pathology. 157 (2), 659-669 (2000).
- Kumar, A., Lindner, V. Remodeling with neointima formation in the mouse carotid artery after cessation of blood flow. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 17 (10), 2238-2244 (1997).
- Lindner, V., Fingerie, J., Reidy, M. A.
- Moroi, M., et al. Interaction of genetic deficiency of endothelial nitric oxide, gender, and pregnancy in vascular response to injury in mice. Journal of Clinical Investigation. 101 (6), 1225-1232 (1998).
