老鼠肝脏组织血管多光子微观观测
Summary
在这个实验中，一只老鼠的尾静脉中注射了可染色血管的罗达明B异氰酸酯。肝脏暴露和固定后，可以选择肝脏的特定部分使用多光子显微镜观察活体的深层组织。
Abstract
观察小鼠肝组织的血管内动力学，使我们能够对小鼠肝脏组织相关疾病进行进一步的深入观察和研究。老鼠被注射一种染料，可以染色血管。要观察小鼠肝脏的体内，它被暴露和固定在一个框架中。使用多光子显微镜获取肝脏组织中血管的二维和三维图像。不断获取选定地点的组织图像，以观察长期变化：还观察到肝组织血管的动态变化。多光显微镜是观察深层组织部分或器官细胞和细胞功能的一种方法。多光子显微镜对组织微观结构具有敏感性，能够在体内以高空间分辨率成像生物组织，从而能够捕获组织的生化信息。多光子显微镜用于观察肝脏的一部分，但修复肝脏，使图像更稳定是有问题的。在这个实验中，一种特殊的真空吸盘用于修复肝脏，并在显微镜下获得更稳定的肝脏图像。此外，该方法还可用于通过用染料标记此类物质来观察肝脏中特定物质的动态变化。
Introduction
血管可以为人体的各种器官组织提供营养，并交换物质。同时，许多细胞因子、激素、药物和细胞也通过血管输送到特定位置而发挥作用。观察肝组织血管变化有助于了解肝组织中血流的分布和物质的输送，有助于分析某些血管相关疾病1、2。
有许多方法可以观察小鼠肝脏的血管。其中，光学显微镜在观察不透明血管组织3方面有许多局限性。多光子显微镜可用于用非侵入性高分辨率4对活体肝脏的血管进行成像。不仅可以获得血管的三维图像，而且该技术还可用于组织组织观察其中的生物效应：此外，整个组织可以成像，而不仅仅是微维塞尔在计算断层扫描和磁共振成像5。
多光子显微镜可用于有效检测深层活组织中零散的荧光信号，光毒性6较小。因此，可以保证活组织的活动，减少损伤。多光子显微镜比共聚焦显微镜具有更好的穿透力，可观察到更深的层7，提供独特的3D成像。多光子显微镜现在常用于成像颅神经8，并已扩展到活小鼠9，10，11的神经元动力学研究。
在这个实验中，在老鼠血管的荧光标记后，肝脏固定在一个框架中，使用多光谱显微镜可以看到活体肝组织中血管的动力学。本实验演示了如何标记特定物质，使用多光子显微镜帮助观察组织内的位置，观察细胞间组织的细胞事件，进行光化学测量12，13，14，并观察活组织15内的物质动力学。例如，肿瘤内皮标记1（TEM1）已被确定为一种新的表面标记，在血管和频闪在许多实体肿瘤，标记单链变量片段（scFv）78对TEM1，然后多光子显微镜可用于小鼠血管瘤的位置和肿瘤16的评估。
Protocol
Representative Results
Discussion
观察特定的活组织是了解组织内物质变化、定位和生物影响的有效手段。在这个实验中，重要的步骤是用器官成像固定装置固定肝脏，它可以解决呼吸和心跳导致的运动神器问题，并使用多光子显微镜进行观察。使用这种方法，通过多光子显微镜观察肝脏体内的内部组织，并荧光标记血管，以清楚地观察其位置和三维结构。这种方法可用于观察特定效果，通过荧光标记物质和动?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作得到了中国国家自然科学基金委员会（81772133） 的支持。 81902444）、广东省自然科学基金（2020A1515010269、2020A15150111367）、广州市公民健康科技研究项目（201803010034、201903010072）和军事医学创新项目（17CXZ008）。
Materials
| 1 mL syringe x 2 | Hunan Pinan Medical Devices Technology | YA0551 | |
| 5 W heating pad | BiolinkOptics Technology | BL336 | |
| 75% absolute ethanol | Guangdong Guanghua Sci-Tech | 1.17113.023 | |
| Absorbent cotton ball | Healthy Sanitation Kingdom | ||
| Mouse surgical instrument | RWD Life Science | SP0001-G | Including scissors and tweezers |
| Multiphoton microscopy | Olympus | FV1200MPE | |
| Organ imaging fixture | BiolinkOptics Technology | BL336 | Including suction cup, hose, negative pressure pump and bracket |
| Rhodamine B isothiocyanate–Dextran | Sigma | R9379 | |
| Shaving machine | Lei Wa | RE-3201 | |
| Sodium pentobarbital | Sigma | P3761-25G |
References
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