यह प्रोटोकॉल मस्तिष्क फैलाना एक्सोनल चोट (दाई) के एक विश्वसनीय, आसान-से-प्रदर्शन और प्रजनन योग्य कृंतक मॉडल को मान्य करता है जो खोपड़ी फ्रैक्चर या कॉन्टसेशन के बिना व्यापक सफेद पदार्थ क्षति को प्रेरित करता है।
दर्दनाक मस्तिष्क की चोट (टीबीआई) मौत और विकलांगता का एक प्रमुख कारण है। फैलाना अक्षीय चोट (DAI) टीबीआई रोगियों के एक बड़े प्रतिशत में चोट का प्रमुख तंत्र है जो अस्पताल में भर्ती होने की आवश्यकता होती है। दाई मिलाते हुए, रोटेशन या विस्फोट की चोट से व्यापक अक्षीय क्षति शामिल है, तेजी से एक्सोनल खिंचाव चोट और माध्यमिक अक्षीय परिवर्तन है कि कार्यात्मक वसूली पर एक लंबे समय तक चलने वाले प्रभाव के साथ जुड़े रहे है के लिए अग्रणी । ऐतिहासिक रूप से, फोकल इंजरी के बिना दाई के प्रायोगिक मॉडलडिजाइन करना मुश्किल रहा है। यहां हम दाई के एक सरल, प्रजनन योग्य और विश्वसनीय कृंतक मॉडल को मान्य करते हैं जो खोपड़ी फ्रैक्चर या कॉन्टसेशन के बिना व्यापक सफेद पदार्थ क्षति का कारण बनता है।
दर्दनाक मस्तिष्क की चोट (टीबीआई) संयुक्त राज्य अमेरिका में मौत और विकलांगता का एक प्रमुख कारण है। टीबीआई सभी चोट से संबंधित मौतों के बारे में 30% के लिए योगदान1,2. टीबीआई के प्रमुख कारण आयु समूहों के बीच भिन्न होते हैं और इसमें गिरता है, खेल के दौरान उच्च गति की टक्कर, जानबूझकर आत्म-हानि, मोटर वाहन दुर्घटनाओं और हमले1,,2,,3शामिल हैं।
ब्रेन डिफ्यूज एक्सोनल इंजरी (दाई) एक विशिष्ट प्रकार की टीबीआई है जो मस्तिष्क के घूर्णन त्वरण, झटकों या विस्फोट की चोट से प्रेरित होती है जिसके परिणामस्वरूप चोट4,,5,,66,7,,8के बाद तत्काल में अप्रतिबंधित सिर आंदोलन होता है। दाई में व्यापक अक्षीय क्षति शामिल है जिससे लंबे समय तक चलने वाली न्यूरोलॉजिकल हानि होती है जो खराब परिणाम, भारी स्वास्थ्य देखभाल लागत, और 33-64% मृत्यु दर1,,2,,4,,5,,9,,10,,11से जुड़ी होती है। दाई के रोगजनन में हाल ही में हुए महत्वपूर्ण शोध के बावजूद, सर्वोत्तम उपचारविकल्प11,12,13,,14पर आम सहमति नहीं बन पाई है ।
पिछले दशकों में, कई प्रयोगात्मक मॉडलों ने दाई11,,12,15,,16के विभिन्न पहलुओं को सही ढंग से दोहराने का प्रयास किया है।, हालांकि, इन मॉडलों में अन्य फोकल चोटों की तुलना में दाई की अनूठी प्रस्तुति दी गई सीमाएं हैं। ये पूर्व मॉडल न केवल सफेद पदार्थ क्षेत्रों में अक्षीय चोट का कारण बनते हैं बल्कि फोकल सेरेब्रल चोटों का भी परिणाम है। चिकित्सकीय रूप से, दाई माइक्रो नकसीर के साथ है, जो सफेद पदार्थ को नुकसान का एक प्रमुख कारण बन सकता है।
दाई की प्रमुख नैदानिक विशेषताओं को दोहराने के लिए केवल दो पशु मॉडल दिखाए गए हैं। Gennarelli और सहयोगियों ने १९८२ में पहली पार्श्व सिर रोटेशन डिवाइस का उत्पादन किया, एक गैर अमानवीय रहनुमा मॉडल15में दाई के साथ कोमा प्रेरित करने के लिए गैर प्रभाव सिर घूर्णन त्वरण का उपयोग कर । इस रहनुमा मॉडल ने 10-20 सुश्री सुश्री के भीतर 60 डिग्री के माध्यम से सिर को विस्थापित करने के लिए त्वरण और मंदी के लिए नियंत्रित एकल रोटेशन को नियोजित किया। यह तकनीक बिगड़ी चेतना और व्यापक अक्षीय क्षति का अनुकरण करने में सक्षम थी जो मानव दिमाग में देखी गई गंभीर टीबीआई के प्रभाव ों के समान थी। हालांकि, रहनुमा मॉडल बहुत महंगेहैं 4,11,,16. पिछले मॉडल पर भाग के आधार पर, घूर्णन त्वरण मस्तिष्क चोट का एक सुअर मॉडल १९९४ में डिजाइन किया गया था (रॉस एट अल.) इसी तरह के परिणाम14के साथ ।
इन दो पशु मॉडलों, हालांकि उन्होंने विशिष्ट विकृति की विभिन्न प्रस्तुतियों का उत्पादन किया, दाई रोगजनन की अवधारणाओं में बहुत कुछ जोड़ा है। रैपिड हेड रोटेशन को आम तौर पर दाई को प्रेरित करने के लिए सबसे अच्छी विधि के रूप में स्वीकार किया जाता है, और कृंतक रैपिड हेड रोटेशन अध्ययन11,,16के लिए एक कम महंगा मॉडल प्रदान करते हैं। यहां, हम दाई के एक सरल, प्रजनन योग्य और विश्वसनीय कृंतक मॉडल को मान्य करते हैं जो खोपड़ी फ्रैक्चर या कॉन्टसेशन के बिना व्यापक सफेद पदार्थ क्षति का कारण बनता है। यह वर्तमान मॉडल दाई के रोगविज्ञान और अधिक प्रभावी उपचार के विकास की बेहतर समझ को सक्षम करेगा।
यह प्रोटोकॉल दाई के एक कृंतक मॉडल का वर्णन करता है। दाई में, मस्तिष्क पर घूर्णन त्वरण एक कतरनी प्रभाव का कारण बनता है जो एक्सोनल और जैव रासायनिक परिवर्तनों को ट्रिगर करता है जो प्रगतिशील प्रक्रिया में ?…
The authors have nothing to disclose.
लेखक कृतज्ञता से बायोमैकेनिकल माप के साथ अपनी सहायता के लिए डॉ नाथन क्लीओरिन (मैकेनिकल इंजीनियरिंग विभाग, बेन-गुरियन विश्वविद्यालय ऑफ नेगेव) को स्वीकार करते हैं। इसके अलावा, हम प्रोफेसर ओलेना Severynovska, Maryna Kuscheriava, Maksym Kryvonosov, Daryna Yakumenko और फिजियोलॉजी विभाग के एवगेनिया गोंचारिक, जीव विज्ञान, पारिस्थितिकी, और चिकित्सा संकाय, Oles Honchar Nipro विश्वविद्यालय, Dnipro, यूक्रेन उसके समर्थन और हमारी चर्चा के लिए उपयोगी योगदान के लिए शुक्रिया अदा करते हैं ।
0.01 M sodium citrate | SIGMA – ALDRICH | ||
2.5% normal horse serum | SIGMA – ALDRICH | H0146 | Liquid |
4 % buffered formaldehyde solution | |||
Anti-Amyloid Precursor Protein, C – terminal antibodyproduced in rabbit | SIGMA – ALDRICH | Lot 056M4867V | |
biotinylated secondary antibody | Vector | BA-1000-1.5 | 10 mM sodium phosphate, pH 7.8, 0.15 M NaCl, 0.08% sodium azide, 3 mg/ml bovine serum albumin |
bone-cutting forceps | |||
DAB Peroxidase (HRP) Substrate Kit (with Nickel), 3,3’-diaminobenzidine | vector laboratory | ||
embedding cassettes | |||
ethanol 99.9 % | ROMICAL | Flammable Liquid | |
guillotine | |||
Hematoxylin | SIGMA – ALDRICH | H3136-25G | |
Hydrogen peroxide solution | Millipore | 88597-100ML-F | |
Isofluran, USP 100% | Piramamal Critical Care, Inc | ||
Olympus BX 40 microscope | Olympus | ||
paraffine | paraplast plus leica biosystem | Tissue embedding medium | |
phosphate-buffered saline (PBS) | SIGMA – ALDRICH | P5368-10PAK | Contents of one pouch, when dissolved in one liter of distilled or deionized water, will yield 0.01 M phosphate buffered saline (NaCl 0.138 M; KCl – 0.0027 M); pH 7.4, at 25 °C. |
Streptavidin HRP | ABCAM | ab64269 | Streptavidin-HRP for use with biotinylated secondary antibodies during IHC / immunohistochemistry. |
xylene |