Abstract
As tiras imunocromatográficas de fluxo lateral baseadas em membrana (ICSs) são ferramentas úteis para o autodiagnóstico de baixo custo e têm sido aplicadas eficientemente à toxina, ao índice fisiológico e à detecção de biomarcadores clínicos. Neste protocolo, fornecemos uma descrição detalhada das etapas para desenvolver um imunoensaio de fluxo lateral rápido, sensível e quantitativo (usando AuNPs como marcador e mAbs como uma sonda). O procedimento descreve a preparação e caracterização do ouro coloidal, síntese do conjugado AuNP-mAb, montagem da tira imunocromatográfica e investigação metodológica do ensaio. Os resultados mostraram que as tiras finais podem ser ainda mais utilizadas para o rápido e conveniente autodiagnóstico de uma pequena molécula, o que pode fornecer uma ferramenta alternativa na análise rápida e precisa dos índices fisiológicos e biológicos.
Introduction
As tiras imunocromatográficas de fluxo lateral baseadas em membrana (ICSs) são ferramentas úteis para detecção rápida e de baixo custo. A membrana de nitrocelulose como o portador e o ouro coloidal como marcadores de reagentes de diagnóstico rápido de cromatografia imune são o método POCT (teste de ponto de cuidado) mais usado, e o escopo de teste do projeto é mais amplo. A partir de sua aplicação original no monitoramento durante a gravidez, seu uso foi estendido para monitorar o estado de coagulação sanguínea1,2, lesão do miocárdio3, medicina veterinária4, resíduos de pesticidas5,doenças infecciosas6 e concentrações de medicamentos. Mais tipos de amostras podem ser avaliadas, incluindo urina, saliva, sangue inteiro, soro e outros fluidos corporais7,8,9.
Nos últimos anos, inúmeros novos ensaios foram desenvolvidos para detectar biomarcadores no diagnóstico de transtornos, incluindo HPLC, UPLC, LC-MS e ELISA, sensíveis e precisos, críveis e específicos. No entanto, esses métodos requerem instrumentação sofisticada, pré-processamento complexo e tratamentos demorados9. Assim, desenvolver uma estratégia de diagnóstico de ponto de cuidado mais rápida e conveniente para a detecção auto e em tempo real de compostos ativos medicinais é urgente10,11.
A popularidade dos ICSs, especialmente para testes comuns, é impulsionada pela facilidade de uso, pois não necessitam de profissionais ou configurações instrumentais elaboradas12. Em outras palavras, pessoas que não possuem treinamento especial podem operar tiras ou autotestes13. Os resultados do teste podem ser obtidos em 5 minutos, o que significa que pode ser usado para inspeções no local14. Além disso, de acordo com nossos cálculos, o custo das tiras poderia ser inferior a 1 RMB15,o que significa que os testes são baratos para promover16. Portanto, o ICS é um dispositivo descartável relativamente preciso, simples e barato. ICSs baseados em ouro coloidal17,18 também são aplicados na detecção rápida covid-19.
O princípio do ICS pode ser dividido em sanduíche ICS e ICS competitivo. Figura 1A é um diagrama esquemático do sanduíche ICS, que é usado principalmente para detectar substâncias macromoleculares como proteínas, incluindo marcadores tumorais, fatores inflamatórios e gonadotropina coriônica humana (HCG, antígeno da gravidez precoce). Neste método, anticorpos emparelhados direcionados a diferentes epítopos do antígeno são usados, e o anticorpo de captura é seco na membrana NC como uma linha de teste. O anticorpo rotulado é seco na almofada conjugada, e o anticorpo secundário é usado como linha de controle.
Figura 1B é um diagrama esquemático do ICS competitivo, que é usado principalmente para detectar pequenas substâncias moléculas (MWCO < 2000 Da). O antígeno de revestimento é fixado na membrana NC como uma linha de teste, e o anticorpo rotulado é seco na almofada conjugada. Durante a detecção, a amostra e o fluxo de anticorpos rotulados através da linha de detecção sob ação capilar, e o antígeno revestido liga competitivamente o antígeno livre na amostra e desenvolve uma cor vermelha na linha de detecção.
Recentemente, descrevemos o procedimento de geração de anticorpos monoclonais contra produtos naturais19. Neste trabalho, desenvolvemos um novo imunoensaio de fluxo lateral baseado no preparado anti-SSD mA20 para detecção rápida e no local. Os resultados indicam que o ensaio de imunocromatografia é uma ferramenta indispensável e conveniente para detectar compostos derivados de produtos naturais.
Figura 1 Diagrama esquemático do ensaio de imunocromatografia (A) Tiras de teste imunocromatomatográficas sanduíche. (B) Tiras de teste anti-cromatográficas imunes competitivas indiretas. Este número foi modificado a partir de Zhang et al., 201821. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Todos os procedimentos realizados neste estudo foram aprovados pelo Comitê de Revisão ética da Universidade de Medicina Chinesa de Pequim (número de aprovação 2017BZYYL00120).
1. Preparação e Caracterização do Ouro Coloidal
NOTA: Para a síntese de ouro coloidal, como o ouro coloidal é facilmente adsorvido na parede interna do vaso e é propenso à precipitação por impurezas, o recipiente para síntese e armazenamento de ouro coloidal deve ser completamente limpo e encharcado em ácido (40 mL de água destilada, 360 mL de ácido sulfúrico concentrado, 20 g de dícroma de potássio) ou submetido ao tratamento de passivação superficial. Foi utilizado um método de redução de ácido cítrico para sintetizar o ouro coloidal.
- Ligue o agitador magnético e coloque o frasco (250 mL) na batedeira.
- Prepare 4% solução de ácido cloreto de ouro e solução de citrato de sódio de 1%, respectivamente.
- Adicione 120 mL de água destilada a um frasco de fundo redondo e aqueça-o a ferver em um agitador magnético termostático.
- Continue fervendo, e adicione rapidamente 0,5 mL de ácido cloroaurico de 4% e 5 mL de 1% de citrato de sódio.
- Observe a cor da solução. A solução de ácido cloroaurico amarelo pálido torna o vinho tinto em poucos minutos.
- Continue aquecendo por 10 minutos, até que a solução mude de incolor para vinho transparente.
- Desligue a potência da batedeira magnética termostática, esfrie até a temperatura ambiente e mova a mistura para uma garrafa limpa. Armazene a 4 °C.
- Determine o tamanho e a morfologia dos AuNPs por espectroscopia ultravioleta e imagem TEM.
NOTA: Diferentes tamanhos de partículas de ouro coloide para várias aplicações podem ser obtidos alterando a proporção de sódio citrato e ácido cloroaurico.
2. Síntese de AuNPs-mAb Conjugado
NOTA: Uma vez que os anticorpos se ligam ao ouro coloidal por adsorção eletrostática, as cargas na superfície das proteínas e do ouro coloidal afetam diretamente a intensidade de ligação; portanto, o valor do pH tampão é um fator importante que afeta a estabilidade do conjugado de ouro anticorpo-colooidal. Os mAbs SSD e anti-SSD são usados como exemplos neste protocolo.
- Avaliação do pH de acoplamento
- Adicione 100 μL de solução NaCl (10% m/v) em oito tubos.
- Ajuste as soluções AuNP em pH 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 e 12 com 0,1 M K2CO3.
- Adicione 100 μL de solução de ouro coloidal (pH ajustado 5-12) a oito tubos contendo NaCl.
- Deixe as soluções em pé por vários minutos após a mistura. Observe a mudança de cor de cada solução de tubo e grave o tubo que permanece vermelho.
- Escolha o valor do pH com a menor adição de K2CO3 e cor de solução estável como o valor ideal de pH para preparar conjugados AuNP-mAb.
NOTA: Não use um medidor de pH porque a sonda pode ser destruída por AuNPs.
- Avaliação da quantidade de anticorpos
- Adicione 100 μL de solução NaCl (10% m/v) a oito tubos.
- Adicione 100 μL de solução de ouro coloidal com pH ideal a cada tubo.
- Adicione as soluções de anticorpos monoclonais (concentração proteica 0,1 mg/mL-3,2 mg/mL) aos oito tubos acima mencionados.
- Deixe as soluções em pé por vários minutos após a mistura. Observe a mudança de cor de cada solução de tubo e grave o tubo que permanece vermelho.
- Escolha a quantidade de anticorpos com a menor concentração de mAb e cor de solução estável como a quantidade mAb ideal para preparar conjugados AuNP-mAb.
- Prepare o tampão de resuspensão: adicione 1 M Tris-HCl (pH 8.8), 1% (w/v) BSA, 0,5% (v/v) Interpol 20 e 1% (v/v) PEG 20000 e misture bem.
- Síntese de conjugados AuNP-mAb
- Pegue 10 mL de solução de ouro coloidal e use 0,1 M K2CO3 para ajustar a solução ao valor ideal de pH.
- Adicione lentamente mAbs SSD em concentrações apropriadas e agite à temperatura ambiente por 30 minutos.
- Centrifugar a mistura a 83 x g (1.000 rpm) por 10 min a 4 °C. Remova o precipitado, que contém impurezas ou ouro coloidal precipitado.
- Centrifugar a mistura a 8.330 x g (10.000 rpm) por 30 min a 4 °C. Descarte o supernasal, e o precipitado é o conjugado coloidal de ouro-mAb.
- Adicione o tampão de ressuspensão para dissociar a precipitação.
3. Montagem da Tira
NOTA: Para imunoensaio de fluxo posterior, a seleção e o pré-tratamento do material da membrana afetarão diretamente o teste, que deve ser investigado. A tira imunocromatográfica consiste em uma amostra pad, uma almofada conjugada, uma membrana nitrocelulose (NC), uma almofada absorvente e uma placa de PVC(Figura 1). O material da membrana deve ser verificado e avaliado por estereomicroscopia para eliminar a inhomogeneidade.
- Cole a membrana NC em uma placa de PVC 2 cm além da borda da extremidade de sucção da placa.
- Adicione SSD-BSA (2 mg/mL) em voz baixa à membrana NC (2 cm além da borda superior) como linha de teste (1 mm de largura), e adicione igG anti-rato de cabra (1,5 mg/mL) em gota na membrana NC (2 cm além da borda inferior) como linha de controle (1 mm de largura). Controle a quantidade de proteína adicionada.
- Conecte a almofada absorvente à folha de PVC acima da membrana NC e sobreponha-a com a membrana NC por 2 mm.
- Submergir a membrana de fibra de vidro na solução conjugada AuNPs-mAb. Seque a membrana úmida em uma incubadora a 37 °C.
- Corte a membrana de fibra de vidro para 5 cm de comprimento e 2 cm de largura e use-a como uma almofada conjugada.
- Cole a almofada conjugada pré-tratada sob a membrana NC. O comprimento da sobreposição com a membrana NC deve ser de 0,1 cm.
NOTA: A membrana de fibra de vidro tem uma forte capacidade de ligar e liberar proteínas. - Corte a membrana de fusão de 3 para 1,8 cm de comprimento e 3,5 cm de largura e use-a como a almofada de amostra.
- Cole a almofada de amostra na placa de PVC e sobreponha-a com a almofada conjugada por 2 mm.
- Corte a placa de papel montada em tiras de 3,5 mm de largura usando uma máquina de corte e compacte-a usando um sistema de laminação em lote.
- Por fim, coloque as tiras de teste na casca, sele-as em um saco de papel alumínio contendo dessecante e armazene-as longe da luz. Os ICSs estão agora montados.
NOTA: O acima é o procedimento laboratorial. Na produção, equipamentos de pulverização de ouro e instrumentos de membrana cruzada são usados para pulverizar ouro e fazer as linhas T e C.
4. Detecção quantitativa
- Solte 50 μL de solução amostral no orifício da amostra para observar o processo de cromatografia.
NOTA: Como resultado da ação capilar impulsionada pelo absorvente, a solução amostral migra para a outra extremidade da tira. Quando a solução amostral chega à almofada conjugada, o SSD (antígeno) da amostra reage com o AuNPs-mAb pré-carregado na almofada. Quando a solução migra e atinge a linha T, o AuNPs-mAb sem SSD pode ser capturado seletivamente pelo SSD-BSA (conjugado de proteína portador de antígeno), mostrando como uma cor vermelha na linha T. Em seguida, a solução migra para a linha C, onde os AuNPs-mAb são capturados por IgG anti-rato de cabra na região, mostrando assim como uma cor vermelha na linha C. - Analise as tiras com um leitor de tiras portátil. A máquina pode fornecer a razão da linha de teste para a linha de controle (T/C).
- Avalie a especificidade, sensibilidade, repetibilidade e estabilidade do teste ics.
NOTA: Sob detecção qualitativa, uma linha vermelha indica um resultado positivo (linha de controle). Duas linhas vermelhas indicam um resultado negativo (linhas de teste e controle). Se a linha de controle não estiver presente, o teste será considerado inválido.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Caracterização do ouro coloidal
As soluções de ouro coloidal preparadas eram vermelho claret. Foram utilizadas análises tem para determinar a morfologia e a forma de AuNPs (Figura 2A-D). A Figura 2A e a Figura 2B revelam que as partículas são poliédricas em forma e uniformemente distribuídas. O diâmetro médio dos AuNPs foi encontrado em aproximadamente 14 nm (Figura 2C). Uma imagem TEM (HRTEM) de alta resolução (HRTEM) de AuNPs é mostrada na Figura 2D e Figura 2E. A imagem HRTEM tirada de um AuNP individual mostra um padrão de franja contínua com um espaçamento de 0,117 nm. Os picos de absorção UV-vis das cinco soluções coloidais de ouro foram de 518 nm, 521 nm, 524 nm, 534 nm e 540 nm, o que mostrou que o tamanho da partícula aumentou ligeiramente com a diminuição da citrato de sódio(Figura 2F).
Figura 2 Caracterização do ouro coloidal. (A) imagem TEM de AuNPs (100.000× ampliação). (B) Imagem TEM de AuNPs (500.000× ampliação). (C) A distribuição de tamanho de AuNPs. Como visto na imagem TEM, os diâmetros dos AuNPs variaram de 10 nm a 18 nm, com um diâmetro médio de aproximadamente 14 nm. (D, E) Imagem TEM (HRTEM) de alta resolução (HRTEM) de AuNPs. A imagem HRTEM tirada de um AuNP individual mostra um padrão de franja contínua com um espaçamento de 0,117 nm. (F) Espectros de absorção UV-vis de diferentes AuNPs variando de 10 nm a 18 nm. Este número foi modificado a partir de Zhang et al., 201821. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Avaliação das varetas
Sensibilidade do ICS
Para determinar a sensibilidade do ICS, foram utilizadas tiras imunocromatográficas para detectar uma variedade de diferentes concentrações de SSD (150.000, 60.000, 12.000, 2400, 480 e 96 ng/mL) amostras padrão(Figura 3A). A água duplamente destilada foi usada como controle. No experimento quantitativo, as tiras foram escaneadas por um leitor de ICS portátil JY1502GS(Figura 3B-C). A equação de regressão linear foi y = −0,113ln(x) + 1,5451, com coeficiente de correlação (R2) de 0,983(Figura 3D). Exibiu boa linearidade em 96 ng/mL a 150 μg/mL. O valor ic50 foi de 10,39 μg/mL. No experimento quantitativo, o tempo ideal de teste foi sugerido para ser de 10 minutos.
Figura 3 Caracterização do imunoensaio de fluxo lateral para SSD. (A) Fotografias de resultados para soluções padrão contendo diferentes concentrações de SSD avaliadas utilizando o ICS. (B) Fotografia da varredura de ouro coloidal combinada. (C) Os padrões de intensidade das linhas de teste e controle escaneadas pelo instrumento quantitativo de ouro coloidal. (D) Curva padrão de icELISA para determinação SSD utilizando o ICS. A equação de regressão é y = −0,113ln(x) + 1,5451, com coeficiente de correlação (R2) de 0,983. Este número foi modificado a partir de Zhang et al., 201821. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Especificidade do ICS
A especificidade do ICS foi testada avaliando a reatividade cruzada com compostos semelhantes ao SSD. A Tabela 1 mostra a reatividade cruzada do ICS com compostos relacionados ao SSD. Pode-se ver claramente que o ICS só tinha baixa reatividade cruzada com o SSa e não teve reação cruzada com outros compostos, incluindo SSc, SSb1 ou SSb2 (Tabela 1),indicando que o ICS preparado tem alta especificidade.
| Amostras | um ICS | bicELISA |
| (%) | (%) | |
| SSD | 100 | 100 |
| Ssa | 4.30% | 4.97% |
| SSb1 | <0.09 | <0.09 |
| SSb2 | <0.09 | <0.09 |
| Ccd | <0.09 | <0.09 |
Mesa 1. Reatividade cruzada de compostos medidos pelo ICS e icELISA. A especificidade do ICS foi avaliada pelo ICS (a) e icELISA (b). Esta tabela foi modificada a partir de Zhang et al., 201821.
Taxa de recuperação
Conforme mostrado na Tabela 2,a taxa média de recuperação foi de 102,05% (média ± SD, n = 3). Com base em sua precisão e consistência, este ensaio foi suficientemente confiável para a determinação do SSD em amostras biológicas.
| Concentração de SSd | Concentração de SSd estabelecida pelo sistema de teste (ng/mL) | Recuperação (%) |
| (ng/mL) | ||
| 100 | 135,72 ± 61,97 | 135,72 ± 61,97 |
| 1000 | 926,59 ± 114,24 | 92,66 ± 11,42 |
| 10000 | 11128,16 ± 745,75 | 111.28 ± 14.12 |
Mesa 2. Taxa de recuperação de SSD. Os dados são a média ± SD de amostras triplicadas em cada concentração picotada de SSD. O percentual de recuperação foi calculado da seguinte forma: recuperação (%) = quantidade/quantidade medida × 100%. Esta tabela foi modificada a partir de Zhang et al., 201821.
Análise de estabilidade do ensaio do ICS
Para avaliar a estabilidade do ICS, foram testadas as tiras de teste armazenadas durante 8 e 16 semanas e comparadas com as tiras recém-preparadas. A Tabela 3 mostra que os resultados das tiras armazenadas e recém-preparadas para as amostras negativas e positivas foram essencialmente inalterados, indicando que o ICS pode ser armazenado à temperatura ambiente por pelo menos vários meses e que é adequado para promoção e aplicação em larga escala.
| RSD % | |||
| SSd (ng/mL) | 1 diapor | 4 semanasb | 8 semanasc |
| 125 | 2.41 | 3.11 | 3.51 |
| 250 | 2.52 | 4 | 3.52 |
| 500 | 2.44 | 3 | 5.2 |
| 1000 | 3.12 | 2.71 | 4.5 |
Mesa 3. Variações entre ICS utilizadas para análise de SSD. aOs valores indicam coeficientes de variância para amostras triplicadas em 3 tiras diferentes utilizadas 1 dia após a fabricação. b Os valores indicam coeficientes de variância para amostras triplicadas em 3 tiras diferentes utilizadas após serem armazenadas por 4 semanas. c Os valores indicam coeficientes de variância para amostras triplicadas em 3 tiras diferentes utilizadas após serem armazenadas por 8 semanas. Esta tabela foi modificada a partir de Zhang et al., 201821.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Neste trabalho, apresentamos um protocolo para a preparação de mAbs contra pequenas moléculas derivadas de produtos naturais. As etapas essenciais e as questões que necessitam de atenção no procedimento foram delineadas, e demonstramos a utilidade deste protocolo usando como exemplo a pequena molécula SSD. Exemplos de espectros, imagens TEM, resultados quantitativos e investigações metodológicas são mostrados em dados representativos. Assim, demonstramos que a produção de ouro coloidal, a conjugação AuNP-mAb e a estratégia de montagem de tiras apresentada aqui resultam na criação de um novo imunoensaio que pode ser usado para detectar rapidamente a molécula alvo.
Tiras imunocromatográficas são fáceis de operar, e a reação é muito rápida. Apenas 50 μL de amostra são necessários, e a detecção é completa em 5 minutos. Em contraste, o método ELISA, que também é um imunoensaio, requer várias horas, incluindo múltiplas lavagens e incubações longas. Múltiplas lavagens e longos períodos de incubação podem efetivamente remover a reação inespecífica da matriz amostral para melhorar a relação sinal-ruído e a sensibilidade aumentando o valor do sinal. Isso significa que a tecnologia anti-interferência e otimização do papel tomográfico são os principais problemas a serem resolvidos neste estudo. Otimizações tecnológicas podem ser alcançadas de várias maneiras. Selecione materiais adequados para a almofada de amostra e almofada conjugada. O comprimento do bloco de amostra foi aumentado adequadamente para melhorar efetivamente a capacidade de pré-tratamento da amostra. PH elevado, alta resistência iônica e alta capacidade de tampão do pré-tratamento do material podem ser usados para evitar fatores influenciadores, como a resposta de anticorpos de antígeno do valor do pH da amostra biológica. Como a configuração condicional de "três altas" pode interferir na ligação de anticorpos, deve ser considerada de forma abrangente.
Além disso, também é importante notar que um anticorpo monoclonal (mAb) é a sonda na tira. Portanto, este procedimento está associado à sensibilidade do mAb. O mAb que aplicamos foi preparado em nosso trabalho anterior17, e a produção de mAb pode ser referenciada em nossa publicação anterior19.
As tiras imunocromatográficas à base de ouro coloidal são tiras amplamente utilizadas porque são baratas e oferecem detecção conveniente. No entanto, este método tem suas próprias limitações e problemas de estabilidade. A força do sinal dos AuNPs é menor do que a de corantes fluorescentes, carbono coloidal e outros marcadores, o que significa que a sensibilidade é limitada. Quando expostos ao ar, os AuNPs mudam de vinho tinto para roxo, o que causará uma mudança no valor cinza e afetará a detecção quantitativa. Assim, várias tiras imunocromatográficas modificadas surgiram, e também preparamos tiras fluorescentes com marca quântica22 e tiras imunocromatográficas baseadas em IgY23,que possuem procedimentos semelhantes para produção.
Os imunoensagratos à base de membrana têm sido amplamente utilizados em indicadores clínicos, doenças infecciosas, resíduos de pesticidas e monitoramento da concentração de medicamentos. Neste protocolo, focamos na elaboração de um método baseado em AuNP para produtos naturais de pequenas moléculas. Este procedimento funciona como um modelo para o desenvolvimento de diversos imunoensatórios-alvo que podem ser efetivamente utilizados como ferramentas analíticas para a avaliação e controle de qualidade de produtos naturais.
Este trabalho fornece um protocolo detalhado para o desenvolvimento de imunoensatórios de fluxo lateral baseados em tiras cromatográficas imunes para uso na detecção rápida, sensível e quantitativa de pequenas moléculas. Este procedimento inclui a preparação de ouro coloidal, síntese de conjugados AuNP-mAb, montagem da tira e investigação metodológica.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Os autores não têm nada a revelar.
Acknowledgments
Este trabalho foi apoiado pelos Fundos Especiais de Fundos De Pesquisa Fundamental de instituições de ensino superior filiadas aos departamentos centrais. Agradecemos o apoio da Equipe de Pesquisa Básica de Prescrição Clássica da Universidade de Medicina Chinesa de Pequim.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Chloroauric acid solution (HAuCl4) | Tianjin Fu Chen Chemical Reagents Factory | JY-SJ102 | |
| bovine serum albumin | AMRESCO | 332 | |
| centrifuge tube 15 mL | Corning | 430645 | |
| centrifuge tube 50 mL | Corning | 430828 | |
| ELISA plates, 96 well | NUNC | 655101 | |
| Filter paper | Sinopharm | H5072 | |
| Glass fibre membranes | Jieyi | XQ-Y6 | |
| goat-anti-mouse IgG antibody | applygen | C1308 | |
| Nitrocellulose membranes | Millipore | millipore 180 | |
| ovalbumin | Beijing BIODEE | 5008-25g | |
| PEG20000 | Sigma Aldrich | RNBC6325 | |
| Pipette 10mL | COSTAR | 4488 | |
| Pipette 25mL | FALCON | 357525 | |
| semi-rigid PVC sheets | Jieyi | JY-C104 | |
| Sodium citrate | Beijing Chemical Works | C1034 | |
| sodium periodate | Sinopharm Chemical | BW-G0008 | |
| Sulfo-GMBS | Perbio Science Germany | 22324 | |
| TipOne Tips 1,000 µL | Starlab | S1111-2021 | |
| Tris-HCl | Solarbio | 77-86-1 | |
| TWEEN 20 | Solarbio | 9005-64-5 |
References
- Huang, X., et al. Membrane-based lateral flow immunochromatographic strip with nanoparticles as reporters for detection: A review. Biosensors and Bioelectronics. 75, 166-180 (2016).
- Chang, H. -F., Wang, J. -Q., Wang, B., Deng, A. -P. An immune chromatographic assay for rapid and simultaneous detection of levonorgestrel and methylprednisolone in water samples. Chinese Chemical Letters. 24 (10), 937-940 (2013).
- Lai, J. J., Stayton, P. S. Improving lateral-flow immunoassay (LFIA) diagnostics via biomarker enrichment for mHealth. Methods in Molecular Biology. 1256, 71-84 (2015).
- Zhang, M. Z., et al. Development of a colloidal gold-based lateral-flow immunoassay for the rapid simultaneous detection of clenbuterol and ractopamine in swine urine. Analytical & Bioanalytical Chemistry. 395 (8), 2591-2599 (2009).
- Kranthi, K. R., et al. Development of a colloidal-gold based lateral-flow immunoassay kit for 'quality-control' assessment of pyrethroid and endosulfan formulations in a novel single strip format. Crop Protection. 28 (5), 428-434 (2009).
- Qian, K., et al. Development and evaluation of an immunochromatographic strip for rapid detection of capsid protein antigen p27 of avian leukosis virus. Journal of Virological Methods. (221), 115-118 (2015).
- Lateral flow immunoassay devices for testing saliva and other liquid samples and methods of use of same. US Patent. Guo, H., et al. , US20040184954A1 (2003).
- Miočević, O., et al. Quantitative Lateral Flow Assays for Salivary Biomarker Assessment: A Review. Frontiers in Public Health. 5, 1-13 (2017).
- Lisa, M., et al. Gold nanoparticles based dipstick immunoassay for the rapid detection of dichlorodiphenyltrichloroethane: an organochlorine pesticide. Biosensors and Bioelectronics. 25 (1), 224-227 (2009).
- Zhang, Z., et al. Monoclonal Antibody-Europium Conjugate-Based Lateral Flow Time-Resolved Fluoroimmunoassay for Quantitative Determination of T-2 Toxin in Cereals and Feed. Analytical Methods. 7 (6), 2822-2829 (2015).
- Shen, H., et al. Facile synthesis of high-quality CuInZnxS2+x core/shell nanocrystals and their application for detection of C-reactive protein. Journal of Materials Chemistry. 22 (35), 18623-18630 (2012).
- Xiang, T., et al. A novel double antibody sandwich-lateral flow immunoassay for the rapid and simple detection of hepatitis C virus. International Journal of Molecular Medicine. 30 (5), 1041-1047 (2012).
- Yang, Q., et al. Quantum dot-based immunochromatography test strip for rapid, quantitative and sensitive detection of alpha fetoprotein. Biosensors & Bioelectronics. 30 (1), 145 (2011).
- Song, L. W., et al. Rapid fluorescent lateral-flow immunoassay for hepatitis B virus genotyping. Analytical Chemistry. 87, 5173-5180 (2015).
- Zhang, Y., et al. Quantum dot-based lateral-flow immunoassay for rapid detection of rhein using specific egg yolk antibodies. Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology. 1, (2017).
- Qu, H., et al. Rapid Lateral-Flow Immunoassay for the Quantum Dot-based Detection of GsRerarin. Biosensors and Bioelectronics. 81, 358-362 (2016).
- Li, Z., et al. Development and Clinical Application of a Rapid IgM-IgG Combined Antibody Test for SARS-CoV-2 Infection Diagnosis. Journal of Medical Virology. 92 (9), (2020).
- Xiaomei, L., Jing, W., Ya, Z. The clinical application value analysis of the 2019-coronary virus disease was analyzed by the whole blood Sars-COV 2 specific antibody detection. Natural Science Edition. 42, (2020).
- Zhang, Y., et al. Generation of Monoclonal Antibodies Against Natural Products. Journal of Visualized Experiments. , e57116 (2019).
- Sai, J., et al. Development of an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay and Immunoaffinity Column Chromatography for Saikosaponin d Using an Anti-Saikosaponin d Monoclonal Antibody. Planta Medica. 82, 432-439 (2016).
- Yue, Z., et al. A Highly Sensitive Immunochromatographic Strip Test for Rapid and Quantitative Detection of Saikosaponin d. Molecules. 23 (2), 338 (2018).
- Qu, H., et al. Rapid Lateral-Flow Immunoassay for the Quantum Dot-based Detection of Puerarin. Biosensors and Bioelectronics. 81, 358-362 (2016).
- Zhang, Y., et al. Quantum dot-based lateral-flow immunoassay for rapid detection of rhein using specific egg yolk antibodies. Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology. 1, (2017).
