Bu protokolde, submandibuler bezin (SMG) endotel bariyer fonksiyonu, iki fotonlu lazer taramalı mikroskop altında test hayvanı modellerinin açısal damarlarına in vivo olarak farklı moleküler ağırlıklı floresan izleyiciler enjekte edilerek değerlendirilmiştir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
İn Vivo Fare Submandibuler Bezinde Vasküler Geçirgenlik Tespiti
Bu makalede
Özet
Özet
Tükürük ağız ve genel sağlıkta önemli bir rol oynar. Kan damarlarının sağlam endotel bariyer fonksiyonu tükürük sekresyonunu sağlarken, endotel bariyer disfonksiyonu birçok tükürük bezi salgı bozukluğu ile ilişkilidir. Bu protokol, fare submandibuler bezlerinde (SMG) endotel sıkı kavşakların (TJ'ler) işlevini değerlendirmek için bir in vivo parasellüler geçirgenlik tespit yöntemini tanımlamaktadır. İlk olarak, farelerin açısal damarlarına farklı moleküler ağırlıklara (4 kDa, 40 kDa veya 70 kDa) sahip floresan etiketli dekstrans enjekte edildi. Daha sonra, tek taraflı SMG diseke edildi ve iki fotonlu lazer tarama mikroskobu altında özelleştirilmiş tutucuya sabitlendi ve daha sonra kan damarları, acini ve kanallar için görüntüler yakalandı. Bu yöntem kullanılarak, farklı büyüklükteki izleyicilerin kan damarlarından acini'nin bazal taraflarına ve hatta asinar epitelinin üzerinden kanallara gerçek zamanlı dinamik sızıntısı, fizyolojik veya patofizyolojik koşullar altında endotel bariyer fonksiyonunun değişimini değerlendirmek için izlendi.
Giriş
Çeşitli tükürük bezleri, öncelikle enfeksiyonlara karşı ilk savunma hattı görevi gören ve sindirime yardımcı olan tükürük üretir, böylece ağız ve genel sağlıkta önemli bir rol oynar1. Kan akışı, tükürük bezi sekresyonu için çok önemlidir, çünkü sürekli olarak birincil tükürüğü oluşturan su, elektrolitler ve moleküller sağlar. Sıkı bağlantı (TJ) kompleksi tarafından düzenlenen endotel bariyer fonksiyonu, suya, çözünürlere, proteinlere ve hatta dolaşımdaki kan damarlarından tükürük bezi dokularına doğru hareket eden hücrelere oldukça geçirgen olan kılcal damarların geçirgenliğini kesin ve hassas bir şekilde sınırlar 2....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm deneysel prosedürler Pekin Üniversitesi Sağlık Bilimleri Merkezi, Hayvan Araştırmaları Etik Kurulu tarafından onaylanmış ve Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'na (NIH Yayın No. 85-23, gözden geçirilmiş 1996) uyulmuştur. Bu çalışmada 8-10 haftalık yaş grubundaki erkek vahşi tip (WT) fareler kullanılmıştır. Deney hayvanları, ağrılarını ve rahatsızlıklarını en aza indirmek için dikkatlice tedavi edildi.
1. Hayvan prosedürleri
- Anestezik ve izleyicileri hazırlayın ve uygulayın.
- Çalışma boyunca steril koşulları koruyun ve otoklavlama ile aletleri sterilize edin. Fareleri iki gruba ayırın.<....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Protokolü takiben, tek taraflı SMG ısmarlama bir tutucuya bağlandı ve bez, nefes almanın hareket artefaktlarına neden olmasını önlemek için fare gövdesinden mümkün olduğunca uzak tutuldu. Kan damarlarındaki kırmızı kan hücrelerinin (siyah noktalar) hızlı akışı mikroskop altında gözlendi. Bir oküler lens altında doku alanını bulduktan sonra, mikroskop yazılımını manipüle etmek için geçiş yapılmalıdır. Kontrol grubunda, her iki izleyici de fare SMG'sinin kan damarlarında mevcuttu. Özellikle, küçük moleküler ağırlığı nedeni.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Endotel bariyer fonksiyonunun idamesi ve düzenlenmesi vasküler homeostaz için gereklidir. Endotel hücreleri ve bunların hücreler arası kavşakları, vasküler bütünlüğün korunmasında ve kontrol edilmesinde kritik bir rol oynamaktadır12. Kan akımının kayma kuvveti, büyüme faktörleri ve inflamatuar faktörler vasküler geçirgenlikte değişikliklere neden olabilir ve böylece hipertansiyon, diyabet ve otoimmün hastalıklar gibi sistemik hastalıkların ortaya çıkmasına ve gelişmesine katkıda bulunabilir
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyleri yoktur.
Teşekkürler
Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (hibeler 31972908, 81991500, 81991502, 81771093 ve 81974151) ve Pekin Doğa Bilimleri Vakfı (hibe 7202082) tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 2-foton mikroskobu (TCS-SP8 DIVE) | Leica, Almanya | ||
| 4 kDa FITC etiketli dekstran | Sigma Aldrich | 46944 | |
| 70 kDa rodamin B-etiketli dekstran | Sigma Aldrich | R9379 | |
| Künt doku ayırma nikel | Bejinghuabo Company | NZW28 | |
| Tüy dökücü krem | Veet | ||
| Tek kullanımlık steril şırınga | Zhiyu Şirketi | 1 mL | |
| Image J yazılımı | Ulusal Sağlık | ||
| Enstitüleri İnsülin şırıngası | Becton, Dickinson and Company | 0253316 | 1 mL |
| Leica Application Suite X yazılımı | Leica Microsystems Microtubes | ||
| Axygen | MCT-150-C 1.5 | mL | |
| Fosfat tamponlu tuzlu su 1x | Servicebio | G4207-500 | |
| Doku makası | Bejinghuabo Şirketi | M286-05 | |
| Tribromoetanol | JITIAN Bio | JT0781 |
Kaynaklar
- Carpenter, G. H. The secretion, components, and properties of saliva. Annual Review of Food Science and Technology. 4, 267-276 (2013).
- Garrett, J. R. The proper role of nerves in salivary secretion: A review. Journal of Dental Research.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
