Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

En proteinsuspension-fældende prøveforberedelse til tåreproteomics ved væskekromatografi-tandemmassespektrometri

Published: December 1, 2023 doi: 10.3791/64617
Automatic Translation
*1, *1,2, 1,2, 1, 1,2,3,4
1Centre for Myopia Research, School of Optometry, The Hong Kong Polytechnic University, 2Centre for Eye and Vision Research (CEVR), 3Research Centre for SHARP Vision (RCSV), The Hong Kong Polytechnic University, 4Research Centre for Chinese Medicine Innovation (RCMI), The Hong Kong Polytechnic University
* These authors contributed equally

Summary

Denne protokol beskriver en metode til indsamling af tåreprøver ved hjælp af Schirmer-strimler og en integreret kvantitativ arbejdsgang til opdagelse af ikke-invasive tåreproteinbiomarkører. Arbejdsgangen til forberedelse af suspensionsfangstprøver muliggør hurtig og robust forberedelse af tåreprøver og massespektrometrisk analyse, hvilket resulterer i højere peptidgenvindingsudbytter og proteinidentifikation end standardprocedurer i opløsningen.

Abstract

Tårevæske er en af de let tilgængelige biofluider, der kan opsamles ikke-invasivt. Tåreproteomics har potentialet til at opdage biomarkører for flere okulære sygdomme og tilstande. Det er rapporteret, at suspensionsfældekolonnen er en effektiv og brugervenlig arbejdsgang til prøveforberedelse til bred anvendelse af proteomisk analyse nedstrøms. Alligevel er denne strategi ikke blevet godt undersøgt i analysen af humant tåreproteom. Denne protokol beskriver en integreret arbejdsgang fra kliniske humane tåreprøver til oprensede peptider til ikke-invasiv tåreproteinbiomarkørforskning ved hjælp af massespektrometri, som giver indsigt i sygdomsbiomarkører og overvågning, når de kombineres med bioinformatikanalyse. En proteinsuspensionsfangeprøveforberedelse blev anvendt og demonstrerede opdagelsen af tåreproteom med hurtige, reproducerbare og brugervenlige procedurer som en universel, optimeret prøveforberedelse til human tårevæskeanalyse. Især suspensionsfangstproceduren overgik prøveforberedelse i opløsning med hensyn til peptidgenvinding, proteinidentifikation og kortere prøveforberedelsestid.

Introduction

Tear proteomics har fået opmærksomhed på at udforske potentielle biomarkører for okulære sygdomme og tilstande 1,2,3,4,5,6, for at få adgang til patogenesen af den okulære og systemiske tilstand samt at udnytte fordelen ved ikke-invasiv tåreprøveindsamling ved hjælp af Schirmer-strimler. Den teknologiske udvikling af næste generations massespektrometri har muliggjort proteinkvantificering i mikroliterskala tårer med nøjagtighed og præcision, der ikke tidligere har været mulig. Prøveforberedelsesmetoder er endnu ikke standardiserede. En robust og standardiseret arbejdsgang til prøveforberedelse er afgørende for succesen med klinisk anvendelse i tåreproteinbiomarkørforskning. Suspensionsfældefangst (S-Trap) prøveforberedelsesarbejdsgang blev for nylig rapporteret som en effektiv og følsom prøveforberedelsesmetode til bred nedstrøms proteomisk analyse 7,8. Alligevel er denne strategi ikke blevet godt rapporteret i analysen af humant tåreproteom, udkonkurreret filterstøttet prøveforberedelse (FASP) og fordøjelse i opløsning med hensyn til enzymatisk nedbrydningseffektivitet og det større antal proteinidentifikation ved massespektrometrisk analyse9. Den S-Trap-baserede tilgang blev demonstreret i fremstillingen af retinal væv 10, formalinfikseret, paraffinindlejret (FFPE) væv11, celler 12, mikroorganisme 13 og flydende biopsier14,15.

Denne protokol beskriver en integreret kvantitativ arbejdsgang fra kliniske prøver til enzymatisk fordøjet protein til opdagelsen af et ikke-invasivt tåreproteinbiomarkørpanel med en hurtig, reproducerbar og robust teknisk strategi. Kort fortalt blev tårevæske opsamlet ved hjælp af en standard Schirmer-strimmel og straks tørret med en oftalmisk rammevarmer for at forhindre proteinautolyse ved stuetemperatur. Indlejrede totalproteiner blev ekstraheret under anvendelse af 5% natriumdodecylsulfat (SDS) lysisbuffer i henhold til producentens forslag efterfulgt af proteinanalysemåling. Det ekstraherede lysat gennemgik derefter standardreduktion med dithiothreitol (DTT) og alkylering med iodoacetamid (IAS).

Efter syring med phosphorsyre blev suspensionsfangekolonneproteinudfældningsbuffer indeholdende 90% methanol og 100 mM triethylammoniumbicarbonat (TEAB) tilsat til samlede proteiner. Prøven blev derefter overført til en ny suspensionsfældende mikrokolonne. Enzymatisk fordøjelse med udført med sekventering grade trypsin i forholdet 1:25 (w/w, trypsin: protein) ved 47 °C i 1 time. De resulterende peptider blev derefter elueret via centrifugering, sekventielt med 50 mM TEAB, 0,2% vandig myresyre (FA) og 50% acetonitril (ACN) indeholdende 0,2% FA. De eluerede peptider blev vakuumtørret og rekonstitueret i 0,1 % FA. Peptidkoncentrationen blev målt og justeret til 0,5 μg/μL til massespektrometrisk analyse.

Protocol

Forsøgspersonerne gav skriftligt informeret samtykke før deltagelse i undersøgelsen. Undersøgelsen blev godkendt af Human Ethics Committee ved Hong Kong Polytechnic University og overholdt principperne i Helsingfors-erklæringen.

1. Opsamling af menneskelig tårevæske med Schirmer strip

  1. Brug handsker og desinficer for at undgå prøvekontaminering.
  2. Kontroller, at den indvendige emballage er intakt, steril og ikke udløbet.
  3. Schirmerstrimlens top bøjes let indad ved 0 mm-mærket som angivet nær strimlens halvcirkelspids (figur 1).
  4. Strimlen fjernes fra den indre emballage ved at holde enden af strimlen, og fra 0 til 25 mm undgås direkte kontakt med prøveopsamlingsområdet.
  5. Bed motivet om at se væk fra placeringen af strimlen, der skal placeres.
  6. Træk forsigtigt det nederste øjenlåg ned, og krog enden af strimlen i den nedre fornix nær det laterale canthus -område (figur 2). Gentag den samme procedure på det andet øje.
  7. Bed motivet om forsigtigt at lukke øjenlågene for at minimere irritation.
  8. Opsaml tårevæske i ca. 5 min, eller helst blev der opsamlet 15-20 mm tåreprøve.
  9. Bed motivet om at åbne begge øjne, træk forsigtigt det nederste øjenlåg ned, og fjern strimlerne fra motivet.
  10. Undersøg den hydrerede længde på Schirmer-strimlen og registrer den opsamlede mængde i mm.
  11. Tør strimlen med en standard, ren rammevarmer, indtil væsken er helt tør.
    BEMÆRK: Overdreven opvarmning, der potentielt kan forkulle filterpapiret, bør undgås.
  12. Indsæt hver tørret Schirmer-strimmel i et mærket kryorør og opbevar det helst på et køligt, tørt sted i mørke indtil videre behandling.

2. Fremstilling af kemikalier og reagenser

  1. Lysisbuffer (5% SDS, 50 mM TEAB, pH 7,5), 20 ml
    1. Pipette 1 ml 1 M TEAB og 80 μL 12% fosforsyre. Vortex og sonikere kort for at fjerne bobler. Fyld op til 20 ml med deioniseret vand.
    2. Der afvejes 1 g SDS og tilsættes til opløsningen med svingning, indtil den er opløst.
  2. Proteinudfældningsbuffer (90% methanol, 100 mM TEAB, pH 7,1), 10 ml
    1. Der tilsættes 893 μL 1 M TEAB og 92 μL deioniseret vand.
    2. Der tilsættes kort 15 μL 85 vægt% phosphorsyre og 9 ml methanol til opløsningen og hvirvelstrømmen.
  3. Fordøjelsesbuffer (50 mM TEAB), 1 ml
    1. Der tilsættes 50 μL 1 M TEAB og fyldes op til 1 ml med deioniseret vand.
  4. 200 mM dithiothreitol (DTT) opløsning, 500 μL
    1. 15 mg DTT afvejes og opløses i 500 μL deioniseret vand; hvirvel kort.
      BEMÆRK: Forbered før brug.
  5. 400 mM iodoacetamid (IAS) opløsning, 200 μL
    1. 15 mg LAS afvejes og opløses i 200 μl deioniseret vand; hvirvel kort. BEMÆRK: Forbered før brug og undgå lys.
  6. 0,2% myresyre, 50% acetonitril, 10 ml
    1. Forbered 10 ml 50% acetonitril i deioniseret vand.
    2. Tilsæt 20 μL myresyre og hvirvel kort.
  7. 0,2% myresyreopløsning, 10 ml
    1. Tilsæt 20 μL myresyre til 10 ml deioniseret vand og hvirvel kort.
  8. 0,1% myresyreopløsning, 10 ml
    1. Tilsæt 10 μL myresyre til 10 ml deioniseret vand; hvirvel kort.

3. Proteinekstraktion i Schirmer-striben

  1. Klip og kassér forenden ud over strimlens 0 mm-mærke for at fjerne potentiel kontaminering på grund af kontakt mellem konjunktivvæv og en saks af rent rustfrit stål.
  2. Strimlen skæres i intervaller på 1 mm i et 1,5 ml mikrocentrifugerør (figur 3).
  3. Der tilsættes 100 μL lysisbuffer til mikrocentrifugerøret og hvirvel ved 1.000 omdr./min., stuetemperatur i 1 time i en termomixer.
  4. Supernatanten centrifugeres kortvarigt og overføres til et nyt 1,5 ml mikrocentrifugeglas.
  5. Flyt strimlerne til 200 μL pipettespidser med rene pincet. Fra trin 3.4 anbringes spidserne i det samme glas med holder, og centrifugeres ved stuetemperatur ved 4.000 × g yderligere i 1 min for maksimal genvinding af den resterende prøve på strimlen.
  6. Mål proteinkoncentrationen ved hjælp af bicinchoninsyre (BCA) eller kompatibelt proteinassay.

4. Prøveforberedelse til suspensionsfældefangst

  1. Normaliser prøver til 50 μg protein baseret på proteinanalyseresultatet.
  2. Der tilsættes 200 mM DTT i forholdet 1:10 (v/v, DTT: prøve) til en slutkoncentration på 20 mM DTT og inkuberes ved 95 °C i 10 minutter.
  3. Afkøl proteinopløsningen til stuetemperatur.
  4. Der tilsættes 400 mM LAS i forholdet 1:10 (v/v, IAS: prøve) til en slutkoncentration på 40 mM LAS og inkuberes i mørke ved stuetemperatur i 10 min.
  5. Der tilsættes 12% vandig fosforsyre i forholdet 1:10 (v/v, syre: prøve) til en endelig koncentration på 1,2% fosforsyre og hvirvel kortvarigt.
  6. Tilsæt proteinbindende buffer i et forhold på 1: 6 (v / v, prøve: buffer) og hvirvel kort.
    BEMÆRK: I dette trin skal kolloide proteinpartikler dannes, og opløsningen vises gennemskinnelig, hvis proteinmængden er tilstrækkelig.
  7. Fjern hætten på Suspension Trapping Micro Spin Column, og saml centrifugeringssøjlen på et 2 ml mikrocentrifugerør for at opsamle gennemstrømning.
  8. Tilsæt op til 200 μL syrnet proteinlysatblanding i kolonnen.
  9. Centrifuger kolonnen ved 4.000 × g i 20 s. Proteinpartikler blev fanget; Gentag, indtil prøverne er indlæst i kolonnen.
  10. Der tilsættes 150 μL proteinbindende buffer og centrifugeres ved 4.000 × g i 20 s for at vaske det suspenderede protein. Gentag 3x.
  11. Saml Suspension Trapping Micro Column på et nyt 1,5 ml mikrocentrifugerør.
  12. Der tilsættes 20 μL 50 mM TEAB fordøjelsesbuffer indeholdende protease i forholdet 1:25 (w/w, trypsin: protein) på filteret inde i centrifugeringssøjlen, idet bobler og luftspalte mellem filteret og fordøjelsesopløsningen undgås.
  13. Sæt låg på ophængsfangende mikrospinsøjle for at forhindre fordampning. Der inkuberes ved 47 °C i 1 time i en termomixer; Ryst ikke eller hvirvel under fordøjelsen.
  14. Eluerende peptider med 40 μL 50 mM TEAB ved centrifugalkraft ved 4.000 × g i 20 s.
  15. Der tilsættes 40 μL 0,2 % FA og centrifugeres ved 4.000 × g i 20 sekunder.
  16. Der tilsættes 35 μL 0,2 % FA, 50 % acetonitril, og der centrifugeres ved 4.000 × g i 20 sekunder.
  17. Pool tre eluater og tør med en vakuumcentrifuge.
  18. Opbevares ved -80 °C fryser med ultralav temperatur indtil yderligere analyse. BEMÆRK: Protokollen kan sættes på pause her.

5. Rekonstituere peptider til massespektrometrianalyse

  1. Rekonstituér prøven med 12 μL 0,1% FA, hvirvel og centrifuger kort.
  2. Mål peptidkoncentrationen med et peptidanalysesæt.
  3. Normaliser peptidkoncentrationen til 0,5 μg / μL i 0,1% FA.
  4. Overfør peptidblandingen til et hætteglas med autosampler og klar til massespektrometrianalyse.

6. Prøveoptagelse ved væskekromatografi-tandemmassespektrometri

  1. 3 μg peptid fyldes med isokratisk belastningsbuffer (0,1 % FA, 5 % ACN) i en fældesøjle (C18, 5 μm, 100 μm, 20 mm) med en strømningshastighed på 2 μL/min i 15 minutter.
  2. Peptiderne fraktioneres ved hjælp af en omvendt fase nanoanalytisk kolonne (C18, 5 μm, 100 μm, 300 mm) ved en strømningshastighed på 350 nL/min i en separationsgradient på 155 minutter. Brug mobil fase A bestående af en blanding af 0,1% myresyre (v/v), 5% ACN (v/v) i vand og mobil fase B indeholdende 0,1% FA (v/v), 98% ACN (v/v) i vand. Brug følgende gradient: 0-0,5 min: 5% B, 0,5-90 min: 10% B, 90-120 min: 20% B, 120-130 min: 28% B, 130-135 min: 45% B, 135-141 min: 80% B, 141-155 min: 5% B.
  3. Udfør dataafhængig anskaffelse (DDA) med et TOF-MS-scanningsområde mellem 350 og 1800 m/z med en akkumuleringstid på 250 ms og en dynamisk måludelukkelsestid på 18 sekunder. Udfør derefter en MS/MS-scanning ved 100 til 1.800 m/z i højfølsom tilstand med en akkumuleringstid på 50 ms for de 50 bedste forløbere pr. cyklus med en tærskel på 125 cps for MS/MS-signal med en opladningstilstand fra +2 til +4.
  4. Analysér rådata med den refererede software eller andre kompatible motorer med en referencedatabase i FASTA fra den offentligt tilgængelige UniProt-database.

Representative Results

Denne protokol tillader opsamling af riveprøver med Schirmer-strimler, der opbevares tørt ved stuetemperatur inden efterfølgende prøveforberedelse til massespektrometrianalyse. FASP-arbejdsgang (filterstøttet prøveforberedelse) med mikrokolonne til suspensionsfangst muliggjorde hurtig prøveforberedelse på få timer sammenlignet med almindeligt anvendte fordøjelsesprocedurer i opløsning på dage, der kræver inkubation natten over. Peptidgenvindingsudbyttet var signifikant højere (p < 0,001) end standard nedbrydningsprotokollen i opløsning og med god reproducerbarhed ved en variationskoefficient (%CV) < 7%. En pulje af tåreprøver blev gentaget i seks tekniske replikater med 74,2 ± 5,0% peptidgenvinding og 52,8 ± 1,6% peptidgenvinding i prøver fremstillet med opløsningsprocedurer. En poolet tåreprøve med en proteinmængde på 36,3 μg blev spiket på Schirmer-strimlen og ekstraheret som tidligere beskrevet, ekstraktionseffektiviteten af protein var 81% (29,5 ± 6,8 μg, gennemsnitlig ± SD).

Begge arbejdsgange indlæste 3 μg peptider på MS, og DDA-søgningen gav i alt 1.183 ± 118 proteiner (5.757 ± 537 forskellige peptider) og 874 ± 70 proteiner (4.400 ± 328 peptider) ved 1% FDR i henholdsvis suspensionsfangstgruppen og opløsningsgruppen. Analyse af genontologi (GO) ved hjælp af PANTHER-klassifikationssystemet afslørede meget ens proteomer for begge tilgange, hvor binding, katalytisk aktivitet og molekylær funktionsregulering er deres vigtigste molekylære funktioner (figur 4).

Figure 1
Figur 1: Bøj toppen af Schirmer-strimlen ved 0 mm-mærket før påføring. Klik her for at se en større version af denne figur.

Figure 2
Figur 2: Schirmer-strimlens placering under opsamling af rivninger. Klik her for at se en større version af denne figur.

Figure 3
Figur 3: Illustration af håndtering af Schirmer-striben før proteinekstraktion. Klik her for at se en større version af denne figur.

Figure 4
Figur 4: Cirkeldiagram, der illustrerer genontologianalysen for de proteomer, der er identificeret ved hjælp af arbejdsgangen i opløsningen og suspensionsfældefangstarbejdsgangen ved hjælp af PANTHER-klassifikationssystemet. Klik her for at se en større version af denne figur.

Discussion

For at opnå nøjagtige resultater ved hjælp af denne metode skal der bæres strømfrie engangshandsker i alle procedurer fra indsamling af riveprøver for at undgå prøvekontaminering. Det er vigtigt at undgå bobler og luftspalter mellem filteret og prøveopløsningen i hvert trin ved at bruge mikrospindesøjler. Hvis prøvevolumenet er større end kolonnernes kapacitet, anbefales det at gentage processen. Denne protokol har vist sig at være mere effektiv end den traditionelle protokol i opløsningen med hensyn til forberedelsestid, proteingenvinding og total proteinidentifikation. Dette skyldes hovedsageligt, at prøverne gennemgår de fleste af de krævede procedurer i samme kolonne, i modsætning til metoden i opløsning, der involverer flere overførselstrin såsom acetoneudfældning, fordøjelse og oprydning (afsaltning), hvilket øger sandsynligheden for variationer i de resulterende data.

Ud over de tåreprøver, der indsamles med mikrokapillærmetoden16,17, giver denne FASP-arbejdsgang med suspensionsfangende mikrokolonne en alternativ prøveforberedelsesmetode, der muliggør hurtig og robust forberedelse af tåreprøver indsamlet ved hjælp af Schirmer-strimler med minimal materialeforberedelse og brugervenlige trin at følge. Dette muliggør reproducerbar forberedelse af tåreprøver til store kohorteundersøgelser på tværs af flere okulære sygdomme eller tilstande med forbedret peptidgenvinding og proteinidentifikation af MS over procedurer i opløsning. Denne pålidelige proces kan anvendes regelmæssigt til fremstilling af tårebiomarkørprøver til forskning og andre kliniske formål. Vigtigst af alt kræver det minimal personaleuddannelse til indsamling på stedet og ophæver behovet for prøveopbevaring i en fryser. Prøver tørres på stedet for at minimere proteinautolyse og nedbrydning. Derfor muliggør dette bekvem forsendelse via post for at lette downstream-analyse i modsætning til at bruge mikrokapillarrør.

Disclosures

Forfatterne har ingen interessekonflikter at erklære.

Acknowledgments

Dette arbejde blev støttet af InnoHK-initiativet og Hongkongs særlige administrative region. Forskningscenter for SHARP Vision; og Research Centre for Chinese Medicine Innovation (RCMI) ved Hong Kong Polytechnic University.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
9 mm Plastic Screw Thread Vials Thermo Scientific C4000-11
Acetonitrile, LCMS Grade Anaqua AC-1026
Centrifuge MiniSpin plus Eppendorf 5453000097
DL-dithiothreitol (DTT), BioUltra Sigma-Aldrich 43815
Eppendorf Safe-Lock Tubes, 1.5 mL Eppendorf 30120086
Formic acid, ACS reagent, ≥96% Sigma-Aldrich 695076
Frame Heater OPTIMONSUN Electronic Breitfeld & Schliekert GmbH 1203166
Iodoacetamide (IAA), BioUltra Sigma-Aldrich I1149
Methanol, HPLC Grade Anaqua MA-1292
Nunc Biobanking and Cell Culture Cryogenic Tubes, 2 mL Thermo Fisher Scientific 368632
Phosphoric acid, 85 wt.% in H2O Sigma-Aldrich 345245
Pierce Quantitative Colorimetric Peptide Assay Thermo Fisher Scientific 23275
Pierce Rapid Gold BCA Protein Assay Kit Thermo Fisher Scientific A53225
Quadrupole Time-of-Flight Mass Spectrometry Sciex TripleTOF 6600
Schirmer Ophthalmic Strips Entod Research Cell UK Ltd I-DEW Tearstrips
S-Trap Micro Column Protifi C02-micro-80
SureSTART 9 mm Screw Caps Thermo Scientific CHSC9-40
Triethylammonium bicarbonate (TEAB), 1 M Sigma-Aldrich 18597
Ultra-performance Liquid Chromatography Eksigent NanoLC 400 
UltraPure Sodium dodecyl sulfate (SDS) Thermo Fisher Scientific 15525017

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Ma, J. Y. W., Sze, Y. H., Bian, J. F., Lam, T. C. Critical role of mass spectrometry proteomics in tear biomarker discovery for multifactorial ocular diseases (Review). International Journal of Molecular Medicine. 47 (5), 83 (2021).
  2. Tse, J. S. H., et al. Integrating clinical data and tear proteomics to assess efficacy, ocular surface status, and biomarker response after orthokeratology lens wear. Translational Vision Science & Technology. 10 (11), 18 (2021).
  3. Cheung, J. K., et al. Human tear proteome dataset in response to daily wear of water gradient contact lens using SWATH-MS approach. Data in Brief. 36, 107120 (2021).
  4. Tse, J. S., et al. Data on assessment of safety and tear proteome change in response to orthokeratology lens - Insight from integrating clinical data and next generation proteomics. Data in Brief. 29, 105186 (2020).
  5. Zhan, X., Li, J., Guo, Y., Golubnitschaja, O. Mass spectrometry analysis of human tear fluid biomarkers specific for ocular and systemic diseases in the context of 3P medicine. The EPMA Journal. 12 (4), 449-475 (2021).
  6. Ponzini, E., et al. Mass spectrometry-based tear proteomics for noninvasive biomarker discovery. Mass Spectrometry Reviews. 41 (5), 842-860 (2022).
  7. HaileMariam, M., et al. S-Trap, an ultrafast sample-preparation approach for shotgun proteomics. Journal of Proteome Research. 17 (9), 2917-2924 (2018).
  8. Ding, H., et al. Urine proteomics: evaluation of different sample preparation workflows for quantitative, reproducible, and improved depth of analysis. Journal of Proteome Research. 19 (4), 1857-1862 (2020).
  9. Ludwig, K. R., Schroll, M. M., Hummon, A. B. Comparison of in-solution, FASP, and S-Trap based digestion methods for bottom-up proteomic studies. Journal of Proteome Research. 17 (7), 2480-2490 (2018).
  10. Sze, Y. H., et al. High-pH reversed-phase fractionated neural retina proteome of normal growing C57BL/6 mouse. Scientific Data. 8 (1), 27 (2021).
  11. Marchione, D. M., et al. HYPERsol: High-quality data from archival FFPE tissue for clinical proteomics. Journal of Proteome Research. 19 (2), 973-983 (2020).
  12. Chhuon, C., et al. A sensitive S-Trap-based approach to the analysis of T cell lipid raft proteome. Journal of Lipid Research. 61 (11), 1512-1523 (2020).
  13. Hayoun, K., et al. Evaluation of sample preparation methods for fast proteotyping of microorganisms by tandem mass spectrometry. Frontiers in Microbiology. 10, 1985 (2019).
  14. Templeton, E. M., et al. Comparison of SPEED, S-Trap, and in-solution-based sample preparation methods for mass spectrometry in kidney tissue and plasma. International Journal of Molecular Sciences. 24 (7), 6290 (2023).
  15. Ding, Z., Wang, N., Ji, N., Chen, Z. S. Proteomics technologies for cancer liquid biopsies. Molecular Cancer. 21 (1), 53 (2022).
  16. Nättinen, J., Aapola, U., Jylhä, A., Vaajanen, A., Uusitalo, H. Comparison of capillary and Schirmer strip tear fluid sampling methods using SWATH-MS proteomics approach. Translational Vision Science & Technology. 9 (3), 16 (2020).
  17. Bachhuber, F., Huss, A., Senel, M., Tumani, H. Diagnostic biomarkers in tear fluid: from sampling to preanalytical processing. Scientific Reports. 11 (1), 10064 (2021).

Tags

Medicin Udgave 202 Tårevæske Schirmer strip Proteomics Massespektrometri
En proteinsuspension-fældende prøveforberedelse til tåreproteomics ved væskekromatografi-tandemmassespektrometri
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Tse, J. S. H., Sze, Y. H., Ka-Wai… More

Tse, J. S. H., Sze, Y. H., Ka-Wai Cheung, J., Li, K. K., Lam, T. C. A Protein Suspension-Trapping Sample Preparation for Tear Proteomics by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry. J. Vis. Exp. (202), e64617, doi:10.3791/64617 (2023).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter